视网膜母细胞瘤中基因杂合缺失现象的研究

目的：由于Rb1基因的失活可能不是引发视网膜母细胞瘤（RB）的唯一因素。因此，此项课题中我们通过探索第13号染色体上基因杂合缺失（LOH）现象发生的机率以及通过家系分析确定标记位点缺失的遗传学源，试图探明其它可能参与RB发生发展的基因存在的位点，并试图寻找和确定具有诊断及预后价值的LOH检测指标。方法：16个RB患者成对的肿瘤与其相应血清标本在13号染色体上14个微卫星标记处通过荧光PCR进行扩增，分别测定LOH；并通过对患者家庭进行分析确定标记位点缺失的遗传学来源。结果：16个RB患者上，12个在13号染色体上一个或一个以上位点发生LOH，其中三个位点，D13S265，D13S263和D13S153（位于Rb1基因内），LOH发生机率最高，分别是8个，8个和9个，12个LOH阳性标本中有10个标记位点的缺失被确定发生在父系来源的染色体中，LOH阳性及阴性组肿瘤的发生时间分别为504d和1086d。结论：在位点D13S263（13q14.1-14.2)和D13S265（13q31-32)处可能含有某些未知基因参与RB的发生发展，在我们的实验群体中标记位点缺失大多选择性地发生在父系来源的染色体中，此外，LOH阳性组的患者RB确诊时间早于LOH阴性组，其中D13S263和D13S265两个位点的LOH现象可能对RB的早期诊断具有一定提示作用。     

胶质母细胞瘤8号、22号染色体等位基因杂合性丢失的研究

目的：寻找胶质母细胞瘤（GBM）8号，22号染色体上可能存在肿瘤抑制基因的杂合性丢失（LOH）区域。为发展和定位肿瘤抑制基因（TSG）提供线索和依据。方法：应用聚合酶链反应（PCR）方法，采用荧光标记的引物和377型DNA序列自动分析仪，分别分析了21例GBM8号，22号染色体上14个，7个微卫星多态性标记的LOH。结果：本组病例8号染色体LOH率为23．8％，在16．3％能提供信息位点检测到LOH，8P的LOH率明显高于8q，分别为23．8％，14．3％，8q上所有位点的LOH率都在15％以上，以8p22-23上D8S550和D8S549的LOH率较高，分别是27．8％，30．0％，染色体22q的LOH率为47．6％，在30．0％可提供信息位点存在LOH，以22q13.2-13.3上D22S274的LOH率最高（41．2％），结论：8号，22号染色体等位基因杂合性丢失可能在GBM的分子发病机制中发挥着重要作用。在8p22-23上D8S550和D8S549位点间区域以及22q13.2-13.3上D22S274位点所在区域可能存在多个与GBM相关的肿瘤抑制基因。     

胶质母细胞瘤1号染色体杂合性丢失的初步研究

目的寻找胶质母细胞瘤(GBM)1号染色体上可能存在肿瘤抑制基因的杂合性丢失(LOH)区域,为发现和定位肿瘤抑制基因提供线索和依据。方法应用聚合酶链反应(PCR)方法,采用荧光标记的引物和377型DNA自动序列分析仪,分析了21例GBM1号染色体上31个微卫星多态性标记的LOH。结果在52%(11/21例)GBM的1号染色体上观察到了LOH,在20%(94/463)可提供信息位点存在LOH。其中1p的LOH率高于1q,1p和1q的LOH率分别为43%(9/21)、33%(7/21)。1p上各微卫星位点的LOH率均小于30%。在1q的下列位点上检测到了较高LOH率1q24-1q25上的D1s218(31.6%)、1q32.3-1q43上的D1s2785(31.6%)-D1s2842(37.5%)。结论染色体1p在GBM的分子发病机制中并不重要,而染色体1q上遗传物质的分子遗传学变化可能在GBM的发生发展中起着重要作用,染色体1q24-1q25上的D1s218和1q32.3-1q43上的D1s2785-D1s2842位点间区域可能存在与GBM有关的肿瘤抑制基因。     

Chromosome 14q may harbor multiple tumor suppressor genes in primary glioblastom a multiformec

目的：评价染色体14q的（杂合性）丢失是否与原发性多形性胶质母细胞瘤的发生发展有关,并确定14q上可能存在的共同杂合性丢失区域。方法：应用聚合酶链反应（PCR）为基础的微卫星分析方法,采用14个荧光标记的多态性（微卫星）标记,检测了20例原发性多形性胶质母细胞瘤（GBM）染色体14q的杂合性丢失（LOH）状况。结果：50％（10/20例）GBM在染色体14q上至少有一个微卫星标记存在LOH,其中5个病例的所有被检测标记都表现为LOH或不能提供信息。在位于14q32.1的D14S65位点、14q23-31的D14S63-D14S74位点间区域检测到的LOH率最高,分别为57.1％、46.7％-47.1％。在本研究中的所有位点,均未检测到微卫星不稳定。结论：染色体14q上的等位基因丢失可能在GBM发病机制中起着重要作用,14q32.1上的D14S65位点、14q23-31上的D14S63-D14S74位点间区域可能存在与GBM相关的多个肿瘤抑制基因。     

散发性结直肠癌3号染色体等位基因杂合缺失

目的 了解散发性结直肠癌（SCRC）3号染色体等位基因杂合缺失（LOH）发生情况。探讨其与临床病理特征间的关系,并对3号染色体上可能的SCRC相关基因进行初步定位。方法 用覆盖3号染色体的13个微卫星标记对83例散发性结直肠癌进行LOH扫描分析。结果 3号染色体至少有两个位点发生LOH者占39%（29/74）,3p所选4个位点中至少有一个发生LOH者占37%（27/74）,3q所选9个位点中至少有一个发生LOH者占53%（39/74）。整条染色体上以D3S1300（3q14.2)位点LOH率最高,达54%（23/43）。3qLOH在远端结直肠癌较近端高发,3q及D3S1300LOH阳性肿瘤多表现为浸润型生长和局部侵犯,并多发于大于50岁的老年患者。结论 3号染色体存在散在分布及区域性高频等位基因LOH,并与SCRC临床病理资料相关,提示其上SCRC相关基因的存在。高频LOH位点D3S1300的发现,提示3p14.2附近区域的FHIT基因可能作为肿瘤抑制基因在结直肠癌的发生发展中发挥作用。     

胶质母细胞瘤染色体1p36杂合性缺失的初步研究

目的探讨1p36上可能存在的与胶质母细胞瘤（GBM）发生有关的肿瘤抑制基因的缺失区域，为发现和定位肿瘤抑制基因提供线索和依据。方法运用聚合酶链反应（PCR）技术为基础的杂合性缺失分析（LOH）法对12例胶质母细胞瘤染色体1p36上12个微卫星多态标记序列作了较详细研究。结果12例胶质母细胞瘤至少有一个位点出现杂合性缺失者11例，总缺失率为91．7％（11／12），其中以D1S214-D1S2666位点间区域LOH的频率最高。结论胶质母细胞瘤染色体1p36发生高频率杂合性缺失，提示位点D1S14-D1S2666缺失区域间可能存在着与GBM发生有关的抑癌基因。     

食管鳞状细胞癌染色体13q11-12杂合性丢失

目的分析食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)在13号染色体长臂11-12区(13q11-12)上的等位基因杂合性丢失(LOH),以期寻找13q11-12区上可能存在的与食管鳞状细胞癌有关肿瘤抑制基因的缺失区域。方法用9个位于13q11-12区的微卫星标志物,对56例ESCC患者组织切片激光显微切割后,进行PCR-LOH分析;56例ESCC患者包括34例有上消化道癌家族史,22例无上消化道癌家族史。结果56例ESCC患者中,49例(87.5%)显示一个或更多位点LOH;并发现一个LOH高频率区,位于位点D13S787和D13S221之间,物理距离仅有1.83 Mb;在位点D13S1236有上消化道癌家族史组LOH为89%,明显高于无上消化道癌家族史组53%(P=0.031<0.05),差异有显著性意义。结论研究提示染色体13q11-12的LOH可能在食管癌发生、发展中起重要作用;在染色体13q11-12区上,可能存在一个或多个与ESCC发生发展有关的肿瘤抑制基因(TSG)。     

High frequency loss of heterozygosity on the long arms of chromosomes 13 and 14 in nasopharyngeal carcinoma in Southern China

目的：分析鼻咽癌（NPC）13号染色体长臂（13q）和14号染色体长臂（14q）上21个位点的等位基因杂合子丢失（LOH）,并分析这些位点的LOH与NPC临床病理及EBV感染的关系。方法：用聚合酶链反应（PCR）为基础的微卫星多态性分析技术结合基因扫描和基因绘图技术对60例NPC进行LOH分析。结果：13q染色体发生一个或多个位点LOH频率为78％,高频率LOH（大于30％）位点集中于13q12.3-q14.3和13q32附近。14q染色体发生至少一个位点LOH的频率为80％,高频率丢失位点集中于14q11-q13、1q421-q24和14q32附近。13q31-q32位点的LOH与低滴度血清EBV EA/IgA有关;14q染色体的LOH与NPC细胞的分化差有关。结论：华南地区鼻咽癌在13q和14q染色体发生高频率的LOH,这些缺失区可能存在多个在NPC发生发展过程中起重要作用的肿瘤抑制基因。     

胶质母细胞瘤染色体lp36杂合性缺失的初步研究

日的探讨1p36上可能存在的与胶质母细胞瘤(GBM)发生有关的肿瘤抑制基因的缺失区域,为发现和定位肿瘤抑制基因提供线索和依据.方法 运用聚合酶链反应(PCR)技术为基础的杂合性缺失分析(LOH)法对12例胶质母细胞瘤染色体1p36上12个微卫星多态标记序列作了较详细研究.结果 12例胶质母细胞瘤至少有一个位点出现杂合性缺失者11例,总缺失率为91.7%(11/12),其中以D1S214-D1S2666位点间区域LOH的频率最高.结论 胶质母细胞瘤染色体1p36发生高频率杂合性缺失,提示位点D1S214-D1S2666缺失区域间可能存在着与GBM发生有关的抑癌基因.     

Loss of Heterozygosity on Chromosome 13 and its Association with the Development of Retinoblastoma

Loss of heterozygosity （LOH） on chromosome 13 was investigated in 16 Chinese sporadic retinoblastoma （RB） patients, using 14 microsatellite markers spanning the complete chromosome 13, to determine whether those alterations, which are different from the alteration of RB1 gene on 13q 14, might play a role in the development of RB. Microdissected RB tissues and their matched blood DNAs were analyzed for PCR-based LOH by using fluorescence-based DNA sequencing technology. Of 16 RB cases, 13 showed LOH on chromosome 13. The frequency of LOH on 13q14 was about 75% （12/16）, consistent with other reports. Therefore, we could conclude that loss of RB 1 allele was commonly encountered in sporadic RB. Investigation of parental origin of lost RB 1 alleles showed that in all these cases, the paternal alleles were preferentially lost. Aside from the RB1 locus, other regions with the frequency of LOH above 30% in these patients were D13S265, D13S158, D13S170, D13S218, D13S285 and D13S159. In particular, the D13S265 locus at 13q31-32 showed the highest rate of allele loss （64%; 9/14 informative cases）, suggesting the presence of one or several genes loss of function might contribute to the multistage oncogenesis of RB. Comparison of the genotypic characteristics of three sites of frequent LOH （D13S153, D13S263 and D13S265） with the clinicopathological phenotype, respectively showed that LOH of each locus was preferentially associated with a significantly younger age at the diagnosis of RB, which suggested that LOH analysis at some specific loci on chromosome 13 might be of great value in RB patients as diagnostic markers.     

Genome-wide allelotype study of primary glioblastoma multiforme

Objective To investigate the molecular genetic pathogenesis of primary glioblastoma multiforme (GBM) and identify which chromosomes or chromosomal regions of the entire genome may harbor tumor suppressor genes (TSGs) associated with GBM.Methods A high-resolution allelotype study of 21 cases of primary GBM was performed by PCR-based loss of heterozygosity （LOH）analysis. Three hundred and eighty-two fluorescent dye-labeled microsatellite markers covering all 22 autosomes were applied. The mean genetic distance between two flanking markers was about 10 cM.Results LOH was observed on all 39 nonacrocentric autosomal arms examined in this study. The LOH frequencies of 10q, 10p, 9p, 17p and 13q were the highest (&gt;50%). Furthermore, high LOH frequencies were detected in the regions containing known TSGs including PTEN, DMBT1, p16, p15, p53 and RB; the LOH frequencies on 14q, 3q, 22q, 11p, 9q, 19q were also high (&gt;40.5%). Our study observed the following commonly deleted regions: 9p22-23, 10p12.2-14, 10q21.3, 13q12.1-14.1, 13q14.3-31, 17p11.2-12, 17p13, 3q25.2-26.2, 11p12-13, 14q13-31, 14q32.1, 14q11.1-13, 22q13.3, 4q35, 4q31.1-31.2, 6q27 and 6q21-23.3. Conclusions The molecular pathogenesis of GBM is very complicated and associated with a variety of genetic abnormalities on many chromosomal arms. The most closely related chromosomal arms to the pathogenesis of GBM are 10q, 10p, 9p, 17p and 13q. Besides the well-known TSGs including PTEN, DMBT1, p16, p15, p53 and RB, multiple unknown TSGs associated with GBM may be present on the commonly deleted regions detected in the present study.     

原发性肝癌全基因组杂合性缺失的研究

目的 研究肝癌全基因组等位基因杂合性缺失（ＬＯＨ）及其临床意义。方法 采用３８２对微卫星标志,对６５例肝癌２２条常染色体等位基因ＬＯＨ进行检测。结果 全组平均杂合子６８．１％。ＬＯＨ〉３０％的有１ｑ、３ｑ、４ｑ、８ｐ、１３ｑ、１６ｑ和１７ｐ。ＨＢｓＡｇ阳性者Ｄ４Ｓ２９６４ ＬＯＨ（６６％）较ＨＢｓＡｇ阴性者（３０％）高（Ｐ〈０．０５）;Ｄ３Ｓ３６８１和Ｄ１７Ｓ９３８ ＬＯＨ者术后复发率（９１％、８     

人肝细胞癌4号染色体高频率杂合子丢失的研究

目的 为克了生新的肝细胞（HCC）相关肿瘤抑制基因的供位点依据。方法 使用4号染色体的12个微卫星DNA多态性标志,分析了48例原发性HCC的杂合子丢失（LOH）。结果 44％（21／48）和63％3（30／48）的肿瘤组织中至少有1个位点的LOH分别发生在4p和4q。丢失图排列鉴定了两个独立的共同丢失片段（CDR）。第1个定位在4q22-q25的CDR位于D4S392和D4S1625位点之间;第2个定位在4q27-q31的CDR位于D4S1625和D4S1652位点之间。结论 至少有两个肿瘤抑制位点存在于4q.     

胃癌患者6号染色体长臂遗传不稳定性

目的研究中国人胃癌6号染色体长臂微卫星不稳定性（microsatellite instability,MSI）和杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH）状况及与临床病理特征之间的联系。方法采用PCR-SSLP-银染方法对27例胃癌组织及其相应正常组织6号染色体长臂（6q）不同位置的4个位点进行MSI和LOH检测。结果27例信息个体中16例检测到一个或多个位点MSI,平均MSI频率59．2％;11例不具MSI的信息个体中7例存在1个或更多位点LOH,平均频率63．6％。MSI和LOH频发位点均为D6S434（6q16．3-q21）和D6S404（6q16．3-q23）。MSI和LOH在高分化胃癌和低分化胃癌各个时期均有发生．但高分化胃癌中高水平MSI（MSI-H）发生有增高趋势。结论MSI和LOH发生率与年龄、性别、组织分化程度、病理分期及发病部位等临床指标虽然无明显相关,但6q等位基因缺失关键区域与其它国家、地区相似,进一步证实6q上该区可能存在与胃癌相关的肿瘤抑制基因。     

Analysis of comparative genomic hybridization and loss of heterozygosity in 43 primary gastric carcinomas

Objective To investigate common chromosomal changes and the LOH frequency of microsatellite loci in primary gastric cancer samples in order to locate the deleted regions in which human gastric cancer related genes might exist.Methods Comparative genomic hybridization (CGH) was used to define global chromosomal aberrations in 43 primary gastric tumors. Based on the results of CGH, analysis of loss of heterozygosity (LOH) was performed in chromosome 19 in which the loss was first discovered in the gastric cancers. The PCR-based approach was used to investigate 22 loci, which are spaced at 1.1 -10. 9 cM intervals throughout chromosome 19. The amplified PCR fragments were subjected to electrophoresis in PAGE gel and analyzed with GenescanTM and GenotyperTM.Results CGH analysis revealed gains in chromosome 3p(8/43), 8q(8/43), 20 [20 (9/43), 20p(7/43), 20q(4/43)], 12q(16/43), 13q(12/43) and losses in 19 [19 (15/43)], 7 [17 (8/43),17p (10/43)], 16 (10/43) and lp (11/43). Among the 43 evaluated samples, the most frequent LOH was detected at locus D19S571 (27. 81% ).Conclusions The tumorigenesis of gastric cancer includes several chromosomal changes. The aberration of chromosome 19 was the first common change founded in gastric cancer. The region near the D19S571 miclht harbor potential clenes related to the tumoriQenesis of Qastric cancer.