黄芪注射液治疗鼠单纯疱疹病毒性脑炎的实验研究

目的 探讨黄芪注射液对Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)感染致病毒性脑炎的疗效及机制.方法 将60只小鼠随机分为对照组、模型组和黄芪治疗组,每组20只.建立HSV-Ⅰ感染致病毒性脑炎模型.观察各组小鼠的死亡率,检测小鼠血中自细胞介素-1β(IL-1β)、γ-干扰素(IFN-γ)、一氧化氮(NO)水平,电镜下观察小鼠神经细胞形态结构的变化.结果 电镜下HSV-Ⅰ感染后小鼠脑细胞胞质水肿明显,核仁固缩,核内结构破坏,多数线粒体呈空泡样改变,脊突破坏,髓鞘严重松解,核仁内可见病毒颗粒;IL-1β、IFN-γ、NO水平及小鼠的死亡率均较对照组明显上升(P均<0.01).黄芪注射液治疗后小鼠脑组织病理学改变减轻,死亡率及IL-1β、NO水平较模型组明显下降,而IFN-γ继续上升(P均<0.01).结论 早期应用黄芪注射液对单纯疱疹病毒性脑炎有一定的治疗效果,其作用机制可能是通过调节免疫应答,影响IL-1β、IFN-γ和NO等细胞因子的水平,从而减轻炎症反应.     

鼻疽诺卡菌感染小鼠足垫后组织病理变化以及细胞因子分泌情况的初步研究

目的 了解鼻疽诺卡菌感染动物模型小鼠足垫后不同时间的组织病理进展变化以及细胞因子分泌情况,为鼻疽诺卡菌致病机制研究提供依据。方法 应用对数生长期的鼻疽诺卡菌注射于小鼠足垫,建立感染模型。将感染1、3、7、14 d后小鼠分别脱臼处死,用手术刀片切取感染小鼠的足垫,制备切片,应用HE染色观察组织不同时间的病理变化,通过免疫组化研究感染过程中IL-6、IL-12、IFN-、TNF表达分泌情况。结果 通过HE染色观察到感染后第1天中性粒细胞浸润,炎症形成;感染后第3天中性粒细胞脓肿形成,进入急性感染时期;感染后第7天肌肉组织间大量肌纤维母细胞及血管内皮细胞增生,感染转入慢性感染时期;感染后第14天肌肉组织间大量肌纤维母细胞及血管内皮细胞增生,见局灶小脓肿,周围见片状增生的泡沫样巨噬细胞,进入感染修复期。组织免疫组化结果显示,在炎症形成时期,组织中的IL-6和TNF表达水平高于对照组,差异有统计学意义（P0.05）;在急性感染期,组织中仅可见TNF表达水平高于对照组,差异有统计学意义（P0.05）;在慢性感染期,组织中IL-6、IL-12、IFN-和TNF表达量均高于对照组,差异有统计学意义（P0.05）;在感染修复期,组织中的IL-6、IFN-和TNF表达水平高于对照组,差异有统计学意义（P0.05）。结论 鼻疽诺卡菌感染小鼠足垫后出现明显的病理变化周期,在感染第3天开始进入急性感染时期,感染后第7天转入慢性感染时期,感染后第14天进入组织修复期,并且IL-6、IFN-、TNF参与了炎症反应,尤其是IL-6表达量最高,主要促进Th0向Th1和Th17亚群分化,激活巨噬细胞、树突状细胞和NK细胞等,增强其吞噬和杀伤功能,以杀伤胞内鼻疽诺卡菌。     

Th1、Th2及Th17细胞因子谱在269例健康儿童中的表达分析

目的：通过检测健康儿童不同年龄段血清中7种细胞因子水平,从而获得研究不同疾病状态下7种细胞因子变化的参照。方法采用流式细胞仪微球芯片（cytometric bead array,CBA）技术和 Th1、Th2及 Th17细胞因子 CBA 分析试剂盒检测269例健康儿童血清中的7种细胞因子（IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ以及 IL-17A）水平。结果 Th1细胞分泌的 IL-2及TNF 在婴儿期及学龄期呈高表达趋势,在学龄前期和青春期呈低表达趋势,且 IL-2表达水平均高于 TNF;Th2细胞所分泌的 IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ及 Th17细胞 IL-17A 在不同年龄段表达水平未见明显变化趋势。只有 IL-10、IFN-γ的表达在青春期不同性别存在统计学差异,其他年龄段不同性别的细胞因子分泌均未见统计学差异。结论采用 CBA 技术同时检测7种细胞因子具有所需样本量少、快速、简便的优点。建立健康儿童不同年龄段血清细胞因子谱表达水平,对于检测儿童疾病状态下细胞因子水平变化的具有重要意义。     

慢性丙型肝炎病毒感染者外周血单个CD4+Th 细胞内IFN-γ及IL-4的表达

目的研究慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染者外周血单个核细胞(PBMC)中Th细胞内IL-4和IFN-γ的表达情况,探讨Th1/Th2细胞及其细胞因子在慢性HBV感染中的作用.方法常规分离PBMC,在PMA、ionomycin、monensin的刺激下,应用FCM检测慢性HCV感染者外周血Th细胞内IL-4和IFN-γ表达情况,采用ELISA法检测血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)水平.结果在慢性HCV感染者中(包括慢性HCV携带者、慢性丙型肝炎以及肝硬化患者)分泌IFN-γ的细胞百分数远高于对照组(P＜0.01);各实验组分泌IL-4的细胞百分数均很低,并且与疾病的进展无任何关联.在慢性HCV感染者中血清sIL-2R水平明显高于健康对照组,并且与分泌IFN-γ的细胞百分数呈正相关.结论在HCV感染的不同阶段,血清sIL-2R和IFN-γ水平均升高,Th1细胞因子或Th1细胞可能在慢性HCV感染肝脏损伤的发病机制中起重要作用.     

结核分枝杆菌感染者TB-IGRA试验检测IFN-γ的临床意义

目的探讨结核分枝杆菌γ-干扰素(IFN-γ)在不同类型结核分枝杆菌感染者中的表达水平及临床意义,为结核分枝杆菌IFN-γ体外释放(TB-IGRA)定量试验的临床诊断提供依据。方法选择该院112例结核分枝杆菌感染住院患者为疾病组,其中痰涂菌阳肺结核(活动性)患者55例;痰涂菌阴肺结核患者28例;痰涂菌阴肺外结核患者29例。选择同期健康体检者22例为健康对照组。采用TB-IGRA定量试验测定两组患者血浆中特异性IFN-γ水平,同时与血抗结核抗体、痰涂片抗酸染色及痰菌培养、结核菌素试验(TST)等方法进行比较。结果疾病组血浆IFN-γ水平均明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P0.05);痰涂菌阳肺结核患者血浆IFN-γ水平均明显高于其他患者,差异有统计学意义(P0.05)。TB-IGRA定量试验对结核分枝杆菌感染者的敏感性达87.5%,准确率89.7%,经比较均高于其他诊断方法(P0.05)。而特异性除TST方法除外,其他方法比较差别无统计学意义(P0.05)。结核患者血浆IFN-γ浓度不受TST红肿硬结直径的影响。结论结核分枝杆菌感染者血浆IFN-γ水平普遍升高,特别是痰涂菌阳性肺结核患者升高明显,TB-IGRA定量试验对结核分枝杆菌感染诊断具有较高的临床意义。     

高瘦素影响小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖的实验研究

目的：探讨高瘦素（Leptin）水平在不同免疫状态下对小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖状况的影响。方法：选用8周龄的清洁级BALB／c雄性小鼠共50只，分成5组，分别腹腔注射外源性鼠Leptin和Leptin抗体，形成小鼠的不同Leptin水平状态；应用普乐可复（FK506）将小鼠分为正常免疫和免疫抑制状态两类，两种状态各设对照组，测定脾淋巴细胞增殖情况，ELISA方法检测外周血中IL-2、IL-4、IFN-γ和Leptin的浓度。结果：正常免疫状态下，Leptin组的脾细胞增殖与对照组无差异，细胞因子除IFN-γ升高外，IL-2、IL-4均无差异；Leptin抗体组显示脾细胞增殖能力下降，各细胞因子测定显示差异；免疫抑制状态下，Leptin组的IL-2、IFN-γ水平上升、IL-4分泌降低，这种结果也在几乎所有体外加入Leptin的各组中出现。结论：Leptin可以起免疫调节作用，增加IFN-γ、IL-2的合成，降低IL-4的产生，使免疫应答向Th1细胞方向偏离。在正常免疫状态下，Leptin的免疫调节作用不明显，而在免疫抑制情况下，这种调节作用得到体现。     

夏枯草提取物对MDR-MTB感染小鼠细胞免疫功能的影响

目的探讨夏枯草提取物对耐多药结核分枝杆菌(multiple drugs resistant Mycobacterium tuberculosis,MDR-MTB)感染小鼠免疫功能的调节作用。方法将30只健康雄性小鼠随机分为3组,每组10只。2组用MDR-MTB菌液尾静脉注射,建立小鼠MDR-MTB感染病理模型,分别为模型组和夏枯草灌胃模型组,另1组为正常对照组。用ELISA法检测小鼠血清中IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12含量的变化;用RT-PCR法检测单个核细胞中IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-12及颗粒裂解肽(granulysin,GLS)的mRNA变化。结果夏枯草灌胃模型组与模型组比较,小鼠血清中IFN-γ[(1.98±0.67)pg/mL vs(1.18±0.38)pg/mL,P<0.05]、IL-12[(3.02±0.86)pg/mL vs(2.19±0.57)pg/mL,P<0.05]含量明显升高;IL-10[(12.13±3.43)pg/mL vs(16.10±2.21)pg/mL,P<0.05]含量明显下降。与正常对照组比较,IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的含量变化差异无统计学意义(P>0.05)。在mRNA表达水平,夏枯草灌胃模型组IFN-γ、IL-12和GLS表达明显升高,IL-10 mRNA表达明显下降(P<0.05),IL-4变化不明显。结论夏枯草提取物可通过上调基因转录水平增强小鼠的细胞免疫功能,为临床应用夏枯草治疗耐多药结核病提供了理论依据。     

羊栖菜多糖免疫调节活性的实验研究

目的:观察羊栖菜多糖(SFPS)对离体小鼠脾细胞免疫调节活性的影响。方法:10、30、100mg/L浓度的SFPS分别作用离体培养的小鼠脾细胞24、48和72h,采用酶联免疫法测定其所分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ量。结果:SFPS可显著升高小鼠脾细胞IL-2、TNF-α和IFN-γ的分泌量,这些作用与时间、浓度相关。其中,各浓度组均使IL-2的分泌量明显升高,100mg/L浓度组效应最为显著,作用24、48、72h后分别使IL-2的分泌量达到7.08、39.04、20.30pg/mL;TNF-α的分泌的最高值则是由100mg/LSFPS作用48h引起;SFPS对IFN-γ分泌量的影响具有明显的量效关系,而不同时间组的差异不显著。结论:SFPS能明显增强离体小鼠脾细胞的免疫活性物质的分泌,具有明显的免疫调节活性。     

板蓝根多糖在结核小鼠模型中的免疫干预研究

目的研究板蓝根多糖(IIP)在结核小鼠模型中对Th细胞的免疫干预效果。方法选取健康SPF小鼠50只,分为三组,对照组10只,其他40只经尾静脉注射标准菌株H37RV混悬液建立结核小鼠模型,其中模型组10只,干预组30只。干预组小鼠造模成功后分别予IIP 100、200、300mg/(kg·d)腹腔注射,观察三组小鼠的临床表现,造模成功时及成功后20、30d后各抽取1次外周血检测干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、IL-12水平。结果干预组小鼠症状较模型组小鼠缓解,外周血检测IFN-γ、IL-4、IL-12水平先升高后降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 IIP可通过对Th细胞的干预对结核感染起到积极作用。     

鸟分枝杆菌脂类诱导的人肺泡巨噬细胞抗结核免疫反应性的改变及机制的初步研究

目的研究鸟分枝杆菌脂类(MALs)对人肺泡巨噬细胞抗结核免疫反应性的影响。方法平板计数法评价MALs对人肺泡巨噬细胞杀结核菌效应的影响;ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Greisse法检测一氧化氮(NO)水平。结果MALs减弱了人肺泡巨噬细胞对牛结核分枝杆菌(BCG)的杀灭。MALs刺激后,结核分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD)和干扰素γ(IFN-γ)诱导的人肺泡巨噬细胞TNF-α和NO的分泌均有所下降。结论 MALs减弱了人肺泡巨噬细胞对结核分枝杆菌的免疫反应性。