经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化与肺癌发生的关系

目的检测肺癌中经典Wnt信号途径相关基因(WIF-1,sFRP-1,DKK-3)启动子的甲基化状态及β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨其在肺癌发病中的作用。方法应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测66例肺癌组织、25例相应的癌旁组织和10例正常肺组织以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化;免疫组化SP法检测β-catenin的表达情况。结果正常肺组织均未检测到所选基因的甲基化,肿瘤组织和癌旁组织中WIF-1,sFRP-1,DKK-3基因启动子甲基化的发生率分别为:50·0%vs24·0%(P<0·05),36·4%vs12·0%(P<0·05)和36·4%vs8·0%(P<0·01);重度吸烟患者肿瘤组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P<0·05)。肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态。免疫组织化学显示肺癌组织中β-catenin的阳性表达率为81·2%,异常表达率为64·4%,且与组织学类型无关(P>0·05)。结论经典Wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌表观遗传干预治疗的新靶点。     

肺癌组织中经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化的检测

目的 检测肺癌组织中经典wnt信号途径相关基因(WIF-1、sFRP-1、DKK-3)启动子的甲基化状态及其与患者临床病理特征问的关系,探讨其在肺癌发生中的作用.方法 应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测30例纤维支气管镜活检肺癌组织、11例石蜡包埋肺癌组织和10例肺良性疾病患者的纤支镜活检标本以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化.结果 肺良性疾病患者活检标本未检测到所选基因的甲基化,肺癌患者活检标本WIF-1、sFRP-1、DKX-3基因启动子甲基化的发生率分别为:46.3%、29.3%和36.6%;重度吸烟患者肺癌组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P<0.05).肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态.结论 经典wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌袁观遗传干预治疗的新靶点.     

急性白血病患者WIF-1基因启动子甲基化及β连环蛋白表达的研究

目的 探讨急性白血病(AL)患者Wnt抑制因子1(WIF-1)基因启动子甲基化及β连环蛋白(β-catenin)的表达在白血病中的意义.方法 采用甲基化特异性PCR检测山东大学附属千佛山医院2009年1月至2010年6月55例AL患者及对照组骨髓单个核细胞WIF-1基因启动子甲基化情况,流式细胞术检测AL患者及对照组骨髓单个核细胞β-catenin表达.结果 32.7％(18/55)的AL患者WIF-1基因启动子区域有异常甲基化,对照组末检测到WIF-1基因甲基化,两组差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化组首次诱导治疗完全缓解率(38.9％,7/18)低于非甲基化组(81.1％,30/37),差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化组与非甲基化组β-catenin的表达(17.5％±3.3％、15.4％±3.6％)均高于对照组(10.5％±1.5％,均P＜0.05);甲基化组β-catenin的表达高于非甲基化组(P＜0.05).结论 WIF-1基因启动子甲基化及β-catenin过表达可能参与了AL患者Wnt/β-catenin途径的异常激活.     

WIF-1、DKK基因启动子甲基化对COLO 320、

目的 探讨Wnt抑制性基因甲基化对结直肠癌细胞株Wnt/β-catenin信号通路的影响。 方法 使用甲基特异性PCR和逆转录实时定量PCR方法,分别检测结直肠癌细胞株COLO 320、HT-29及正常细胞株CCD-18Co中WIF-1、DKK-1、DKK-3的启动子CpG岛甲基化、mRNA水平,和测定β-catenin蛋白磷酸化情况,并观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-dC）去甲基化对各指标的影响。 结果 COLO 320细胞的DKK-1及DKK-3 mRNA水平明显降低、甲基化程度高;HT-29细胞的DKK-3、WIF-1 mRNA水平低、甲基化程度高;两个肿瘤细胞株的β-catenin蛋白总量均明显增高,且主要为非磷酸化的状态。5-aza-dC可减少这些指标的改变。 结论 抑制性基因甲基化调节的Wnt/β-catenin通路的异常激活,可能在结直肠癌的形成中有重要作用。在不同的肿瘤细胞株之间、不同Wnt抑制基因的甲基化程度存在差异;该领域的深入研究有助于开发出新的治疗药物。     

血浆WIF-1基因启动子甲基化检测在肺癌早期诊断中的临床意义

目的检测肺癌患者血浆Wnt抑制因子-1(WIF-1)基因启动子的甲基化情况并分析其在肺癌早期诊断中的意义。方法应用巢式甲基化特异性PCR(n MSP)法,首先检测肺癌患者血清癌胚抗原(CEA)水平,再分别检测78例肺癌患者、40例肺良性病变患者和40例健康志愿者血浆中WIF-1基因启动子区甲基化状态。结果肺癌患者血清癌胚抗原阳性率为35.90%(28/78),大致接近血浆标本中WIF-1基因启动子区甲基化率34.62%(27/78)。肺良性病变患者血浆中WIF-1基因启动子区甲基化率为2.50%(1/40),健康志愿者血浆中WIF-1基因启动子区未检测出甲基化。肺癌患者血浆WIF-1基因启动子甲基化和血清癌胚抗原二项联合检测的灵敏度为(62.82%),特异度为(90.00%)。不吸烟者WIF-1基因启动子甲基化率低于吸烟者。结论外周血浆中WIF-1基因启动子甲基化有成为肺癌的新的检测手段的可能性,并且对肺癌的初步筛查具有一定的临床意义。     

siRNAi沉默DNMT1基因对肺癌细胞WIF-1启动子甲基化的影响

目的 探讨DNA甲基转移酶(DNMT1)siRNAi对人肺癌A549细胞内抑癌基因wnt抑制因子-1(WIF-1)基因启动子高甲基化的影响.方法 利用pSilencer 4.1-CMV neo载体,通过siRNAi表达载体法制备DNMT1 siRNAi.将DNMT1 siRNAi转染肺癌A549细胞,采用RT-PCR和Western blot检测观察转染前后肺癌A549细胞DNMT1内DNMT1基因的表达改变,并利用甲基化PCR,直接测序法检测WIF-1基因启动子甲基化水平.结果 构建的DNMT1 siRNAi转染肺癌A549细胞后,明显抑制DNMT1基因的表达,mRNA表达下降75%,蛋白表达下调82%;同时,WIF-1基因启动子序列较转染前甲基化水平明显降低.结论 靶向DNMT1的siRNAi可明显下调靶基因DNMT1的表达,并逆转WIF-1基因启动子高甲基化水平.     

软骨肉瘤WIF-1基因甲基化及Wnt-5a蛋白表达的临床病理意义

目的 研究软骨肉瘤中Wnt抑制因子-1基因(WIF-1)启动子区甲基化状态及Wnt-5a蛋白表达情况,探讨其临床病理意义.方法 应用甲基化特异性PCR(MSP)法及免疫组织化学SP法,检测61例软骨肉瘤和作为对照的40例软骨瘤组织中,WIF-1启动子甲基化及Wif-1和Wnt-5a蛋白的表达.结果 软骨肉瘤WIF-1基因甲基化阳性率和Wnt-5a蛋白表达阳性率均高于软骨瘤组(p＜0.05).软骨肉瘤中发生浸润转移者Wnt-5a蛋白阳性表达率高于未发生浸润转移者(P＜0.05).软骨肉瘤WIF-1基因甲基化与Wif-1蛋白表达下降及Wnt-5a蛋白过表达相关(Kappawif-1值为0.747,Pwif-1 ＜0.001;Kappawnt-5a值为0.468,Pwnt-5a＜0.05).结论 WIF-1基因甲基化可能在软骨肉瘤发生的早期起作用,软骨肉瘤Wnt-5a蛋白高表达与肿瘤的侵袭性呈正相关,WIF-1基因甲基化与Wnt-5a蛋白过表达在软骨肉瘤形成中可能存在协同作用.     

贲门腺癌Wif-1基因启动子区甲基化状态的检测及临床意义

目的 研究贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中Wnt抑制因子-1(Wnt inhibitory factor-1,Wif-1)基因启动子区甲基化状态及表达情况,探讨其与贲门癌发生的关系及可能机制.方法 分别用巢式甲基化特异性PCR(MSP)和RT-PCR方法检测贲门腺癌及相应正常黏膜组织中Wif-1基凶的甲基化状态和mRNA表达水平;应用免疫组化S-P法检测β-catenin蛋白的表达情况.结果 Wif-1基凶在贲门腺癌及正常黏膜组织中的甲基化率分别61.7%(58/94)和34.0%(32/94),癌组织中Wif-1基因的甲基化率明显高于正常黏膜组织(χ~2=14.409,P=0.000);癌及正常黏膜组织中Wif-1基因mRNA的阳性表达率分别为10.6%(10/94)和86.2%(81/94),β-catenin蛋白的异质表达率分别为90.4%(85/94)和38.3%(36/94),癌组织中Wif-1 mRNA表达及β-catenin蛋白的表达均与Wif-1基因的甲基化明显相关(P<0.01);Wif-1基因的甲基化与肿瘤的浸润深度及淋巴结转移相关(P<0.05),而与肿瘤的病理分级及临床分期无关.结论 Wif-1基因启动子区甲基化在贲门腺癌中频繁发生,可能通过引起经典Writ/β-catenin通路的异常激活与贲门腺癌的发生密切相关.     

SFRP1/FZD6抑制Wnt/β-catenin信号通路对A549肺癌细胞生物学行为的影响

目的研究分泌型frizzled相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)影响A549肺癌细胞Wnt/β-catenin信号通路的机制及其对细胞增殖、克隆形成和迁移侵袭能力的影响。方法 q RT-PCR和western blot检测SFRP1在肺腺癌及癌旁组织中的表达。在A549细胞中通过质粒过表达SFRP1和用si RNA敲低FZD6的表达,采用q RT-PCR、western blot检测Wnt信号通路相关基因的表达水平变化。通过CCK-8、平板克隆形成、划痕实验以及transwell实验分别检测SFRP1/FZD6对A549细胞增殖、克隆形成、细胞迁移侵袭能力的影响。结果 SFRP1在肺癌组织中表达水平显著低于癌旁组织(P0.05);过表达SFRP1显著抑制了A549肺癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路,干扰受体FZD6的表达能够显著减弱SFRP1对Wnt/β-catenin信号通路的抑制效应。过表达SFRP1显著抑制肺癌细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力等恶性表型,并且能够通过干扰FZD6被逆转。结论 SFRP1通过受体FZD6抑制A549肺癌细胞的Wnt/β-catenin信号通路活化,进而抑制细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力。SFRP1/FZD6可能在肺癌进展中发挥重要作用,靶向SFRP1/FZD6有望成为研发治疗肺癌的重要靶点。     

Wnt3a在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中对神经发生的作用

目的探讨Wnt3a在大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤中对神经发生的作用及其机制。方法将健康雄性SD大鼠70只按随机数字表法分为假手术组、SAH组、Wnt3aⅠ组、Wnt3aⅡ组、Wnt3aⅢ组、Wnt3aⅣ组和DKK-1组。蛛网膜下腔出血的模型通过枕大池自体血注入法建立。应用免疫荧光技术观察各组大鼠海马的神经发生情况,应用蛋白印迹法检测各组大鼠海马中Wnt通路信号分子散乱蛋白-1(Dvl-1)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况。结果随着Wnt3a剂量升高,各组中BrdU阳性细胞百分率呈上升趋势(P<0.05),各组中Dvl-1与β-catenin的蛋白表达量也呈逐渐升高趋势(P<0.05);给予经典Wnt通路抑制剂DKK-1后,Dvl-1、β-catenin蛋白表达量与阳性细胞百分率均明显下降(P<0.05)。结论在蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤中,Wnt3a可能通过经典Wnt信号通路促进神经发生,对中枢神经系统的修复与保护发挥积极作用。     

卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化与β-catenin蛋白表达检测

目的:检测卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化与β-catenin蛋白的表达。方法:应用甲基化特异性PCR法和免疫组织化学SP法分别检测20例正常卵巢上皮组织、20例卵巢交界性上皮性肿瘤组织以及40例卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化状态以及β-catenin蛋白的表达。结果:在正常卵巢上皮、卵巢交界性上皮性肿瘤以及卵巢上皮性癌组织中,SFRP5基因启动子区甲基化率分别为0.0%、10.0%、67.5%,差异有统计学意义(P<0.001);β-catenin蛋白的异常表达率分别为5.0%、40.0%、72.5%,差异有统计学意义(χ2=24.962,P<0.001)。卵巢上皮性癌组织中β-catenin蛋白的异常表达与SFRP5基因启动子区甲基化有关联(rP=0.468,P<0.001)。结论:SFRP5基因启动子区甲基化可能导致β-catenin蛋白异常表达,并可能通过激活Wnt/β-catenin信号传导通路促进卵巢上皮性癌的发生发展。     

肺癌患者14-3-3σ基因启动子甲基化与其mRNA表达水平的关系

目的:探讨肺癌患者14-3-3σ基因启动子CpG岛甲基化状况与其mRNA表达水平的关系。方法:用实时定量PCR检测14-3-3σ基因mRNA在肺癌组织、正常肺组织及肺癌细胞株A549中的表达;用甲基化特异性PCR检测这些组织、细胞中14-3-3σ启动子区CpG岛甲基化状态。结果:14-3-3σ基因启动子在肺癌组织和正常肺组织中发生甲基化的频率分别为51.11%(23/45)和17.39%(4/23)(2χ=7.229,P=0.007)。14-3-3σmRNA在正常组织中全部表达,在肺癌组织中表达缺失率为15.56%(7/45),且表达量低于正常肺组织(t=10.309,P<0.001),不同肿瘤病理分型(SCLC、NSCLC)之间14-3-3σmRNA有显著差异(t=5.256,P<0.023),不同年龄、性别、肿瘤大小之间无显著差异(P>0.05)。14-3-3σ启动子甲基化与其表达量下降密切相关(r=0.48,P=0.04).结论:在肺癌中14-3-3σ启动子甲基化与其mRNA表达下调或缺失有密切关系,在肺癌发生中14-3-3σ异常甲基化起一定作用。     

WNT信号通路抑制因子-1和β连环蛋白在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨WNT信号通路抑制因子-1(WIF-1)和β连环蛋白(β-catenin)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达及其与肾癌临床分期、病理分级的相关性。方法选取2010年2月—2015年6月中国医科大学附属盛京医院第二泌尿外科行根治性手术切除的ccRCC患者102例为研究对象,应用免疫组织化学SP法检测102例肾细胞癌组织及相对应的癌旁正常肾脏组织中WIF-1、β-catenin表达情况。结果 WIF-1在ccRCC组织及正常组织中的表达差异有统计学意义(59.7±19.6 vs.112.2±18.6,t=3.104,P<0.05);β-catenin在ccRCC组织及正常组织中的表达差异亦有统计学意义(157.1±17.2 vs.102.1±18.7,t=4.015,P<0.05)。WIF-1的表达与肾透明细胞癌的临床分期(r=-0.542,P<0.05)、病理分级(r=-0.476,P<0.05)呈负相关;β-catenin的表达与肾透明细胞癌的临床分期(r=0.511,P<0.05)、病理分级(r=0.562,P<0.05)呈正相关.;WIF-1与β-catenin在肾癌中的表达呈负相关(r=-0.425,P<0.01)。结论 WIF-1表达降低和β-catenin表达升高与肾癌的病理分级和临床分期有关,对ccRCC预后评价有一定参考意义,也可为其治疗提供一种可能的靶向治疗途径。     

甲状腺及乳房多原发癌病人甲状腺癌组织WIF-1基因mRNA表达及其启动子甲基化状态分析

目的探讨甲状腺、乳房多原发癌病人甲状腺癌组织WIF-1基因mRNA表达及其启动子的甲基化状态。方法采用RT-PCR及甲基化特异性PCR(MSP)方法检测33例甲状腺、乳房多原发癌病人甲状腺癌组织WIF-1基因mRNA表达及其启动子甲基化状态,以30例单纯甲状腺乳头状癌和20例甲状腺良性病变组织作为对照。结果多原发癌病人甲状腺癌组织、单纯甲状腺乳头状癌组织和甲状腺良性病变组织WIF-1基因的表达缺失率分别为51.5%(17/33)、36.7%(11/30)、15.0%(3/20),3组比较差异有统计学意义(χ2=7.105,P<0.05)。多原发癌病人甲状腺癌组织、单纯甲状腺乳头状癌组织WIF-1基因的甲基化率分别为45%(15/33)、43%(13/30),高于甲状腺良性病变组织的10%(2/20),差异有显著性(χ2=6.349、7.185,P<0.01),但多原发癌病人甲状腺癌组织与单纯甲状腺乳头状癌组织相比差异无显著性(P>0.05)。结论 WIF-1基因mRNA表达缺失在甲状腺、乳房多原发癌的发生过程中起关键作用;WIF-1基因启动子区的高甲基化状态可能是其mRNA低表达的机制之一。     

食管鳞状细胞癌中WIF-1基因启动子区甲基化状态及mRNA表达的研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中WIF-1基因启动子甲基化状态及mRNA表达水平及其与病理指标之间的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测62例ESCC组织及30例癌旁组织中WIF-1基因启动子区甲基化状态和mRNA的表达水平,应用SPSS13.0探讨其与临床病理资料的关系。结果 WIF-1基因在癌组织中的甲基化率59.7%(37/62)明显高于癌旁组织13.3%(4/30),差异有显著性(P<0.05);其甲基化状态与年龄、分化程度及淋巴结转移情况相关(P<0.05);而与其他临床资料(性别、部位、浸润深度、临床分期)无明显相关性(P>0.05)。WIF-1基因mRNA在ESCC组的表达量(0.565±0.112)显著低于癌旁正常组(0.666±0.107),差异有显著性(P<0.05)。结论 WIF-1基因启动子甲基化在食管鳞癌的进展过程中起着重要的作用;WIF-1基因mRNA表达异常可能与ESCC的发生有关,此基因甲基化与mRNA表达两者之间的关系有待进一步研究。     

Dickkopf1(DKK-1)基因甲基化在急性白血病中的表达分析

目的探讨WNT/β-catenin通路的关键抑制因子Dickkopf1(DKK-1)基因异常甲基化与急性白血病(AL)发病机制的相关性。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测4个AL细胞系(NB4、Jurkat、Molt-4、CEM)、65例AL患者及20例正常对照骨髓单个核细胞中DKK-1基因mRNA的表达情况;采用甲基化特异性PCR(M SP)方法检测各标本及细胞系中DKK-1基因启动子区域的甲基化状态。结果与正常对照组比较,AL患者DKK-1基因mRNA表达量显著降低(P<0.05);正常对照组标本单个核细胞中不存在DKK-1基因的甲基化;DKK-1在AL患者中甲基化率为37.7%(24/65),其中急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中甲基化率为41.2%(14/34),急性髄系白血病(AML)患者中甲基化率为28.6%(10/31)。结论 DKK-1甲基化及异常表达在急性白血病中是一种较为普遍的现象,其参与了部分急性白血病的发病过程。     

非小细胞肺癌组织中αVβ3的表达情况及敲低αVβ3对肺癌细胞株A549恶性生物学行为的影响

目的:研究非小细胞肺癌组织中αVβ3的表达情况及敲低αVβ3对肺癌细胞株A549恶性生物学行为的影响.方法:收集100例非小细胞肺癌患者的肺癌组织和癌旁正常组织,检测αVβ3的表达情况;培养肺癌细胞株A549,采用siRNA转染的方式敲低αVβ3的表达,而后检测促增殖和抗凋亡基因、侵入和血管新生基因的表达情况.结果:(1)肺癌组织中αVβ3的mRNA和蛋白含量均高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05);(2)促增殖和抗凋亡基因:处理组细胞Bcl 2、Notch1、Cyclin E的mRNA和蛋白含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);(3)侵入和血管新生基因:处理组细胞VEGF、ICAM-1、VCAM-1的mRNA和蛋白含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:非小细胞肺癌组织中αVβ3表达量升高;siRNA敲低αVβ3表达后,可以抑制肺癌细胞株A549中促增殖和抗凋亡基因、侵入和血管新生基因的表达.     

Dishevelled-1，3影响肺癌细胞侵袭机制的研究

 目的　散乱蛋白（Dvl）亚家族成员在非小细胞肺癌中均存在过表达,但不同亚型对肺癌细胞侵袭能力的影响和可能的机制尚不清楚。方法　检测转染Dvl-1和Dvl-3后肺癌细胞系T细胞转录因子（T-cell factor,Tcf）转录活性的改变,β-连环蛋白（β-catenin）和p120连环蛋白（p120ctn）的表达,以及对细胞侵袭能力的影响。结果　Dvl-1和Dvl-3过表达后,肺癌细胞中p120ctn蛋白水平均上调,但Dvl-3可明显上调p120ctn mRNA水平。同时,Dvl-1过表达后Tcf 转录活性明显上调,而Dvl-3未明显影响其Tcf 转录活性。应用β-catenin和p120ctn抗体抑制β-catenin和p120ctn蛋白作用后,可分别显著抑制由Dvl-1和Dvl-3增强的细胞侵袭能力。结论　Dvl-1可能主要通过经典Wnt通路中的β-catenin,而Dvl-3则可能主要通过与非经典Wnt通路相关的p120ctn影响肺癌细胞的生物学行为。     

ASC和p16基因启动子甲基化与非小细胞肺癌发生发展的关系

目的 探讨ASC和p16基因启动子甲基化与非小细胞肺癌发生发展的关系.方法 应用甲基化特异性PCR（MSP）检测非小细胞肺癌中ASC和p16基因启动子的甲基化发生率.结果 48例非小细胞肺癌中ASC和p16基因启动子甲基化的发生率分别为47.9%和37.5%,显著高于癌旁正常组织（P＜0.001）;重度吸烟患者的肿瘤组织中ASC和p16基因启动子甲基化的发生率明显增高（P＜0.05）;ASC基因启动子甲基化在较小的肿瘤组织中的有较高的发生率（P＜0.05）.而且,重度吸烟患者的正常肺组织中亦可检测到ASC基因启动子的甲基化.结论 ASC和p16基因启动子的甲基化在非小细胞肺癌中有较高的发生率.ASC基因启动子的频繁甲基化可能与吸烟引起的非小细胞肺癌有关,并且ASC基因甲基化有可能是非小细胞肺癌发展过程中的一个早期事件。     

Wnt/β-catenin信号通路在体外调控诱导性多能干细胞向神经干细胞分化中的作用及机制研究

[目的]探讨Wnt/β-catenin信号通路在体外调控诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS)向神经干细胞分化中的作用及机制。[方法]体外培养小鼠iPS,采用N2B27培养基联合维甲酸(retinoic acid,RA)诱导法,诱导其向神经干细胞分化;免疫荧光法检测iPS来源神经干细胞中的巢蛋白(Nestin)、β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)的表达情况;将细胞分为正常组、Wnt3a组、Dickkopf相关蛋白-1(Dickkopf-1,DKK-1)组和IWR-1组,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)、Western blot分别检测iPS神经分化过程中Nestin、β-tubulinⅢ及β-catenin的表达情况;采用悬浮培养法检测Wnt/β-catenin信号通路对iPS来源神经干细胞增殖能力的影响。[结果]iPS来源神经干细胞表达神经干细胞的表面特异性标志物Nestin,以及早期神经元特异性标志物β-tubulinⅢ;iPS向神经干细胞分化过程中,Nestin、β-tubulinⅢ的表达均升高(P0.05,P0.05),β-catenin表达降低(P0.05);采用Wnt3a处理后,iPS来源神经干细胞增殖能力较弱;采用DKK-1和IWR-1处理后,iPS来源神经干细胞增殖能力较强,且Nestin表达提高(P0.01),β-catenin表达降低(P0.05)。[结论]Wnt/β-catenin信号通路在iPS向神经干细胞诱导分化过程中受到抑制;采用DKK-1和IWR-1下调Wnt/β-catenin信号通路,可促进iPS向神经干细胞分化,提高iPS来源神经干细胞的增殖能力,提示Wnt/β-catenin信号通路在iPS向神经干细胞分化过程中具有负调控的作用。