因为ABO基因外显子7上单独的796C>A突变形成-新的cis-AB等位基因

背景 cis-AB极为罕见,已经报道过的符合此特殊的 ABO等位基因改变的表型仅3例。cis-AB01涉及A102等位基因外显子7上G803C非同义替换;然而cis-AB02和cis-AB03 不同,分别是由于B101等位基因背景下A796C和C700T的非     

遗传性CisAB血型的血清学和基因型特征研究——附一例家系报告

目的研究1名cis AB血型患者及其家系的血型血清学及基因型特征。方法采用试管正反定型法筛查该家系3代共10例标本的血型;对于正反定型结果不一致的标本以PCR-SSP法作基因分型;采用直接测序法作DNA序列分析。结果血型血清学检测发现10名家系成员中,正反定型不相符4例:2例表型为A2B3、2例为A2B;基因型分型分别为:cis AB01/O02、CisAB01/B101。DNA序列分析:cis AB01/O02第6外显子261缺失G,第7外显子297AG、467CT、646TA、681AA、771CT、803GC和829GC;CisAB01/B101第6外显子297AG,第7外显子467CT、803GC、526CG、657CT、703GA、796CA、930GA。结论确定了1个遗传性cis AB血型家系;发现具有cis AB01等位基因的标本其血清学表型检测结果不一致,考虑由cis AB杂合的等位基因差别所致。     

1名RhD弱表现型个体携带D~(el)等位基因

目的　探讨 1名RhD弱表现型个体的RH基因型及RHD基因的分子机制。方法　采用常规血清学方法检测RhD、C、c、E和e抗原表型 ,间接抗球蛋白试验确认D抗原 ,用序列特异性引物 聚合酶链反应 (PCR SSP)测定RHD/RHCE基因 ,然后分析RHD编码区全长序列 ,并用PCR检测RhD杂合型。结果　血清学结果显示该个例为D抗原弱表现型 ,Rh因子为D +C +c +E e +,PCR SSP检测RHD/RHCE基因与之相符 ;RHD编码区序列析发现第 9外显子存在 1 2 2 7G→A碱基突变 ,其余外显子序列则与正常RHD基因一致 ,表明该个体携带RHD1 2 2 7A等位基因。RhD合子型鉴定结果为RHD +/RHD -杂合型 ,拟定RHCE和RHD为cis遗传 ,提示该个体基因型为CDe/cde。结论　该RhD弱表现型个体携带RHD 1 2 2 7A等位基因 ,而这一等位基因是Del表型的主要等位基因 ,提示该等位基因在不同个体RhD分子的表达效率不同     

对国内7例顺式(cis)AB的分析

<正> 顺式(cis)AB 是 ABO 血型系统中 A 和B 两种抗原在同一条染色体上一起传递的现象。它与 A 和 B 基因在两条染色体上的正常AB 型不同,后者称为反式(trans)AB。这与 Bernstein 三复等位基因学说显然矛盾。作者从国内文献收集到7篇 cis AB 的报道,共     

一新的B_(var)等位基因(547 G>A)依赖合并遗传ABO等位基因形成的不同表达

背景和目的在韩国作B型献血者遗传分析。材料和方法对6名B3、6名A183共12名B3表型献血者作外显子6和外显子7测序。结果所有B3和6名A1B3献血者的2名均检出一致的序列。4名A1B3献血者被确定为新的B等位基因- Bvar位于A101／或者A102/Bvar之间。对于1例A1B3供者     

昆明地区无偿献血者ABO亚型的分子遗传学分析

目的研究无偿献血者中昆明地区ABO亚型的分子机制。方法对26名无偿献血者正反定型不符的标本ABO基因第6、7外显子及侧翼内含子进行测序分析。结果 26例标本中共检测到2个O等位基因(O01、O02)、4个A等位基因(A101、A102、A105、A201)、9个B等位基因(B101、B(A)02、B305、Bel03、Bx02、Bw03、Bw11、Bw17、Bw19)以及1个新的B等位基因。该新等位基因基因第6外显子上检测到255CT,为同义突变。结论本研究揭示了昆明地区献血者ABO血型亚型的分子遗传学背景。ABO基因第6外显子255CT突变未见报道。     

3例ABO血型鉴定正反不符患者基因序列分析——附1个新的ABO等位基因突变点位的发现

目的 探讨导致3例ABO血型正反定型不符的分子机制。方法 采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行亚型鉴定;采用PCR方法扩增ABO基因的6、7外显子;采用测序方法对ABO6、7外显子进行直接测序。结果 血型血清学试验结合基因测序证实3例标本为分别为：AwB(1例)、Ael(2例)。基因直接测序发现先证者1在A等位基因第7外显子发生了476C>T、595C>T突变,在B等位基因第7外显子526C>G、657C>T、703G>A、796C>A、803G>C、930G>A突变;先证者2、3在A等位基因第7外显子发生了476C>T和767C>T突变,两标本突变点符合Ael₀₅。以上的基因位点改变均导致了ABO血型的血清学表型变化,表现为ABO亚型。先证者3的母亲及女儿都携带Ael₀₅等位基因。结论 本研究揭示了3例ABO亚型的分子遗传背景,并发现1个新的ABO血型等位基因,即：c.595C>T单基因位点突变。     

CisAB与B(A)血型的鉴定分析——附报告5例

目的了解吉林地区人群中Cis AB和B(A)血型的特点及其表型与基因型的关联性。方法采用微孔板法对本血液中心无偿献血者共71 200名进行ABO血型筛查鉴定,对凝集强度减弱和正反定型结果不一致样本采用试管法进行血型血清学分析和亚型鉴定,对血清学检测为ABO亚型的样本再采用PCR-SBT方法对6、7外显子和部分内含子进行基因序列分析。结果经ABO基因测序确定Cis AB 3例、B(A)2例,等位基因有Cis AB01、Cis AB05、B(A)02、B(A)04,其中发现1例B(A)04/B(A)04纯合基因型,它们对应的血清学表型有A2B、A2Bx和Ax B。结论Cis AB和B(A)血型通过血清学表型通常难以区分,经基因测序可以明确血清学特征形成的分子基础。     

1例ABw表型的血清学和基因型检测

目的 鉴定对1例ABO疑难血型标本的表型和基因型.方法 1例ABO疑难血型标本用血清学方法做ABO表型检测,用PCR-SSP法做ABO基因鉴定,用直接测序法和克隆测序法对ABO基因的第6、7外显子做序列分析.结果 血清学定型:ABw表型;PCR-SSP法鉴定:AB型;直接测序:A101/B101等位基因杂合,但伴有nt1055的G/A突变;克隆测序:G1055A突变发生在B101等位基因上,该突变产生Bw07等位基因.结论 在中国人群中发现A101/Bw07基因型.     

cisAB基因型与表型分析2例

目的对父子(先证者1,先证者2)2例ABO疑难血型标本鉴定血清型和基因型。方法用血清学方法检测标本ABO血清型,用ABO基因亚型检测试剂盒检测基因型,测序法对ABO基因的第6、7外显子测定序列。结果血清学结果显示,先证者1红细胞上具有高凝集强度的A2抗原、H抗原和弱凝集强度的B抗原,血浆中含有弱凝集强度的抗-B,初步判定为A2Bx型;先证者2红细胞上具有高凝集强度的B抗原和弱凝集强度的A2抗原、H抗原,血浆中含有弱凝集强度的抗-A,初步判定为A2B型。基因亚型分型结果显示,先证者1为AO2型,先证者2为AB型。直接测序结果显示,先证者1第6外显子为261delG和A297G,第7外显子为C467T,T646A,G681A,C771T,G803C,G829A;先证者2第6外显子为A297G,第7外显子为C467T,C526G,C657T,G703A,C796A,C803C,G930A。克隆测序法显示2名先证者均具有CisAB01等位基因,先证者1同时具有O2等位基因,先证者2同时具有B101等位基因。结论由于与cisAB杂合的等位基因不同,造成均具有cisAB01等位基因的2名先证者在血清学上的显著差异。     

2个新的ABO血型等位基因的发现和序列分析

目的 探讨4例ABO血型正反定型不符标本的遗传背景。方法 采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行亚型鉴定;采用PCR方法扩增ABO基因的7个外显子;采用测序方法对7个外显子进行直接测序。结果 血型血清学试验证实4例标本为ABO亚型,分别为:Bx(1例);ABx(1例);Ax(2例)。基因直接测序发现Bx和ABx在ABO~*B.01基础上1～6外显子未发生改变,仅在B等位基因第7外显子发生了449位核苷酸AG的突变;2例Ax在ABO~*A1.01基础上1～6外显子未发生改变,仅在A等位基因第7外显子发生了467位核苷酸CT的突变和798位插入了一个碱基T,以上的基因位点改变均导致了ABO血型的血清学表型变化,表现为ABO亚型。结论 研究揭示了4例ABO亚型的分子遗传背景。发现2个新的ABO血型等位基因,即:c.449AG单基因位点突变,c.467CT的突变和c.798insT单碱基插入。     

α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶等位基因467C＞T和539G＞C变异导致A2亚型

为了研究中国汉族人群ABO血型系统中A2亚型的分子遗传背景，发现并鉴定新的ABO等位基因，采用血型血清学方法鉴定5例ABO血型疑难样本，PCR扩增ABO基因转录调控序列和全编码序列，PCR产物经割胶纯化后直接测序，并对含有变异位点的扩增片段进行单倍体序列分析。结果表明：5例疑难样本分别鉴定为A2或A2B亚型；进一步研究发现，1例A2B和1例A2样本分别含有A201和A205等位基因，另3例A2B样本中发现一个新的A2等位基因。该等位基因与A101相比，差异在外显子7的467C〉T和539G〉C变异，导致多肽链P156L和R180P的替换。结论：首次发现467C〉T和539G〉C组合的A2等位基因，中国汉族人群中A2亚型具有遗传多态性。     

B(A)02/O02亚型的血清学及分子遗传学研究——附报告1例

目的鉴定罕见的B(A)02/O02亚型,选择合适血液进行配血。方法应用血型血清学鉴定表型,利用分子生物学对血液标本第6、7外显子进行基因测序,并做家系调查。结果先证者和其父亲标本血清学鉴定疑似B(A),H物质较正常B型明显增强,血清中产生不规则抗-A;经基因测序后,2例标本的第6外显子有O02等位基因,其B等位基因的第7外显子发生700CG突变。结论经血清学和分子生物学检测后,2例标本均证实为B(A)02/O02,为先证者选择O型洗涤红细胞和AB浆输血治疗。     

一个先天性长QT综合征家系的分子遗传学诊断研究

目的 对一个先天性长QT综合征（long QT syndrome，LQTS）家系进行分子遗传学分析。方法应用多聚酶链式反应-单链构象多态分析（Polymemse Chain Reaction—single Strand Conformation Polymorphism，PCR—SSCP）结合测序的方法，筛选KCNH2基因的突变位点。结果 患者第7外显子在编码序列的1682位点发生C〉T碱基替换，引起A561V错义突变。同时，在编码序列的1691位点上存在一个G〉A的SNP，引起L564L同义突变。在该家系中患者父亲和母亲也携带了L564L同义突变。结论 分子遗传学分析可以准确的诊断LQTS，排除临床疑似患者，指导临床LQTS的治疗和遗传咨询。     

ABO血型A201等位基因表达A抗原活性的分析

目的研究ABO血型A201等位基因表达A抗原活性。方法运用血型血清学方法对1家2代3人的唾液及血液标本的ABO血型进行检测;运用Identifiler法医基因分析试剂盒作为亲缘关系鉴定;PCR扩增ABO基因后,对所有外显子做DNA测序分析,运用PCR-RFLP法进行同步检测A201等位基因中的序列变异。结果亲缘关系鉴定在Identifiler的15个遗传标记系统中显示,父母可以将所有的等位基因提供给子女,确定具有亲缘关系;然而运用不同来源的3份抗体对ABO血型进行检验时,却出现了正定型否定了母子关系,反定型无法排除母子关系的现象。3个标本ABO基因的测序:父、母、子的基因型分别为O01/O01、A201/B101及A201/O01,符合反定型结果,这就说明A201等位基因在A表型及AB表型中表达的A抗原活性差异显著。运用PCR-RFLP法可将A201等位基因中的2个主要变异点1059-1061del C和467C/T。结论 ABO血型A201基因在AB及A表型中表达A抗原活性,可由于检测抗体不同出现一定的差异;基因测序与PCR-RFLP法进行同步分析能够快速简便的鉴定A201等位基因中的1059-1061del C和467C/T。     

ABO血型A201等位基因表达A抗原活性的分析

目的了解ABO血型系统中A201等位基因表达的A抗原活性。方法采用血型血清学方法检测1个家系2代3人血液和唾液各1份标本的ABO血型表型;应用Identifiler法医基因分析试剂盒作亲缘关系鉴定;PCR扩增ABO基因所有外显子区后作DNA测序分析,PCR-RFLP法同步检测A201等位基因中的序列变异。结果亲缘关系鉴定显示在Identifiler的15个遗传标记系统中,父母均能够提供全部相应的等位基因给孩子,确定存在亲缘关系;然而采用不同来源的3份抗体作ABO血型检验时,出现其中之一的正定型试验否定母子关系、反定型不能排除母子关系的矛盾现象。3个标本ABO基因的测序:父、母、子的基因型分别为O01/O01、A201/B101和A201/O01,支持反定型结果,提示A201等位基因在AB和A表型中所表达的A抗原活性存在明显的差异。PCR-RFLP法成功地同步鉴定出A201等位基因中的2个主要变异点467C/T和1059-1061delC。结论 ABO血型A201基因在AB和A表型中表达A抗原活性可能因检测抗体不同表现出一定的差异;基因测序与PCR-RFLP法同步分析可简便快速地鉴定A201等位基因中的467C/T和1059-1061delC。     

B(A)血型的血清学特点及基因分析—附1例报告

目的探讨1例B(A)血型的血清学特点,及采用基因测序技术对B(A)血型进行鉴定。方法采用血型血清学技术检测ABO血型表型,采用直接测序和克隆测序方法确定其ABO基因型。结果血清学结果正反定型不符,正定型为AB型,A抗原较弱,H抗原较正常B型明显增强;反定型血浆中有较弱的抗-A1;对ABO基因第6、7外显子进行基因测序,第6外显子有O_(02)等位基因,第7外显子存在640AG突变,证实为B(A)_(04)等位基因,基因型确定为B(A)_(04)/O_(02)。结论血型确定为B(A)血型,进一步基因型鉴定为罕见的B(A)_(04)/O_(02)。     

ABO血型新等位基因Ael08的分子生物学研究

目的研究ABO新等位基因Ael08的分子机制。方法利用单克隆抗体检测先证者标本红细胞ABO血型抗原,标准A、B、O红细胞检测血清中的ABO抗体,吸收放散试验检测红细胞上微量抗原;采用PCR技术扩增先证者ABO基因的第5~7外显子序列,PCR产物经双酶切后直接测序分析6和7外显子;扩增产物经TOPO TA克隆到质粒载体中获得单链,对所得克隆作ABO基因第6、7外显子双向测序分析;家系调查采集先证者父亲和哥哥的标本作血型血清学试验和ABO基因第6和7外显子直接测序分析。结果先证者红细胞上表达很弱的A抗原,只有通过吸收放散才能有效检出,同时其血浆中存在较强的抗-B和较弱的抗-A;直接测序分析发现:6号外显子第261位缺失杂合,7号外显子第297位A/G、467C/T、646T/A、681G/A、771C/T、829G/A、804insG/G杂合;克隆测序发现1个为常见的O02等位基因,另1个为1种新的等位基因(已被dRBC NCBI命名为Ael08),与A102比较,Ael08在第804位碱基处插入G,这导致氨基酸第268位后阅读框架发生改变,编码产物比正常A1转移酶多37个氨基酸。家系调查显示:先证者Ael08等位基因从父亲遗传所得。结论发现1个ABO新等位基因Ael08,α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因(A基因)第804位碱基处插入G突变导致产生Ael表型。     

应用变性高效液相色谱技术检测肥大细胞病c-kit基因突变

本研究检测7例肥大细胞病患者c—kit基因激酶编码区突变情况，以探讨该基因变异在肥大细胞病诊断及治疗中的意义。应用PCR测定、变性高效液相色谱技术及DNA测序方法对患者进行c—kit基因外显子17～外显子19突变检测。结果表明：1例患者外显子17扩增产物在DHPLC中出现异常色谱峰，测序结果显示在外显子17出现A→T突变，即D816V；另2例患者外显子18／19经DHPLC检测，结果显示1个额外的色谱峰，测序结果证实在外显子18出现G→C改变，为同义突变L862L。结论：变性高效液相色谱技术是一种高效、可靠的突变检测方法，c—kit基因突变检测对肥大细胞病临床治疗有指导意义。     

HLA新等位基因HLA—A＊1127认定

目的发现和认定HLA新等位基因HLA—A＊1127。方法应用PCR—SSO基因分型技术筛选可能的HLA新等位基因,采用分子克隆和PCR产物直接测序方法得到核苷酸序列,通过软件分析基因序列及其与最同源HLA等位基因序列的差异。结果发现1个样品的HLA—A位点结果异常。其序列与已知所有HLA—A等位基因序列不一致,与同源性最高的等位基因A＊1104的差异是在第三外显子区域的570位碱基发生G→C的替换,并导致了相应的166密码子由GAG→GAC,编码的氨基酸由谷氨酸（Glu）变成天冬氨酸（Asp）;571位碱基发生T→G的替换,并导致相应的167密码子由TGG→GGG,编码的氨基酸由色氨酸（Trp）变成甘氨酸（Gly）。结论该等位基因为HLA新的等位基因,被WHO HLA因子命名委员会正式命名为HLA—A＊1127。