HL—60细胞降钙素基因高甲基化的发生机制

目的：探讨ＨＬ－６０细胞降钙素基因高甲基化的发生机制。方法：采用ＨＬ－６０细胞，以正常骨髓单个核细胞为对照，应用甲基化敏感的限制性内切酶消化，结合设有内外参照的ＰＣＲ技术，检测ＣＴ基因甲基化状态；应用同位素激量分析法检测ＤＮＡ－胞嘧啶－甲基转移酶（ＤＮＡ－ｃｙｔｏｓｉｎ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＭＴａｓｅ）活性；应用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测ＭＴａｓｅ基因表达水平。结果：ＨＬ－６０细胞经甲基化敏感的内切酶Ｈｐａ Ⅱ消化后仍可扩增出清晰的ＣＴ基因特异条带，提示ＣＴ基因５’端呈高甲基化状态；ＨＬ－６０细胞ＭＴａｓｅ活性平均测定值为５３９．９Ｂｑ，是正常骨髓单个核细胞（平均２１．８Ｂｑ）的２９．８倍；ＭＴａｓｅ基因的ｍＲＮＡ表达水平以ＭＴａｓｅ与β－ａｃｔｉｎ内参照ＲＴ－ＰＣＲ产物的比值表示，ＨＬ－６０细胞（０     

三氧化二砷对HL-60细胞生长的影响

目的：观察不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对HL－60细胞生长的作用。方法：采用瑞氏染色油镜观察细胞形态；四甲基噻唑氮蓝（MTT）比色法观察As2O3对HL－60细胞的生长抑制作用。结果：瑞氏染色显示低浓度的As2O3（0.1μmol/L,1.0μmol/L）诱导后，细胞呈现部分分化现象，而高浓度的As2O3（5．0μmol/L）诱导后细胞呈现凋亡特征，As2O3能明显抑制HL－60细胞的生长，第1天半数抑制率（IC50）约为20．0μmol/L，第2天、第3天IC50均约为5．0μmol/L。结论：As2O3能明显抑制HL－60细胞的生长；低浓度者可诱导HL－60细胞部分分化，高浓度者可诱导其凋亡。     

白血病细胞诱导分化过程中降钙素基因异常甲基化的研究

采用ＰＣＲ检测技术，观察白血病细胞诱导分化前后ＣＴ基因甲基化型的变化和检测本方法的灵敏度及对检测白血病ＭＲＤ的意义。结果发现随着ＨＬ－６０细胞以及人早纪粒白血病体外诱导分化成熟，该基因由收藏 化状态转变为正常，２例缓解期的ＡＰＬ病人，其甲基化正常，本方法的度为１／１０００白血病细胞，如进一步提高敏感性，将有助于ＭＲＤ的检测。     

阿司匹林诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:研究非甾体类抗炎药阿司匹林(ASA)对体外诱导人急性白血病细胞的凋亡作用及其相关机制.方法:采用MTT法测定ASA对HL-60细胞的抑制率,通过光镜、流式细胞仪(FCM)、原位末端标记法(TUNEL)观测ASA诱导HL-60细胞凋亡,半定量RT-PCR检测基因表达.结果:浓度为2.5～10mmol/L的ASA能抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;ASA与阿糖胞苷(Ara-c)抗肿瘤作用具有相加效应;ASA可下调HL-60细胞c-myc mRNA水平表达.结论:一定浓度ASA在体外有抑制急性白血病细胞生长和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与c-myc基因下调有关.     

一氧化氮对白血病HL-60细胞作用的研究

目的 :探讨NO对髓系白血病细胞HL - 6 0的作用。方法 :以SNP为NO供体 ,采用MTT法检测细胞生长抑制率 ,光镜、电镜观察细胞形态学变化 ,DNA电泳、FCM检测凋亡率等方法。结果 :SNP在 0 .5～ 4 .0mmol/L浓度范围内能明显抑制HL - 6 0细胞的生长 ,此作用有浓度和时间依赖性 ;且在作用 12h后细胞出现凋亡 ,SNP2 .0mmol/L浓度作用 36h ,凋亡率达 6 8.71% ,DNA电泳出现梯形带。NO清除剂N -乙酰半胱氨酸能显著降低SNP的这种作用 (P <0 .0 1)。结论 :NO对HL - 6 0细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

HL-60细胞端粒酶活性的调控因素

目的 探讨HL－60细胞端粒酶活性的调控因素。方法 用脂质体介导法将LXSN－wt-p53逆转录病毒质粒导入人髓性白血病细胞系HL-60中,用c-myc,bcl-2基因反义脱氧寡核苷酸作用HL－60细胞,用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL－60细胞分化后,采用TRAP－ELISA－PAGE法测定端粒酶活性,观察野生型p53基因、c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）对HL－60细胞端粒酶活性的影响。结果 野生型p53基因不影响HL－60细胞的端粒酶活性;bcl-2及c-myc反义寡核苷酸可下调HL－60细胞的端粒酶活性;ATRA在诱导HL－60细胞分化的同时,可使HL－60细胞的端粒酶活性降低。结论 HL－60细胞端粒酶活性受到c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）的调节。     

HpaⅡ—PCR检测慢性髓细胞白现降钙素基因甲基化

采用ＨｐａⅡ－ＰＣＲ检测３１例不同病期慢性髓细胞白血病降钙素基因甲基化。结果显示：降钙素基因的高甲基化与慢性髓细胞白血病恶性程度密切相关,加速期与夺始细胞危象期检出率远高于慢性期。提示检测降钙素基因甲基化水平期预测疾病转变和选择骨髓移植病例有参考价值。     

高三尖杉酯碱诱导HL-60细胞凋亡过程的研究

目的：探讨高三尖杉酯碱对HL—60细胞凋亡过程的影响。方法：DNA电泳及流式细胞术。结果：DNA电泳出现细胞凋亡时特征性生化改变—DNA“Ladder”样带。FCM显示在G0／G1峰前有一低DNA含量峰，即凋亡细胞峰。不同研究方法均表明HHT能诱导HL—60细胞凋亡，其影响强度和作用时间及剂量呈依赖关系。结论：HHT抗白血病的机理可能是通过诱导细胞凋亡实现的。     

DNA甲基化与卵巢肿瘤的研究进展

DNA甲基化是目前肿瘤领域研究中研究最多的表现遗传学机制之一.特殊基因的DNA异常甲基化对于卵巢肿瘤的发生、发展、治疗、预后及肿瘤耐药性都有重要影响.随着DNA甲基化检测水平的提高,DNA甲基化的检测可望成为卵巢肿瘤早期诊断、病情进展、患病风险评估及预后评估的重要的分子生物学诊断方法.     

水杨酸钠对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞的影响

目的：研究水杨酸钠对HL－60细胞的影响。方法，用MTT法检测水杨酸钠对HL－60细胞存活率的影响，光镜、电镜观察细胞形态学变化；流式细胞术分析DNA含量；Annexin-V结合分析检测靶细胞磷脂酰丝氨酸外化。结果：水杨酸钠明显抑制HL－60细胞生长，并呈时间，剂量信号性；5mmol.L^-1(IC50)的水杨酸钠作用后，HL－60细胞出现典型的凋亡形态特征，并检测到亚二倍体峰；同时，靶细胞磷脂酰丝氨酸外化率显著高于阴性对照组（0．24vs0.03)。结论：水杨酸钠能抑制HL－60细胞生长并促进其凋亡。     

降钙素基因相关肽与银屑病Langerhans细胞的相关性

目的:探讨神经递质降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP) 与银屑病皮损Langerhans细胞的相关性,研究银屑病的发病机制.方法:抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物法确定CGRP的靶细胞,用双相间接免疫荧光染色法,把CD1a单克隆抗体和CGRP抗体作用于寻常型银屑病斑块型皮损同一切片,用PE-αM IgG和FITC-αR IgG 抗体显示,通过激光扫描共焦显微镜观察,并利用RNA探针原位杂交技术,研究表皮树枝状细胞CGRP的来源.结果:免疫组化染色银屑病皮损显示CGRP阳性表皮树枝状细胞,经双相免疫荧光染色及激光扫描断层光切,可见CGRP存在于银屑病皮损表皮CD1a+ Langerhans细胞膜表面,Langerhans细胞内有CGRPmRNA的表达.结论:寻常型银屑病斑块型皮损表皮Langerhans细胞与神经肽CGRP密切接触,同时Langerhans细胞内有CGRPmRNA的表达.     

中药安迪对HL-60细胞分化的诱导作用

目的　探讨安迪粉针剂 (Andi)对 HL- 60细胞分化的诱导作用 .方法　采用人早幼粒白血病细胞株 (HL - 60 )为靶细胞 ,分为不加任何药物的对照组 (C组 )、安迪粉针剂 (Andi)组、阳性对照药维甲酸 (RA)组和苦参 (KS)组 ,进行体外培养和诱导分化 ,观测细胞生长曲线、细胞形态、硝基蓝四氮唑(NBT)还原和吞噬能力等指标 .结果　 2 mg· L-1 Andi可显著地抑制 HL - 60细胞增殖 ,使原始细胞分化为中幼以下的成熟细胞 ,分化后的细胞具有 NBT还原能力和吞噬功能 ;Andi为 68.0 % ,RA为 61 .5% ,KS为 59.0 % ,C组还原能力仅6.0 % (P<0 .0 1 vs C) .其形态的改变和吞噬能力与阳性对照药维甲酸 (RA)和苦参 (KS)相似 ,分别为 52 .0 % ,45.5%和56.5% (P>0 .0 5) ;均明显高于空白对照组 .C组吞噬功能仅7.5% (P <0 .0 1 vs C)其 NBT还原能力与 KS相当 (P >0 .0 5) .结论　 Andi对 HL - 60细胞具有显著的诱导分化作用     

富铁对HL-60细胞Bcl-2基因表达的影响

目的 :探讨富铁对HL 60细胞Bcl 2基因表达的影响 ,揭示铁促进肿瘤细胞增殖的机制。方法 :体外加入不同浓度的三氯化铁培养HL 60细胞 6h、12h、2 4h、48h ,亲和免疫组化LSAB法检测HL 60细胞Bcl 2基因表达。结果 :Bcl 2表达在 5 0 μmol/L、10 0 μmol/L的三氯化铁作用HL 60细胞 12h、2 4h和 48h时最高 ,与对照组相比有差异 (P <0 0 5 )。结论 :铁可促进肿瘤细胞生长 ,铁诱导Bcl 2表达增高可能是铁促进HL 60细胞增殖的机制之一     

8-Br-cAMP对人白血病HL-60细胞生长、分化及有关基因表达的影响

目的　观察 8 Br cAMP对HL 6 0细胞生长、分化及其相关基因的调节。方法　组织化学、原位杂交和完整细胞RNA斑点印迹。结果　 8 Br cAMP作用 2 4h ,HL 6 0细胞c fos癌基因和p2 1waf1抑癌基因表达明显升高 ,c myc癌基因表达明显降低 ;8 Br cAMP作用 48h ,HL 6 0细胞生长、增殖明显受抑制 ,并向中性粒细胞方向分化。结论　 8 Br cAMP可调整HL 6 0细胞生长、分化及相关癌基因和抑癌基因的表达 ,抑制HL 6 0细胞的生长 ,促进HL 6 0细胞的分化     

苦荞胰蛋白酶抑制剂对HL-60细胞增殖的抑制作用

应用MTT法分析了苦荞胰蛋白酶抑制剂对急性髓细胞性白血病细胞株HL－60细胞生长的影响。结果显示：苦荞胰蛋白酶抑制剂能够显著抑制HL－60白血病细胞的增殖，而对正常细胞毒性较小，其IC50值分别为0．29g/L和1．01g/L，并且对HL－60细胞增殖的抑制作用呈明显的剂量-效应和时间－效应关系。这一结果表明，苦荞胰蛋白酶抑制剂可显著地抑制HL－60细胞的增殖，有望开发成为一种新型的抗白血病药物。     

三尖杉酯碱对HL60和L1210细胞核DNA结构的影响

用国产抗肿瘤药物三尖杉酯碱处理HL60 和L12 10 细胞 ,探讨药物对两种不同的白血病细胞以及在不同条件下培养的同种白血病细胞核DNA结构的影响。DNA凝胶电泳结果表明 :(1) 0 2 μg/mlHT作用 2h的HL60 细胞和HT作用 2～ 2 4h的L12 10 细胞有明显的DNAladder。 (2 )HT处理 6～ 2 4h的HL60 细胞、在DBA/ 2纯种小鼠体内培养的被HT处理不同时间的L12 10 细胞及所有对照细胞无DNAladder。 (3)HT处理 2 4h的HL60 细胞和HT处理 12h的白血病小鼠体内的L12 10 细胞核DNA断裂成碎片 ,在琼脂糖凝胶上呈弥散状分布。     

三氧化二砷对HL-60细胞端粒酶活性表达的抑制作用

目的:探讨不同浓度的三氧化二砷(As2O3 )与HL-60细胞共反应不同时间后对其端粒酶活性表达的抑制作用.方法:采用端粒重复序列扩增(TRAP)-银染法检测HL-60细胞的端粒酶活性,并经Smart view生物电泳图像分析系统扫描分析.结果:浓度分别为0.1 μmol/L、1.0 μmol/L、5.0 μmol/L的As2O3 与HL-60细胞共培养3天,HL-60细胞相对端粒酶活性由97.83%下降至9.62%,且具有剂量依赖性和时间依赖性.结论:As2O3可有效抑制HL-60细胞的端粒酶活性.     

灵芝复方诱导HL-60白血病细胞凋亡的研究

应用体外集落与液体培养、细胞形态学观察、ＤＮＡ片段凝胶电泳及ＤＮＡ片百分率测定等方法观察灵芝复方对人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ生长及ＨＬ－６０细胞增殖和凋亡的作用。发现灵芝复方在一定浓度范围内对人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ生长有促进作用，而对白血病系ＨＬ－６０细胞集落生长则表现了剂量依赖性抑制；细胞形态学经为芝复方对ＨＬ－６０细胞凋亡具有剂量和时间依赖性诱导作用。８和１６ｍｇ／ｍｌ灵芝复方作用４８ｈ，可使ＨＬ－６０细