依赖核酸序列的扩增技术在诺如病毒基因检测中的应用

目的将一种新颖的核酸扩增技术-依赖核酸序列的扩增技术(NASBA)应用于诺如病毒的快速检测与辅助诊断。方法根据NCBI诺如病毒RdRp基因保守序列设计特异性引物,建立NASBA检测方法,同时验证该方法的特异性、灵敏度和重复性,并利用所建立的NASBA检测方法对临床收集的108例病毒性腹泻患者粪便标本进行检测。结果本文建立的NASBA检测方法对诺如病毒具有高度特异性,与轮状病毒等腹泻相关病毒均无交叉反应,反应体系具有很高的稳定性;灵敏度高,即诺如病毒最低检测线为20 pg/μl;检测周期短,NASBA反应在42℃90 min即可进行有效扩增,3 h~4 h即可完成样品中目标基因的筛选。结论本研究应用的诺如病毒NASBA检测方法特异性好、灵敏度高、快速易操作,尤其适用于诺如病毒的日常监测和暴发疫情的应急诊断。     

诺如病毒——挑战感染控制

急性胃肠道感染是一种相当常见的疾病，发病率仅次于发生在北美洲家庭的急性呼吸道疾病。尽管这种疾病长时间被怀疑是由病毒引起，但经过近30年的临床和实验室研究之后才确定引起这种疾病的病毒。最开始被认为是类似于诺瓦克样（Norwalk-like）病毒的新病毒，以后依据地名诺瓦克命名为诺瓦克病毒。诺瓦克是俄亥俄州的一个市，在那里发生了一次由原核因子引起的暴发，现在将其命名为诺如病毒（Norovirus）。     

诺如病毒引起的感染性腹泻暴发疫情调查

目的调查了解诺如病毒引起的感染性腹泻暴发疫情的流行病学特点及传播途径,为制定预防控制对策提供依据。方法采用流行病学现场调查和统计分析方法、轮状病毒抗原检测、诺如病毒RNA检测以及细菌分离培养常规方法。结果本次疫情共发生病例444例,其中犯人360例,同时波及周围村屯及矿区工人;首例9月18日,末例10月7日,高峰在9月25~26日,不同区域流行时间不一致;病例分布有一定的区域聚集性;病例以成人为主;临床表现较轻,病程多在2~3天,有一定自限性;血常规多正常,大便常规均无异常;26份粪便标本中24份诺如病毒RNA检测阳性,1份轮状病毒抗原检测阳性,3份同时检出诺如病毒和产毒性大肠埃希菌。结论证实此为一起由诺如病毒引起的感染性腹泻暴发疫情,传播途径主要系生活接触传播所致。     

一起由诺如病毒引起的感染性腹泻事件调查

目的:查找一起学校群体性感染性腹泻的原因,为制定防控措施提供科学依据。方法:结合现场流行病学调查,采集粪便标本8份,肛试子标本2份、水标本1份进行诺如病毒、肠道致病菌检测。结果:8份粪便标本5份检测诺如病毒阳性,1份肛试子标本诺如病毒阳性,水标本诺如病毒GⅠ型,未检出致病菌。结论:确定本次事件是水源性诺如病毒感染性腹泻引起的暴发疫情,及时切断传染源,是控制疫情的有力措施。     

诺如病毒感染性腹泻分子流行病学调查

目的 了解医院就诊腹泻病例诺如病毒感染现状及主要基因型.方法 收集2009年4月-2010年4月临床腹泻就诊患者的资料及标本,采用RT-PCR方法检测诺如病毒并进行分型.结果 在214例来医院就诊的腹泻患者中,诺如病毒阳性率为16.8％;其中19.4％患者伴有基础疾病;临床症状以恶心呕吐、发热、水样便为主;全年均有散发病例但在冬春季节出现明显的发病高峰,约占全年病例数的58.3％,基因型以GⅡ型为主.结论 腹泻就诊患者中诺如病毒感染不容忽视,基因型以GⅡ为主.     

诺如病毒研究进展

1病原学该病毒最早是从1968年在美国诺瓦克市的一次急性腹泻爆发的患者粪便中分离得到的病原,当时被命名为诺瓦克病毒。此后,世界各地陆续自胃肠炎患者粪便中分离出多种形态与之相似但抗原性略异的病毒样颗粒,均以发现地点命名,后称为诺瓦克样病毒(Norwalk-like virus NLV),直至2002年8月第八     

诺如病毒感染性腹泻肠道排毒时间及其影响因素

目的  研究诺如病毒肠道排毒规律,找出影响其肠道排毒时间的因素。方法  采集深圳市龙华区3起发生诺如病毒感染性腹泻暴发疫情中涉疫人群的肛拭子标本并检测,定期监测并计算排毒期,分析临床症状和基本特征等排毒期的影响。结果  共监测3起聚集性疫情涉及255名对象,型别均为GII型,纳入研究对象91名。采取停课措施后(疫情发生后3~5 d),病毒感染率达到最高值,幼儿较成人的排毒时间更长(HR=0.235,P＜0.001),不同岗位人群排毒期比较差异有统计学意义(H=8.528,P=0.014)。学生病例中未发热感染者较发热病例(HR=2.281,P=0.025)排毒期更长。结论  诺如病毒隐性感染者和病例在班级复课后仍持续带毒,二者排毒期无差异,但学生群体中隐性感染者较病例排毒期更长,易造成疫情二次传播风险。     

海岛地区腹泻病例中诺如病毒基因序列分析

目的了解海岛地区病毒性腹泻病原中诺如病毒的流行状况,对优势流行株进行基因序列分析。方法对舟山市监测医院疑似病毒性腹泻粪便样本经酶联免疫吸附法(ELISA)筛选轮状病毒,对阴性样本采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增诺如病毒RNA聚合酶与主要衣壳蛋白基因,PCR扩增产物进行测序反应,序列结果与GenBank已公布的序列进行比对,测其同源性;并绘制成系统发生树进行进化分析。结果在35份诺如病毒扩增阳性样本中挑选病毒载量最高的Hu/Zhejiang/9/2006/CHN株进行测序,并与Hunter株、Farming Hill株等进行比对并绘制系统发生树。Hu/Zhejiang/9/2006/CHN株属于诺如病毒GⅡ-4群,与Hunter株和Lanzhou株形成的分支较接近,RNA聚合酶有部分序列与这2株完全相同。结论舟山市(海岛地区)病毒性腹泻病原中存在诺如GⅡ-4群,采用GDD基序分析有利于更好地发现新的变异株的存在,为病毒性腹泻的病原学和基因学研究提供依据。     

蜱类携带粒细胞无形体的核酸检测及核酸序列分析

目的了解蜱类自然感染粒细胞无形体(anaplasma phagocytophilum)的状况,为人粒细胞无形体病的预防、控制提供技术支持。方法利用分子生物学技术,通过对野外采集的蜱类样品的核酸(DNA)提取、聚合酶链反应(套式PCR)、凝胶电泳分析以及核酸序列分析等,对蜱类携带的粒细胞无形体进行确认。结果在大连地区采集的长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)中检测到粒细胞无形体。序列分析结果表明,与GenBank数据库中已注册的粒细胞无形体核酸序列有高度的相似性(97%～99%)。结论我国大连地区存在蜱粒细胞无形体感染。应加强对该地区蜱类的监测和控制,防止因蜱类叮咬导致人粒细胞无形体病的暴发流行。     

深圳市某大型工厂发生诺如病毒腹泻暴发的调查

目的调查深圳市松岗街道内某公司诺如病毒感染性腹泻暴发原因及处理对策。方法采用现场流行病学调查分析和实验室检测方法。结果 2009年9月21日—10月3日,该公司总发病258例,临床诊断病例248例,实验室确诊病例10例;男168例,女90例;厨房、各厂房、各宿舍均有发病。全厂罹患率为1.81%,男女罹患率分别为2.13%和1.33%,无住院病例,无死亡病例。厂务部和厨房员工罹患率较高,分别为50.00%、24.64%;45岁-组罹患率最高,为26.67%。在病人粪便、直饮水水源中检测到诺如病毒抗原。结论该次疫情为一起水源性诺如病毒感染性腹泻暴发。建议市政自来水公司直接提供一切生活饮用水。     

2016-2018年广州儿童腹泻诺如病毒检测及流行状况分析

目的 了解2016-2018年广州地区儿童腹泻中诺如病毒感染的情况,为临床诊断和病毒性腹泻疾病的防控提供可靠数据.方法 收集2016年1月至2018年12月住院和门诊的腹泻12岁以下儿童粪便标本856份,采用荧光定量RT-PCR检测方法检测诺如病毒核酸,确定是否感染阳性,并从患者感染年龄、性别、时间等方面比较分析.结果...     

两种核酸染料的应用比较研究

目的 研究GoldView核酸染料对于凝胶中DNA/RNA的染色效果及其取代EtBr用于常规电泳后凝胶中核酸染色的可能性。方法 将电泳后的SSCP凝胶和琼脂糖凝胶放入两种核酸染液中轻摇浸染30～45min，并注意避光，300nm紫外灯下观察并照相记录。结果 GoldView染色后，dsDNA呈绿色荧光，ssDNA呈红色荧光，可检测到少至5ng的dsDNA，灵敏度与EtBr大致相当。结论 GoldView是一种安全、灵敏的EtBr替代品，可用于常规核酸染色。     

2013 - 2014年广西诺如病毒腹泻暴发疫情特征分析

目的 分析广西壮族自治区诺如病毒腹泻暴发疫情的流行特征及影响因素,为疾病防控提供科学依据。方法 采用现场流行病学调查方法收集2013年1月至2014年12月广西地区诺如病毒腹泻疫情报告及个案资料,并进行整理分析。结果 2013年1月至2014年12月,广西共报告6起诺如病毒腹泻疫情,累计病例257例,99.61%为临床诊断病例,无死亡病例。疫情暴发地点主要集中在学校;病例时间分布有明显季节性,主要集中在春秋季的3、10和11月;病例年龄主要为1～10岁(29.13%)和11～20岁(54.72%);可能的传播途径包括经水、食物、人传人接触传播等多途径。共采集87份病例、48份食堂从业人员肛拭子,检出诺如病毒RNA阳性数分别为44份和4份,检出率分别为50.57% 和8.33%。结论 广西地区诺如病毒暴发疫情主要发生在人口密集的学校,应重点针对中小学校, 开展健康宣教,加强个人卫生习惯,同时加强饮用水卫生、食品卫生等监测工作, 减少诺如病毒腹泻暴发疫情的发生。     

核酸适配子的研究进展与应用展望

核酸适配子是采用指数富集配体的系统进化(SELEX)技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体。核酸适配体由于具有精确识别、易体外合成与修饰等特点,它已在基础研究、临床诊断与治疗以及新药研发等诸多领域展示了广阔的应用前景。鉴于其特有的性质,它们将在环境毒理研究及相关领域,如环境毒素的快速检测、生物体内毒性评价、毒性阻断研究上有着广阔的应用前景。     

2016-2019年常州地区无偿献血者酶免和核酸平行检测结果分析

目的 分析ELISA和NAT平行的血液筛查模式对降低经输血感染病原体风险的有效性.方法 收集常州市2016—2019年270215例无偿献血者血液标本,采用两次ELISA并行检测HBsAg、抗HCV、抗HIV和抗TP.268264例ELISA双阴性标本采用6人份混样(pool)NAT进行HBV DNA、HCV RNA和...     

武汉地区致人腹泻轮状病毒的核酸电泳和血清分型研究

提要本文报告对武汉地区540例腹泻病人的粪便标本进行了聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,并对电泳阳性标本用酶标法检测血清型。结果表明,电泳阳性数59例,其中,电泳短型22型,长型37例,并获得6种电泳异型图谱。病原血清分型结果为Ⅰ型25例(42.37％),Ⅱ型18例(30.51％),Ⅲ型4例(6,78％),Ⅳ型12例(20.34％)。短型与血清Ⅱ型符合率为81.8％,长型与其它血清型符合率为90.2％。     

2006年上海监测点婴幼儿腹泻标本中诺如病毒基因分析

[目的]了解2006年上海监测点婴幼儿病毒性腹泻散发病例中诺如病毒基因型别及核酸变异情况。[方法]应用一步法RT-PCR扩增89份病毒性腹泻标本中诺如病毒核酸,测序后应用基因分析软件包对核酸序列进行分析。[结果]12条核酸序列经测序和比对均属于诺如病毒GII基因组,其中3条核酸测序序列与2006年德国公布的序列同源性相近;其余9条核酸测序序列与2004年中国、2004、2005年日本、2006年荷兰公布的序列同源性相近。[结论]2006年上海地区婴幼儿中存在诺如病毒GII基因组散发病例,并以GII4基因型为主。     

浙江台州地区婴幼儿诺如病毒感染特征及危险因素分析

目的了解浙江台州地区婴幼儿腹泻病例诺如病毒的感染情况,并分析其危险因素。方法选取2017年1—12月台州地区腹泻哨点监测医院0~6岁腹泻患儿670例,对患儿粪便样本进行诺如病毒核酸检测,与轮状病毒感染患儿进行症状对比,同时根据病毒阳性情况,选取396例健康体检儿童作为对照组,分析诺如病毒感染的危险因素。结果670例腹泻患儿中诺如病毒阳性率为19.70%(132例),其中GⅡ基因型110例,GⅠ基因型22例;不同性别和年龄腹泻患儿诺如病毒阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。2017年1—2月和10—12月阳性率呈现高峰;诺如病毒感染患儿腹泻≥5次/d、水样便、呕吐及发热的比例明显高于轮状病毒感染患儿,差异有统计学意义(χ^2=43.147、12.563、49.847、28.589,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,菜板生熟未分(OR=1.958,95%CI:1.243~3.086)和发病前1周接触胃肠炎患者(OR=2.438,95%CI:1.247~4.765)是诺如病毒感染的危险因素。结论婴幼儿腹泻病例诺如病毒感染呈明显的季节性分布,菜板生熟未分、发病前1周接触胃肠炎患者是诺如病毒感染的危险因素。