地塞米松对哮喘大鼠Th1/Th2失衡及嗜酸性粒细胞凋亡的作用

目的　观察地塞米松对哮喘大鼠Th1/Th2 (T辅助细胞 1/T辅助细胞 2 )平衡、嗜酸性粒细胞 (EOS)凋亡率的影响作用 ,探讨糖皮质激素治疗哮喘的机制。方法　清洁级雄性SD大鼠 30只 ,随机分为 3组 :正常对照组 (C)、哮喘组 (A)、地塞米松治疗组 (T)。卵清白蛋白复制大鼠哮喘模型 ,检测大鼠血、支气管肺泡灌洗液 (BALF)中IL 4、IFN γ水平及气道壁EOS凋亡率。结果　A组大鼠BALF中IFN γ水平明显低于C组 (P <0 0 1) ,血中及BALF中的IL 4水平则明显高于C组 (均为P<0 0 1) ,表现出明显的Th1/Th2失衡。T组大鼠IL 4的表达明显低于A组而IFN γ的表达则明显高于A组 (均为P <0 0 1)。在A组 ,大鼠气道壁EOS的浸润明显增多 ,但凋亡细胞却很少看到 ,EOS凋亡率明显低于C组 (P <0 0 1) ,T组EOS凋亡率则明显高于A组 (P <0 0 1)。结论　纠正哮喘Th1/Th2失衡和促进气道壁EOS凋亡可能是糖皮质激素减轻哮喘气道炎症的重要机制之一。     

不明原因习惯性流产患者主动免疫治疗前后Th1/Th2型细胞因子水平的变化

为探讨主动免疫治疗对不明原因习惯性流产 (UHA )患者Th1/Th2型细胞因子水平的影响。采用酶联免疫吸附法检测15例正常非妊娠妇女、 35例UHA患者淋巴细胞主动免疫治疗前后经滋养细胞抗原刺激的外周血单个核细胞 (PBMC )培养上清液中IL 2、IFN γ、IL 4、IL 10的水平。结果发现 :(1)在最佳诱导时间下 ,UHA组治疗前PBMC产生IL 2、IFN γ的水平明显高于正常对照组 (P <0 0 5 ) ,IL 4、IL 10水平明显低于正常对照组 (P <0 0 5 )。UHA组治疗后PBMC产生IL 2、IFN γ的水平较治疗前明显降低 (P <0 0 5 ) ,IL 4、IL 10水平较治疗前明显升高 (P <0 0 5 )。UHA组治疗后PBMC产生各细胞因子的水平与正常对照组比较 ,差异均无显著性 (P >0 0 5 ) ;(2 )UHA组 35例患者主动免疫治疗后半年内 2 8例妊娠 ,其中 9例又出现自然流产。 9例自然流产者治疗后IL 2、IFN γ水平未明显下降 ,IL 10水平未明显上升。 19例妊娠成功者治疗后IL 2、IFN γ水平较治疗前明显下降 (P <0 0 5 ) ,IL 4、IL 10水平明显上升 (P <0 0 5 )。以上结果表明UHA患者对滋养细胞抗原产生以Th1型反应为主的免疫应答 ,产生大量Th1型细胞因子 ,主动免疫治疗有助于上调Th2型细胞因子及下调Th1型细胞因子 ,利于UHA患者妊娠成功。     

肝癌患者癌组织与外周血Th1/Th2细胞的监测及临床意义

目的 :为观察肝癌患者癌组织与外周血Th1 Th2细胞变化及临床意义。方法 :Th1 Th2细胞检测采用酶联免疫斑点法 (ELISPOT) ,细胞因子检测采用双抗体夹心ELISA法。结果 :肝癌患者癌组织与外周血Th1 Th2细胞比值明显降低 (P <0 0 5 ) ,其Th1型细胞表达IL 2、INF γ等细胞因子水平明显低于正常对照组 ;Th2型细胞表达IL 4、IL 10等细胞因子水平明显高于正常对照组。PHA和IL 12介导肝癌患者手术切除前和手术切除 3个月后外周血Th1型细胞表达IL 2、INF γ等细胞因子水平升高 ,Th2型细胞表达IL 4、IL 10等细胞因子水平明显下降。结论 :肝癌患者癌组织与外周血Th1 Th2细胞比值均明显降低 ,细胞因子表达失衡 ,肝癌患者存在免疫功能抑制 ,因此 ,在肝癌治疗过程中打破免疫抑制 ,纠正Th1 Th2细胞比例失衡是必要的     

消化道肿瘤患者Th1/Th2细胞的监测和分析

为观察肿瘤患者外周血Th1/Th2细胞数及其与肿瘤的相关性。Th1/Th2细胞的检测采用酶联免疫斑点法 (ELISPOT ) ,细胞因子的检测采用双抗体夹心ELISA法。结果胃癌患者Th1/Th2细胞比值降低 (P <0 0 5 )。经IL 12 +抗IL 4单抗处理组 ,Th1/Th2细胞比值升高 ;经IL 4 +抗IFN γ单抗处理组 ,Th1/Th2细胞比值降低 (P <0 0 5 )。胃癌、结直肠癌患者外周血中Th2细胞均占优势 ,其Th1型细胞因子IL 2和IFN γ与正常人相比显著降低 ;Th2型细胞因子IL 4、IL 6和IL 10与正常人相比显著升高 (P <0 0 5 ) ;同时 ,TNF α显著升高 (P <0 0 5 ) ;IL 12降低 ,其中结直肠癌患者与正常人比没有显著差异 (P >0 0 5 ) ,胃癌患者与正常人比有显著差异 (P <0 0 5 )。此外还发现随着肿瘤分化程度的降低 ,Th1型细胞因子的降低和Th2型细胞因子的升高更加明显 (P <0 0 5 )。肿瘤患者Th1/Th2细胞比值降低 ,同时 ,Th1型细胞因子降低 ,Th2型细胞因子升高。但在肿瘤的免疫治疗过程中 ,通过诱导IL 12等Th1型细胞因子的分泌 ,可促进细胞免疫应答 ,有助于疾病的治疗。     

L-4在支气管哮喘发病中的作用研究

目的　研究IL 4在促使支气管哮喘发病中的作用。方法　用ELISA方法检测 39例支气管哮喘产妇和 46例正常产妇新生儿脐血中IL 4、IFN γ、sIL 2R和总IgE含量 ,并计数脐血嗜碱性粒细胞数 ,同时用免疫磁珠纯化脐血T淋巴细胞和嗜碱性粒细胞 ,以RT PCR和ELISA方法检测上述细胞刺激后表达IL 4mRNA和IFN γmRNA以及其释放的蛋白质。结果　哮喘脐血组IL 4、IFN γ和sIL 2R含量和嗜碱性粒细胞数虽高于正常脐血组 ,但两组差异无显著性 (P >0 .0 5 )。而纯化的脐血嗜碱性粒细胞表达IL 4mRNA和释放IL 4的水平 ,哮喘组显著高于正常脐血组 ,也高于T淋巴细胞。结论具有支气管哮喘遗传背景的新生儿脐血嗜碱性粒细胞对环境因素的刺激更加敏感 ,其释放的IL 4在促使支气管哮喘发病中起重要作用     

DV2 NGC株感染BALB/C小鼠后IL-4、IFN-γ产生动态的研究

目的 :观察 2型登革病毒NGC株感染BALB C小鼠后其IL 4、IFN γ产生动态 ,研究登革病毒感染的免疫机制。方法 :用不同含量的DV2NGC株经皮下多点注射 ,间接ELISA法测定感染后不同时间各组小鼠血浆IL 4、IFN γ含量。结果 :DV2NGC株感染小鼠产生IL 4和IFN γ动态不同。初次感染早期 ,IL 4水平明显升高 ,而IFN γ处于较低水平 ;再次感染后第 1天 ,IL 4水平达最高峰 ( 4 2 94 6 6 8± 349 0 38pg ml) ,IFN γ则于第 4天和第 11天达较高水平 ,两者的产生彼消此长 ,且产生动态与感染病毒量有关。结论 :DV2NGC株感染早期 ,体液免疫和细胞免疫相互影响 ,体液免疫占主导作用 ,为Th2应答优势。但在登革热感染后期 ,细胞免疫一定程度抑制Th2应答 ,使病情好转     

在单个细胞水平上分析抗原特异性Th1/Th2细胞因子产生的关联性

目的　在单个细胞水平上 ,观察抗原特异性Th1和Th2细胞因子产生的关联性 ,为进一步阐明CD4 T细胞的分化 ,细胞因子产生的相互关系及其特征提供理论依据。方法　从OVA TCR转基因小鼠的脾和淋巴结中分离CD4 T细胞 ,在体外在抗原提呈细胞存在下 ,用卵白蛋白 (OVA)抗原多肽刺激 3d后 ,再以同样的培养条件刺激 5～ 6h ,固定细胞 ,然后进行细胞表面和细胞内细胞因子染色 ,最后利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析Th1和Th2细胞因子产生的关联性。结果　抗原特异性CD4 T细胞经抗原再一次刺激后 ,分泌Th1(IFN γ和IL 2 )和Th2 (IL 4、IL 5和IL 10 )细胞因子。IL 12促进IFN γ的表达 ,控制Th2细胞的分化。此外 ,大多数抗原特异性CD4 T细胞只产生 1种细胞因子 ,1个细胞同时产生 2种细胞因子极少见。结论　在单个细胞水平上的研究结果表明 ,经抗原短暂刺激后 (3d) ,不同的CD4 T细胞亚群只产生 1种Th1和 或Th2细胞因子 ,同时产生两种以上者占有很低的比率     

肺癌患者Th1/Th2状态及川芎嗪的调节作用

本研究采用RT PCR方法 ,以IFN γ和IL 2代表Th1型细胞因子 ,IL 4、IL 6、IL 10代表Th2型细胞因子 ,分别检测 3种肺癌细胞株 (鳞、腺、小细胞肺癌 )以及荷瘤机体外周血单个核细胞 (PBMC )Th1/Th2状态 ,并观察中药川芎嗪 (Tetram ethlpyrazine ,TTMP )的作用。结果显示 3种肺癌细胞株IFN γ和IL 2均无表达 ,而IL 4、IL 6、IL 10均表达 ;经川芎嗪培育后 ,3种肺癌细胞株均出现IFN γ的表达 ,而IL 4、IL 6的表达被抑制 ,小细胞肺癌株同时表达IL 2。肺癌患者PBMC中IL 4、IL 6和IL 10表达阳性率明显高于正常人 ,而IL 2无 1例表达 (0 / 2 3) ,IFN γ仅 1例表达 (1/ 2 3) ;与川芎嗪培养后 (两种浓度 ) ,肺癌患者IL 2 ,IFN γ的表达率明显提高 ;Th2型因子表达的优势状态较未加药组出现明显逆转。表明川芎嗪可促进肺癌细胞株和肺癌患者PBMC的Th2优势状态向Th1方向逆转     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4~+T细胞细胞因子的检测

本文通过检测系统性红斑狼疮 (SLE )患者外周血中Th1和Th2分泌IFN γ、IL 2、IL 4细胞因子的表达情况 ,探讨Th1/Th2细胞因子水平与SLE的发病关系。采用流式细胞分析法对 4 1例SLE患者和 15例健康志愿者外周血中细胞因子(IFN γ、IL 2、IL 4 )在辅助性T细胞 (CD4 )内的表达进行检测。结果活动期SLE患者Th1细胞因子的表达率较正常人明显下降 (P <0 0 1)。SLE患者Th1细胞因子 (IFN γ、IL 2 )的表达与SLEDAI之间具有明显的负相关性 (P <0 0 5 )。活动期SLE患者Th1细胞因子的表达明显下降 ,SLE患者Th1细胞因子水平与SLEDAI之间呈负相关性     

SLE患者外周血IFN-γ及IL-4细胞因子mRNA的表达研究

为利用实时监测定量PCR技术检测细胞因子mRNA的表达 ,从mRNA水平探讨IFN γ、IL 4mRNA的变化。对初诊SLE患者外周血IFN γ、IL 4的mRNA表达进行检测 ,并同时使用LPS及PHA作刺激剂研究其对SLE患者细胞因子mRNA表达的影响。结果是PHA刺激后 ,正常组IFN γmRNA的表达明显高于SLE组 (P =0 0 2 4 ) ;LPS对正常对照的IFN γ和IL 4的mRNA表达均能明显上调 ,但SLE患者仅表现为IFN γ升高 ,IL 4升高不明显 ;未刺激组SLE患者与正常对照的比较结果显示IFN γ的表达及IFN γ/IL 4有明显降低 (P =0 0 14 ,P =0 0 33)。故SLE患者与正常对照相比 ,IFN γmRNA的表达下降 ,同时SLE患者的IFN γ、IL 4mRNA表达对LPS及PHA的反应下降。由于不同的患者受累系统不同 ,临床表现不一 ,可能T细胞的异常并不相同 ,其免疫系统紊乱的机制也不一致     

自体角朊细胞引起Th1向Th2极化抑制同种异体免疫应答

我们已有的工作揭示 ,在混合皮肤移植的体外模型MELC中 ,自体角朊细胞可通过间接递呈同种异体抗原诱导免疫抑制。本文在此基础上 ,进一步分析其中Th1和Th2相关细胞因子含量的变化。结果发现 :(1)向MELC引入自体角朊细胞后约 32h ,原同种异体应答中出现的IFN γ和IL 2分泌格局开始让位于IL 4和IL 10 ,6 4h后IFN γ和IL 2完全消失 ,表明发生了淋巴细胞Th1向Th2亚群的极化 ;(2 )单抗封闭试验表明 ,IL 10在其中起关键作用 ;(3)经自体和异体角朊细胞调变过的淋巴细胞对MELR的作用相反 ,前者抑制 ,后者促进。这是首次从T亚群相互作用上探索并揭示混合皮肤移植引起局部免疫耐受的机制。     

IFN-γ/IL-4对早孕期蜕膜细胞和绒毛滋养层细胞的体外影响

探讨Th1/Th2型细胞因子对人孕早期绒毛滋养层细胞和蜕膜细胞活性及其内分泌功能的影响。绒毛滋养层细胞和蜕膜细胞活性采用MTT法进行检测 ,绒毛组织分泌的人绒毛膜促性腺激素 (hCG )和蜕膜组织分泌的催乳素 (PRL )均采用放免法 (RIA )进行分析测定。结果 :(1)一定浓度范围的Th1型细胞因子IFN γ (10～ 10 0 0ng/ml)和Th2型细胞因子IL 4 (1～ 10ng/ml)对绒毛滋养层细胞活性及其hCG分泌分别有不同程度的抑制作用 (P <0 0 1)和促进作用 (P <0 0 1) ;(2 )Th1型细胞因子IFN γ低浓度时 (1～ 10ng/ml)对蜕膜细胞活性及PRL分泌有刺激作用 (P <0 0 5 ) ,高浓度时 (10 0～ 10 0 0ng/ml)则有抑制作用 (P <0 0 1) ,Th2型细胞因子IL 4对蜕膜上述功能的调节作用与对绒毛滋养层的调节作用相似。Th1/Th2型细胞因子可能是通过影响绒毛滋养层细胞和蜕膜细胞活性及其内分泌功能而在早期妊娠中起重要的免疫调节作用     

Altered Th1/Th2 balance associated with the immunosuppressive/protective effect of the H-2Ab allele on the response to allo-4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase

The H-2A^b allele exerts a dominant down-regulatory effect on the anti-allo-HPPD (4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase) antibody response, through a hitherto unknown mechanism. In the present study, the allo-variable peptide bound to responder H-2A^k molecules with higher affinity than to H-2A^b ones, arguing against the operation of an affinity hierarchy. Quantitative polymerase chain reaction revealed differences in cytokine mRNA expression between suppressed and high-responder mice. Lymph node cells of responder but not suppressed mice contained high levels of interleukin (IL)-4 mRNA as early as 11 h post-immunization and continued to do so for at least 8 days; this early burst was paralleled by a small burst in transforming growth factor (TGF)-β mRNA level. Differences in IL-12 mRNA were not detected, although an early IL-12 effect could not be excluded. Interferon (IFN)-γ appeared to contribute to the suppression at later time points. Early treatment of responder mice with anti-IL-4 monoclonal antibody (11B11) down-regulated the antibody response. The proliferative T cell response from hyperimmunized mice was reduced but still detectable in the presence of an H-2A^b allele. Thus, in the presence of this allele, the Th1 response is enhanced and that of Th2 cells suppressed, apparently as a result of the bias of H-2A^b-restricted T cells in favor of the Th1 subset.     

Differential regulation of Th1 responses and CD154 expression in human CD4+ T cells by IFN-alpha

Like interleukin (IL)-12, interferon (IFN)-alpha has been shown to play an important role in inducing human Th1 responses. Recent studies have shown that human Th1 responses driven by IL-12 are associated with enhanced expression of CD154. The present study examined the effects of IFN-alpha on CD154 expression in human CD4+ T cells, with special attention to the relationship with Th1 responses. Highly purified CD4+ T cells from healthy donors were stimulated with immobilized anti-CD3 with or without IFN-alpha and IL-12 in the complete absence of accessory cells. IFN-alpha suppressed CD154 protein and mRNA expression in CD4+ T cells at the initial phase of activation with immobilized anti-CD3, but enhanced it in the subsequent maturation phase irrespective of the presence of IL-12. By contrast, IFN-alpha by itself did not enhance IFN-gamma production or mRNA expression in CD4+ T cells in the absence of IL-12 even in the presence of stimulation with anti-CD28, but enhanced it in the presence of IL-12. Accordingly, IFN-alpha enhanced IL-12Rbeta2 mRNA expression in anti-CD3-stimulated CD4+ T cells. Neither IFN-alpha nor IL-12 influenced the stability of CD154 mRNA in anti-CD3-activated CD4+ T cells. These results indicate that IFN-alpha by itself enhances CD154 expression in CD4+ T cells independently of the induction of IFN-gamma mRNA expression. The data also suggest that the optimal induction of human Th1 responses by IFN-alpha might require the presence of IL-12 and that the induction of Th1 responses and CD154 expression in human CD4+ T cells might be regulated through different mechanisms.     

转染MHCII类基因对卵巢癌细胞株免疫特性的影响

建立稳定表达CIITA基因的人卵巢癌细胞株HO CIITA ,分析转染CIITA基因对T细胞体外抗肿瘤免疫应答的影响。以CIITA基因逆转录病毒 (pLXSN/CIITA )转染并筛选获得HO CIITA。用FACS和RT PCR分析HLA以及抗原加工递呈基因表达水平。以磁珠法分离得到正常人外周血CD4 +/CD8+T细胞 ,分别进行混合淋巴细胞反应及细胞因子测定 (ELISA和RT PCR )。结果显示 ,转染CIITA基因后 ,使HO细胞HLAII类分子和LMP7基因表达增高 ,而Ii基因表达由阳性转为阴性 ,未检测到TAP1表达 ;HO和HO CIITA细胞刺激CD4 +T细胞分泌IL 4含量两者有显著差异。刺激 4 8h后达到顶峰 ,前者分泌量约为后者的 1/2 ,但分泌IFN γ无差异 ,RT PCR与ELISA两种测定结果一致。表明转染CIITA基因可增加肿瘤细胞表面MHCII类分子的表达 ,该作用与IFN γ具有协同效应 ;并能诱导CD4 +T细胞表达IL 4。     

The pro‐Th2 cytokine IL‐33 directly interacts with invariant NKT and NK cells to induce IFN‐γ production

IL‐33 has recently been identified as a cytokine endowed with pro‐Th2 functions, raising the question of its effect on invariant natural killer T cell (iNKT), which are potent IL‐4 producers. Here, we report a two‐fold increase of iNKT‐cell counts in spleen and liver after a 7‐day treatment of mice with IL‐33, which results from a direct effect, given that purified iNKT cells express the T1/ST2 receptor constitutively and respond to IL‐33 by in vitro expansion and functional activation. Conversely to the expected pro‐Th2 effect, IL‐33 induced a preferential increase in IFN‐γ rather than IL‐4 production upon TCR engagement that depended on endogenous IL‐12. Moreover, in combination with the pro‐inflammatory cytokine IL‐12, IL‐33 enhanced IFN‐γ production by both iNKT and NK cells. Taken together these data support the conclusion that IL‐33 can contribute as a co‐stimulatory factor to innate cellular immune responses.