中国人凝血因子Ⅸ基因MseⅠ多态性

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限制性内切酶ＭｓｅⅠ酶解分析，发现我国人群凝血因子ＩＸ（ＦｌＸ）基因５’侧翼－６９８位核苷酸存在ＭｓｅＩ多态性，该多态性由８３ｂｐ／５８ｂｐ＋２５ｂｐ组成。在受检的１１８个ＦＩＸ基因中，二者基因频率分别为０．６３５和０．３６５，多态性信息量为０．４６３。此系我国人群中发现的第二种限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ），有助于血友病乙携带者的检测及产前基因诊断。     

中国汉族人群vWF基因MspⅠ和RsaⅠ限制性片段长度多态性研究

目的：研究我国汉族人群ｖＷＦ基因的多态性特点。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术结合ＭｓｐⅠ和ＲｓａⅠ酶切分析研究了５２名汉族人１０４条染色体ｖＷＦ基因ＭｓｐⅠ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和４８名汉族人９６条染色体的ＲｓａⅠＲＦＬＰ。结果：在我国汉族人中，等位基因ＭｓｐⅠ＋／ＭｓｐⅠ－的频率为０．２０∶０．８０，理论杂合频率为３６％；ＲｓａⅠ＋／ＲｓａⅠ－的频率为０．９３∶０．０７，理论杂合频率为１３％。结论：在我国汉族人中，在ｖＷＦ基因的５′端存在ＭｓｐⅠ和ＲｓａⅠ的多态性位点，可用于血管性血友病的遗传咨询和产前诊断。     

聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测肿瘤坏死因子β基因多态性

目的：建立酶链反应限制性片段长度多态性（PCR－RFLP）检测肿瘤坏死因子β（TNFβ）多态性的方法。方法：采用PCR方法扩展TNFβ第一外显子到第二外显子包含G→A突变在内的DNA片段，扩增产物用限制性内切酶Nco I酶切后电泳，分析TNFβ的基因型。结果：TNFβ检测到3种基因型，分别为TNFβ＊1／1、TNFβ＊1／2和TNFβ＊2／2。结论：PCR－RFLP检测肿瘤坏死因子β多态性方法快速、简便、准确、可靠，适合普通实验室开展及大规模研究。     

应用PCR技术对凝血因子Ⅷ基因多态性的研究

凝血因子Ⅷ(FⅧ)是血液凝固过程中起重要作用的一种血浆蛋白,其基因缺陷可导致临床上常见的遗传性出血性疾病——血友病A。本研究应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增FⅧ基因的BclⅠ和Xba Ⅰ的特异片段,经酶解后分析酶切位点限制性片段长度多态性(RFLP),BclⅠ的多态信息量(PIC) 为0.36,XbaⅠ为0.49,联合应用则为0.67。在30名受检女性中,BclⅠ杂合频率为40％,XbaⅠ为53％,联合应用则为76％。15个家系中,10个可采用BclⅠ或XbaⅠ进行RFLP分析。对这些家系中19名可疑携带者进行检测,结果诊断出8名基因携带者。     

聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术在乙型肝炎病毒基因分型中的应用

目前乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)基因型的分型方法有 4种 ,即全基因测序[1] ,表面抗原基因 (Ｓ基因 )序列分析[2 ] ,聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (ＰＣＲ ＲＦＬＰ)基因分型[3 6] ,单克隆抗体酶联免疫吸附试验基因分型法[7] 。而ＰＣＲ ＲＦＬＰ方法是较成熟、准确、简单的方法 ,本研究用分析基因库软件和ＰＣＲ ＲＦＬＰ技术及Ｌｉｎｄｈ等[3] 基因分型方法对广州地区乙型肝炎无症状携带者 (ＡｓＣ)和患儿的基因型进行研究。一、材料和方法1.标本来源 :2 0 0 0年 1月至 9月本院就诊ＡｓＣ和乙型肝炎患儿血清 91份 ,其中ＡｓＣ血清 6 0份 …     

乙型肝炎病毒基因的巢式聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分型及初步应用

目的 用改进的乙型肝炎病毒(HBV)巢式聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)的基因分型方法初探广州地区HBV基因型分布状态。方法 设计巢式PCR扩增前S基因，经限制性内切酶AvaⅡ和DpnⅡ酶切鉴别HBV A—G基因型；并对140份乙型肝炎患者血清进行基因分型，其中随机挑选3份进行克隆测序，并对20份患者血清进行巢式PCR—RFLP重复分型试验，以验证此分型技术的稳定性和特异性。同时采用PCR和巢式PCR对92份乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阴性血清进行HBV DNA阳性率检测比较。结果 基因分型与测序结果一致；基因分型重复试验符合率100％；92份HBeAg阴性血清经PCR和巢式PCR扩增HBV DNA的阳性率分别为20．7％和68．5％。140份乙型肝炎患者血清中HBV基因型以C型(94份)和B型(42份)为主，偶见A型(4份)。结论 巢式PCR—RFLP HBV基因分型方法具有良好的敏感性、特异性、稳定性，且操作简便，适用于临床和流行病学调查研究。     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测载脂蛋白E基因型

目的建立一种简便、准确、实用的人载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）基因型的检测方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增ａｐｏＥ基因含编码１１２位和１５８位氨基酸的基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＨｈａⅠ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＩＰ）图谱。结果运用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测了１１３名健康人ａｐｏＥ基因型，频率分别为ε３／３６９．０％，ε３／２１６．８％，ε４／３１１．５％，ε４／２１．８％，ε４／４０．９％；ε２、ε３和ε４等位基因频率分别是９．３％、８３．２％和７．５％。结论该方法简单、快速、准确，对人体无害，适合于一般实验室开展及大规模人群调查     

中国北方汉族人群TRIB1基因rs17321515多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的 探讨中国北方汉族人群TRIB1基因rs17321515多态性与2型糖尿病的关系.方法 应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测了148例对照组,98例2型糖尿病组和76例2型糖尿病并发冠心病组TRIB1基因rs17321515多态性基因型,分析了不同组间基因型和等位基因频率分布特点,并探讨了基因多态性对糖化血红蛋白(HbA1c)、血糖、血脂水平的影响.结果 三组研究对象间的TRIB1基因rs17321515多态性基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05).中国北方汉族人群rs17321515多态性基因型AA,AG,GG频率分别为0.151,0.500,0.349,A,G等位基因频率分别为0.401,0.599,与不同国家地区间人群分布差异无统计学意义(χ2=3.543,P=0.471).2型糖尿病并发冠心病组中AG+GG基因型患者TG水平明显高于AA型,差异有统计学意义(P<0.05).未发现TRIB1基因rs17321515多态性与性别相关.Logistic回归分析显示,A等位基因是2型糖尿病并发冠心病的危险因素(95%CI=1.032～4.742,OR=2.212,P=0.041).结论 TRIB1基因rs17321515多态性与2型糖尿病并发冠心病有关联,A等位基因可能是我国北方地区汉族人群2型糖尿病并发冠心病发病的危险因素.     

限制性片段长度多态性分析人血小板抗原5系统基因型

目的 建立人类血小板抗原（HPA）5系统限制性片段长度多态性（PCR－RFLP）分析方法。方法 采用PCR－RFLP方法对25名健康献血员的HPA－5系统进行基因分型。分型结果与采用等位基因特异性寡核苷酸点杂交（PCR－ASO）获得的结果进行比较。结果 以PCR－RFLP方法对25名献血员的HPA－5系统分型：24名为a/a型,1名为a/b型,未发现b/b纯合子个体,结果与PCR－ASO方法获得的结果完全一致。结论 使用PCR－RFLP方法对HPA－5系统进行基因分型,具有简便、快速、准确等优点,有利于新生儿同种免疫血小板减少性紫癜、输血后紫癜和血小板输注无效等疾病的诊断和治疗。     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性 检测维生素D

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云南省傣、彝、汉族人FⅦ基因BclI限制性片段长度多态性的研究

为探讨FⅧ基因BclI限制性内切酶多态性住点在云南省人群中的诊断价值，应用PCR技术及PAGE分离技术获得云南省傣、彝、汉族人拜的多态信息量(polymorphic informative con-tent，PIC)，其中傣族人的PIC为O．6435．明显高于汉族人的PIC0．4190，显高于彝族人PIC0．3641，这充分显示了FⅧ BclI多态现象的民族差异性及该分子遗传标志的应用价值。     

74例血友病B患者FⅨ基因突变研究

目的 研究导致中国人血友病B的凝血因子Ⅸ（FⅨ）基因突变类型的分布,并比较与美国白种人群有何异同。方法 从患者外周血白细胞抽提基因组DNA,分9段扩增Ⅸ基因外显子序列,用基因扩增转录测序技术直接测序法检出突变。结果 74例患者中有69例查到了FⅨ基因58种突变。分析比较这69例患者FⅨ基因突变类型的分布特征与美国白种人无显著性。中国不同地区之间差异也无显著性。结论 中国人血友病B的FⅨ基因突变类型非常分散,呈高度异质性。与美国白种人之间相比差异无显著性。     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测维生素D受体基因型

目的建立一种简便、实用、准确的人维生素Ｄ受体（ＶＤＲ）基因型的检测方法，以利于ＶＤＲ基因变异在骨质疏松研究中的应用。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增ＶＤＲ基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＢｓｍⅠ酶切，琼脂糖凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）图谱。结果应用ＰＣＲＲＦＬＰ法检测了１１０名健康汉族人ＶＤＲ基因型，ｂｂ、Ｂｂ、ＢＢ基因型分布频率分别是９４％（１０３例）、６％（７例）、０。结论该方法简便、准确、重复性好，适用于一般实验室及流行病学调查。     

云南省傣、彝、汉族人FⅧ基因BclⅠ限制性片段长度多态性的研究

为探讨FⅧ基因BcⅠ限制性内切酶多态性位点在云南省人群中的诊断价值,应用PCR技术及PAGE分离技术获得云南省傣、彝、汉族人群的多态信息量(polymorphic informative con-tent,PIC),其中傣族人的PIC为0.6435,明显高于汉族人的PIC 0.4190,显著高于彝族人PIC0.3641,这充分显示了FⅧBclⅠ多态现象的民族差异性及该分子遗传标志的应用价值。     

江苏地区汉族人群载脂蛋白E基因多态性和表型分布

目的探讨江苏地区汉族人群载脂蛋白E (APOE) 基因多态性和表型分布的特征.方法选择168名江苏地区无血缘关系健康汉族人,聚合酶链反应(PCR)扩增ApoE基因第4外显子包含编码第112位和第158位氨基酸碱基的基因序列,cfoI限制性内切酶酶切后电泳,经银染色后分析ApoE基因型.计算各基因型及等位基因频率分布.结果江苏地区汉族健康人群载脂蛋白E各基因型频率分别为:ε2/2=0.60%,ε2/3=11.90%,ε2/4=1.20%,ε3/4=10.70%,ε3/3=75.00%,ε4/4=0.60%;各等位基因频率分别为:ε2=7.14%,ε3=86.31%,ε4=6.55%.频率分布在不同年龄、性别无显著差异.中国人群ε3等位基因频率明显高于欧美人群,而ε4等位基因频率明显低于欧美人群.结论江苏地区汉族健康人群载脂蛋白E等位基因频率分布与其他地区中国人群频率分布相似,与欧美人群不同.     

中国汉族血友病B家系五种新的FⅨ基因突变的研究

目的探讨中国汉族无关血友病B家系先证者的凝血因子Ⅸ基因的突变和发病的分子机制。方法对19例中国汉族无关血友病B家系先证者，静脉采集各家系先证者外周血，表型诊断确诊后，用PCR对FⅨ8个外显子及其侧翼序列进行扩增，用末端标记双脱氧法检测核酸序列。结果19例血友病B家系先证者均检测到相应的基因序列的改变。结论19例中国汉族无亲缘关系的血友病B家系先证者FⅨ基因在编码外显子的核苷酸部位均发现有基因突变，其中发现五种新的突变，即6444T→A（Cys23Stop）；10497G→C（Cys82Ser）；31101G→T（Arg327Ile）；31102InsertT；30984T→G（Ile288Ser）为国际上首次报道。     

60名上海汉族人群ABO血型系统基因型研究

目的：建立ABO血型系统基因分型方法，研究上海汉族人群ABO血型的基因型分布，并对A等位基因进行较为深入的研究。方法：采用多重聚合酶链反应（PCR）和限制性片段长度多态性（RFLP）方法，单管扩增ABO基因第6和第7外显子，然后用KpnⅠ和MspⅠ两种限制性内切酶同时消化多重PCR产物。结果：在中国汉族符合Hardy-Weinber平衡的随机群体（60人）中，检出A102，A101，B、O1四种等位基因，其基因频率分别为20．8％、2．5％，24．2％，52．5％。基因型频率为BB10．0％、O1O1 21．7％、A102A102 1．7％、A101A102 1．7％、A102O1 33．％、A101O1 3．3％、BO1 25．0％、A102B 3．3％，未检测到O2基因。3名血清学疑为A2亚型的个体中有1名经PCR－序列特异性引物（SSP）法证实存在A467（C→T）及1060位单个碱基C缺失的移码突变。结论：上海汉族人群A型以A102占优势。     

汉族正常人群与血栓性疾病患者vWF裂解酶C1423T基因多态性调查

目的　研究我国汉族人群中血管性血友病因子裂解酶 (vWF cp)基因C14 2 3T多态性的分布频率及其与血栓性疾病的相关性。方法　应用PCR技术结合酶切分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳研究来自我国三个不同地区 4 0 0名汉族人vWF cp中C14 2 3T多态性的分布特点。同时 ,根据病例对照研究 ,比较了健康对照和血栓性疾病患者中该多态性的分布频率。结果　我国汉族人群中C14 2 3T的基因频率分别为 98.5 %和 1.5 % ,总理论杂合率为 2 .96 % ,不同地区人群杂合率不同 ,但未发现 14 2 3T T纯合子。该多态性的基因型与基因频率在健康对照和血栓性疾病患者中相似。结论　vWF cp基因C14 2 3T多态性在我国汉族人群中频率较低 ,尽管它影响vWF cp的酶活性。     

中国北方汉族人群TRIB1基因rs2235108多态性与2型糖尿病合并冠心病的相关性

目的探讨中国北方汉族人群TRIB1基因rs2235108多态性与2型糖尿病(T2DM)合并冠心病(CHD)的关系。方法用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测了147例健康人对照组、96例T2DM组和75例T2DM合并CHD组TRIB1基因rs2235108多态性基因型和等位基因频率分布,分析基因多态性对T2DM和T2DM合并CHD的影响。结果我国北方汉族人群TRIB1基因rs2235108多态性CC基因型频率为81.8%,CT+TT为18.4%,C、T等位基因频率分别为90.5%、9.5%。3组研究对象的TRIB1基因rs2235108多态性基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05)。3组内不同基因型间各项生化指标差异均无统计学意义(P>0.05)。logistic回归分析显示,年龄、HDL-C、高血压病史是T2DM合并CHD的独立危险因素。结论 TRIB1基因rs2235108多态性与T2DM合并CHD无明显关联性,不是我国北方汉族人群T2DM合并CHD发病的独立危险因素。     

Apo CⅢ基因多态性在中国汉族健康人群中的分布特点及与不同种族人群的比较

目的探讨中国南通地区汉族人群载脂蛋白CⅢ(ApoCⅢ)基因多态性在健康人群中的分布特点,并与不同种族进行比较研究。方法收集中国南通地区74名无血缘关系健康个体的静脉血提取DNA,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)结合微流控电泳技术,分别分析ApoCⅢ基因T-455C和C-482T的多态性。结果中国汉族人群ApoCⅢ-455C等位基因频率明显低于印度和哥斯达黎加人群(P0.01),与高加索和法国人群相似;中国汉族人群ApoCⅢ-482T等位基因频率明显高于法国人群(P0.01),与印度和高加索人群相似。结论ApoCⅢ基因T-455C和C-482T的多态性在健康人群分布具有种族差异。