小鼠脊髓腰膨大发育的初步遗传分析

目的 :筛选小鼠脊髓腰膨大发育具有差异的近交系。检测小鼠各世代群体中个体的数量性状值 ,研究遗传因素在小鼠腰膨大发育中贡献的大小。方法 :取 4种近交系小鼠 ,A/J;C5 7BL/6J ;DBA/2J ;12 9xl/SvJ以及A/J与C5 7BL/6J杂交获得的F1和F2个体 ,多聚甲醛灌注后进行腰膨大截面积测定。结果 :四个近交系中 ,A/J与C5 7BL/6J脊髓腰膨大截面积差别显著。脊髓腰膨大发育遗传度为 3 5 % ,最少控制基因对数为 2。结论 :小鼠脊髓腰膨大发育的数量性状值与遗传参数的确定 ,为其数量性状基因座的确定提供了有价值的资料。     

Wnt7b受体Frizzled在小鼠脊髓的表达和分布研究

目的：探讨Wnt信号分子受体Frizzled在小鼠脊髓发育中的作用。方法：取孕14天A／J和C57BL／6J近交系小鼠的胎鼠，于胎鼠中部连续冰冻切片，采用大鼠抗小鼠Frizzled7单克隆抗体，免疫组化法测定Frizzled在脊髓上的表达和分布。结果：发育14天的胎鼠脊髓上的Frizzled表达强度和分布范围在两种品系小鼠中差异有显著性，A／J小鼠在神经管周围表达明显强于C57BL／6J，提示在发育晚期Frizzled的强表达与脊髓发育的抑制相关。结论：Wnt7b的信号转导途径介导了控制脊髓发育的过程。本研究为进一步研究脊髓发育的分子机制奠定了基础。     

微卫星DNA监控近交系小鼠的重组近交系培育研究

目的采用微卫星DNA技术监控近交系小鼠仔代基因状况，有选择性地进行交配繁殖，以达到快速培育新的重组近交系动物。方法利用PCR扩增微卫星DNA技术对近交系C57和BALB／c小鼠所交配繁殖的仔代鼠进行了微卫星DNA多态性分析，与母代C57小鼠相似系数高的与中的进行定向交配繁殖。结果F2代小鼠多态性位点为14个，纯合基因率为53．3％；到F10代时基因纯合位点达29个，纯合基因位点率为96．7％。每代相似系数具有不断上升的趋势，上升率为3％一10％。采用皮肤移植方法验证了F10代小鼠为近交系。结论建立了一种新的快速培育重组近交系动物的方法，打破了传统近交系的培育方法，为今后研究分析动物间的血缘关系和遗传距离奠定了基础。     

小鼠脊髓腰膨大截面积QTL研究

目的 :小鼠脊髓腰膨大截面积性状进行数量性状基因座 (Quantitativetraitlocus ,QTL)的分析定位。方法 :应用近交系小鼠A/J和C5 7BL/6J以及其F1、F2代为材料 ,测定脊髓腰膨大截面积 ,利用分布于小鼠全基因组的 87对引物 ,PCR法进行F2代小鼠基因组扫描分析。结果 :9个QTL与脊髓腰膨大截面积相关 ,分别位于 4,8,13 ,14 ,15 ,16,17和X染色体上。其中 7个QTL的性状变异解释率 (10 % )。对照我们以前的结果 ,3个腰膨大QTL与脊髓重和颈膨大QTL均重叠 ;3个与脊髓重QTL重叠 ;3个单独与腰膨大相关。D15Mit15 8位点显示出最大的性状变异解释率 (15 % ) ,与脊髓重最大的性状变异解释率 (2 4% )的位点相吻合。结论 :研究结果说明控制小鼠脊髓发育最主要位点位于 15号染色体D15Mit15 8附近。本研究为小鼠脊髓发育QTL的精细定位、进行位置克隆以最终确认控制基因打下了基础     

生化标记基因法对近交系小鼠扩大生产群的遗传检测

中国医科大学实验动物学部从上海、北京分别引进DBA／2、BALB／c和C57BL／6三种近交系小鼠。经过培育，作者对第五代扩大生产群近交系小鼠以同功酶和异构蛋白基因作为遗传标记，采用国产的醋酸纤维膜进行丁生化标记基因的检测，证实生化标记基因法县有快速、准确、方便、经济的优点。同时进一步验证近交系小鼠扩大生产群超过5代都有不同程度的遗传污染或变异，为确定传代保持遗传稳定性提供了重要依据。     

无毛小鼠同类系的建立

目的：培育包含无毛基因的同类系小鼠新品系，明确无毛基因在不同遗传背景下的表达方式。方法：将无毛基因通过杂交互交导入法分别导入615、C57BL／6、BALB／c、DBA／2共4种近交系。结果：已完成4代导入杂交的第1代、第3代均表现有毛，第2代、第4代互交育出615、C57BL／6、BALB／c、DBA／2共4种无毛小鼠，其脱毛规律同豫医无毛小鼠。结论：无毛基因可以在不同的遗传背景下表达。     

辽宁省6种常用近交系小鼠10个微卫星位点的遗传质量检测报告

目的 利用微卫星技术对辽宁省6种近交系小鼠进行遗传质量分析.方法 根据 Mouse GenomeDatabase和相关文献选取10个多态信息丰富的位点和引物,进行PCR扩增和PAGE电泳,对小鼠的遗传多态性进行研究.结果 不同品系小鼠同一位点的扩增结果表现出多态性,同一品系同一位点表现单态性,所有小鼠的10个位点都处于纯合状态;遗传距离分析表明,C57BL/10与C57BL/6J小鼠之间的遗传距离最近,为0.1021,遗传距离最远的是BALB/c与C57BL/10、C57BL/6J,分别为0.1635和0.1614.结论 运用所筛选的10个微卫星位点可以对近交系小鼠进行遗传质量检测,说明该方法具备可行性.     

C57BL/6J-HBV转基因小鼠血清生化指标与性别年龄的关系

目的观察C57BL/6J-HBV乙型肝炎病毒转基因小鼠血清总胆红素（T-BIL）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）与性别和年龄的关系，以及与遗传背景相同的C57BL／6J小鼠的差异。方法选取8周龄和24周龄的C57BL／6J-HBV转基因小鼠及C57BL／6J小鼠的血清测定T-BIL、ALT、AST、TP和ALB值。结果C57BL／6J-HBV转基因小鼠与同周龄同性别的C57BL／6J小鼠相比，T-BIL、ALT、AST、TP和ALB均存在显著差异（P〈0．05）；24周龄的C57BL／6J-HBV转基因小鼠ALT和AST与其8周龄鼠相比均存在显著差异（P〈0．05）。结论C57BL／6J-HBV转基因小鼠T-BIL、ALT、AST、TP和ALB值显著高于C57BL／6J小鼠；且C57BL／6J-HBV转基因小鼠ALT和AST值与年龄有关，与性别无关。     

DMD模型小鼠基因突变及肌肉亚型表达特点研究

目的研究C57BL／10ScSn—Dmd^mdx／J模型小鼠子代基因突变情况及肌肉亚型的表达差异。方法选取2、3和4周龄C57BL／10ScSn—Dmd^mdx／J模型小鼠及C57BL／6J小鼠各3只，分别采集膈肌、背阔肌和腓肠肌的肌肉组织，利用RT-PCR方法扩增分析Dmd基因的结构特点；采用Western bolt方法分析β—dystroglycan的表达差异。结果模型小鼠基因编码抗肌萎缩蛋白基因（Dmd）的第3202位点出现C→T的自发突变，模型小鼠β—dystroglycan的表达比正常鼠有显著性升高。结论C57BL／10ScSn-Dmd^mdx／J模型小鼠的肌纤维在发育中出现断裂或是缺失，β-dystroglycan表达大幅度上调。     

影响小鼠冻融精子体外受精率的主要因素探讨

目的分析影响小鼠精子冷冻成功的因素。方法用含3％脱脂奶和18％棉子糖的冷冻保护剂分别冷冻C57BL／6J、FVB／NJ、B6D2F1、KM和ICR小鼠精子。复苏后，评价小鼠精子的冷冻效果和受精能力。结果各品系小鼠精子冷冻前后的受精率不同；新鲜精子体外受精时，C57BL／6J、FVB／NJ、B6D2F1，KM和ICR五个品系的小鼠的受精率分别为81．4％、87．2％、90．4％、82．7％和79．4％而冻融精子的体外受精率分别为6．7％、46．0％、76．8％、59．2％和31．9％，差异极显著（P〈0．01）。结论遗传背景不同的小鼠品系，精子的受精能力及对冷冻的耐受能力不同。     

微管蛋白酪氨酸连接酶样-1在小鼠脊髓中表达差异的研究

目的:探讨微管蛋白酪氨酸连接酶样-1(Ttll1)在脊髓发育中的作用。方法:选用孕18天胎鼠及出生后1天、5天、10天、20天、40天的A/J(A)和C57BL/6J(B6)小鼠,以实时荧光定量PCR方法测定各发育阶段Ttll1在脊髓中的表达。结果:2种品系小鼠不同发育阶段Ttll1的表达有明显差异,A/J小鼠在出生后1天表达最强,C57BL/6J小鼠在胚胎18天表达最强且峰值显著高于A/J的峰值。提示Ttll1的表达与脊髓的发育及与两种小鼠脊髓发育的差异有关。结论:Ttll1基因与脊髓发育相关,其机制可能是通过表达强度调节脊髓的发育。     

小鼠脊髓腰膨大横截面积数量性状基因座研究

应用具有87个标记位点的(A／J)／(C57BL／6J)F2群体的分子遗传图谱对控制小鼠脊髓腰膨大横截面积的效量性状基因座(Quantitative Trait Loci，QTL)进行区间作图。共定位了2个QTL：DXMit140和D15Mit26,并估算了每个QTL的加性效应和贡献率。     

C57BL/6J小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立及其病理特征

目的 探讨C57BL/6J小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的可能性及其发病特点.方法 使用PLP139-151抗原及其C57BL/6J小鼠自制脑脊髓匀浆(spinal cord homogenate,SCH)免疫C57BL/6J小鼠,使用完全福(氏)免疫佐剂为免疫佐剂,并在尾静脉注射百日咳杆菌,建立EAE模型,与经典的PLP139-151免疫的SJL/J小鼠EAE模型进行对比.结果 PLP139-151免疫C57BL/6J小鼠仅有一只小鼠表现为尾部张力明显降低;自制SCH免疫C57BL/6J小鼠可见明显脱髓鞘改变.与PLP139-151免疫SJL/J小鼠组相比发病率较低(P<0.05),神经功能评分比较没有明显差异(P>0.05),但发病时间长于PLP139-151免疫SJL/J小鼠组(P<0.05).结论 SCH免疫C57BIJ6J小鼠的EAE动物模型,主要表现为急性单相病程,从临床表现和病理学特点来看符合人类MS的病理特点,值得在以后的研究中进一步研究探讨.     

小鼠脊髓发育候选基因Wnt7b的初步研究

目的:探讨Wnt7b基因及Wnt信号系统分子对小鼠脊髓发育的作用。方法:基因测序比较A/J和C57BL/6J两种小鼠Wnt7b基因开放阅读框架序列差异;以RT-PCR方法测定Wnt7b基因在两种小鼠组织中的表达差异;免疫组化法测定Frizzled在2种孕14天胎鼠脊髓上的表达和分布。结果:测序结果中发现两种小鼠Wnt7b开放阅读框架序列结构具有差异;在2种小鼠8种组织中,脊髓、肌肉、脾和肾中的Wnt7b基因表达具有明显差异;免疫组化的测定表明,发育14天的胎鼠脊髓上的Frizzled表达强度和分布范围具有显著差异,尤其是A/J小鼠在神经管周围表达明显强于C57BL/6J。结论:基因表达差异和基因结构差异提示,Wnt7b基因与脊髓发育具有一定的关联,应为一脊髓发育候选基因;Frizzled的强表达与脊髓发育的抑制相关,Wnt7b的信号转导途径介导了控制脊髓发育的过程。     

DXB／c近交系小鼠的建立及遗传学检测

将ＤＢＡ／２雌鼠与Ｃ５７ＢＬ／６雄鼠杂交后，利用其Ｆ２代中结进行兄妹交配，建立了ＤＸＢ／ｃ近交系小鼠。目前已近交２８代，历时１３年，经皮肤移植试验、下颌骨形态分析、混合淋巴细胞培养、毛色基因及生化标志基因检测，表明ＤＸＢ／ｃ系小鼠的基因已经纯合，符合一个近交系小鼠的标准，毛色基因及生化标志基因测试结果同时表明ＤＸＢ／ｃ系小鼠的遗传背景组合了两亲代品系的遗传基因。     

近交系小鼠不同供受体组合对移植心脏存活期的影响

目的:在小鼠异位心脏移植模型中观察近交系小鼠不同品系的供受体组合对于移植心脏生存时间的影响.方法:采用腹腔异位小鼠心脏移植模型,术后通过扪诊评估移植心功能,比较C3H/HeJ、Balb/c和C57BL/6J常见近交系小鼠六种不同供受体组合生存时间的差异,并进行组织病理评分.结果:C3H/HeJ、Balb/c和C57BL/6J六种不同供受体组合的受体心脏存活时间无统计学差异,中位生存时间均为7～8 d,而且组内生存时间差异小;移植心脏组织病理检查发现所有标本均表现为严重的排斥反应,各组间无明显差异.结论:C3H/HeJ、Balb/c和C57BL/6J不同供受体组合均能符合移植免疫研究的要求,但是综合考虑手术难度、术后检测、喂养以及感染等因素,C57BL/6J和C3H/HeJ适合作为供体小鼠,而Ba1b/c更适合作为受体小鼠.     

慢性EAE模型C57 BL/6J小鼠脑和脊髓EBI3和p28.mRNA表达

目的：观察IL-27两个亚单位EBI3 mRNA和p28 mRNA在慢性实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型C57BL/6J小鼠脑和脊髓动态表达的变化,探讨其在EAE发病机制中的作用。方法：72只近交系无特定病原体的6～8周健康雌性C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、佐剂组和慢性EAE模型组,采用RT-PCR技术观察不同时期脑和脊髓EBI3 mRNA和p28 mRNA的表达变化。结果：EAE组小鼠在发病初期即有EBI3 mRNA和p28 mRNA的表达升高,在疾病高峰期迅速增加,并在慢性期仍维持在较高水平;与空白对照组和佐剂组相比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。空白对照组小鼠脑和脊髓EBI3 mRNA和p28 mRNA的表达与佐剂组相比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：IL-27有可能在早期促进EAE发病,并维持最后阶段的炎症反应。     

应用MOG—TrxA建立小鼠EAE动物模型的新方法

目的探索利用基因工程生产的少突胶质细胞糖蛋白-硫氧还融合蛋白（MOG—TrxA）免疫C57BL／6（H-2b）小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）动物模型的方法。方法利用实验室已经重组成功的携带pET32（a）-MOG—TrxA质粒的大肠杆菌BL21和携带pET32（a）-TrxA质粒的空载大肠杆菌BL21分别诱导大量表达MOG—TrxA和TrxA,并利用蛋白金属螯合亲和层析纯化,超滤法浓缩除盐,Bradford法蛋白定量,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。利用制备的MOG—TrxA抗原免疫C57BL／6（H-2b）小鼠诱导EAE动物模型,以TrxA免疫动物作为对照组,以脊髓匀浆（SCH）免疫动物作为阳性对照组,以临床评分、体重变化、HE染色和Kluver—Barrera髓鞘染色评分等指标,评价模型的质量。结果MOG—TrxA组动物在临床评分、HE染色病理评分和Kluver—Barrera髓鞘染色病理评分等指标与TrxA组相比明显增高,体重明显下降,数据差异均有统计学意义（均P〈0．01）,与SCH组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论利用基因工程制备的MOG—TrxA免疫C57BL／6（H-2b）小鼠能成功建立慢性非缓僻型EAE动物模型。     

C57BL/6J小鼠听力损失与认知功能下降的相关性

目的 通过对老年性聋模型鼠C57BL/6J和对照组CBA/CaJ小鼠听力检测,认知行为检测以及海马CA3区突触超微结构的观察,探讨C57BL/6J小鼠年龄相关性听力损失与认知功能下降的关系。方法 将C57BL/6J小鼠根据听力随年龄的变化,按年龄分为3组：6～8周、24～26周、42～44周,每组10只。CBA/CaJ小鼠按同样的年龄也分为3组,每组9只。以TDT-Ⅲ型ABR测试仪检测听力,Morris水迷宫实验检测认知行为,透射电镜观察海马突触超微结构。结果 C57 BL/6J小鼠24～ 26周组与4～6周组比较高频开始出现听力下降,42～44周组是3个组中听力最差的。而3组的CBA/CaJ小鼠均保持了较好的听力。42～44周组的C57 BL/6J小鼠与同龄CBA/CaJ小鼠的认知行为比较,在定位航行实验中前者的潜伏期和上台前路程明显长,尤其是第3天和第4天。在空间探索实验中,42～44周组的C57 BL/6J小鼠与同龄的CBA/CaJ小鼠比较穿越平台次数明显少(0.5±0.6比1.9±1.6;P＜0. 05)。海马CA3区在42～44周C57 BL/6J小鼠比24～ 26周小鼠突触间隙明显宽[(19.4 ±0. 5)nm比(11.9±0.7) nm],突触后致密物明显薄[(15.2±0.5) nm比(27.8±2.0) nm],差异均有统计学意义（均P＜0. 05）。而在CBA/CaJ小鼠变化不明显。结论 C57BL/6J小鼠随年龄增加听力进一步下降,42～44周的C57B L/6J小鼠的听力接近全聋。同时42～ 44周C57BL/6J小鼠出现明显的认知功能下降及海马突触退变,而听力较好的同龄CBA/CaJ小鼠却没有出现相应的变化。我们推测C57BL/6J小鼠年龄相关的听力损失同其认知功能下降呈正相关。