内源性大麻素系统对肝硬化的影响

内源性大麻素系统包括内源性大麻素物质、特异性大麻素受体1(cannabinoid receptor1,CB1)和大麻素受体2(cannabinoid receptor2,CB2).许多研究已经证实在慢性肝病发展过程中,肝脏肌成纤维细胞和血管内皮细胞的CB1和CB2表达升高,内源性大麻素系统与肝纤维化及肝硬化关系密切.本文就内源性大麻素系统、内源性大麻素系统和脂肪性肝病、内源性大麻素系统和肝纤维化、内源性大麻素系统和肝硬化并发症等作一综述.     

大麻素受体2与几种消化系统疾病

内源性大麻素系统包括内源性大麻素物质、特异性大麻素受体1(cannabinoid receptor 1,CB1)和CB2.内源性大麻素系统在胃肠道疾病、肝脏疾病、胰腺疾病和肿瘤的发生发展过程中扮演了众多的生理效应和病理生理角色.本文就内源性大麻素系统、CB2与肠易激综合征、炎症性肠病、胰腺炎、肝脏疾病及消化系肿瘤的关系等作一综述.     

氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞内源性大麻素系统激活

目的 探讨氧化型低密度脂蛋白刺激能否诱导巨噬细胞内源性大麻素系统激活.方法 体外常规培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,加入氧化型低密度脂蛋白或溶媒孵育24 h,用高效液相色谱分析技术检测巨噬细胞内源性大麻素Anandamide和2-arachidonoylglycerol水平,以实时定量PCR技术和免疫印迹法对大麻素CB1、CB2受体和血小板活化因子受体mRNA和蛋白的表达进行分析.结果 内源性大麻素2-arachidonoylglycerol水平在6mg/L和12 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激时分别升高了2.4倍和4.8倍,而Anandamide水平无明显变化.3～12mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激时,RAW264.7巨噬细胞大麻素CB1和CB2受体及血小板活化因子受体mRNA和蛋白的表达均明显上调(P＜0.01).结论 首次证实氧化型低密度脂蛋白通过激活血小板活化因子受体诱导巨噬细胞内源性大麻素系统激活,提示氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化过程中可能涉及该系统的激活.     

内源性大麻素样系统与肥胖

内源性大麻素样系统主要由内源性大麻素及其受体组成,后者分为CB1受体和CB2受体两种,激活后可引起摄食增加。与正常小鼠相比,CB1受体(-/-)小鼠的体重和脂肪明显减少,即使在致肥胖饮食条件下也不会发生肥胖或胰岛素抵抗。研究证实,CB1受体拮抗剂可通过中枢和外周两种机制抑制摄食并改善代谢;其中,利莫那班已进入Ⅲ期临床试验,可有效抑制食欲、减轻体重,并且尚未发现明显的副作用。     

丙型肝炎病毒核心蛋白活化内源性大麻素系统诱导不完全线粒体自噬

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白活化内源性大麻素系统诱导不完全线粒体自噬的机制。方法HepG2细胞或表达HCV核心蛋白的HepG2细胞与肝星状细胞(LX-2细胞)共培养。共培养后高效液相色谱-质谱联用技术检测2-AG水平,分光光度法测定检测线粒体呼吸链酶复合体活性,流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平,激光共聚焦显微镜检测Ca~(2+)浓度和线粒体膜电位,试剂盒检测线粒体丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,蛋白质免疫检测大麻素受体1(CB1R)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和p62蛋白表达。计量资料采用t检验。结果与LX-2细胞和HepG2细胞共培养组相比,LX-2细胞和表达HCV核心蛋白HepG2细胞共培养组,2-AG水平增加,线粒体呼吸链酶复合体活性下降,ROS水平和Ca~(2+)浓度升高,线粒体膜电位下降,MDA升高而SOD下降,CB1R水平升高,p-Akt和p-mTOR表达下降,LC3-Ⅱ表达增加,而p62蛋白表达无明显差异。结论 HCV核心蛋白增加2-AG水平,上调CB1R表达;增加线粒体ROS水平和Ca~(2+)浓度,降低线粒体膜电位;下调Akt和mTOR活性引起不完全线粒体自噬。     

TGF-β1、TGF-β1RⅡ、NF-κB在肝细胞癌血管形成中的作用及机制探讨

目的　探讨转化生长因子 β1(TGF - β1)、转化生长因子 β1Ⅱ型受体 (TGF - β1RⅡ )、核转录因子 -κB(NF -κB)在肝细胞癌 (HCC)血管形成中的作用及其机制。方法　用免疫组化技术 ,分别检测 36例肝癌组织和癌旁肝组织中TGF - β1、TGF - β1RⅡ及NF -κB蛋白的表达 ;以CD3 4 标记血管内皮细胞 ,观察TGF - β1及TGF- β1RⅡ蛋白与微血管密度 (MVD)的关系 ;同时观察NF -κB与TGF - β1的关系。结果　 (1)肝癌组织TGF - β1蛋白表达明显高于癌旁组织 (P <0 0 1) ;肝癌组织TGF - β1RⅡ蛋白表达明显低于癌旁组织 (P <0 0 1)。(2 )肝癌组织中MVD明显高于癌旁组织 (P <0 0 1)。(3)肝癌组织中TGF - β1蛋白阳性表达与MVD呈正相关 ;TGF -β1RⅡ蛋白阳性表达与MVD呈负相关。 (4)NF -κB蛋白阳性表达与TGF - β1蛋白阳性表达呈正相关。结论　肝癌细胞中TGF - β1、TGF - β1RⅡ、NF -κB蛋白表达异常 ,并与MVD相关 ,提示它们在肝细胞癌血管形成中发挥重要作用 ,NF -κB可能在介导TGF - β1的活化或产生中发挥一定的作用     

内源性大麻素系统与阻塞性睡眠呼吸暂停合并症

阻塞性睡眠呼吸暂停(obstructive sleep apnea,OSA)是以睡眠过程中反复的上气道狭窄甚至完全闭塞导致频繁发生呼吸暂停为特征的睡眠呼吸障碍性疾病,该疾病与白天嗜睡、肥胖、高血压、缺血性心脏病、心律失常等均有明显的相关性.内源性大麻素系统(endocannabinoid system,ECS)是新近发现的信号系统,由内源性大麻素(endogenous cannabinoids,EC),大麻素受体CB1、CB2及合成、降解EC的酶类共同组成.在体内,ECS有广泛的生理学作用.     

胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血及肝组织内源性大麻素系统的变化

目的研究胰岛素抵抗(IR)的慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血及肝组织内源性大麻素系统的变化。方法采用高效液相色谱-质谱联用技术检测CHC患者和CHC合并IR患者外周血内源性大麻素花生四烯酸乙醇胺(AEA)和花生四烯酰甘油(2-AG)水平,应用RT-PCR及Western印迹检测肝组织大麻素受体1(CB1R)及脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)的表达,数据行t检验。结果与CHC患者相比,CHC合并IR患者外周血AEA水平升高[(6.80±1.70)pmol/mL比(3.88±0.63)pmol/mL,t=8.053,P0.01];肝组织CB1R mRNA水平(1.7±0.4比1.0±0.2,t=4.696,P0.01)和CB1R蛋白水平(0.8±0.2比0.4±0.1,t=5.367,P0.01)增加;FAAH mRNA水平(0.5±0.1比1.0±0.3,t=4.743,P0.01)和FAAH蛋白水平(0.5±0.1比0.8±0.3,t=2.846,P0.01)下降。与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)4的患者相比,HOMA-IR指数≥4的患者AEA水平升高[(7.53±1.85)pmol/mL比(5.56±1.40)pmol/mL(t=2.986,P0.05)];肝组织CB1 mRNA水平(2.3±0.65比1.4±0.35,t=2.986,P0.05)和CB1R蛋白水平(1.2±0.3比0.9±0.2,t=2.038,P0.05)升高,FAAH mRNA水平(0.3±0.08比0.6±0.15,t=4.076,P0.01)和FAAH蛋白水平(0.2±0.05比0.4±0.1,t=3.464,P0.05)下降。结论随着IR程度加重,CHC患者外周血AEA水平升高;肝组织CB1R表达增加而FAAH表达减少。     

大麻素受体1在慢性乙型肝炎肝纤维化发生和发展中的作用

Sato等[1]和Teixeira Clerc等[2]先后发现大麻素受体1(CB1R)在慢性肝病发展过程中起着独特作用.为深入研究CB1R在慢性乙型肝炎(CHB)肝纤维化发生、发展过程中的作用,我们用免疫组织化学染色法检测肝组织中CB1R表达情况,分析CB1R半定量评分与纤维化分期、血清转化生长因子(TGF)β1、ALT以及HBV DNA水平等指标的相关性,为今后以CB1R为靶点进行抗肝纤维化治疗提供依据.     

内源性大麻素系统心血管作用的研究进展

内源性大麻素系统在心血管系统中的作用涉及到血压、心率、心肌收缩力的调节等许多方面,在生理条件下主要通过刺激大麻素1受体(CB1受体)发挥降低血压和心脏抑制效果;在多种病理条件中也起了重要作用,包括通过CB1受体活化参与出血、内毒素和心源性休克、肝硬化伴随的低血压,降低高血压大鼠的血压;通过大麻素2受体(CB2受体)活化防止动脉粥样硬化进展,还能对缺血再灌注后的心肌起保护作用,但CB1受体和CB2受体谁在其中起主要作用尚不明确。对其机制的深入研究对研制新的药物,治疗心血管疾病有着深远意义。     

肝癌组织中TGF-β1、TGF-β1RⅡ和NF-κB的表达

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)、转化生长因子β1Ⅱ型受体(TGF-β1RⅡ)、核转录因子-κB(NF-κB)在肝细胞癌(HCC)中表达.方法:在30例肝癌组织和癌旁肝组织中,用免疫组化技术,分别检测TGF-β1 TGF-β1RⅡ及NF-κB蛋白的表达;用原位杂交方法检测TGF-β1mRNA的表达,以CD34标记血管内皮细胞,观察TGF-β1及TGF-β1RⅡ蛋白与微血管密度(MVD)、TGF-β1蛋白与TGF-β1mRNA、NF-κB与TGF-β1的关系.结果:肝癌组织TGF-β1mRNA平均光密度明显高于癌旁组织(0.1 043±0.035 vs 0.0 620±0.0 225,P＜0.01)、TGF-β1蛋白平均光密度表达明显高于癌旁组织(0.0 72 5±0.0 102 vs 0.0 442±0.0 103,P＜0.01);肝癌组织TGF-β1RⅡ蛋白平均光密度表达明显低于癌旁组织(0.0 402±0.0 113 vs 0.0 669±0.0 157,P＜0.01);肝癌组织NF-KB蛋白表达均明显高于癌旁组织(0.0 723±0.0 210 vs 0.0 305±0.0116,P＜0.01),肝癌组织MVD明显高于癌旁组织(31.23±9.25 vs 4.24±2.10,P＜0.01),肝癌组织TGF-β1蛋白阳性表达与MVD呈正相关(t=3.25,P＜0.01);TGF-β1 mRNA与TGF-β1蛋白呈正相关(χ2=8.21,P＜0.01);NF-κB蛋白阳性表达与TGF-β1蛋白阳性表达呈正相关(χ2=9.075,P＜0.01);而TGF-βRⅡ蛋白与MVD呈负相关.结论:肝癌组织中TGF-β1基因的变化发生在多个水平,肝癌细胞中TGF-β1RⅡ、NF-KB蛋白表达异常,并与MVD相关,提示他们在肝细胞癌血管形成中发挥重要作用,NF-κB可能在介导TGF-β1的活化或产生中发挥一定的作用.     

内源性大麻素调节去甲肾上腺素对肝星状细胞作用的研究

交感神经释放的神经递质对肝纤维化发展和促进肝纤维化时的损伤修复都有很重要的调节作用[1].有研究表明,内源性大麻素(anandamide,AZA)作为中枢神经系统中的神经调节因子,与其大麻素CB1、CB2受体对大脑中神经递质的释放起着重要的调节作用,但其对肝脏中神经递质释放的调节及协同神经递质对肝星状细胞(HSC)增殖、活化的调控国内外报道甚少.     

肝癌组织中Glut1与HIF-1α表达的关系及临床意义

目的探讨肝细胞癌组织中葡萄糖转运蛋白1(Glut1)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达情况及其临床意义,并分析两者的相关性。方法用免疫组织化学Envision法检测45例肝细胞癌、11例正常肝组织中的Glut1和HIF-1α表达情况。结果Glut1和HIF-1α在肝癌组织中的阳性率明显高于正常肝组织(P<0.05)。在肝癌组织中,Glut1和HIF-1α表达均与肿瘤大小、临床分期、有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓有关(P<0.05)。肝癌组织中Glut1与HIF-1α表达呈正相关(r=0.583,P<0.01)。结论Glut1和HIF-1α异常表达与肝癌的发生、发展有一定关系。HIF-1α可能通过上调Glut1表达促进肝细胞癌发生。     

内源性大麻素受体1在肥胖大鼠胰腺表达的实验研究

高脂饲料喂养20周的SD肥胖大鼠呈胰岛素抵抗特征,免疫荧光双标记显示内源性大麻素受体1(CBIR)主要表达于胰岛p细胞,免疫组化和实时定量PCR结果显示,高脂喂养组胰腺CBIR蛋白(6 002.8±855.5 vs 3 712.8±769.6,P<0.01)及mRNA(对照组的16.7倍,P<0.05)表达均高于对照组,提示肥胖时胰岛D细胞CB11R表达量上调可能导致胰岛素抵抗.     

血吸虫性肝纤维化小鼠肝组织中内源性大麻素1受体的表达

研究发现，内源性大麻素及其相应受体在肝纤维化、肝硬化的发生发展中起重要作用。本实验旨在研究血吸虫性肝纤维化时肝组织中内源性大麻素1（CB1）受体表达的变化情况，进一步阐明血吸虫性肝纤维化发病机制，为疾病治疗开辟新的途径。     

生存素、p27和PTEN在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的 探讨生存素蛋白、生存素mRNA、p27蛋白、p27 mRNA和第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)蛋白在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理意义.方法 自制组织芯片,采用免疫组织化学和原位杂交法检测生存素蛋白、p27蛋白、PTEN蛋白和生存素mRNA、p27 mRNA在141份肝细胞癌、128份癌旁肝组织、97份远癌肝组织及17份正常肝组织中的表达,探讨各指标的关系并建立预测肝癌发生的模型.结果 肝癌组中生存素蛋白(Ridit值的95%CI为0.689±0.048,P《0.01)、生存素mRNA(Ridit值的95% CI为0.690±0.049,P《0.01)和p27蛋白(Ridit值的95% CI为0.556±0.053,P《0.05)表达明显增高,PTEN(Ridit值的95% CI为0.282±0.048)表达明显下降(P《0.01);肝癌中生存素的表达与p27、PTEN表达均显著相关;生存素mRNA、p27蛋白和PTEN蛋白对判断肝癌发生与否有重要意义.结论 生存素mRNA、p27蛋白的表达上调和PTEN蛋白的表达下调可作为判断肝癌发生的有价值指标.     

HBx诱导甲胎蛋白表达对肝细胞恶性转化的影响及其调控机制

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生与肝细胞感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)密切相关,HBV在复制时表达的X蛋白(HBx)在肝细胞恶性转化过程中发挥关键性作用.甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)是HCC发生早期表达的蛋白质,HBx通过抑制P53对AFP基因的阻遏作用诱导AFP表达.近期研究发现,在HBx诱导的肝细胞恶性转化过程,优先促进AFP表达,AFP通过激活磷酸肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)/蛋白激酶-A(protein kinas A,AKT)信号途径刺激肝细胞恶性行为分子的表达,提示AFP的表达可能是HBx驱动肝癌发生的重要因素和先锋分子.AFP新功能的发现,可以利用AFP的表达预警HBV相关肝癌的发生,AFP可能作为肝癌治疗的新靶点.     

促凋亡蛋白Bid在肝癌发生过程中的作用

目的探讨促凋亡蛋白Bid在肝癌发生中的作用。方法应用基因毒性药物二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine，DEN）制备小鼠实验性肝癌动物模型，通过阻断（Bid缺陷小鼠）或诱导（抗Fas抗体注射）肝细胞凋亡过程，观察肝癌发生中Bid蛋白的作用。结果1．在致癌剂DEN和凋亡诱导剂抗Fas抗体注射小鼠后8个月，在野生型小鼠肝脏内瘤结节外周BrdU标记指数显著高于Bid缺陷的小鼠（P=0．016）；2．野生型动物与Bid缺陷型动物比较，肝内瘤结节的个数、面积以及肝脏受累比率二者差异具有显著性（P值分别为0．025、0．002和0．004）。结论Bid缺陷小鼠对DEN诱导的肝癌具有明显的抵抗作用，这一作用可能与Bid的促增殖作用有关。     

树鼩实验性肝癌发生过程p53基因的变化

目的 探讨由人乙型肝炎病毒(HBV)和黄曲霉毒索B1(AFB1)诱发的树鼩肝细胞癌变过程,p53基因的表达及变化。方法 将树鼩分为四组:A组:HBV AFB1;B组:只感染HBV;c组:只摄入AFB1;D组:作空白对照。定期肝活检,用免疫组织化学、分子生物学等技术对实验树鼩肝及肿瘤组织进行检测。 结果 (1)接受HBV及AFB1双因素的A组,肝细胞癌(HCC)发生率(66.7％)明显高于只接受HBV的B组或AFB1的C组(30％),而且HCC的平均发生时间也明显早于C组,(120.0±16.6)周与(153.3±5.8)周,t=3.336,P<0.01。(2)在第75周前各组动物肝均未检出突变的p53蛋白。(3)105周时,A组p53蛋白表达率为78.6％,B组为60％,C组为71.4％,D组为10％(x2≥5.03,P<0.05)。在A、C组检出p53基因异常带。(4)树鼩肝癌p53基因突变点分别位于275、78及13密码子;其野生型p53基因的核苷酸及氨基酸序列与人的p53基因的核苷酸及氨基酸序列的同源性分别为91.7％、93.4％。 结论 再次证实HBV和AFB1有协同致肝癌作用;突变的p53蛋白出现于肝细胞发生癌变之前,p53基因的突变促进了肝癌的发生和演进。HBV可能协同AFB1致p53基因突变。     

缺氧诱导的上皮间质转化通过诱导肝细胞癌免疫抑制微环境促进肿瘤转移

正【据《Cancer Res》2016年2月报道】题:缺氧诱导的上皮间质转化通过诱导肝细胞癌免疫抑制微环境促进肿瘤转移(作者Ye LY等)门静脉癌栓是肝细胞癌(HCC)发生转移的重要危险因素之一,与患者预后密切相关。门静脉癌栓的存在经常伴有肿瘤微环境的缺氧,进而加速肿瘤转移,但目前其发生机制仍不清楚。最近的证据表明,缺氧诱导因子~(-1)α诱导上皮间质转化进而促进肿瘤细胞转移。来自浙江大学医学院的Ye等做了相关研究,探讨是否缺氧诱导的上皮间质转化可影响肿瘤微环境中的免疫细胞,进而促进肿瘤免疫抑制。作者发现,缺氧诱导的上皮间质转化上调了肝癌细胞内细胞因子CCL20的表