NMM抗肿瘤治疗性DNA疫苗中卡那霉素残留量检测方法的建立与验证

建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗中卡那霉素残留量的方法。采用间接竞争ELISA方法检测卡那霉素残留量,采用四参数Logstic曲线进行回归分析,并对本方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证,验证方法有效后对多批次样品进行检测。使用该方法检测卡那霉素残留量时,样品无需稀释,辅料、质粒DNA对卡那霉素的检测无干扰;本方法检测限为0.15 ng/mL;定量限为0.5 ng/mL;在0.5～40.5 ng/mL范围内线性关系良好,且符合四参数方程式：y=D+(A-D)/[1+(x/C)^B],R²≥0.999;在检测线性范围内加入不同浓度的卡那霉素对照溶液,回收率均值在95%～115%之间(n=12,RSD=6.20%);本方法重复性试验中卡那霉素含量RSD值为4.22%(n=6),中间精密度试验中DNA疫苗中卡那霉素含量RSD值为10.95%。本方法检测实验条件发生微小变动时(不同人员、不同批次试剂盒、不同酶标仪),对测定结果的影响在可接受范围内。应用该方法对7批样品中卡那霉素残留量进行检测,结果表明,每个人用...     

LC-MS/MS法测定注射用重组人干扰素α2b中氨苄西林残留

目的建立LC-MS/MS法测定注射用重组人干扰素α2b中氨苄西林残留。方法选择阿莫西林为内标,直接沉淀蛋白。采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×150mm,5μm)柱,以乙腈-水(甲酸调pH3.1)为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应监测(MRM)。氨苄西林、内标监测离子对的m/z分别为350.0/106.1,350.0/192.0和366.0/114.0,366.0/208.0。结果氨苄西林在0.0442~17.6472ng/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9991),最低定量限为0.0442ng/mL,方法回收率在95.26%~102.40%之间,批内、批间RSD分别小于3.71%及6.88%。结论本方法准确可靠,重复性好,灵敏度高,适用于注射用重组人干扰素α2b中氨苄西林残留检测。     

LC-MS/MS法测定注射用重组人干扰素a2b中氨苄西林残留

目的 建立LC-MS/MS法测定注射用重组人干扰素alb中氨苄西林残留.方法 选择阿莫西林为内标,直接沉淀蛋白.采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mmX 150mm,5pm)柱,以乙腈-水(甲酸调pH3.1)为流动相进行梯度洗脱.采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应监测(MRM).氨苄西林、内标监测离子对的m/z分别为350.0/106.1,350.0/192.0和366.0/114.0,366.0/208.0.结果 氨苄西林在0.0442~17.6472ng/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9991),最低定量限为0.0442ng/mL,方法回收率在95.260/6~102.40%之间,批内、批间RSD分别小于3.71%及6.88%.结论 本方法准确可靠,重复性好,灵敏度高,适用于注射用重组人干扰素a2b中氨苄西林残留检测.     

液相色谱-串联质谱法测定柏子仁中黄曲霉毒素残留量

目的建立检测柏子仁中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2残留量的液相色谱-串联三重四极杆质谱法。方法将样品提取液经免疫亲和柱净化,甲醇洗脱,以甲醇/乙腈-0.1 mmol乙酸铵为流动相,经反相色谱柱Agilent Zorbax Extend-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),用电喷雾正离子二级离子监测扫描模式(MRM)检测。结果黄曲霉毒素G2和B2质量浓度在0.03～3.2 ng/mL范围内、黄曲霉毒素B1和G1在0.1～10 ng/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好。检测限(LOD)为0.1 ng/mL,定量限(LOQ)为0.2 ng/mL。3个质量浓度(0.25,1.0,5.0 ng/mL)的加标平均回收率为84.1%～96.8%,RSD为7.7%～13.4%。结论所用方法专属性强、灵敏度高、简便快速、结果准确,可定性定量测定柏子仁中残留的黄曲霉毒素。     

高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法测定一次性静脉留置针中双酚A残留量

目的 建立测定一次性静脉留置针中双酚A残留量的高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法。方法 以乙腈为溶剂,超声提取静脉留置针样品中残留的双酚A。色谱柱为Waters Acquity Premier BEH C₁₈柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.05%氨水-甲醇(28∶72,V/V),流速为0.3 mL/min,柱温为30℃,进样量为2μL;三重四极杆质谱,电喷雾电离离子源,负离子、多反应监测模式扫描,气帘气、喷雾气、辅助加热气气压分别为25,55,55 psi,离子化电压为4 500 V,定量离子对质荷比(m/z)为227.1/133.0。结果 双酚A的质量浓度在5.42～216.8 ng/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9,n=6);检测限为0.108 4 ng/mL,定量限为1.084 ng/mL;精密度、重复性试验结果的RSD均小于4.0%;加样回收率为90.44%,RSD为1.27%(n=6)。市售静脉留置针样品中双酚A的残留量最高为9 213.34 ng/g。结论 该方法操作简便、灵敏度高、重复性好、结果准确,可用于...     

一种高通量免疫检测抗生素残留方法的建立

目的将表面具有羧基的聚苯乙烯微球运用于悬液芯片系统中,建立一种高通量检测牛奶中卡那霉素和氯霉素残留的方法。方法将合成的卡那霉素和氯霉素全抗原包被在聚苯乙烯微球表面构成捕获抗原,并对整个包被过程进行优化。利用捕获抗原、单克隆抗体及检测物构建间接竞争免疫检测体系,并用荧光标记的二抗作为荧光探针标记与捕获抗原结合的单克隆抗体得到悬液芯片系统的检测物。由于不同型号的微球被悬液芯片系统的激光激发后所呈现的侧向散射荧光(side scatter,SSC)和前向散射荧光(forward scatter,FSC)不同,所以悬液芯片系统能够将不同的微球进行区分以达到分辨不同检测物的目的,悬液芯片系统上的另外一套检测系统能够对每个微球表面荧光探针的荧光强度进行检测以实现定量分析,双检测系统同时工作实现了高通量检测的目的。结果微球的包被优化实验结果表明,包被100μL微球需要卡那霉素和氯霉素全抗原的最佳量分别是12μg和17μg。单克隆抗体的最佳稀释倍数分别是800倍和1600倍;在牛奶基质中,该方法对卡那霉素和氯霉素的检测限分别是0.79ng/mL和52.01ng/mL,半数抑制浓度(IC50)分别为36.65ng/mL和626.03ng/mL,检测范围分别为9~900ng/mL和90~900ng/mL;抗体特异性实验表明两种单克隆抗体的特异性良好。该方法在牛奶基质中的标准添加回收率为80%~110%,满足检测方法建立的要求。结论利用基于微球技术的悬液芯片系统建立了一种高通量检测牛奶中抗生素残留的方法,该研究为下一步更多种抗生素残留的同步检测提供了数据依据。     

HPLC法同时测定雌激素类药物尼尔雌醇片和己烯雌酚片中主药含量

目的:建立同时测定尼尔雌醇片和己烯雌酚片中主药含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Waters Sym-metry C18,流动相为0.02 mol/L乙酸铵水溶液-乙腈(40∶60,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为35℃,进样量为20μL。结果:尼尔雌醇、己烯雌酚检测质量浓度线性范围均为0.01～0.5 mg/mL(r均为0.999 9);定量限分别为187、192 ng/mL,检测限分别为56、58 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于1%(n=6);加样回收率分别为99.13%～100.80%(RSD=0.52%,n=9)、99.20%～100.90%(RSD=0.58%,n=9)。结论:该方法灵敏度高、重复性好,可用于同时测定雌激素类药物尼尔雌醇片中尼尔雌醇和己烯雌酚片中己烯雌酚的含量。     

UPLC法测定银杏叶茶中总黄酮醇苷的含量

目的建立银杏叶茶中槲皮素、山柰素和异鼠李素的超高效液相色谱分析法。方法色谱柱:Thermo Scientific AcclaimTM RSLC 120C18 ODS(100mm×2.1mm,2.2μm);流动相:甲醇-4mL·L~(-1)磷酸溶液(50∶50);流速:0.3mL·min~(-1);检测波长:360nm。结果槲皮素在4.503~90.06ng、山柰素在3.586~71.72ng、异鼠李素在2.111~42.22ng范围内线性关系良好;平均回收率分别为98.95%(RSD=0.87%),98.80%(RSD=0.90%)和98.78%(RSD=1.39%)。结论该方法简单,分析速度快,准确度高,可用于快速检测银杏叶茶中总黄酮醇苷的含量。     

总有机碳法检测丹参多酚酸生产设备的清洗残留

目的建立总有机碳（TOC）分析技术实现快速分析注射用丹参多酚酸主要原料丹参多酚酸的生产设备清洗残留。方法对TOC法的专属性、准确度、精密度（重复性与中间精密度）、线性、检测限、定量限与耐用性进行验证。将不同含碳浓度的丹参多酚酸样品溶液滴于不锈钢板上,擦拭取样,计算取样回收率。结合方法学研究数据评价TOC法用于丹参多酚酸生产设备清洗残留检测的效果。结果空白溶剂与空白棉签对测定丹参多酚酸生产设备清洗残留的干扰较小;准确度的平均回收率为103%,重复性与中间紧密度的RSD值均小于3%;丹参多酚酸理论含碳质量浓度在0~30 μg/mL线性关系良好（r=0.999 9）,定量限为55 ng/mL,检测限为18 ng/mL。供试品溶液在冰箱2~10℃中储存的有效期为48 h,酸碱耐用性范围为5~9;平均取样回收率为100%。设备改造的清洁验证实验中,丹参多酚酸生产设备清洗残留的检测结果最大值为2.22 μg/mL,均低于验证标准。结论 TOC分析方法快速、准确、简便,可用于丹参多酚酸生产设备的残留检测,为设备清洗洁净程度的判断提供有力依据。     

用液相色谱-质谱-质谱法测定人血清中非洛地平浓度

目的:建立液相色谱-质谱-质谱(LC-MS-MS)法测定人血清中非洛地平的浓度。方法:血清样品经液-液萃取预处理。色谱柱为Xterra柱(50 mm×2.1 mm,3.5μm),流动相为乙腈-0.02%氨水,采用梯度洗脱,流速为0.3 mL/min。非洛地平和尼莫地平(内标)的多反应监测(MRM)扫描离子对分别为m/z382.1→145和m/z417.2→92,两者的保留时间分别为1.24 min和1.06 min。结果:非洛地平在0.04～20 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.999 7),低、中、高浓度(0.08、8.0、16.0 ng/mL)的日内RSD分别为6.60%、7.22%和5.01%(n=6),日间RSD分别为9.42%、8.46%和5.12%(n=14),准确度为98.21%～106.20%(n=6)。结论:本法操作简便,检测准确、灵敏、专一,重复性好,适用于非洛地平血药浓度监测和药动学及生物利用度研究。     

HPLC法测定盐酸左西替利嗪搽剂中苯扎溴铵的含量

目的建立高效液相色谱法测定盐酸左西替利嗪搽剂中苯扎溴铵的含量。方法采用C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以0.02 mol.L-1的庚烷磺酸钠溶液(含0.1%三乙胺,用磷酸调节至pH值至3.5)-乙腈(35∶65)为流动相,检测波长为262 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL.min-1。结果盐酸左西替利嗪搽剂中苯扎溴铵浓度在10.3～206.0μg.mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9),最小检出量约为1.2 ng,平均回收率为100.13%,RSD为0.52%。结论本方法简便,快速,准确,灵敏度高,重复性好,可用于盐酸左西替利嗪搽剂中苯扎溴铵含量的测定。     

同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中氟康唑的浓度

目的:建立测定人血浆中氟康唑浓度的方法。方法:血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,以同位素氟康唑-d4为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定。色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C_(18),流动相为0.1%甲酸溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为0.3 mL/min,柱温为40℃,进样量为3μL;采用电喷雾离子源,以多反应监测模式进行正离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z 307.1→220.0(氟康唑)和m/z 311.1→223.0(内标)。结果:氟康唑血药浓度检测的线性范围为10～5 000 ng/mL(r=0.998 1),定量下限为10 ng/mL;日内、日间RSD均低于8%,准确度为95.8%～106.7%;提取回收率为97.3%～107.3%(RSD<5.0%,n=6),基质效应、稀释效应及残留效应均不影响待测物的定量分析。结论:该方法简便、快速、专属性强、准确度高,可用于氟康唑治疗药物监测及药动学研究。     

GC-MS/MS法测定甲磺酸卡莫司他原料药中N-亚硝基二甲胺

目的建立GC-MS/MS法测定甲磺酸卡莫司他原料药中的亚硝胺类基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺(NDMA)。方法采用Agilent DB-SELECT 624UI色谱柱(30 m×0.32 mm×1.80μm)色谱柱,离子源为EI源,采用多反应监测模式,以m/z 74→44.2为定量离子,m/z 74→42.2为定性离子,进行数据采集。结果 NDMA在12.571 2～100.569 6 ng/mL线性良好(r=0.997 6),检测限质量浓度为5.028 5 ng/mL,平均回收率为107.4%,RSD值为2.5%。结论该方法操作简单,灵敏度高,专属性和重复性好,可用于甲磺酸卡莫司他原料药中NDMA的检测。     

UPLC-MS法检测动物类药材中氯霉素类药物残留

目的:建立检测动物类药材中氯霉素类药物残留的方法。方法:采用超高效液相色谱-质谱法。色谱柱为SB-C_(18),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为0.2 mL/min,柱温为35℃,进样量为20μL;离子源为电喷雾离子源,干燥气温度为350℃,干燥气流量为5 L/min,鞘气温度为250℃,鞘气流量为11 L/min,毛细管电压为3 500 V,负离子扫描方式,多反应检测模式。结果:氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素检测质量浓度线性范围均为0.5~15 ng/mL(r分别为0.999 8、0.999 9、0.998 9);定量限分别为0.03、0.03、0.15μg/kg,检测限分别为0.01、0.01、0.05μg/kg;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<3.0%;回收率分别为84.00%~112.80%(RSD=10.15%,n=9)、88.24%~109.80%(RSD=7.11%,n=9)、88.24%~99.02%(RSD=3.91%,n=9)。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于动物类药材中氯霉素类药物残留的检测。     

RP-HPLC法测定兔血浆中盐酸川芎嗪和阿魏酸

目的建立RP-HPLC法测定兔血浆中盐酸川芎嗪和阿魏酸的方法。方法采用RP-HPLC法,使用Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇–0.5%冰乙酸(35∶65),体积流量为1.0 mL/min,检测波长280 nm,柱温30℃,香豆素作内标,采用甲醇沉淀蛋白法处理血浆样品。结果盐酸川芎嗪线性范围为0.072~13.888μg/mL(r=0.999 8),最低检测浓度12 ng/mL,日内、日间精密度试验的RSD值均小于2%;阿魏酸线性范围为0.06~15.36μg/mL(r=0.999 9),最低检测浓度10 ng/mL,日内、日间精密度试验的RSD值均小于3%。结论该分析方法简便、灵敏,可用于同时测定兔血浆中盐酸川芎嗪和阿魏酸。     

高效液相色谱法测定多西他赛注射液的含量和有关物质

目的建立多西他赛注射液含量及有关物质测定的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB C18柱(150×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇-水(30∶30∶40),流速为1.0mL/min;检测波长为232nm,柱温40℃。结果多西他赛的浓度在1.2～985μg/mL范围内线性关系良好(A=-96.38+11.869C,r=0.9999),方法的最低检测限为0.8ng(S/N=3.1);高、中、低3种浓度的平均回收率(n=3)99.5%(RSD=0.14%),99.9%(RSD=0.09%),99.8%(RSD=0.11%);日内精密度RSD=0.07%(n=6),各杂质峰与主峰达到基线分离。结论此法操作简单,灵敏、准确、重复性好,适用于多西他赛注射液的含量和有关物质的测定。     

HPLC-ESI-MS法测定人血浆盐酸氨溴索浓度

目的建立高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中氨溴索浓度的方法.方法血浆样品经NaOH碱化,乙醚提取浓缩后,以乙腈-水(8515)为流动相,流速0.2mL·min-1,采用电喷雾离子源(ESI),以多离子反应监测方式(MRM)进行正离子检测,氨溴索和内标地西泮的定量分析离子对分别为m/z 378.9→263.9和m/z 285.1→193.1.结果血浆样品中氨溴索线性范围0.26～200μg·L-1(r=0.9998),最低定量限为0.26ng·mL-1.低、中、高(0.78,12.5,100μg·L-1)3种浓度的日内RSD分别为9.1%,8.3%和2.7%;日间RSD分别为10.0%,7.2%和12.4%;准确度为109%,114%和106%.结论本方法灵敏度高、专属性强、重现性好、准确,可用于人血浆中氨溴索的含量测定.     

HPLC测定微球中盐酸左氧氟沙星的含量

目的建立测定壳聚糖微球中盐酸左氧氟沙星含量的高效液相色谱法。方法采用Agilent 1200型高效液相色谱仪,色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm),柱温:30℃,流速:1.0 mL.min 1,流动相:0.04 mol.L 1磷酸溶液(三乙胺调pH值为4)-乙腈(85∶15),检测波长:293 nm。结果盐酸左氧氟沙星浓度在1.021~51.15μg.mL 1内线性关系良好(r=0.999 6),日内和日间精密度RSD均<2%(n=5),平均加样回收率为99.1%,RSD为0.72%。结论本方法简便易行、灵敏度高、重复性好,结果准确可靠,适用于壳聚糖微球中盐酸左氧氟沙星含量测定。     

高效液相色谱荧光法测定人血浆中奥美沙坦浓度

目的建立奥美沙坦血药浓度的高效液相色谱法。方法以盐酸哌唑嗪为内标,血浆样品用沉淀法,色谱柱为奥泰Apollo C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),在线过滤器;以0.1%三乙胺水溶液(甲酸调pH为2.5)-乙腈(75∶25)为流动相;激发波长为260 nm,发射波长为379 nm;流速为1.0 mL/min,柱温为25℃。结果奥美沙坦质量浓度线性范围是10.00～1 280.00 ng/mL(r=0.999 6),最低检测浓度为10.00 ng/mL,方法的相对回收率为97.53%～99.24%(n=5),绝对回收率为86.89%～89.32%(n=5),日内RSD为1.25%～2.26%,日间RSD为1.14%～5.55%。结论该方法简便、准确、灵敏,特异性强,重复性好,可用于血浆中奥美沙坦的测定及药代动力学研究。     

NMM抗肿瘤DNA疫苗原液大肠杆菌菌体蛋白质残留量检测方法的建立与验证

目的 建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白质残留量的双抗体夹心ELISA试验方法。方法 使用双抗体夹心ELISA试验方法检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白残留量,采用四参数logstic曲线进行回归分析,并对该方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证,验证通过对5批样品进行检测。结果 采用双抗体夹心ELISA试验方法进行大肠杆菌蛋白质残留量检测时,DNA疫苗原液无需进行稀释。NMM抗肿瘤DNA疫苗原液对大肠杆菌菌体蛋白质的检测无干扰及抑制作用,方法的专属性良好;本法检测限为0.41 ng/ml;定量限为0.98 ng/ml;该方法测定宿主菌蛋白质残留量在0～100 ng/ml范围内线性良好,R2≥0.9999;本方法重复性试验中宿主菌蛋白质含量RSD值均低于15%,中间精密度实验中样品吸光值RSD值低于10%,精密度结果良好。在检测线性范围内加入高、中、低3种浓度的大肠杆菌菌体蛋白,回收率均值为100.35%(n=9,RSD=3.58%);本方法检测实验条件发生微小变动时（不同人员、不同批次试剂盒）,对测定结果的影响...