电磁脉冲辐射对小鼠睾丸间质细胞结构和功能的影响

目的 :探讨电磁脉冲 (EMP)辐射对小鼠睾丸间质细胞结构和功能的影响。　方法 :6～ 8周龄二级昆明雄性小鼠 1 1 4只 ,随机分为辐射组 (1 0 8只 )和对照组 (6只 )。辐射组小鼠分别接受 8× 1 0 3、2× 1 0 4 、6× 1 0 4 V/m 3种不同场强EMP 5次重复全身辐射 ,并于辐射后 6h、1d、3d、7d、1 4d和 2 8d应用光镜、电镜观察睾丸间质细胞组织学及超微结构的改变 ,放射免疫法检测小鼠血清睾酮 (T)、黄体生成素 (LH)及雌二醇 (E2 )的浓度。　结果 :3种不同场强EMP辐射后 2 8d内小鼠睾丸间质细胞主要病变表现为细胞水肿和空泡变性 ,胞质线粒体肿胀、数目减少 ,内质网扩张 ,脂滴增多 ,大多数脂滴着色变浅 ,部分或完全排空 ;血清T与对照组相比较均呈不同程度的降低 ,分别在辐射后 6h～ 1 4d、6h～ 7d、1～ 2 8d时显著降低 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ,而LH和E2均未发生明显改变。　结论 :睾丸间质细胞是EMP辐射敏感的靶细胞之一 ,EMP辐射可引起小鼠睾丸间质细胞结构和功能的损伤 ,既有早期影响 ,又表现为持续效应 ,可能影响性功能和生精过程     

ATP50荧光表达载体构建及其在TM3小鼠睾丸Leydig细胞定位研究

目的:构建ATP50的荧光表达载体,研究其在原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞中的表达和在TM3小鼠睾丸Leyd ig细胞中的定位。方法:原代培养小鼠睾丸Leyd ig细胞并利用3β-HSD染色法鉴定,应用PCR方法研究ATP50在小鼠睾丸Leyd ig细胞中的表达。利用BamH I和EcoR I酶切位点把ATP50克隆到pEYFP-N1。细胞转染和细胞荧光显微镜技术观察YFP-ATP50在TM3小鼠睾丸Leydig细胞的定位。结果:ATP50表达在原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞中。TM3小鼠睾丸Leydig细胞中,绿色荧光的YFP-ATP50和红色荧光的线粒体标记物M ito-tracker有完全的共定位。结论:ATP50在小鼠睾丸Leydig细胞表达,成功构建了ATP50真核荧光蛋白表达载体,明确YFP-ATP50定位在Leydig细胞的线粒体。这些结果将对老年男性睾丸间质细胞睾酮合成功能障碍的研究提供重要的信息,有利于进一步深入研究。     

睾丸移植物间质细胞4种基因的表达分析

目的 研究新生小鼠睾丸组织异体异位移植后,4种在睾丸间质细胞中起重要作用的基因表达情况,为异体异位睾丸组织移植模型用于科研及临床的可行性提供进一步实验数据.方法 将162只1～2d昆明小鼠的睾丸移植到54只7～12w去势雄性免疫缺陷小鼠背部;在移植后9个时间段(3d和1～8w)取出移植物;选取4种在睾丸间质细胞中表达或高表达的基因3β -hsd、1hr、p450scc和star,采用聚合酶链反应,对发育不同阶段移植物中4种基因的表达情况进行分析,并与正常小鼠相应各年龄段睾丸中的基因表达情况相比较.结果 在9个时间段取出的移植物中,所测定4种基因的表达趋势与在正常小鼠睾丸中所见基本相同.结论 新生小鼠睾丸组织异体异位移植到免疫缺陷小鼠体内后,间质细胞4种受试基因的表达趋势与在正常小鼠中的表现基本相同.     

GnRH抑制剂对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD蛋白表达水平的影响

目的 探讨西曲瑞克(GnRHant)对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白V(annexin5)和3 β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)表达的影响.方法 体外分离、纯化和培养大鼠睾丸间质细胞原代培养,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定,用不同终浓度的GnRHant(分别为10-6、10-7和10-8mol/L)作用于间质细胞24h后,通过Western Blot检测间质细胞中annexin5和3β-HSD的表达情况.结果 间质细胞经GnRHant处理后,Western Blot结果显示,当GnRHant的终浓度为10-6mol/L和10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5的表达量都显著地降低,分别降低了62.35%和40.82%,两者比较,差异具有统计学意义(P<0.05):当GnRHant的终浓度为10-6mol/L和10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD的表达量也降低,分别降低了53.33%和23.85%(P分别<0.01和<0.05),当GnRHant的终浓度为10-8mol/L时,与对照组比较,差异均没有统计学意义(P>0.05).结论 GnRH抑制剂在原代培养的睾丸间质细胞中,对annexin5和3β-HSD的表达具有一定调控作用.     

MGRN1对小鼠睾丸支持细胞自噬的影响

目的:研究MGRN1对小鼠睾丸支持细胞自噬的影响。方法:体外培养小鼠睾丸支持细胞株(TM4细胞)利用RNAi下调TM4细胞中MGRN1的表达,然后利用Western印迹(WB)检测自噬相关蛋白(LC3-II/I、ATG-5和ATG-7)的表达,免疫荧光及电镜检测MGRN1下调后TM4细胞的自噬小体。结果:MGRN1下调后,WB发现TM4细胞中自噬相关蛋白(LC3-II/I、ATG-5和ATG-7)表达增加,荧光显微镜可观察到TM4细胞中自噬小体增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),电镜可观察到TM4细胞中自噬小体增加。结论:MGRN1影响睾丸支持细胞的自噬,具体分子机制有待进一步研究。     

吸烟对雄性小鼠睾丸间质细胞、睾酮及精子数量的影响

目的探讨吸烟对雄性小鼠的睾丸间质细胞、血清睾酮含量及附睾精子数量的影响。方法雄性小鼠50只,随机分为5组,即经吸烟处理后6周、12周(吸烟组),未经特殊处理的6周、12周小鼠(对照组),及吸烟6周后戒烟6周(戒烟组)小鼠。对5组小鼠睾丸组织进行HE染色,光镜下观察支持细胞、问质细胞形态及结构;免疫组化方法分别计数5组小鼠睾丸支持细胞及问质细胞数量;利用酶联免疫法(ELIsA)测定小鼠体内睾酮含量:用石墨炉原子吸收光谱法测定血清镉含量;同时计数附睾精子数。结果 HE染色可见吸烟6周小鼠睾丸问质细胞数量减少;吸烟12周小鼠睾丸问质细胞数量稀少甚至消失:而睾丸支持细胞数量及形态与对照组相比未见明显改变。免疫组化发现吸烟组小鼠睾丸支持细胞数量与对照组相比无显著差异(P0.05)。问质细胞数量随吸烟时间延长而显著减少(P0.01);小鼠血清中睾酮水平吸烟组明显低于对照组(P0.01),且随吸烟时间的延长而下降(P0.01):吸烟组小鼠附睾精子汁数较对照组显著下降(P0.01),并且与吸烟时间呈正相关(P0.01)。而戒烟组中,睾丸问质细胞、血清睾酮含量、附睾精子数量3组数据都较吸烟组增高。结论吸烟可导致睾丸间质细胞的破坏,影响体内睾酮的生成,进而导致生精障碍,而戒烟可逆转此现象。     

未羧化骨钙素对老年大鼠睾丸间质细胞睾酮合成功能的影响

目的:通过建立老年大鼠模型,探究未羧化骨钙素对老年雄性大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响。方法:30只3月龄成年雄性大鼠,随机对半分为正常对照组和实验组,实验组颈背部皮下注射D-半乳糖溶液300 mg·kg~(-1)·d~(-1),对照组颈背部皮下注射等剂量生理盐水,注射时间为8周。验证衰老模型构建成功后,取大鼠的睾丸间质细胞,分别用不同质量浓度0(等量PBS溶液)、1、3 ng/mL的非羧化骨钙素刺激大鼠睾丸间质细胞,24 h后收取培养液采用睾酮ELISA检测试剂盒进行睾酮浓度检测;并在24 h后收集细胞提取RNA,然后采用荧光定量PCR法检测睾丸间质细胞睾酮合成关键酶StAR、Cyp11a、Cyp17的表达。结果:同加入等量PBS溶液的对照组大鼠睾丸间质细胞相比,加入等量PBS溶液的模型组大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮水平下降(P0.05);对模型组大鼠睾丸间质细胞分别进行1、3 ng/mL未羧化骨钙素处理,相较于模型组加入等量PBS溶液处理的睾丸间质细胞,骨钙素处理组睾丸间质细胞培养液上清中睾酮水平均升高(P0.05);与加入等量PBS溶液的模型组大鼠睾丸间质细胞相比,经过1 ng/mL未羧化骨钙素处理后的模型组大鼠睾丸间质细胞的StAR、Cyp11a、Cyp17基因的表达有明显的上升;经过3 ng/mL未羧化骨钙素处理后的模型组大鼠睾丸间质细胞的StAR、Cyp11a、Cyp17基因的表达有显著上升。结论:本研究成功的构建了D-半乳糖诱导的衰老大鼠模型,证明了未羧化的骨钙素可以促进D-半乳糖诱导的老年大鼠睾丸间质细胞睾酮合成,并且该作用可能是由于未羧化骨钙素促进其睾酮合成关键酶的表达引起的。     

麻醉浓度七氟醚对TM3小鼠睾丸间质细胞活力的影响

目的 探讨麻醉浓度七氟醚对TM3小鼠睾丸间质细胞活力的影响.方法 采用随机数字表法,将TM3小鼠睾丸间质细胞株随机分为3组,每组24皿:对照组(C组)、2％七氟醚组和5％七氟醚组(SEV1,2组).将细胞放置于37℃的密闭培养箱中,通入七氟醚,维持浓度2％(SEV1组)或5％(SEV2组).C组仅给予95％空气和5％CO2的混合气体.于七氟醚孵育2、4、6 h(T1-3)时采用光学双目倒置显微镜观察细胞形态,并采用CCK-8法测定细胞活力.于七氟醚孵育6h后,收集C组和SEV2组细胞,应用基因芯片筛选差异基因.结果 与C组和SEV1组比较,SEV2组T3时细胞活力明显降低(P＜0.05),T1.2时差异无统计学意义(P＞ 0.05);SEV1组和C组各时点细胞活力比较差异无统计学意义(P＞0.05).C组和SEV1组细胞形态未见异常,SEV2组细胞发生形态学改变.与C组比较,SEV2组差异表达的基因有45个,差异倍数最大的有:前列腺素内过氧化物酶2基因、趋化因子配体2基因和双特异性磷酸酶l基因.结论 麻醉浓度七氟醚可抑制TM3小鼠睾丸间质细胞的活力,且与浓度有关,其机制可能与前列腺素内过氧化物酶2基因、趋化因子配体2基因和双特异性磷酸酶1基因表达异常有关.     

Nestin-GFP转基因小鼠睾丸中P75NTR表达的研究

目的:观察小鼠睾丸中的p75神经营养因子受体(P75NTR)的表达规律,并探讨其与巢蛋白(nestin)之间的关系。方法:通过免疫荧光技术观察出生后第5天Nestin-GFP转基因小鼠睾丸组织中的P75NTR和巢蛋白的表达位置,并采用实时荧光定量PCR和流式细胞分选方法检测P75NTR在不同周龄小鼠睾丸组织中的表达量;对分选得到的P75NTR阳性细胞在神经干细胞的培养液中进行培养,通过定向分化技术观察其神经分化能力。结果:免疫荧光染色结果显示P75NTR和巢蛋白定位表达于睾丸间质细胞。实时荧光定量PCR和流式细胞分选结果显示,P75NTR在出生第14天小鼠睾丸组织中出现表达高峰。出生后第5、14、30天小鼠睾丸中P75NTR阳性百分率分别为(2.88±0.52)%、(9.54±1.81)%、(2.63±0.43)%,分选得到的P75NTR阳性细胞也共定位表达巢蛋白和P75NTR,并且具有神经分化能力。结论:睾丸组织中P75NTR和巢蛋白共定位表达于睾丸间质细胞,该类P75NTR阳性细胞具有神经分化能力,推测其起源于神经脊。     

八仙胶囊生精壮阳作用的实验研究

目的 :考察八仙胶囊的生精壮阳作用及可能机制。　方法 :实验动物 (大鼠或小鼠 )随机分为 5组 :空白对照组、八仙胶囊组 (2 .5、7.5、2 2 .5g/kg)和阳性对照组 ,连续灌胃给药 14d后 ,用放免法测定低龄大鼠血清睾酮、皮质醇含量 ;称重大鼠睾丸、附睾、精囊腺 前列腺和包皮腺重量 ,计算其脏器系数 ;观察小鼠睾丸间质细胞和精子数目的变化 ;测定给药后电刺激雄性去势大鼠阴茎勃起的时间及正常大鼠性交的次数和频率。　结果 :八仙胶囊能显著提高低龄大鼠血清睾酮和皮质醇的含量 ,增加睾丸、附睾、精囊腺 前列腺及包皮腺的脏器系数 ,显著增加低龄小鼠精子数和睾丸间质细胞数量 ,抑制去势大鼠阴茎勃起潜伏期的延长 ,提高大鼠交配能力。　结论 :八仙胶囊具有生精壮阳作用 ,该作用可能与药物促进下丘脑 垂体 性腺和肾上腺皮质系统功能有关。     

Cox7a2 mediates steroidogenesis in TM3 mouse Leydig cells

Aim:To investigate the regulatory function of Cox7a2 on steroidogenesis and the mechanism involved in TM3 mouseLeydig cells.Methods:The cDNA of CoxTa2 was cloned from TM3 mouse Leydig cells.It was subcloned to pDsRed-Express-N1 and transfected back into TM3 mouse Leydig cells for Cox7a2 overexpression by transient gene transfection.Steroidogenesis affected by overexpressed Cox7a2 was studied by ELISA.To elicit the mechanism of this effect,expression of steroidogenic acute regulatory(StAR)protein and reactive oxygen species(ROS)were examined byWestern blot and fluorometer,respectively.Results:The cDNA of Cox7a2(249 bp)was cloned from Leydig cells andconfirmed by DNA sequencing.After constructed pDsRed-Express-N1-Cox7a2 was transfected back into TM3 mouseLeydig cells,Cox7a2 inhibited not only luteinizing hormone(LH)-induced secretion of testosterone but also the expres-sion of StAR protein.At the same time,Cox7a2 increased the activity of ROS in TM3 mouse Leydig cells.Conclusion:Cox7a2 inhibited LH-induced StAR protein expression,and consequent testosterone production,at least in part,byincreasing ROS activity in TM3 mouse Leydig cells.(Asian J Androl 2006 Sep;8:589-594)     

低剂量睾酮疗法降低TM3睾丸间质细胞的氧化损伤

睾酮替代疗法对老年男性及性腺机能减退症的治疗是有意义的。然而,外源性睾酮对睾丸间质细胞的作用尚不清楚,需要进一步阐明。本研究表明睾酮补充疗法能降低睾丸间质细胞的氧化损伤。本文用睾丸间质细胞TM3作为体外细胞模型。研究发现睾酮剂量为100nmol L-1治疗时可以产生细胞保护作用,但睾酮补充剂量≥500nmol L-1时就会产生细胞毒作用。在睾酮剂量为100nmol L-1治疗时能够显著降低ROS的产生,脂质过氧化物含量,缺氧诱导因子（HIF）-1α的稳定性和活性。睾酮剂量为500nmol L-1时产生的活性氧比100nmol L-1时增加了1．72倍。与对照组相比,睾酮剂量为50nmol L-1时类固醇激素合成急性调节蛋白（STAR）的表达增加了1．58倍（P〈0．01）．睾酬补充疗法降低了化学性诱导缺氧。低剂量睾酮补充疗法治疗睾丸间质细胞通过降低ROS和脂质过氧化物,增加StAR蛋白表达,减缓缺氧应激即降低HIF-1α测子的稳定性性产生细胞保护作用。研究中发现当睾酮剂量≥500nmol L-1时,氧化损伤增加。为阐明睾酮替代疗法的效果,需进一步阐明睾丸间质细胞中华酮量效关系受哪种机制调控。     

Effects of uric acid on mitochondrial oxidative damage and apoptosis in human renal tubular epithelial cells

Objective To observe the effects of uric acid (UA) on mitochondrial oxidative damage and apoptosis in renal tubular epithelial cells (HK-2), and investigate the possible mechanism. Methods HK-2 cells were exposed to UA (480 μmol/L, 720 μmol/L) for different time (0 h, 24 h, 48 h) in vitro. The mitochondrial ROS production was detected by MitoSOX staining. The mitochondrial membrane potential was measured by JC - 1 staining. The expressions of prohibitin and AIF were examined by Western blotting and immunofluorescence cytochemistry. The cell apoptosis was measured by Annexin V-FITC/PI staining. Results The mitochondrial ROS production in HK-2 cells exposed to 480 μmol/L UA was increased than that of control group at 24 h (P﹤0.05), and increased gradually with UA concentration and incubation time increasing, while the mitochondrial membrane potential was reduced at the same time. There were no significant changes in AIF expression and apoptosis rate of HK -2 cells exposed to 480 μmol/L UA for 24 h compared with that of control group (P﹥0.05), while both of them were up-regulated when HK-2 cells were exposed to 480 μmol/L UA for 48 h and 720 μmol/L UA for 24 h and 48 h (P﹤0.05). The prohibitin expression in HK-2 cells exposed to 480 μmol/L UA was reduced than that of control group at 24 h (P ﹤ 0.05), and down - regulated gradually with UA concentration and incubation time increasing. Conclusion Uric acid can induce the mitochondrial ROS production increased, the mitochondrial membrane potential reduced, the prohibitin expression down-regulated and the mitochondrial apoptosis pathway activated in HK-2 cells.     

高糖加重造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡

目的探讨高糖对造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响及其分子机制。方法将NRK52E细胞分成6组：正常对照组（A组）;造影剂组（B组）;葡萄糖（5mmol／L）＋造影剂组（C组）;葡萄糖（15retool／L）＋造影剂组（D组）;葡萄糖（30mmol／L）＋造影剂组（E组）;8]3203580＋葡萄糖（30mmol／L）＋造影剂组（F组）。F组SB203580（20μmol／L）在造影剂加入30min前加入。结果C组细胞葡萄糖作用6、12、24h及D、E组细胞葡萄糖作用6h,未见造影剂诱导的肾损伤和肾小管上皮细胞凋亡加重。D、E组细胞葡萄糖作用12h,造影剂肾损伤和肾小管上皮细胞凋亡重于B组,葡萄糖作用24h,肾损伤和肾小管上皮细胞凋亡重于葡萄糖作用12h,且E组重于D组（P〈0．05）。高糖显著增加造影剂诱导的肾小管上皮细胞ROS水平及p-p38和caspase3蛋白表达,SB203580抑制1〉p38和caspase3蛋白表达。ROS与p-p38、caspase3及p-p38与caspase3呈显著正相关（r分别为0．70、0．68和0．65,P〈0．05）。结论高糖以时间和剂量依赖方式加重造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤,其分子机制与高糖显著增加细胞内ROS水平及上调p-p38、caspase3表达有关。     

脱氢抗坏血酸对高糖诱导系膜细胞产生氧自由基的影响

目的 探讨脱氢抗坏血酸(DHA)对高糖诱导系膜细胞产生氧自由基(ROS)的影响。 方法 (1)原代培养大鼠系膜细胞；(2)以Fe3+还原法检测细胞内抗坏血酸(AA)和DHA浓度，观察系膜细胞摄取AA和DHA的情况及葡萄糖、葡萄糖转运蛋白(GLUT)抑制剂细胞松弛素B对其的影响；(3)采用激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内ROS，观察高糖诱导系膜细胞ROS产生的情况及不同浓度DHA对其的影响；(4)采用凝胶电泳迁移率法(EMSA)检测活性蛋白1(AP-1)和DNA的结合活性，观察DHA对高糖诱导的系膜细胞内AP-1 活性的影响。结果 (1)AA不能由细胞外进入系膜细胞，而DHA可以进入，并且随着细胞外葡萄糖浓度的增加，其进入速度减慢；细胞松弛素B则完全抑制了DHA进入到系膜细胞。(2)高糖快速诱导系膜细胞ROS产生增多；DHA抑制了高糖的这种作用，并且该抑制作用在≤4 mmol/L的浓度范围内呈浓度依赖性。(3)DHA抑制了高糖诱导的系膜细胞内AP-1 的激活。 结论 (1)系膜细胞是依赖DHA利用Vit C的细胞型；DHA进入该细胞依赖GLUT介导，高糖可抑制其进入细胞。(2)DHA可有效抑制高糖诱导的系膜细胞ROS产生增多，并在一定范围内呈浓度依赖性。(3)DHA在抑制ROS产生的同时，也显著抑制了高糖诱导的AP-1 的激活。     

Autophagic deficiency is related to steroidogenic decline in aged rat Leydig cells

Late-onset hypogonadism (LOH) is closely related to secondary androgen deficiency in aged males, but the mechanism remains unclear. In this study, we found that reduced testosterone production in aged rat Leydig cells is associated with decreased autophagic activity. Primary rat Leydig cells and the TM3 mouse Leydig cell line were used to study the effect of autophagic deficiency on Leydig cell testosterone production. In Leydig cells from young and aged rats, treatment with wortmannin, an autophagy inhibitor, inhibited luteinising hormone (LH)-stimulated steroidogenic acute regulatory (StAR) protein expression and decreased testosterone production. In contrast, treatment with rapamycin, an autophagy activator, enhanced LH-stimulated steroidogenesis in Leydig cells from aged, but not young, rats. Intracellular reactive oxygen species (ROS) levels were increased in both young and aged Leydig cells treated with wortmannin but decreased only in aged Leydig cells treated with rapamycin. Furthermore, an increased level of ROS, induced by H(2)O(2), resulted in LH-stimulated steroidogenic inhibition. Finally, knockdown of Beclin 1 decreased LH-stimulated StAR expression and testosterone production in TM3 mouse Leydig cells, which were associated with increased intracellular ROS level. These results suggested that autophagic deficiency is related to steroidogenic decline in aged rat Leydig cells, which might be influenced by intracellular ROS levels.     

自吞噬在脂多糖诱导HL-1心肌细胞损伤中的作用

目的 评价自吞噬在脂多糖(LPS)诱导HL-1心肌细胞损伤中的作用.方法 采用随机数字表法,将培养的HL-1细胞随机分为4组(n=15):正常对照组(C组)不予任何处理,继续培养24h;LPS组在细胞培养液中加入LPS(终浓度1 μg/ml);自吞噬诱导剂纳巴霉素组(R组)在细胞培养液中加入纳巴霉素(终浓度0.2 μg/ml),孵育48 h时加入LPS(终浓度1 μg/ml);自吞噬抑制剂三甲基嘌呤组(3-MA组)在细胞培养液中加入加入3-MA(终浓度10 mmol/L),孵育48 h时加入LPS(终浓度1μg/ml).各组孵育4h时测定自吞噬蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)表达水平,并观察线粒体超微结构,计算自吞噬体数量,测定线粒体光密度值、线粒体膜电位(JC-1).于孵育24h时测定细胞凋亡率和Caspase-3活性.结果 与C组比较,LPS组LC3Ⅱ表达水平、线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性升高,自吞噬体数量增加,JC-1降低(P＜0.05);与LPS组比较,R组LC3Ⅱ表达水平和JC-1升高,自吞噬体数量增加,线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性降低,3-MA组LC3Ⅱ表达水平和JC-1降低,自吞噬体数量减少,线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性升高(P＜0.05).R组线粒体超微结构损伤较LPS组减轻,3-MA组较LPS组加重.结论 自吞噬可减轻LPS诱导的HL-1心肌细胞损伤,机制可能与清除受损线粒体,改善线粒体功能,抑制细胞凋亡有关.     

Effects of follistatin on testosterone secretion of rat Leydig cell in vitro

<正> Objective:To investigate the effects of follistatin(rhFS-288) on biosynthesis andsecretion of testosterone in rat Leydig cell in vitro.Methods:Leydig cells were isolated from Wistar rat testes by a discontinuous Per-coll gradient procedure.Purified cells were incubated in 24-well plate(10~5 cell/ml/well)and maintained for 24 h in a CO_2 incubator,rhFS-288 and Ca~(2+) were added to the wellsindependently or jointly in both baseline (without hCG) and stimulation condition (1.0IU/ml of hCG) to observe the change of testosterone concentration in the media.Results:rhFS-288 showed a dose-dependent inhibiting effect on testosterone releasein baseline and stimulating condition.Ca~(2+) presented inhibitory effect either.Whereas,escape phenomenon emerged while Ca~(2+) concentration reached to 100 mmol/L.A com-bination of rhFS-288 with Ca~(2+) displayed a dose-dependent inhibition on testosterone se-cretion.Conclusion:rhFS-288 inhibits testosterone secretion in a dose-dependent manner.Calcium is thought to be the second messenger of FS action.The mechanism of escapephenomenon during high dose of Ca~(2+) along is unknown.     

ROS/GADD153蛋白在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨活性氧簇(ROS)/GADD153蛋白在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞凋亡中的作用.方法 体外培养乳鼠心肌细胞,随机分为9组(n=5),Ⅰ组(C组)常规心肌细胞培养,不予其他处理;Ⅱ组(AngⅡ6组)给予100 nmol/L AngⅡ,孵育6 h;Ⅲ组(AnsⅡ12组)给予100 nmol/L AngⅡ,孵育12 h;Ⅳ组(ArtsⅡ24组)给予100 nmol/L Ang Ⅱ,孵育24 h;V组[N-乙酰-L半胱氨酸(NAC)+AngⅡ组]预先给予抗氧化剂NAC 5 mmol/L,2 h后给予100 nmol/L Ang Ⅱ,孵育24 h;Ⅵ组(NAC组)仅给予NAC 5 mmol/L,孵育24 h;Ⅶ组(anti-ODN组)GADD153反义寡核苷酸10 μmol/L转染24 h后,加入100nmoFL AngⅡ,孵育24 h;Ⅷ组(mis-ODN组)GADDl53错义寡核苷酸10 μmol/L转染24 h后,加入100nmol/L Ang Ⅱ,孵育24 h;Ⅸ组(脂质体对照组)加入等容量转染试剂,孵育24 h.检测细胞活力、细胞内ROS产量、细胞凋亡率及GADD153蛋白表达水平.结果 与C组相比,AngⅡ6组、AngⅡ12组、AngⅡ24组细胞活力降低,细胞凋亡率、ROS产量及GADD153蛋白表达升高,且呈时间依赖性(P＜0.05);与AngⅡ24组比较,NAC+AngⅡ组和anti-ODN组细胞活力升高,细胞凋亡率、ROS产量及GADD153蛋白表达降低(P＜0.05).结论 AugⅡ通过增加ROS产量,诱导GADD153蛋白表达上调,从而导致心肌细胞凋亡的发生.     

脱氢抗坏血酸对高糖诱导肾小管上皮细胞产生氧自由基的影响

目的 探讨脱氢抗坏血酸(DHA)对高糖诱导肾小管上皮细胞产生氧自由基的影响&#65377;方法 (1)传代培养肾小管上皮细胞;(2)以Fe3+还原法检测细胞内抗坏血酸(AA)浓度,观察肾小管上皮细胞摄取AA和DHA的情况及葡萄糖和葡萄糖转运蛋白(GLUT)抑制剂细胞松弛素B(cytochalasin B)对其影响;(3)激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内氧自由基,观察高糖诱导肾小管上皮细胞氧自由基产生的情况及不同浓度DHA对其影响&#65377;结果 (1)AA不能由细胞外进入肾小管上皮细胞,而DHA可以进入,并且随着细胞外葡萄糖浓度的增加,其进入速度减慢&#65377;细胞松弛素B则完全抑制了DHA进入到肾小管上皮细胞, 而固定葡萄糖浓度(25 mmol/L)时,随着DHA浓度的增加,DHA进入细胞内的速度逐渐增快&#65377;(2)高糖快速诱导了肾小管上皮细胞氧自由基产生增多,DHA抑制了高糖的这种作用,并且该抑制作用在浓度小于&#65380;等于4 mmol/L的范围内呈浓度依赖性&#65377;结论 (1)肾小管上皮细胞是依赖DHA利用VitC的细胞型,DHA进入该细胞依赖GLUT介导,高糖可抑制其进入细胞;(2)DHA可有效抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞氧自由基产生增多,并在一定范围内呈浓度依赖性&#65377;