人参皂苷Rh2致中国仓鼠肺细胞染色体畸变的作用

目的：研究人参皂苷Rb2致中国仓鼠肺细胞（Chinese hamster lung cells,CHL）染色体畸变的作用。方法：细胞计数法测定人参皂苷Rb2对CHL细胞的半数抑制浓度（50％ inhibition concentration,IC50）,根据IC50设立不同剂量组,进行CHL细胞染色体畸变试验,分别观察人参皂苷Rb2染毒6、24h及加S9后染毒6hCHL细胞染色体的数目及结构变化,进行染色体畸变分析。结果：人参皂苷Rb2染毒6、24h及加S9后染毒6hCHL细胞染色体畸变均为阴性。结论：在本试验条件下,人参皂苷Rb2未引起CHL细胞染色体产生畸变。     

人参皂苷Rb2在体外调控破骨细胞的作用

目的探究人参皂苷Rb2在体外对破骨细胞的作用及机制。方法通过培养RAW264.7破骨前体细胞,加入不同浓度Rb2溶液(0.1μM,1μM,10μM),采用CCK-8检测Rb2药物毒性,利用TRAP染色观察破骨细胞形态并计数,使用RT-PCR方法检测TRAP、NFATc1破骨活动特异性基因m RNA的表达,通过Western blot技术检测破骨细胞中LC3 I、LC3 II、m TOR的蛋白表达水平。结果 TRAP阳性计数,与空白对照组相比(168.2±22.6),0.1μM组(131.0±16.3),P=0.018;1μM组(98.8±17.9),P0.01;10μM组(85.8±17.3),P0.01,破骨细胞数量明显减少。对照组TRAP、NFATc1破骨分化特异性基因m RNA表达明显下降,与对照组相比各组P0.01。LC3 II/LC3 I的比值显著增高,m TOR量下降,与对照组相比各组P0.01。结论 Rb2可能通过自噬途径影响破骨基因的表达,从而减少破骨细胞的形成,m TOR通路在此过程中起重要作用。     

二醇组人参皂苷抑制Lewis肺癌生长及NF-κB相关基因的作用

目的 研究二醇组人参皂苷Rh2、PPD对Lewis肺癌生长及NF-κB相关信号的抑制作用.方法 体外实验采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定Rh2、PPD对Lewis肺癌细胞增殖的影响.体内实验,以足趾皮下接种模型检测Rh2、PPD对Lewis肺癌细胞为瘤源的肿瘤生长的抑制作用.并对体内样品用实时荧光定量PCR方法测定Rh2、PPD对p65和p50(组成性NF-κB)及其下游若干相关基因的表达调节.结果 在体外,人参皂苷Rh2、PPD对肺癌细胞株具有明显的增殖抑制作用;在体内,Rh2、PPD对小鼠Lewis肺癌移植性模型均具有明显的生长抑制作用;实时荧光定量PCR结果表明,Lewis肺癌组织在体内经人参皂苷Rh2、PPD作用后,p65和p50及其下游基因表达明显下调.结论 Rh2、PPD对Lewis肺癌生长有明显的抑制作用,同时抑制NF κB及下游基因的表达.     

人参皂苷Rg3抑制肺癌NCI-H1650细胞增殖作用研究

[目的]研究人参皂苷Rg3对肺腺癌NCI-H 1650细胞增殖的抑制作用及对凋亡的影响.[方法]MTT法检测人参皂苷Rg3对NCI-H 1650细胞增殖的抑制作用,Annexin-V-FITC/PI法检测细胞凋亡.Western blot法检测caspase-3、Bcl-2、Bax、survivin蛋白表达的情况.[结果]不同浓度人参皂苷Rg3能有效抑制NCI-H1650细胞增殖,且呈时间剂量依赖性(P＜0.01).20μmol/L人参皂苷作用NCI-H1650细胞24、48h,细胞凋亡率明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).20μmol/L人参皂苷作用NCI-H1650细胞48h,Bcl-2、survivin蛋白表达降低、caspase-3、Bax蛋白表达增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01).[结论]人参皂苷Rg3对肺腺癌NCI-H1650细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间剂量依赖关系,其机制可能与降低细胞Bcl-2、survivin蛋白表达,增加caspase-3、Bax蛋白表达,促进细胞凋亡有关.     

人参皂苷抗结直肠癌作用机制的研究进展

人参皂苷作为人参的主要活性成分,具有诱导肿瘤细胞调亡、抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞周期停滞、抑制肿瘤血管生成、免疫调节、化疗增效、抗炎以及调节肠道菌群等作用。现如今,人参皂苷对结直肠癌的作用已成为研究的热点。文章就人参皂苷抗结直肠癌的作用机制进行综述。     

人参皂苷Rb1 通过KEAP1/PGAM5/AIFM1 通路促进肝细胞癌HepG2细胞发生氧死亡

目的：探讨人参皂苷Rb1（Gn-Rb1）对肝细胞癌（HCC）HepG2细胞氧死亡的影响及其可能的分子机制。方法：采用生物信息学方法分析氧死亡的关键基因PGAM5表达对HCC患者生存期的影响。选取辽宁省肿瘤医院收治的8例HCC患者的HCC 组织与癌旁组织,通过WB法及qPCR 检测氧死亡相关基因蛋白与mRNA的表达情况。将HepG2 细胞随机分为对照组与Gn-Rb1组（予以200 μmol/L Gn-Rb1干预）,采用细胞克隆形成实验、划痕愈合实验分别检测Gn-Rb1对HepG2细胞的集落形成能力、迁移能力的影响,ELISA 检测对细胞ROS 生成水平的影响,微板法检测对细胞LDH 释放水平的影响;WB法、qPCR 法检测Gn-Rb1对HepG2氧死亡关键基因蛋白质与mRNA水平表达的影响。结果：生物信息学分析发现,PGAM5高表达肝癌患者总生存时间较低表达患者更长（P<0.05）。在临床HCC组织与癌旁组织样本中发现,相较于癌旁组织,在蛋白质与mRNA水平上,肿瘤组织KEAP1与PGAM5表达显著降低,NRF2表达显著升高（均P<0.01）,p-AIFM1蛋白水平显著升高（P<0.05）。对HepG2细胞予以200 μmol/L Gn-Rb1干预后,相较于对照组,Gn-Rb1组HepG2细胞的迁移能力与集落形成能力显著降低（均P<0.01）,而LDH水平显著升高（P<0.05）;相比于对照组,在mRNA和蛋白质水平上,Gn-Rb1 组细胞中KEAP1、PGAM5 表达均显著升高而NRF2表达均显著降低（均P<0.05）,p-AIFM1蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论：HCC组织中氧死亡被抑制,而Gn-Rb1能够通过调控KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进HepG2细胞氧死亡的发生,抑制细胞增殖和迁移能力。     

破骨细胞对休眠肺腺癌细胞的激活作用及其分子机制探讨

目的:探讨破骨细胞对休眠肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）细胞H1975的激活作用及其潜在的分子机制。方法:用血清剥夺的方式建立肺腺癌细胞的休眠模型,检测休眠肺腺癌细胞的增殖与凋亡,以及衰老（β-半乳糖苷酶）和休眠相关标志物的蛋白表达;分离培养人外周血单个核细胞,用M-CSF和h-RANKL因子诱导人外周血单个核细胞分化为成熟的破骨细胞,TARP染色鉴定破骨细胞,收集破骨细胞的培养上清;破骨细胞培养上清与休眠肺腺癌细胞共培养,流式细胞术检测肺腺癌细胞周期、增殖情况,Transwell小室检测细胞迁移能力,Western blot检测休眠相关以及AMPK信号通路相关蛋白的表达。结果:体外血清剥夺可以诱导肺腺癌细胞系H1975进入休眠状态,其细胞周期停滞在G0-G1期,增殖停滞,休眠相关标志物Nanog、NR2F1、p27、p21表达上调;建立体外人外周血单个核细胞诱导分化的破骨细胞培养体系;破骨细胞的培养上清具有促进休眠肺腺癌细胞周期恢复、细胞增殖以及细胞迁移的作用;同时,休眠相关蛋白表达的下调,其作用与AMPK信号通路的AMPK去磷酸化和mTOR磷酸化有关。结论:破骨细胞具有促进休眠肺腺癌细胞激活的作用,其分子机制与AMPK信号通路有关。     

CCN3在肺癌骨转移灶中高表达及其对破骨细胞的作用

背景与目的:肺癌易转移至骨并导致溶骨性破坏的具体机制目前还不清楚,本研究观察CCN3在肺癌骨转移灶中的表达水平以及在前体成骨细胞(MC3T3-E1)与前体破骨细胞(RAW264.7)共培养体系研究CCN3重组蛋白对前体破骨细胞分化的影响。方法:采用免疫组化检测9例肺癌骨转移转灶组织及相应癌旁组织中CCN3的表达;构建RAW264.7细胞与MC3T3-E1细胞共培养模型,向共培养体系中加或不加800 ng/mL的CCN3重组蛋白,采用Real-time PCR检测RAW264.7细胞的破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CK)、降钙素受体(calcitonin receptor,CTR)mRNA的表达,并通过TRAP染色法对破骨细胞进行鉴定。结果:肺癌骨转移灶组织中的CCN3表达量明显高于癌旁组织;CCN3重组蛋白可显著促进共培养体系中的RAW264.7细胞的破骨细胞标志基因TRAP、CK、CTR的mRNA的表达量;TRAP染色可见对照组TRAP阳性细胞数[(6.2±1.48)个]明显低于加了CCN3重组蛋白的试验组[(21.4±3.04)个],差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CCN3在肺癌骨转移灶中高表达及其可诱导破骨细胞分化,CCN3可能在肺癌骨转移和溶骨性破坏中具有重要作用。     

破骨细胞生成抑制因子在雌激素受体阳性乳腺癌中的生物学作用

目的:探讨破骨细胞生成抑制因子(osteoprotegerin,OPG)蛋白在人乳腺癌中的生物学作用。方法:利用Kaplan-Meier plotter 数据库分析OPG在人乳腺癌病例中的表达对于病人预后生存的影响。MCF-7去激素培养后,加入17β-雌二醇刺激24 h后,提取总RNA,检测OPG在细胞内的表达情况。利用STRING数据库检索OPG相互作用蛋白。结果:OPG低表达明显减低雌激素受体阳性乳腺癌病人的预后生存时间,而雌激素受体阴性的乳腺癌病人的生存时间不受OPG表达的影响。在17β-雌二醇的刺激下,OPG基因表达水平明显减低。多个因子能够与OPG发生相互作用。结论:OPG可能参与雌激素受体阳性的乳腺癌的转化。     

Ginsenoside F2 induces apoptosis accompanied by protective autophagy in breast cancer stem cells

Ginsenoside F2 (F2) was assessed for its antiproliferative activity against breast cancer stem cells (CSCs). F2 induced apoptosis in breast CSCs by activating the intrinsic apoptotic pathway and mitochondrial dysfunction. Concomitantly, F2 induced the formation of acidic vesicular organelles, recruitment of GFP-LC3-II to autophagosomes, and elevation of Atg-7 levels, suggesting that F2 initiates an autophagic progression in breast CSCs. Treatment with an inhibitor of autophagy enhanced F2-induced cell death. Our findings provide new insights into the anti-cancer activity of F2 and may contribute to the rational use and pharmacological study of F2.     

Ca2+在顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞自噬反应中的作用

背景与目的：Ca2+在维持细胞生物活性方面扮演着很重要的角色,其在细胞内的储存、释放和摄取主要受内质网调节,细胞内Ca2+浓度的稳态是维持细胞生物能量代谢、蛋白质折叠和分泌的基础条件。本研究探讨Ca2+在顺铂诱导SKOV3细胞内质网应激-自噬反应中的作用机制。方法：取人卵巢癌SKOV3细胞系为研究对象,按以下步骤分组：①探讨顺铂诱导内质网应激与自噬反应,用6μg/mL的顺铂处理SKOV3细胞0、6、12和24 h;②了解顺铂和毒胡萝卜内酯(thapsigargin, TG)诱导内质网应激释放的Ca2+与自噬的关系,分别用TG和顺铂处理SKOV3细胞0、9和12 h;③探究Ca2+对自噬的作用机制,分成对照组、顺铂组、TG组、BAPTA-AM组、顺铂联合BAPTA-AM组和TG联合BAPTA-AM组。用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测内质网应激相关蛋白GRP78和自噬标志性蛋白LC3蛋白的表达水平;用Fluo-4钙离子荧光探针检测细胞质中的Ca2+浓度变化;间接免疫荧光染色后,用共聚焦显微镜检测LC3蛋白的表达情况。结果：SKOV3细胞经6μg/mL顺铂作用6 h时GRP78灰度值(1.393±0.004)与其对照组(0.679±0.011)相比显著提高(t=113.2,P=0.000),在12 h时LC3灰度值(0.072±0.002)与其对照组(0.038±0.000)相比显著提高(t=25.5,P=0.000)。间接免疫荧光结果显示,顺铂(6μg/mL)组和TG(3μmol/L)组随作用时间的延长,细胞内LC3荧光斑点会逐渐增多,并伴随着细胞质Ca2+浓度上升。后经钙离子络合剂BAPTA-AM干预后,细胞内LC3荧光强度进一步增强。Westren blot结果显示,顺铂组LC3灰度值(0.039±0.000)小于顺铂联合BAPTA-AM组(0.071±0.001),TG组(0.035±0.001)小于TG联合BAPTA-AM组(0.065±0.001),差异有统计学意义(P=0.000)。结论：顺铂诱导SKOV3细胞内质网应激和自噬的发生,并伴随着细胞质内Ca2+浓度的上升。络合细胞质内Ca2+能增强顺铂诱导的自噬反应。     

Mechanism of P-glycoprotein expression in the SGC7901 human gastric adenocarcinoma cell line induced by cyclooxygenase-2

Objective: To investigate possible signal pathway involvement in multi-drug resistant P-glycoprotein (P-gp)expression induced by cyclooxygenase-2 (COX-2) in a human gastric adenocarcinoma cell line stimulated withpacliaxel (TAX). Methods: The effects of TAX on SGC7901 cell growth with different doses was assessed byMTT assay, along with the effects of the COX-2 selective inhibitor NS-398 and the nuclear factor-ΚB (NF-ΚB)pathway inhibitor pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC). Influence on COX-2, NF-ΚB p65 and P-gp expressionwas determined by Western blotting. Results: TAX, NS-398 and PDTC all reduced SGC7901 growth, with dosedependence.With increasing dose of TAX, the expression of COX-2, p65 and P-gp showed rising trends, thisbeing reversed by NS-398. PDTC also caused decrease in expression of p65 and P-gp over time. Conclusion:COX-2 may induce the expression of P-gp in SGC7901 cell line via the NF-kappa B pathway with pacliaxelstimulation.     

Her2-PI3K-Akt信号转导通路与胃癌的关系

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)作为Her2重要信号转导通路之一,通过对下游核因子κB(NF-κB)等凋亡相关因子的调节,影响细胞的存活和凋亡,且与肿瘤的侵袭、转移、预后及化疗耐药有关。胃癌的生物学特性和临床特征与Her2-PI3K-Akt信号转导通路也密切相关。曲妥珠单抗是抗Her2的人源化单克隆抗体,临床前研究证实该药对Her2过表达的胃癌细胞和异体移植肿瘤有一定抑制作用。     

Pre-clinical evaluation of Rh2 in PC-3 human xenograft model for prostate cancer in vivo: formulation, pharmacokinetics, biodistribution and efficacy

Purpose  This study assesses the pharmacokinetics, biodistribution and efficacy of ginsenoside Rh2 as a single agent administered in a novel oral dosage formulation. Methods  A novel oral dosage formulation of Rh2 has been described. Rh2 levels in blood and tissues following administration to nu/nu nude mice were determined by high performance liquid chromatography tandem mass spectroscopy. Efficacy was determined in an established PC-3 human prostate cancer model. Results  Rh2 administered at a dose of 120 mg/kg exhibited a peak plasma concentration of 19.0 ± 2.0 μg/ml. Rh2 levels were measurable in prostate and tumor tissues, with as much as 0.3% of the administered dose being detected in tumors. This formulation exhibited no measurable toxicity as judged by weight loss or changes in serum levels of aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, and creatinine. This dose engendered a significant delay in PC-3 tumor growth, an increase in apoptotic index, and a decrease in tumor cell proliferation. Conclusions  Rh2 is a stable compound that can be formulated for oral gavage. Pharmacokinetics studies demonstrate its ability to be absorbed following oral administration. Future studies will assess the pharmacokinetics of Rh2 when administered in combination with docetaxel.     

Modulatory effects of Beclin 1 on expression of angiopoietin and Tie-2 receptor in human cervical cancer cells

Aim: To investigate the effect of Beclin 1, an autophagy gene, on the expression of angiopoietin (Ang) protein and the Tie-2 receptor in CaSki human cervical cancer cells. Materials and Methods: Beclin 1 overexpression (pcDNA3.1-Beclin1) and knockdown (pSUPER-Beclin1) plasmids were independently transfected into CaSki cells, and stably transfected cells were selected. Real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot analyses were performed to detect the mRNA and protein expression of Beclin 1, Ang-1, Ang-2, and Tie-2. MTT assays were employed to determine cell proliferation rates. Results: In the cells transfected with pcDNA3.1-Beclin1, the expression of Beclin 1, Ang-2, and Tie-2 was markedly increased, but expression of Ang-1 was dramatically reduced. MTT assays revealed that the proliferation of these cells was also significantly suppressed. In the CaSki cells transfected with pSUPER-Beclin1, the expression of Beclin 1, Ang-2, and Tie-2 was inhibited. Conclusion: Overexpression of Beclin 1 can inhibit the proliferation of CaSki cells, which may be attributed to an imbalance among the expression of Ang-1, Ang-2 and Tie-2.     

Rb基因、Rb2/p130基因在骨肉瘤中的表达与相关性

目的探讨骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)中Rb基因、Rb2/p130基因表达情况及两者间的相关性。方法用免疫组织化学SP法检测Rb、Rb2/p130基因在62例OS、39例骨软骨瘤及51例非肿瘤患者患旁正常骨组织中的蛋白表达情况。结果1.OS组中pRb、pRb2/p130阳性率分别为38.71%、27.42%;2.骨软骨瘤组中两者的阳性率分别为84.62%、76.92%;3.正常骨组织组中两者的阳性率分别为94.12%、82.35%;4.OS组与骨软骨瘤组及正常骨组织组中二个基因表达差异均有统计学意义(P<0.01);5.在骨肉瘤中二个基因表达呈正相关,有统计学意义(r=0.8743,P<0.01)。结论Rb、Rb2/p130基因在骨肉瘤中以低表达方式存在,它们与骨肉瘤的发生、发展及预后关系密切,它们在骨肉瘤中的表达呈正相关,并且有可能通过共同低表达来促使骨肉瘤的发生、发展,而它们共同作用的机制有待进一步研究。     

miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌发生发展的分子机制

目的：探讨miR-515-5p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法：选取2020年6月至2020年12月在河北医科大学第四医院手术切除的60例食管癌患者的癌组织标本和20例健康成人的食管上皮组织标本,以及食管癌细胞TE1、Eca109、KYSE30和KYSE170,用q PCR法检测食管癌组织和细胞中miR-515-5p的表达水平。在Eca109细胞中转染miR-515-5p模拟物以及其阴性对照物、在TE1细胞中转染miR-515-5p抑制剂以及其阴性对照物,q PCR法检测转染效率,用CCK-8法、Transwell实验分别检测转染细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法分析预测miR-515-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)为miR-515-5p的靶基因。应用GEPIA和TCGA数据集分析HDAC2在食管癌组织中的表达及其与患者临床特征的关系。结果：miR-515-5p在食管癌组织及细胞中表达降低（均P<0.01）。过表达miR-515-5p抑制食管癌Eca109细胞...