CX26基因在非综合征型耳聋中的产前诊断及早期干预

目的：对非综合征型耳聋家系进行CX26基因的突变检测,对检测出CX26基因突变的家系进行产前诊断并实施早期干预。方法：对来自国内十多个省份的100个非综合征型耳聋家系中的先证者通过聚合酶链反应、单链构像多态性分析以及直接测序法进行CX26基因的突变检测,对确诊为CX26基因所致的遗传性耳聋家系中的一成员在妊娠时通过脐静脉穿刺术抽取脐胎血进行产前诊断及早期干预。结果：①发现CX26基因的致病性突变1种：cDNA编码区233～235位点c的纯合缺失;多态6种：G79A、G109A、A341G、G442A、G506A和T608C;②对一个确诊为CX26基因233~235delC的遗传性聋家系的成员于第2次妊娠时进行产前诊断,发现胎儿具有同种致病性突变。结论：①CX26基因cDNA编码区233～235位点C的杂合缺失不致聋,纯合缺失可导致非综合征型常染色体隐性遗传性聋;②产前诊断和早期干预可预防遗传性聋。这是我国首次确诊携带耳聋致病基因的胎儿并实施早期干预。     

非综合征性耳聋患者连接蛋白26基因突变的研究

目的　探讨中国人非综合征性耳聋患者连接蛋白 2 6 (connexin 2 6 ,Cx2 6 )基因突变频率和特性。方法　收集中国散发先天性聋哑儿童 16例 ,常染色体隐性遗传性聋 39例 (39个家系 ) ,10岁前开始听力下降的常染色体显性遗传性聋 30例 (30个家系 )和健康对照组 10 0例。聚合酶链反应 单链构象多态 (singlestrandconformationalpolymorphismanalysisofpolymerasechainreaction ,PCR SSCP)分析初筛可疑突变者 ,SSCP分析发现异常构象带后再行DNA测序。结果　健康对照组中 15例发现 5种多态性改变 ,耳聋患者中 10例发现 6种多态性改变。散发先天性聋哑和常染色体隐性遗传非综合征性耳聋中未发现致病突变。 1个常染色体显性遗传性聋家系发现所有患者 (3例 )Cx2 6基因的编码区2 99 30 0位碱基AT杂合性缺失 ,导致移码突变 ,翻译的蛋白质截短 ,该家系听力正常者无此突变。结论　蒙古人种中常染色体隐性遗传性非综合征性耳聋的Cx2 6基因突变率可能低于其他人种。Cx2 6基因编码区 2 99 30 0位碱基AT杂合性缺失可致常染色体显性遗传性聋DFNA3型     

一个常染色体显性遗传性聋家系致病基因鉴定

目的分析常染色体显性遗传性聋家系的听力学及遗传学特征,利用高通量测序和连锁分析技术进行致病基因鉴定。方法采集一个常染色体显性遗传性非综合征型聋家系患者的临床资料,进行耳聋表型和遗传方式的判定并绘制家系图,提取家系成员外周血DNA,首先利用耳聋相关基因靶向测序,对家系先证者进行162个已知耳聋基因的筛查,然后采用全外显子组测序和连锁分析相结合的方法继续寻找致病基因,筛选出候选基因变异位点在家系中进行验证,以明确该家系致病原因。结果该耳聋家系来自河南省,编号为HBSY-012,现存三代共34人,14人诊断为感音神经性聋,为常染色体显性遗传模式,耳聋者发病年龄5~7岁,早期表现为高频听力下降,随年龄增长迅速发展为全频受累的重度或极重度感音神经性聋。对先证者进行已知162个耳聋基因筛查未发现致病突变,家系连锁分析将致病基因定位于第9号染色体q31.1-q31.3区间内(最大LOD值3.6076)。全外显子组测序数据分析显示在连锁分析定位的区间内未发现候选变异,在区间以外筛选出4个候选基因变异位点,候选变异为ANKMY2基因NM_020319c.822_826del、DDX49基因NM_019070c.341C>T、DEFB129基因NM_080831c.284G>T以及EVI5基因NM_005665c.2399C>T,并对4个候选基因变异位点进行家系验证,结果提示都不是该家系的致病突变。结论该常染色体显性遗传非综合征型聋家系连锁分析将致病基因定位于第9号染色体q31.1-q31.3区间内。耳聋相关基因靶向测序和全外显子组测序均未发现致病突变,考虑该家系致病原因可能为基因的非编码区域的突变或者罕见的CNV/SV所致。     

connexin26基因突变与国人遗传性无综合性耳聋相关性分析

目的 分析国人遗传性无综合征耳聋与缝隙连接蛋白26（connexin26,Cx26）基因突变相关性,从分子水平探讨该病的发病机理。方法 收集国人35个无综合征耳鼻聋家系中138名成员,99例散发的无综合征耳 聋患者以及100份健康对照个体的外周血DNA样本共337份;采用聚合酶链反应－单链构像多态性（polymerase chain reaction-single stand conformational polymorphism,PCR-SSCP)分析方法,初筛受试者Cx26基因部分编码区的突变,发现异常电泳带的PCR产物直接序列分析。结果 PCR－SSCP检出2个家系5例耳聋成员异常泳带的样本。2个常染色体遗传性耳聋家系发现所有5例患者Cx-26基因的编码区233－235位碱基C纯合性缺失,导致移码突变,这2个家系听力正常者为杂合性突变或无此突变。结论 国人遗传性无综合征耳聋患者的Cx26基因突变热点可能与其他人种不同。Cx26基因编码区233－235位碱基C纯合性缺失可致常染色体隐性遗传性聋,是国人遗传性无综合征耳聋的致病因素之一。     

一个迟发性非综合征型常染色体显性遗传性聋家系表型特征及致病基因初步探讨

目的分析一个迟发性遗传性聋大家系的临床表型,探讨该家系耳聋患者的致病基因。方法对一个湖南籍耳聋大家系成员进行详细的病史资料采集、体格检查、听力学检查,其中两名患者做了颞骨CT检查。绘制家系图。以先证者外周血基因组DNA为模板对候选致病基因进行涵盖全部编码序列聚合酶链反应(polymer-ase chain reaction,PCR)扩增,对扩增产物进行酶切纯化后用ABI 3730测序仪直接测序,用DNASTAR-Laser-gene SeqMan Pro软件对测序结果进行分析。结果系谱分析得知该家系是一个常染色体显性遗传性非综合征型聋家系。患者临床表现高度一致,均表现为在9～25岁时首先出现"嗡嗡样"耳鸣,然后自觉双耳听力下降,纯音测听显示早期为以高频听力下降为主的神经性聋,之后听力下降程度逐步加重并波及低频。对候选致病基因进行突变检测,未发现致病突变。结论该家系符合常染色体显性遗传的特征,其致病基因还有待于进一步探索。     

Wolfram 综合征I型基因异质性突变引起低频非综合征型聋

目的分析常染色体显性遗传的低频非综合征感音神经性聋与Wolfram 综合征Ⅰ型(wolfram syndrome 1, WFS1)基因WFS1的关系以及WFS1基因突变特性,从分子遗传学水平探讨其致病机理.方法收集 6个低频非综合征感音神经性聋家系中28例成员以及140例健康对照个体的外周血DNA样本;采用聚合酶链反应,直接序列分析和限制性片断长度多态性分析方法,进行WFS1基因编码区的筛查.结果发现2个家系6例耳聋成员测序结果异常.1个家系发现所有耳聋患者WFS1基因的编码区2379位碱基G杂合性改变成A,导致错义突变;另1家系先证者WFS1基因的编码区2016位碱基G杂合性改变成T,先证者之妹2776位碱基G杂合性改变成A,导致错义突变;先证者之母为一Wolfram综合征伴有心理障碍患者,发现其为2016位2776位碱基复合型错义突变.这2个家系听力正常者及健康对照者中无此突变.结论 WFS1基因异质性突变引起低频非综合征感音神经性聋,主要突变为错义突变,遗传咨询和基因检测对该类型耳聋诊治具有指导意义.     

Wolfram综合征Ⅰ型基因异质性突变引起低频非综合征型聋

目的分析常染色体显性遗传的低频非综合征感音神经性聋与Wolfram综合征Ⅰ型（wolfram syndrome 1，WFSl）基因WFS1的关系以及WFS1基因突变特性，从分子遗传学水平探讨其致病机理。方法收集6个低频非综合征感音神经性聋家系中28例成员以及140例健康对照个体的外周血DNA样本；采用聚合酶链反应，直接序列分析和限制性片断长度多态性分析方法，进行WFS1基因编码区的筛查。结果发现2个家系6例耳聋成员测序结果异常。1个家系发现所有耳聋患者WFS1基因的编码区2379位碱基G杂合性改变成A，导致错义突变；另1家系先证者WFS1基因的编码区2016位碱基G杂合性改变成T，先证者之妹2776位碱基G杂合性改变成A，导致错义突变；先证者之母为一Wolfram综合征伴有心理障碍患者，发现其为2016位2776位碱基复合型错义突变。这2个家系听力正常者及健康对照者中无此突变。结论WFS1基因异质性突变引起低频非综合征感音神经性聋，主要突变为错义突变，遗传咨询和基因检测对该类型耳聋诊治具有指导意义。     

一个遗传性耳聋大家系的基因突变检测

目的 :探讨中国人遗传性耳聋基因的突变热点和明确我们最近收集到的一个遗传性耳聋家系是否为已克隆的耳聋基因的突变所致。方法 :该家系 5代共 4 7人 ,其中耳聋患者 1 8人 ,从家系图分析 ,符合常染色体显性遗传 ;所有患者均为语后聋 ,从 1 6 3 0岁起病 ,为双耳对称性、进行性、高频听力下降为主的感觉神经性聋 ,不伴其它器官系统的异常 ;采用PCR 直接测序法在该家系中进行HDIA1、GJB3、GJB2、DFNA5、а tectorin(可导致DFNA8和DFNA1 2两型遗传性耳聋 )、MYO7A、POU4F3等 7个常染色体显性耳聋基因的突变检测。结果 :发现CX2 6基因有 2种核苷酸改变即A3 4 1G和GC2 5 7 2 5 8CG ;POU4F3基因有 1种核苷酸改变即T90C。分析后发现 ,上述核苷酸改变均不是该家系耳聋的致病性突变。其余 5个基因未发现突变。结论 :该常染色体显性耳聋家系由目前已克隆基因突变所致的可能性较小 ,笔者目前正在进行的全基因组扫描和连锁分析极有可能定位一个新的耳聋基因位点     

一个非综合征型聋家系的遗传学分析及产前诊断

目的 对一个遗传性聋家系进行致病基因鉴定、遗传咨询和产前诊断。方法 运用目标区域捕获测序检测一个非综合征型聋家系遗传学病因,对检出的致病突变进行Sanger测序验证,结合STR检测技术对该家系行产前诊断。结果 一个家系两代人(Ⅰ:2、Ⅱ:2、Ⅱ:3)均为遗传性聋,但病因不同,先证者(Ⅰ:2)是SLC26A4基因C.919-2A>G纯合突变导致,两个异卵双胞胎女儿(Ⅱ:2、Ⅱ:3)耳聋病因是MYO15A基因c.5062＿5063delCT/c.7396-1G>A复合杂合突变。先证者孕期胎儿产前诊断结果显示耳聋风险低,出生后复查与产前诊断一致,并顺利通过新生儿听力筛查。结论 本研究明确了该非综合征型聋家系的基因型,首次明确了MYO15A基因c.5062＿5063delCT突变为致病性变异,拓展了MYO15A基因致病突变谱。     

GJB2基因在遗传性聋中的检测

目的对遗传性聋家系进行GJB2基因突变检测,为该病的基因诊断提供依据。方法采用PCR直接测序法对20个非综合征型遗传性聋家系的先证者(均为耳聋患者)进行GJB2基因的突变检测。结果发现了三种碱基改变:109G>A、79G>A和341G>A。109G>A是已报道的具有争议的致病突变,本实验在两个隐性遗传性聋家系的先证者中检测到109G>A纯合突变,且与耳聋共分离。79G>A和341G>A是已报道的多态。结论本研究发现了具有争议的致病突变109G>A的纯合突变,极可能导致隐性遗传性聋。     

Study on mutations in the connexin 26 gene among Chinese with nonsyndromic hearing loss]

OBJECTIVE: To study the relation between nonsyndromic hearing loss in Chinese and mutations in connexin 26 (Cx 26) gene and to explore the pathogenic mechanism. METHODS: One hundred and thirty-eight individuals from thirty-five pedigrees with nonsyndromic hearing loss, 99 children with sporadic nonsyndromic hearing loss and 100 normal adults as control were collected in present studies. The Cx 26 coding sequence was screened by single strand conformational polymorphism (SSCP) and analyzed by direct sequencing when SSCP shifts were observed. RESULTS: Five SSCP shifts in 2 pedigrees were observed. Homozygous deletion C at position 233-235 of Cx 26 cDNA, which resulted in frameshift mutation, was found in 2 pedigrees with nonsyndromic hearing loss. CONCLUSION: The hot-spot mutations of Cx 26 gene in Chinese with nonsyndromic hearing loss may be different from other ethnic groups. The 233-235 delC homozygous mutation of Cx 26 cDNA can result in autosomal recessive nonsyndromic hearing loss in Chinese population.     

Mutations in the connexin 26 gene in patients with nonsyndromic hearing impairment]

OBJECTIVE: To determine the prevalence and characteristics of deafness-causing mutations in Connexin 26(Cx26, GJB2) gene in Chinese with nonsyndromic hearing impairment(NSHI). METHODS: Study subjects are all Chinese including 16 infants with sporadic congenital deaf-mutism, 39 patients with autosomal recessive hereditary hearing loss, 30 patients with autosomal dominant hereditary hearing loss and 100 normal adults. The subjects were screened for base variations by single-strand conformational polymorphism (SSCP) analysis of the amplified products of polymerase chain reaction (PCR). Those who were found have abnormal conformational band were sequenced. RESULTS: Five kinds of polymorphism were found in 15 cases of controls and six kinds of polymorphism in 10 patients. No mutation was found in Cx26 gene in Chinese with autosomal recessive NSHI. Heterozygous deletion AT at position 299-300 of Cx26 cDNA, which results in premature chain termination, was found in a pedigree with autosomal dominant hereditary nonsyndromic hearing loss. CONCLUSION: The prevalence of deafness-causing mutations in Cx26 gene in Chinese with autosomal recessive NSHI maybe is lower than that of other ethnic groups. Heterozygous deletion AT at position 299-300 of Cx26 cDNA can lead to autosomal dominant hereditary hearing loss (DFNA3).     

间隙连接蛋白基因与遗传性聋的相关性研究

OBJECTIVE: To study the relation between hereditary nonsyndromic hearing impairment (NSHI) in Chinese and mutation in Connexin 31 (Cx31) gene and to explore the pathogenic mechanism. METHODS: Forty-seven pedigrees with hereditary NSHI, 38 Children with sporadic NSHI and cases of control were collected in present studies. The coding sequence of Cx31 gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR), screened by denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC) and confirmed by direct sequencing. RESULTS: The mutation rate of heterozygous mutation C --> T at position 798 of Cx31 cDNA in patient group and in control were 14.1% (12/85) and 1% (1/100) respectively. Significant difference was found between the two group (P < 0.01). Heterozygous mutation G --> A at position 580 of GJB3 cDNA, which results in a missense mutation (A194T), was found in two members of one pedigree with autosomal dominant NSHI. The mutation was not found in numbers with normal hearing of this pedigree and controls. Heterozygous mutation G --> A at position 250 of Cx31 cDNA was found in one child with sporadic congenital NSHI. In our previous studies, Cx26 gene mutations have been screened among the patient with hereditary NSHI and sporadic NSHI and the control of our test, and two Cx26 gene mutations were found in two pedigrees. But the two NSHI pedigrees which were confirmed to have Cx26 gene mutation were not found to have Cx31 mutation. The patient and the control which were confirmed to have Cx31 gene mutations were not found to have Cx26 mutations. CONCLUSIONS: Cx31 gene was associated with nonsyndromic hearing impairment There was no cross and cooperative effect between Cx26 gene and Cx31 gene.     

国人conneXin 2 6基因突变与先天性感音神经性耳聋的相关性研究

目的探讨国人耳聋人群中connexm26基因的突变频率和位点.方法收集15例有遗传性耳聋家族史的病例和252例散发性先天性耳聋病例血液样本,使用PCR-SSCP方法分析connexin26基因编码区突变.同时采用PSDM和BsBsiYI酶切的方法,直接检测异常connexin26基因35delG的突变.结果检出突变样本46例,其中散发耳聋患者中38例,突变率为15.1%;有家族史的聋儿15例中8例,突变率为53.3%.46例中5份有相似的异常电泳带,PCR产物直接测序,其形式为79位G→A的突变;另外在散发耳聋患者中还发现2例251delT和233delC,PDSM分析未发现有35delG的突变.结论国人先天性耳聋患者中存在着connexin26基因的高突变率,但突变热点与国外报道的不同,推测connexin26基因突变有明显的种族特异性.     

connexin 26基因突变与国人遗传性无综合征耳聋相关性分析

目的分析国人遗传性无综合征耳聋与缝隙连接蛋白26（connexin 26,Cx 26）基因突变相关性,从分子水平探讨该病的发病机理。方法收集国人35个无综合征耳聋家系中138名成员,99例散发的无综合征耳聋患者以及100份健康对照个体的外周血DNA样本共337份;采用聚合酶链反应-单链构像多态性（polymerase chain reaction-single stand conformational     

非综合征型遗传性聋家系系谱分析及mtDNA 12SrRNA tRNALeu(UUR)tRNASer(UCN) 基因突变分析

目的探讨非综合征型遗传性聋(NSHL)家系中线粒体基因(mtDNA)突变所占比重以及母系遗传的统计学规律.探讨mtDNA突变与遗传性聋的关系及突变在这类家系及散发感音神经性聋(SNHL)中的发生率.方法收集遗传性NSHL家系29个,行家系调查;对家系进行形式遗传学分析、分离分析;采取外周血,从白细胞中抽取DNA;以多重聚合酶链反应(PCR)法检测mtDNA(nt)1 555G、7 445G、3 243G点突变;行mtDNA12SrRNA,tRNALeu(UUR)及tRNASer(UCN)基因序列测定.结果多重PCR检测示mtDNA突变家系12个;形式遗传学分析确定为显性遗传不规则外显的家系,mtDNA突变率高;分离分析结合mtDNA突变检测示母系遗传不具有常染色体遗传基因分离比.经测序证实,12个家系具有mtDNA突变;形式为1 555G突变家系10个,7 445G突变家系2个,未发现3 243G突变家系.结论母系遗传与常染色体显性及隐性遗传基因传递分离比有差异;mtDNA突变在NSHL中占较高比例,主要形式是1 555G及7 445G突变.在散发病例中发生率很低;7 445G结合1 555G点突变筛查对SNHL的诊断有重要意义.多重PCR法是mtDNA多基因突变位点简便的检测方法.     

遗传性耳聋资源收集保存及基因定位克隆

目的建立聋病遗传资源收集网络,着重收集具有中国特色的聋病遗传资源,进行聋病基因定位克隆及相关的分子流行病学研究。方法通过遗传资源收集网络进行聋病遗传资源的收集,建立资源库进行遗传资源的表型鉴定和分析。应用微卫星标记的连锁分析及候选基因法进行家系的基因定位克隆和分子流行病学研究。结果共收集到含有多种耳聋表型的大小家系2071个,其中涵盖了单基因病孟德尔遗传的全部遗传方式:包括X-连锁遗传家系2个,Y-连锁遗传家系1个(命名为DFNY1基因座)、常染色体显性遗传性耳聋大家系12个(完成了基因定位5个)、常染色体隐性遗传性耳聋核心家系619个以及线粒体突变母系遗传性耳聋家系76个;大前庭水管综合征163例;听神经病108例;不明原因感音神经性耳聋478例;西北地区聋哑学校聋哑患者612例。对1489例散发患者进行了线粒体基因12S rRNA 1555G,缝隙连接蛋白基因(GJB2,GJB3和GJB6)以及SLC26A4基因的突变筛查与分析。其中西北地区612例聋哑人群中发现27．92％患者分别存在三个基因的突变,mtDNAA1555G平均阳性率为9．15％,GJB2为9．97％,SLC26A4为8．8％。结论遗传性听力损失是非常常见的耳聋疾病,其发病率超出原有的预测。基于大家系的基因定位研究有望发现新的基因座位及新的基因突变。分子流行病学研究发现遗传因素在先天性聋和学语后听力损失中的作用强于环境因素,并发现中国人群具有耳聋基因的高发病率和特异的突变图谱。