miR-202通过降低肝癌细胞ROCK1表达抑制其迁移和侵袭

目的：研究微小RNA-202（miR-202）对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：通过实时定量PCR检测Hep3B、Huh7及HCCLM3人肝癌细胞和LO2人正常肝细胞中miR-202的表达水平。以miR-202表达水平最低的HCCLM3细胞为转染对象,转染miR-202模拟物或空白对照miRNA,以miR-202表达水平最高的Hep3B细胞为转染对象,转染miR-202抑制物或阴性对照miRNA,并利用实时定量PCR验证转染效率。采用Transwell迁移和侵袭实验检测过表达和敲低miR-202对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学网站检索并应用荧光素酶报告基因实验验证miR-202的靶基因。实时定量PCR和Western blot检测miR-202靶基因的表达水平。结果：与正常肝细胞LO2相比,miR-202在肝癌细胞的表达水平显著降低;HCCLM3细胞转染miR-202模拟物后,细胞miR-202的表达水平显著增加;过表达miR-202后,HCCLM3细胞的迁移和侵袭能力显著降低;Hep3B细胞转染miR-202抑制物后,细胞miR-202的表达水平显著降低;敲低miR-202后,Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著增强;生物信息学检索及荧光素酶报告基因证明ROCK1基因为miR-202的靶基因。过表达miR-202可明显降低肝癌细胞中ROCK1基因的表达,而敲低miR-202可明显增加肝癌细胞中ROCK1基因的表达。结论：miR-202在肝癌细胞中低表达,miR-202通过抑制ROCK1的表达抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。     

miR-185对肝癌细胞生长增殖及侵袭迁移的影响

目的 探讨miR-185对人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721生长增殖、侵袭迁移能力的影响.方法 构建miR-185过表达载体、合成miR-185反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO),经脂质体转染肝癌细胞HepG2和SMMC-7721.利用CCK-8和Transwell小室实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力;生物信息学数据库预测结合基因芯片结果确定miR-185的候选靶基因NRl D1;利用实时荧光定量PCR技术和Western blot检测miR-185对细胞中NRlD1基因表达水平的影响;荧光报告载体实验验证miR-185对靶基因的调控作用.结果 miR-185在人肝癌细胞中的mRNA表达水平显著低于正常肝细胞(P＜0.01);过表达miR-185使人肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低,下调肝癌细胞中NRl D1基因的mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.01);荧光报告载体实验证明miR-185可以通过作用于NRlDl mRNA的3’端非翻译区(untranslated region,UTR)下调其表达水平(P＜0.05).结论 miR-185能抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,NRlD1是miR-185的直接靶基因.     

microRNA-10b及靶基因HOXD10在肝癌细胞中的表达及侵袭能力的影响

目的  探讨microRNA-10b（miR-10b）及其靶基因同源异性盒基因HOXD10在肝癌细胞中的表达及转染miR-10b对肝癌细胞侵袭性能力的影响。方法  分析HOXD10基因在3种肝癌细胞株Huh7、HepG2、SMMC-7721中的基础表达量,筛选出HOXD10基础表达量高的HepG2作为后续研究对象。设计合成外源性miR-10b序列,用脂质体瞬时转染肝癌细胞株,设置miR-10b转染组、无关序列转染组（阴性对照组）和未处理组（对照组）。用RT-PCR及Western blot检测肝癌细胞转染miR-10b后HOXD10基因及蛋白表达量的变化,细胞侵袭实验研究转染miR-10b对肝癌细胞侵袭能力。结果  在基因水平和Western blot分析蛋白水平HOXD10基因表达量2-ΔΔCT分别是（1.24±0.23）、（1.00±0.02）,P >0.05差异无统计学意义。在蛋白分析HepG2细胞灰度计算值是值分别是653.492和1 968.742,蛋白水平表达降低。HOXD10基因在肝癌细胞株HepG2的表达量显著高于Huh7和SMMC-7721;miR-10b成功转染HepG2后,HOXD10基因表达水平与对照组比较无明显变化,但HOXD10蛋白表达量与对照组比较下降及侵袭性也增强。结论  miR-10b可能通过抑制靶基因HOXD10表达发挥作用,促进肝癌细胞的侵袭。

     

miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响

目的：研究 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移能力的影响及其可能机制。方法将 miR-98mimics、mimics-NC、miR-98inhibitor、inhibitor-NC 瞬时转入肝癌 HepG2细胞内,应用噻唑盐( MTT)法、流式细胞仪、Tr-answell 小室实验检测 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响,进一步用 Western blot 法检测各组 Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT 实验表明 miR-98过表达后,肝癌细胞的增殖能力明显低于对照组;Annexin V-FITC / PI 凋亡实验证实上调 miR-98表达后,细胞的凋亡率较对照组升高;Transwell 小室实验表明上调 miR-98可使肝癌细胞的侵袭、迁移能力减弱。而当 miR-98被抑制后,肝癌HepG2细胞的增殖及侵袭、迁移能力则明显增强,凋亡率则下降。 Western blot 实验检测发现 miR-98过表达后,Bcl-2的表达降低。结论 miR-98可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌基因的作用;miR-98可能通过下调 Bcl-2的表达,促进肝癌 HepG2细胞凋亡。     

miR-30c减轻肝细胞肝癌的侵袭与转移

目的:观察miR-30c/snail在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达并探讨其在肝癌侵袭中的作用?方法:定量PCR检测肝癌及肝癌细胞系中miR-30c/snail的mRNA表达水平,通过免疫组织化学和Western blot分别检测肝癌及肝癌细胞系中snail的蛋白表达水平,并在肝癌细胞株中转染miR-30c模拟物或抑制物,分析其对肝癌细胞侵袭的作用?结果:与无脉管转移组相比,miR-30c在有脉管转移组的HCC组织中表达明显下调,同时在高转移肝癌细胞株MHCC-97H中也有相似的结果?转染miR-30c模拟物可减少snail的表达,并减少MHCC-97H细胞的侵袭性,然而,转染miR-30c抑制剂则增加snail的蛋白水平,增加HepG2细胞的侵袭力?结论:上调miR-30c的表达通过直接抑制snail,可减弱HCC的侵袭性?一种新的针对miR-30c的治疗策略可能有利于伴侵袭转移的HCC患者?     

miR-194通过调控相关靶向蛋白影响肝癌细胞的增殖和侵袭行为

目的:探讨miR-194通过调控相关靶向蛋白影响肝癌细胞的增殖和侵袭行为及其机制。方法:qPCR检测miR-194在肝癌组织和不同肝癌细胞株中的表达情况;Western blotting检测miR-194对钙粘蛋白表达水平的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测miR-194的表达对肝癌细胞的迁移和侵袭能力的影响;抑制miR-194的表达可以干扰肝癌细胞的生长发展进程。结果:与癌旁正常组织相比,miR-194在肝癌组织中的表达上调,miR-194在HepG2细胞株中表达水平相对较高;miR-194可直接调控相关钙粘蛋白的表达情况,抑制miR-194的表达后可以一定程度上抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力。结论:miR-194可以调控靶向蛋白的表达,影响肝癌细胞的迁移和侵袭行为。     

RNA干扰FUT6对人肝癌细胞HepG2侵袭迁移的影响

目的 初步探讨α1,3岩藻糖基转移酶-Ⅵ(FUT6)基因在肝癌细胞侵袭和转移中的作用,为肝癌FUT6基因治疗的可行性提供初步依据.方法 靶向FUT6的siRNA转染肝癌细胞株HepG2后,分为3组:空白对照组、阴性对照组和实验组,分别予等体积无RNase水、scrambled-siRNA和iRNA-FUT6,通过Western blot检测FUT6蛋白的表达,Transwell小室方法进行细胞迁移和侵袭实验检测肝癌细胞株HepG2转移和侵袭能力的变化.结果 空白对照组、阴性对照组及实验组FUT6蛋白的表达分别为1.24±0.07、1.09±0.04和0.30±0.06,实验组FUT6蛋白比空白对照组降低75.8％,差异有统计学意义(P＜0.05),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).与空白对照组比较,实验组HepG2细胞迁移能力降低了73.3％,侵袭能力降低了73.7％.结论 通过siRNA靶向沉默HepG2细胞的FUT6蛋白表达能削弱HepG2细胞在体外的迁移和侵袭能力.     

microRNA-133a在复发性肝细胞癌中差异表达及其生物学功能研究

目的 探讨miR-133a在不同复发时间间隔复发性肝癌中的表达差异,并研究其对肝癌细胞侵袭、迁移、增殖等生物学功能的影响。方法 通过miRNA芯片筛选复发性肝细胞癌病例差异表达的miRNA;将miR-133a mimic及inhibitor转染入人肝癌细胞株SMMC-7721,通过CCK8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;利用生物信息学方法预测miR-133a的可能靶基因。结果 芯片结果发现miR-133a在早期复发肝癌样本中表达明显升高;转染miR-133a的mimic或inhibitor入肝癌细胞SMMC-7721后,细胞增殖能力无显著差异(P>0.05);转染mimic后,细胞的侵袭及迁移能力明显增强(P<0.05),而转染inhibitor后,细胞的侵袭及迁移能力明显减弱(P<0.05)。结论 miR-133a的表达在不同复发间隔的肝细胞癌组间有显著差异,在短期复发肿瘤组织内明显升高;miR-133a可以促进肿瘤细胞的侵袭和迁移,而对增殖无明显作用,提示miR-133a水平升高可能通过促进肿瘤细胞侵袭从而增加肝细胞癌肝内转移复发风险。     

Tip30基因表达对肝癌细胞侵袭转移能力的影响

目的：分析Tip30表达对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。方法：聚乳酸-羟乙酸(polylactic-co-glycolic acid, PLGA)纳米粒介导腺相关病毒质粒pAAV-Tip30真核表达质粒转染HepG2细胞。RT-PCR检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2,MMP-9和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA水平;Western印迹 检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平;Transwell法检测肝癌细胞迁移能力;四氮唑盐(MTS)法和细胞集落形成实验检测细 胞增殖能力;细胞-细胞黏附试验、细胞-基质黏附实验检测Tip30表达对肝癌细胞黏附能力的影响。结果：过表达Tip30 基因的HepG2肝癌细胞明显降低了MMP-2,MMP-9的mRNA表达和蛋白的翻译;肝癌细胞的增殖、锚定非依赖性生长及 肝癌细胞迁移能力均明显受到抑制。结论：体外实验研究证明Tip30基因可抑制肝癌细胞侵袭转移的能力。     

miR-373在人肝细胞癌中的表达及其作用

目的探讨miR-373在肝细胞癌的表达及其作用。方法 qRT-PCR法检测80例肝癌及癌旁灶中miR-373的表达;qRT-PCR法检测人肝细胞癌细胞株BEL7402、HepG2、Hep3b、Huh7、SMMC7721中miR-373的表达情况,选择高表达miR-373的细胞株为后续研究对象;干扰miR-373表达后,Transwell检测细胞株体外迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞内MMP2、MMP9蛋白的表达变化。结果人肝细胞癌细胞株BEL7402、HepG2、Hep3b、Huh7、SMMC7721中,HepG2细胞中miR-373的表达最高。用miR-373 inhibitor转染HepG2细胞后,细胞内miR-373表达水平明显下调(P<0.05)。转染miR-373 inhibitor后,细胞迁移和侵袭细胞数目均少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-373inhibitor后,HepG2细胞内MMP2、MMP9表达下调,(P<0.05)。结论 miR-373上调MMP2、MMP9表达促进了肝细胞癌的转移,miR-373可能为... 更多     

miRNA-34a靶向Bcl-2对肝癌细胞HepG2的生长和迁移能力的影响

通过过表达miRNA-34a检测Bcl-2的表达及对肝癌细胞的生长和迁移能力的影响，为肝癌的治疗提供新靶点。方法 通过生物信息学方法预测miRNA-34a的潜在作用靶点；采用双荧光素酶报告实验检测miRNA-34a与Bcl-2的靶向调控关系；体外培养肝癌细胞，将肝癌细胞分为对照组（转染miRNA-34a阴性对照物mimic NC）及miRNA-34a转染组（转染miRNA-34a模拟物）。分别转染miR-34a模拟物和阴性对照，转染36 h后，CCK8检测细胞增殖，Trans-well检测细胞迁移能力，q-PCR和Western blot方法检测miRNA-34a对肝癌细胞中Bcl-2表达量的影响。结果 miRNA-34a对肝癌HepG2细胞的活力和迁移能力具有抑制作用（P＜0.01）；miRNA-34a可以直接靶向下调Bcl-2（P＜0.01）的表达。结论 miRNA-34a可靶向并负向调控Bcl-2,降低肝癌细胞HepG2的活力和迁移能力。     

毒蕈碱型胆碱能受体M3调控肝癌细胞侵袭转移的研究

目的 探讨毒蕈碱型胆碱能受体M3 (muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及其分子机制.方法 Western blot检测两种人肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721中ChRM3受体的表达;采用氯贝胆碱(Beth)及达菲那新(UK88525)处理肝癌HepG2和SMMC-7721细胞,分为空白对照组、Beth组、Beth+UK88525组、UK88525组,经处理48 h后,Transwell 实验检测两种肝癌细胞经不同分组处理后侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测各组细胞中上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白的表达及下游信号通路PI3K/Akt的变化;采用shRNA干扰质粒经Lipofectamine 2000TM转染肝癌细胞HepG2以沉默ChRM3,分为空白对照组、Beth组、Beth+shChRM3组、shChRM3组,分别检测细胞的侵袭、转移能力及EMT、下游PI3 K/Akt的改变.结果 HepG2和SMMC-7721两种肝癌细胞中均有ChRM3受体的表达;Transwell实验显示:Beth单独处理组对肝癌细胞的迁移和侵袭有明显的促进作用,而UK88525能够抑制Beth对肝癌细胞迁移侵袭能力的促进作用(P＜0.05);Western blot结果显示:Beth单独处理组能够上调EMT标志蛋白N-Cadherin和Vimentin,下调E-Cadherin的表达,UK88525处理后能够明显抑制Beth促进HepG2细胞EMT的过程(解除Beth对HepG2细胞EMT的促进过程),同时也能够抑制PI3K/Akt的活化(P＜0.05);干扰质粒沉默ChRM3受体同样能够抑制Beth促肝癌细胞迁移、侵袭的作用,并且抑制Beth诱导的EMT和下游PI3K/Akt的活化(P＜0.05).结论 ChRM3活化能够通过PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞的侵袭和转移.     

白藜芦醇通过上调miR-186-5p表达抑制肝癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的：探讨白藜芦醇抑制肝癌细胞转移的分子机制。方法：利用CCK-8法检测白藜芦醇对肝癌细胞HepG2和Huh7存活率的影响,筛选后续实验适合的浓度;实时定量RT-PCR检测肝癌组织和肝癌细胞中miR-186-5p的表达;细胞划痕实验、Transwell小室实验和蛋白质印迹法分别检测白藜芦醇或miR-186-5p表达变化对肝癌细胞HepG2和Huh7迁移、侵袭和上皮-间质转化相关蛋白表达的影响。结果：6.25?μmol/L白藜芦醇对肝癌细胞HepG2和Huh7的存活率无显著影响,遂后续实验中白藜芦醇的浓度选择6.25?μmol/L。实验结果显示, 白藜芦醇可以抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,并增加上皮钙黏素表达,降低波形蛋白和Twist1表达（均P<0.05）。与癌旁组织和正常肝细胞相比,肝癌组织和肝癌细胞中miR-186-5p表达均下调（均P<0.05）。白藜芦醇能诱导肝癌细胞中miR-186-5p的表达（均P<0.01）。上调miR-186-5p表达可显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化（均P<0.05）,而敲低miR-186-5p表达能阻断白藜芦醇对肝癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的抑制作用。结论：白藜芦醇能体外抑制肝癌转移,其机制可能与上调miR-186-5p表达有关。     

下调PMEPA1表达对肝癌细胞HepG2增殖与转移的影响

目的 观察沉默前列腺跨膜雄激素诱导蛋白1(PME-PA1)对肝癌细胞HepG2增殖和迁移的影响.方法 应用qRT-PCR、免疫组化染色和Western blot方法检测PMEPA1在肝癌细胞HepG2中mRNA和蛋白表达情况.分析PME-PA1在肝细胞性肝癌(HCC)组织中的表达及其与临床病理特征的关系.使用siRNA干扰肝癌细胞HepG2中PMEPA1的表达,并应用MTT法,Transwell法检测肝癌细胞HepG2的增殖及迁移能力.结果 PMEPA1蛋白在HCC组织中表达高于正常肝组织.肝癌组织内PMEPA1蛋白表达与HCC患者肿瘤大小(P=0.0366)和淋巴结转移(P=0.0358)密切相关.与HCC患者性别、年龄、AFP水平高低、脉管浸润、组织学分级及TNM分期等均无相关性.PMEPA1-siRNA肝癌细胞HepG2 PMEPA1蛋白及mRNA表达均下调(P<0.01).siPMEPA1转染细胞增殖能力及迁移能力均降低(P<0.01).结论 PMEPA1表达可能促进HCC的增殖和迁移.     

RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞侵袭和转移的影响

目的：探讨RNA干扰技术对人肝癌HepG2细胞mTOR的表达及细胞侵袭与转移的影响。方法：体外合成mTOR siRNA,并转染HepG2细胞24 h,同时设无义对照组（转染无义对照siRNA）、空白对照组（转染空脂质体）及正常对照组（不转染）。采用western blot法检测各组HepG2细胞的mTOR蛋白表达;应用Transwell小室细胞体外实验检测转染后肝癌HepG2细胞的穿膜细胞数,评价肝癌细胞体外侵袭和转移能力的变化。结果：mTOR siRNA转染组HepG2细胞mTOR蛋白的表达低于各对照组（P〈0.05）;HepG2细胞侵袭和转移力均显著低于各对照组（P〈0.05）。结论：mTOR siRNA可有效抑制HepG2细胞mTOR蛋白的表达,且能抑制HepG2细胞的侵袭和迁移。     

miR-99a对乳腺癌细胞侵袭和迁移的负向调控机制研究

目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物（miR-99amimics）、miR-99a抑制物（miR-99ainhibitors）以及相应对照miRNA转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,通过Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-99a的靶基因,并对靶基因进行验证。结果（1）高转移潜能的MDA-MB-231细胞中miR-99a表达明显低于低转移潜能的MCF-7细胞,划痕实验中转染miR-99amimics的与转染controlmimics的MDA-MB-231细胞比较迁移能力显著减弱（P＜0.05）,而MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力明显增强（P＜0.01）。（2）Transwell的侵袭及迁移实验显示,转染miR-99amimics后MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力明显减弱（P＜0.01）;MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力增强（P＜0.01）,而侵袭能力基本不变（P＞0.05）。（3）生物信息学方法预测微管相关蛋白（MTMR3）是miR-99a的靶点,实时定量PCR和3′UTR荧光素酶报告基因实验验证了该靶点。（4）干扰了MTMR3后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论（1）miR-99a对乳腺癌细胞的侵袭及迁移发挥负向调控作用。（2）miR-99a可能通过靶向于MTMR3发挥其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用。     

Amotl2促进肝细胞肝癌血管生成拟态及EMT形成

目的:研究Amotl2对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响及其在诱导肝癌上皮间充质转化（EMT）及血管生成中的作用。方法:将Amotl2过表达质粒和干扰质粒分别转染至肝癌细胞系HepG2和Bel7402中,Western blot检测转染前、后HepG2和Bel7402中Amotl2、EMT相关蛋白（E-cadherin、Vimentin）表达变化情况;划痕、侵袭实验检测Amotl2对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响;三维培养检测Amotl2对HCC细胞形成血管样结构的影响。结果:促进Amotl2表达后HepG2表现出EMT样改变,E-cadherin表达下降、Vimentin表达上升、细胞迁移侵袭和三维成管的能力增强。抑制Amotl2表达后Bel7402由间质样表型转变为上皮样表型,E-cadherin表达上升、Vimentin表达下降、细胞迁移侵袭和三维成管的能力减弱。结论:Amotl2可能通过诱导EMT促进原发性肝癌的迁移侵袭能力和血管生成拟态的形成。     

姜黄素对肝癌细胞miR-29及VEGF表达的干预作用

目的观察姜黄素对肝癌细胞miRNA-29(miR-29)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的干预作用。方法收集2008年12月1日—2018年12月1日杭州市肿瘤医院临床资料较完整的手术切除肝癌标本41份,含癌组织和癌旁非癌组织,采用免疫组化研究VEGF表达情况以及与肝癌分型的相关性;转染VEGF siRNA后,MTT检测其对细胞增殖的调控作用,Western blot检测其对凋亡蛋白Bcl2、Bax表达的影响;PCR检测肝癌细胞miR-29表达,转染miR-20mimics后,qRT-PCT和Western blot检测对VEGF表达的影响;MTT检测姜黄素对Hep G2细胞抑制效应的IC50,qRT-PCT和Western blot检测姜黄素对mi R-29-VEGF调控作用。结果肝癌组织VEGF表达阳性率70.73%(29/41)显著高于癌旁肝组织30.00%(3/10)和正常肝组织(0.00%)(P均0.01);肝癌组织VEGF表达水平与肿瘤的病理分级、侵袭转移性有关,病理分级Ⅲ～Ⅳ级明显高于Ⅰ～Ⅱ级(P0.05),高侵袭转移(15/24)明显高于低侵袭转移(7/17)(P0.05);qRT-PCR结果显示,与转染前比较,转染VEGF si RNA 48h后,细胞增殖下降[(2.31±0.39)%比(4.21±0.52)%,P0.05];与阴性对照组比较,抑制VEGF表达后,HepG2细胞迁移能力明显降低;与正常人肝细胞比较,HepG2细胞miR-29表达量显著降低[(2.11±0.92)比(7.32±2.11),P0.05];转染miR-29 mimics促进miR-29表达后,VEGF mRNA表达水平下降[(3.01±1.00)比(11.33±2.02),P0.05];姜黄素对Hep G2细胞抑制率在72h最好(IC50=49.50μmol/L);肝癌HepG2细胞与姜黄素59.68μmol/L共同培养72h后,miR-29表达显著升高[(9.04±2.19)比(2.18±1.00),P0.05],VEGF mRNA表达降低[(2.98±1.00)比(8.32±1.80),P0.05]。结论姜黄素可能通过促进肝癌细胞miR-29表达,抑制VEGF表达,调控肝癌细胞生物学过程。     

沉默GRP94基因对肝癌细胞的影响

目的:探讨GRP94基因对肝癌细胞的影响。方法:用脂质体法转染GRP94 siRNA序列及阴性对照序列,采用实时荧光定量PCR及Western blotting方法检测转染后GRP94的mRNA和蛋白表达水平。以CCK-8和流式细胞仪来检测细胞增殖和细胞凋亡的情况。以划痕实验和Transwell方法检测转染后细胞的迁移和侵袭能力。结果:在肝癌细胞HepG2中瞬时转染siRNA-GRP94序列及阴性对照序列后,其mRNA和蛋白表达显著减低;转染48 h后,细胞增殖能力明显下降,而细胞凋亡率明显上升。划痕实验检测发现24 h细胞愈合率明显抑制,Transwell实验发现迁移和侵袭至下室的细胞数目显著减少。结论:GRP94基因对肝癌细胞HepG2凋亡有抑制作用,促进增殖、迁移和侵袭能力,为进一步研究GRP94在肝细胞肝癌发生和进展中的作用奠定了基础。     

miR-128抑制结肠癌侵袭转移的机制研究

目的分析miR-128在结肠癌细胞中的表达情况,研究其对结肠癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法对转染miR-128模拟物后的结肠癌SW48细胞进行培养,采用MTT法行细胞增殖实验检测细胞增殖能力,细胞划痕法检测细胞迁移能力,Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;并采用RT-RCR检测miR-128mRNA的表达,Westernblot法检测miR-128蛋白的表达。结果转染miR-128模拟物后的结肠癌SW48细胞较转染空白对照模拟物后的,细胞增殖、侵袭及迁移能力均下降（均P＜0.05）,且转录因子Sp1基因在mRNA及蛋白水平均下降（均P＜0.05）。结论miR-128可抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移,可能通过调控Sp1基因发挥上述作用。