抑制RhoC基因对卵巢癌细胞紫杉醇敏感性的影响

目的 探讨RNA干扰技术沉默Ras homolgyC(RhoC)基因对卵巢癌细胞SKOV3细胞对紫杉醇敏感性的影响.方法 体外设计合成针对RhoC基因的微小干扰RNA(miRNA),转染卵巢癌细胞SKOV3,应用RT-PCR和Western印迹方法检测转染前后基因mRNA和蛋白的变化,应用MTT方法检测干扰后SKOV3细胞对紫杉醇敏感性的变化,同时应用RT-PCR法检测转染前后SKOV3细胞中的凋亡基因Caspase-3、Survivin mRNA的表达水平.结果 转染针对RhoC基因的miRNA后24、48、72 h,SKOV3细胞mRNA和蛋白水平显著下降;关闭RhoC基因后,SKOV3细胞对紫杉醇的敏感性显著提高.与单独使用紫杉醇相比,在RhoC-miRNA联合紫杉醇组中促进凋亡的基因Caspase-3明显增高,而抗凋亡蛋白Suvlvin mRNA水平显著降低.结论 RNA干扰RhoC基因能增加卵巢癌SKOV3细胞对紫杉醇的敏感性,其协同机制可能与Caspase-3基因的上调,Suvivin基因的下调有关.     

干扰ATF5功能对卵巢癌细胞紫杉醇敏感性影响

目的探讨干扰转录激活因子5(ATF5)功能对卵巢癌细胞SKOV3紫杉醇(PTX)敏感性的影响。方法应用RT-PCR、Western blot方法检测SKOV3细胞中ATF5的表达;WST-8法检测不同浓度PTX(0、10、20、40、80、100nmol/L)与SKOV3细胞作用不同时间(24、48、72h)后细胞增殖情况;将SKOV3细胞分为空质粒组(vector组)、干扰质粒组(dnATF5组)、药物组(PTX组)、联合治疗组(dnATF5+PTX组),对vector组、dnATF5组、dnATF5+PTX组进行质粒转染,转染后24hPTX组和dnATF5+PTX组给予PTX(70nmol/L)作用48h,WST-8法和流式细胞术检测各组细胞的增殖抑制率或细胞凋亡率;Western blot检测干扰质粒转染SKOV3不同时间(0、24、48h)后Bcl-2蛋白的表达。以急性视网膜色素上皮-19(ARPE-19)二倍体细胞作为正常对照。结果卵巢癌SKOV3细胞中高表达ATF5;PTX对SKOV3细胞生长具有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖性(F=497.68～11 286.93,P<0.05);干扰ATF5功能后明显促进PTX诱导的SKOV3细胞增殖抑制或细胞凋亡(t=11.40、13.86,P<0.05);与ARPE-19细胞相比,干扰ATF5功能联合PTX作用对SKOV3细胞增殖和凋亡的影响更明显(t=11.50、13.86,P<0.05);干扰ATF5功能后SKOV3细胞Bcl-2蛋白的表达明显下调(F=158.38,P<0.05)。结论 ATF5在卵巢癌SKOV3细胞中高表达,干扰ATF5能明显增强卵巢癌SKOV3细胞对PTX的敏感性,其机制可能与Bcl-2的下调有关;干扰ATF5功能联合PTX作用对肿瘤细胞的疗效强于二倍体细胞。     

姜黄素逆转卵巢癌对紫杉醇耐药的实验研究

目的:通过观察姜黄素作用人卵巢癌A2780/Taxol细胞株后,逆转该细胞株对紫杉醇的耐药作用,研究卵巢癌细胞对紫杉醇耐药的原因及姜黄素逆转耐药机制。方法:人卵巢癌A2780/Taxol细胞株在体外培养,将细胞分为对照组（A组）和实验组（不同浓度姜黄素组作用细胞）。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测2组细胞与相同浓度紫杉醇联用后细胞的生长抑制情况;Westernblot方法检测2组细胞内P-糖蛋白（P-gp）和蛋白激酶C-α（PKC-α）的表达情况。结果:四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法得出联合用姜黄素各组细胞生长抑制率均高于A组（P<0.05～P<0.01）;Western blot检测联合用姜黄素各组多药耐药蛋白-1/P-gp和PKC-α表达均较A组显著降低（P<0.01）。结论:姜黄素通过阻碍卵巢细胞中多药耐药蛋白-1/P-gp和PKC-α的表达,增加紫杉醇对细胞的毒性,降低细胞的耐药性。     

人Bub1基因shRNA真核表达质粒的构建及其对人卵巢癌细胞SKOV3紫杉醇敏感性的影响

目的 构建人Bub1 shRNA真核表达质粒,鉴定该质粒对人卵巢癌SKOV3细胞中Bub1基因的抑制作用,并探讨其对SKOV3细胞紫杉醇敏感性的影响.方法 构建pEGFP-Bub1-shRNA质粒,将其经脂质体Lipo 2000TM转染SKOV3细胞后,通过RT-PCR及Western blot检测干扰效率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT法比较转染前后SKOV3细胞的紫杉醇敏感性.结果 成功构建了pEGFP-Bub1-shRNA质粒;RT-PCR 和Western blot检测结果提示,转染后Bub1的mRNA和蛋白表达均显著降低;MTT和FACS提示,与对照组细胞相比,转染后SKOV3细胞生长抑制率及凋亡率明显降低(P<0.05).结论 pEGFP-Bub1-shRNA质粒能有效抑制Bub1 mRNA及蛋白的表达,并降低SKOV3细胞紫杉醇敏感性,该质粒的成功构建为进一步研究Bub1基因的生物学功能提供了工具.     

miR-107对卵巢癌细胞免疫逃逸的调控和紫杉醇耐药性的影响

探讨微小RNA-107（miR-107）通过丝裂原活化蛋白3激酶7（MAP3K7）调控卵巢癌细胞免疫逃逸对紫杉醇（TAX）耐药性的影响,并阐明其作用机制。     

耐紫杉醇卵巢癌细胞株中凋亡途径相关基因的差异表达

目的：探讨耐紫杉醇卵巢癌细胞株SKOV3/TAXOL中凋亡途径相关基因的表达差异。方法：运用real-ti me-RT-PCR技术,检测耐紫杉醇卵巢癌细胞株SKOV3/TAXOL和敏感细胞株SKOV3中凋亡途径相关基因TRADD、DFFA、MADD和TGM2的表达量,并对结果进行对比分析。结果：4个基因在SKOV3/TAXOL中的表达量均高于SKOV3,其中TRADD、DF-FA、MADD、TGM2分别高2.25、3 333、3.5×10^5和2 865倍。结论：凋亡相关基因TRADD、DFFA、MADD和TGM2在SK-OV3/TAXOL细胞株中表达都升高,说明卵巢癌细胞对紫杉醇耐药可能在一定程度上与细胞凋亡功能异常相关。     

紫杉醇耐药的卵巢癌细胞中PKC-α与P-gp的表达

目的:探讨PKC-α与P-gp在紫杉醇诱导的卵巢癌耐药细胞系A2780/Taxol中的表达.方法:免疫细胞化学SP法及免疫荧光双标检测PKC-α与P-gp在耐药细胞A2780/Taxol及其亲本细胞中的表达; Western Blot检测并半定量分析PKC激动剂佛波脂(PMA)和抑制剂十字孢碱(SP)作用后P-gp在两种细胞上的表达水平.结果:免疫细胞化学结果表明在A2780/Taxol中,P-gp与PKC表达均呈阳性,而在亲本细胞中,P-gp不表达,PKC呈阳性表达. 在A2780/Taxol中PKC-α与P-gp有共表达. SP及PMA作用后,A2780/Taxol细胞P-gp表达无明显差别.结论:卵巢癌对紫杉醇耐药的产生与PKC-α和P-gp有关.     

姜黄素逆转卵巢癌细胞紫杉醇耐药的机制研究

目的:建立抗人紫杉醇的人卵巢癌细胞株(OVCAR3/T).研究姜黄素逆转对紫杉醇耐药的卵巢癌细胞株(OVCAR3/T)的作用,并探讨其相关的分子机制.方法:通过紫杉醇浓度梯度递增法诱导构建OVCAR3/T细胞株.MTT法检测OVCAR3/T对紫杉醇的IC50;比较耐药细胞和敏感细胞的细胞形态、自噬相关基因及蛋白质;MT...     

紫杉醇对人卵巢癌细胞凋亡的影响

目的 :探讨紫杉醇 (PTX)对人卵巢细胞凋亡的影响。方法 :应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪、活细胞视频观察和蛋白印迹免疫法进行检测和观察。结果 :癌细胞在PTX作用下 ,首先表现为G2 /M期阻滞 ,一定时间后出现细胞凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质凝聚或断裂。细胞DNA裂解片段呈现典型的“阶梯状”排列的条带。凋亡抑制基因Bcl- 2在细胞凋亡过程中呈低表达并发生修饰反应 ,而调亡诱发基因Bax先呈高表达后表达降低。结论 :PTX诱发人卵巢癌细胞的凋亡与细胞分裂阻滞密切相关 ,Bcl- 2和Bax在PTX引起人卵巢癌细胞凋亡中可能起着重要的调控作用。     

XIAP基因与耐紫杉醇卵巢癌细胞A2780/Taxol耐药关系的研究

目的 探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）基因与卵巢癌对紫杉醇耐药的相关性。方法 以5、10、20、40、80、160、320 ng/mL的紫杉醇处理卵巢癌紫杉醇敏感细胞A2780和耐药细胞A2780/T,噻唑蓝（MTT）比色法检测各组细胞的抑制率（IR）, 逆转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、蛋白质印记（Western blot）检测紫杉醇100 ng/mL处理A2780和A2780/T细胞后XIAP基因和蛋白的表达;将A2780/T细胞分为空转染组（转染空载体质粒）、小干扰RNA（siRNA）-XIAP（siRNA-XIAP）组（转染siRNA-XIAP质粒）、非特异性转染组（转染非特异性质粒）、空白对照组（不转染质粒）,RT-qPCR和Western blot检测各组细胞XIAP基因和蛋白的表达,并加入含不同质量浓度的紫杉醇（0、1 000、1 500、2 000、2 500 ng/mL）,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 不同质量浓度紫杉醇处理后,A2780细胞IR随紫杉醇质量浓度的增加而增高（P<0.05）,A2780/T细胞IR无明显变化。紫杉醇100 ng/mL处理A2780和A2780/T细胞后,A2780细胞XIAP mRNA的表达低于紫杉醇未处理组（P<0.05）,A2780/T细胞中XIAP mRNA的表达与紫杉醇未处理组差异无统计学意义(P>0.05),但A2780/T细胞XIAP mRNA和蛋白表达均高于A2780紫杉醇处理组（P均<0.05）;siRNA-XIAP组XIAP mRNA和蛋白的表达均低于其他各组（P<0.05）,在紫杉醇2 000 ng/mL及2 500 ng/mL作用下,siRNA-XIAP组凋亡率高于其他各组（P<0.05）。结论 卵巢癌对紫杉醇耐药与XIAP基因的高表达有关,特异性的siRNA可通过降低XIAP的表达,促进细胞凋亡,增加耐药癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

Survivin蛋白表达与卵巢恶性生殖细胞肿瘤临床病理特征的关系

目的 探讨Survivin蛋白表达与卵巢恶性生殖细胞肿瘤发生发展的关系.方法 采用免疫组化链菌素亲生物素蛋白-过氧化酶连接法(labelled streptavidin biotin method, LSAB)检测10例正常卵巢和29例卵巢恶性生殖细胞肿瘤组织石蜡标本中Survivin蛋白的表达状况.结果 正常卵巢组织中无Survivin蛋白的表达;Survivin蛋白表达定位在肿瘤细胞的胞浆和胞核中;卵巢恶性生殖细胞肿瘤中Survivin蛋白表达阳性率为58.6%,高于正常卵巢组织(P＜0.05),但Survivin蛋白表达与恶性生殖细胞肿瘤的病理类型、FIGO分期、淋巴结转移、血清AFP含量及腹水量间均无明显关联(P＞0.05).结论 Survivin蛋白表达水平增高可能与卵巢恶性生殖细胞的发生有关.     

Survivin蛋白在卵巢癌中的表达和意义

目的探讨Survivin蛋白表达与卵巢癌临床病理特征间的关系。方法采用链菌素亲生物素蛋白-过氧化酶连接法检测10例正常卵巢、21例卵巢交界性肿瘤和38例卵巢浆液性囊腺癌石蜡组织中Survivin蛋白的表达。结果正常卵巢组织中无Survivin蛋白的表达;Survivin蛋白表达定位在肿瘤细胞的胞浆和胞核中;卵巢交界性肿瘤中Survivin蛋白表达阳性率为42．9％,与病理类型及血肿瘤相关抗原（CA125）的测定值无明显相关关系（P〉0．05）;浆液性囊腺癌中Survivin蛋白表达阳性率为76．3％,明显高于交界性肿瘤和正常卵巢组织（P〈0．05）,且与临床分期、组织学分级及淋巴结转移有关（P〈0．05）,与血CA125测定值、腹水量以及腹水／腹腔冲洗液细胞学问无明显相关关系（P〉0．05）。结论Survivin蛋白表达水平增高可能与卵巢上皮癌的分化转移有关。     

Survivin基因真核表达载体的构建及鉴定

  目地 构建pcDNA3.1-Survivin基因的真核表达载体并鉴定。方法 提取大鼠肝细胞总RNA,RT-PCR 法扩增Survivin cDNA 片段, 双酶切构建pcDNA3.1-Survivin, 重组载体。结果 重组真核表达载体经PCR、酶切鉴定及测序证实正确。结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-Survivin。     

非小细胞肺癌中Survivin和Sp1的表达及意义

目的探讨Survivin和Sp1在非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC）组织中的表达与组织分化程度、淋巴结转移和临床分期的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测NSCLC患者120例手术标本和良性肺疾病患者40例手术标本中Survivin和Sp1的表达。结果NSCLC组织中Survivin和Sp1的阳性表达率分别为81．6％（98／120）和62．5％（75／120）;良性肺疾病组织中阳性表达率分别为无表达和7．5％（3／40）,Survivin和Sp1在组织分化程度差、有淋巴结转移和临床分期为三期的NSCLC中表达显著升高;且二者表达呈正相关（rs=0．355,P=0．005）。结论Survivin和Sp1在NSCLC组织中均有高表达,且与组织分化程度、淋巴结转移和临床分期密切相关。     

RNA干扰抑制Survivin表达对人喉癌细胞药物敏感性的影响

目的:探讨RNA干扰技术抑制Survivin基因表达对增强人喉癌HEP-2细胞化疗药物敏感性。方法:针对Survivin mRNA序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-Survivin重组表达载体,转染人喉癌HEP-2细胞;通过RT-PCR和Western blot分析其对HEP-2细胞内源性Survivin表达的影响;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察HEP-2细胞对化疗药物5-FU和优福定敏感性的改变。结果:成功构建pRNAT-Survivin重组质粒,并成功转染HEP-2细胞;RT-PCR和Western blot结果证实重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制Survivin基因表达(P<0.01);MTT及流式细胞仪结果证明在5-FU和优福定联合作用下,pRNAT-Survivin组HEP-2细胞的生长抑制率明显增高(P<0.01)。结论:pRNAT-Survivin可抑制Survivin在人喉癌HEP-2细胞中的表达,并增强HEP-2细胞对化疗药物敏感性。     

survivin启动子的真核表达载体构建

目的构建以survivin启动子驱动增强绿色荧光蛋白（EGFP）表达的真核表达载体pEGFP-C1/Surv。方法用PCR扩增survivin启动子,构建其真核表达载体并检测survivin启动子的活性。结果PCR成功扩增出survivin启动子,其真核表达载体构建成功。结论survivin启动子能驱动EGFP的表达,证明其具有活性。     

Survivin蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨Survivin蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达和临床意义。方法:S-P法检测86例食管鳞癌标本及其癌旁组织Survivin蛋白表达情况,研究其与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。结果:Survivin蛋白主要位于肿瘤细胞胞质,在食管鳞癌组织阳性表达率为75.5%(65/86),癌旁组织中不表达,其表达与淋巴结转移密切相关(P<0.05),与鳞癌分化程度无关(P>0.05)。结论:Survivin表达可能与食管鳞癌的发生、发展及淋巴结转移密切相关,其表达水平可以作为判断食管癌恶性潜能的重要生物学指标。     

白黎芦醇对人激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3 Survivin蛋白表达的影响

目的:探讨白藜芦醇(Res)对人激素非依赖性前列腺癌体外生长细胞PC-3的抑制作用及实现其抑制作用的可能途径。方法:按白藜芦醇浓度分为25,50,100和200 ttmoI/L 4个处理组和对照组(未加白藜芦醇),处理PC-3细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;MTT法检测细胞的增殖抑制情况;免疫组化sP法分析Sur-vivin蛋白的表达。结果:与对照组比较,白藜芦醇处理组可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;MTT法检测显示,白藜芦醇对PC-3细胞的增殖有抑制作用,并呈时间-剂量依赖性,其中24 h组细胞存活率分别为86.2%,77.15%,60.89%和35.76%,48 h组细胞存活率分别为65.24%,59.76%,46.47%和27.77%,白藜芦醇处理组随着浓度的增加和作用时间延长,对PC-3细胞的增殖抑制作用增强,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,Survivin蛋白在100 gmol/L白藜芦醇作用下较对照组表达明显减弱(P<0.01)。结论:白藜芦醇对体外生长的PC-3细胞有明显的抑制作用,下调Survivin蛋白表达而诱导前列腺癌细胞凋亡可能是其抑制肿瘤生长的机制之一。     

Survivin与NF-κBP65在眼睑基底细胞癌中的表达

目的 探讨眼睑基底细胞癌中Survivin与NF-κBP65的表达及相关性.方法 采用免疫组织化学SP法检测33例眼睑基底细胞癌及20例正常眼睑组织中Survivin与NF-κBP65的表达情况.结果 Survivin在正常眼睑组织细胞中呈阴性表达,在眼睑基底细胞癌中呈阳性表达,在眼睑正常组织细胞中与肿瘤组织细胞中的表达差异有显著性(P＜0.05).NF-κBP65在正常眼睑组织细胞中表达率15%,在眼睑基底细胞癌中表达率66.7%,差异有显著性(P＜0.05).Survivin与NF-κBP65的表达密切相关.结论 Survivin与NF-κBP65在基底细胞癌的发生中起重要作用,两者密切相关.     

生存素蛋白在非小细胞肺癌中的表达及与MVD的关系

目的 探讨生存素蛋白在不同临床病理特征的非小细胞肺癌(NSCIC)组织中的表达情况及与肿瘤微血管密度(MVD)间的关系.方法 采用链霉素抗生物素过氧化酶(S-P)法检测66例 NSCLC组织和20例肺良性肿瘤组织中生存素及CD34表达情况.结果 NSCLC组织中生存素阳性表达率54.5%,显著高于肺良性肿瘤组织中的阳性表达率30%(P＜0.05);在腺癌组织中阳性表达率63.6%,在鳞癌组织中阳性表达率为54.5%,差异无统计学意义(P＞0.05);在中-高分化、低分化鳞癌组织中阳性表达率分别为44.0%、87.5%,在中-高分化、低分化腺癌组织中阳性表达率分别为41.2%、87.5%,差异均有统计学意义(P＜0.05);在淋巴结转移组的肺癌组织中阳性表达率为74.1%,显著高于无淋巴结转移组中的阳性表达率48.7%(P＜0.05);生存素阳性组MVD值(45.55±9.05)显著高于生存素阴性组MVD值(38.21±8.71)(P＜0.05).结论 生存素表达与肺癌分化程度密切相关,与有无淋巴结转移密切相关,揭示了生存素可以作为判断病情和评价预后的指标,生存素表达与MVD呈正相关,推测其可能具有促进肿瘤血管生成的作用.