叶酸靶向超声造影剂的制备及体外寻靶实验研究

目的 制备偶联叶酸的靶向超声微泡造影剂,鉴定其基本性质,并探讨体外寻靶能力.方法 将DSPE-PEG(2000)Folate溶入微泡成膜材料中,制备叶酸靶向超声微泡造影剂.用DFY型超声图像定量分析诊断仪检测微泡粒径和浓度.通过光镜和激光共聚焦显微仪观察该靶向造影剂对SKOV3细胞的体外寻靶情况,以普通超声微泡作对照.结果 靶向超声微泡的大小、粒径及分布与普通超声微泡相似.体外寻靶试验显示,该靶向微泡可以较多并牢固地聚集到SKOV3细胞表面,而普通微泡对照组未见特异性结合.结论 成功制备出偶联叶酸的靶向超声微泡造影剂.该造影剂在体外对高表达叶酸受体的SKOV3细胞具有较强的特异性亲合力,有望成为靶向显像卵巢癌的理想造影剂.     

LHRHa靶向微泡造影剂的制备及体外寻靶实验

目的 制备人卵巢癌靶向超声造影剂,观察其体外寻靶能力。方法 采用生物素-链霉亲和素法制备促黄体生成素释放激素类似物(LHRHa)靶向脂质微泡,以免疫荧光染色验证LHRHa与脂质微泡的结合情况,并以普通脂质微泡作为对照,在倒置显微镜下观察LHRHa靶向脂质微泡对人卵巢癌A2780/DDP的体外寻靶能力。结果 LHRHa靶向脂质微泡免疫荧光阳性;体外寻靶实验显示LHRHa靶向脂质微泡能够与表面存在LHRH受体的A2780/DDP细胞特异性结合,而普通脂质微泡则不能结合。结论 利用生物素-链霉亲和素方法可成功制备LHRHa靶向脂质微泡造影剂,该靶向造影剂具有体外寻靶能力。     

靶向高分子造影剂的制备及其体外寻靶实验

目的制备一种特异性靶向肝癌细胞的高分子超声造影剂,并考察其体外寻靶能力。方法采用双乳化法制备高分子材料PLGA-COOH造影剂;并用碳二亚胺法将造影剂与抗体偶联制备出靶向高分子造影剂。检测该造影剂一般特性及体外寻靶能力,并与普通高分子造影剂做比较。结果高分子造影剂的平均粒径600.5 nm,体外寻靶试验显示,该靶向高分子造影剂较多并牢固的聚集到肝癌细胞表面;普通高分子造影剂对照组末见造影剂和细胞的结合。结论成功制备出特异性结合人肝癌抗体的靶向高分子超声造影剂。该造影剂在体外对肝癌细胞具有较强的特异性亲合力。     

靶向血栓高分子超声造影剂的制备及其体外寻靶实验

目的制备靶向血栓高分子超声造影剂,并对其理化性质及体外寻靶能力进行研究。方法以高分子材料端羧基聚乳酸/羟基乙酸(PLGA-COOH)为载体,采用双乳化法制备PLGA微球;并用碳二亚胺法将该微球与血栓靶向短肽片段精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(RGDS)共价结合制备靶向血栓高分子超声造影剂(RGDS-PL-GA);检测该造影剂的理化特性并通过体外寻靶实验,评价其对血栓的亲和性。结果采用本法成功制备了RGDS-PLGA,其形态规则,呈大小均匀的球形,平均粒径为(1.21±0.27)μm,RGDS携带率25.69%。体外实验显示RGDS-PLGA可以牢固结合到血栓表面。结论采用双乳化法及碳二亚胺法可以成功制备靶向血栓高分子超声造影剂,该造影剂粒径小,对血栓具有很强的靶向性及稳定性,有望在分子水平为血栓的诊断提供新方法。     

靶向纳米脂质超声造影剂制备及其体外寻靶能力实验研究

目的 制备一种靶向乳腺癌的纳米脂质超声造影剂,并观察其体外寻靶能力.方法 制备生物素化抗人乳腺癌细胞单克隆抗体Neu(F-11),并检测其生物素化程度和活性;通过生物素-亲和素系统制备靶向纳米脂质超声造影剂,用免疫荧光染色定性检测造影剂与抗体的连接情况,通过靶向造影剂与不同细胞的结合实验检测其寻靶能力.结果 每分子抗体可结合的生物素数目平均为7个,生物素化抗体的活性与游离单抗相比未见明显降低;免疫荧光染色显示靶向纳米脂质超声造影剂表面可见明亮的红色环状荧光,细胞结合实验显示其可与乳腺癌细胞特异性牢固结合.结论 生物素-亲和素系统可使造影剂与抗体牢固结合,所制得的靶向纳米脂质超声造影剂在体外具有较强的寻靶能力.     

靶向超声造影剂的制备及应用研究进展

随着超声造影剂的出现及不断发展，人们又着眼于将特异性配体连接到造影剂微泡表面，使它到达感兴趣的组织或器官，选择性地与相应受体结合，从而达到特异性增强靶区超声信号或局部靶向治疗的目的。现将这种结合有特异性配体的超声造影剂——靶向超声造影剂的制备及应用研究进展综述如下。     

携RGDS的靶向超声造影剂的制备及鉴定

目的制备血栓靶向脂膜超声造影剂,并对其理化特性及靶向作用进行鉴定.方法将脂膜超声造影剂通过酰胺键共价键键合的方式与血栓靶向短肽片段(RGDS)进行结合.制备产物通过流式细胞仪进行携带率和稳定性的检测;对内源性凝血途径产生的血栓进行寻靶特性研究.结果流式细胞仪显示携带RGDS的脂膜超声造影剂其波长发生了明显变化,携带率达到82%;激光共聚焦显微镜显示携带RGDS的脂膜超声造影剂对离体血栓具有很强的靶向性和稳定性.结论采用共价键键合的化学修饰方法成功制备了亲血栓靶向脂膜超声造影剂.     

靶向BST2微泡造影剂的制备及其与肿瘤细胞的体外结合能力

目的 制备骨髓基质抗原蛋白(BST2)靶向微泡造影剂,观察其与小鼠前列腺癌细胞(RM-1)和小鼠乳腺癌细胞(4T1)的体外结合能力,探讨BST2作为前列腺癌潜在靶点的可行性.方法 通过免疫荧光染色和蛋白质印迹法对BST2在两种细胞中的表达进行对比分析.采用生物素-亲和素桥连技术制备BST2靶向脂质微泡,普通光镜下观察BST2靶向微泡造影剂,并采用Accu Sizer 780A粒度仪进行表征,以非靶向微泡作为对照,比较其与RM-1和4T1两种肿瘤细胞系的结合特性及结合率.结果 BST2在RM-1细胞中的表达高于在4T1细胞中的表达;BST2靶向微泡与RM-1细胞的黏附率明显高于其与4T1细胞的黏附率,并远远高于非靶向微泡的黏附率.结论 BST2靶向微泡造影剂可与RM-1细胞特异性结合,有望作为前列腺癌的特异性超声分子探针用于前列腺癌的靶向分子成像.     

携Herceptin靶向高分子造影剂的制备及体外寻靶能力研究

目的 制备一种携Herceptin的靶向高分子造影剂,并研究其体外寻靶能力.方法 通过双乳化法制备出高分子PLGA-COOH造影剂,采用碳二亚胺法将高分子PLGA-COOH造影剂与Herceptin相连制备出靶向高分子造影剂,检测其一般性质,然后通过免疫荧光法检测其与抗体的连接情况,用光镜及激光共聚焦显微镜观察其与细胞的结合能力,并与普通高分子造影剂做比较.结果 靶向高分子造影剂的粒径范围为466.8～857.6 nm,平均粒径为(662.2±69.7)nm,有85.9%的微球粒径落于该范围内,通过免疫荧光法可在荧光显微镜下观察到许多绿色点状荧光,体外寻靶能力实验显示靶向高分子造影剂能与乳腺癌细胞较好的结合.结论 成功制备出的携Herceptin的靶向高分子造影剂在体外与人乳腺癌细胞有较好的结合能力.     

载ICAM-1抗体的靶向脂质纳米超声造影剂体外寻靶实验研究

目的 制备一种载细胞间黏附因子-1 (ICAM-1)单克隆抗体的脂质纳米超声造影剂,研究其体外寻靶能力.方法 采用机械振荡法制得普通脂质纳米超声造影剂和生物素化的脂质纳米超声造影剂,利用生物素-亲和素桥接法将ICAM-1抗体连接于脂质纳米超声造影剂上,制成靶向造影剂,检测两种造影剂的物理性质.将上述两种造影剂分别作用于普通HepG2细胞和经TNF-α处理的HepG2细胞,实时荧光定量PCR检测HepG2细胞上ICAM-1荧光表达强度,荧光显微镜观察造影剂与HepG2细胞靶向结合的情况.结果 普通造影剂粒径为(623.2±91.37) nm;靶向造影剂粒径为(760.6±145.0) nm.经TNF α刺激后HepG2细胞ICAM-1基因的表达量明显增高.普通造影剂组均未见造影剂与HepG2结合,而靶向造影剂组可见大量的造影剂聚集在经TNF-α刺激后的HepG2细胞周围.结论 本研究自制的载ICAM-1抗体的靶向脂质纳米超声造影剂,其粒径小,性质稳定,在体外能与高表达ICAM-1的HepG2细胞特异结合,可望成为一种良好的肝癌靶向造影剂.     

制备RGDS/rt-PA双负载靶向微泡并初步评价其靶向性溶栓效果

目的 制备RGDS/rt-PA双负载靶向微泡,分析其对富血小板血栓（PRT）的靶向性和溶栓效果。方法 制备不同剂量梯度的RGDS及rt-PA单负载靶向微泡,以其最佳结合剂量、按照不同加入顺序（先加入RGDS,再加入rt-PA;先加入rt-PA,再加入RGDS;将RGDS及rt-PA混匀后加入）分别制备RGDS/rt-PA双负载靶向微泡,检测其结合率。比较裸微泡、单负载及双负载微泡的物理特性（直径、浓度及pH值）,不同剂量梯度的同一配体与微泡的单负载结合率,同一剂量梯度的不同配体与微泡的单负载结合率,加入顺序不同的配体与微泡的双负载结合率。制备体外PRT模型,检测RGDS/rt-PA双负载靶向微泡的声学显像特征、靶向溶栓能力。结果 不同微泡间的物理特性差异均无统计学意义（P均>0.05）。不同剂量梯度的rt-PA、RGDS与微泡单负载结合率的差异均有统计学意义,同一剂量梯度的rt-PA与微泡单负载的结合率均低于RGDS （P均<0.05）。加入顺序不同的配体与微泡的双负载结合率的差异有统计学意义（F=16.090,P=0.004）。将RGDS/rt-PA双负载靶向微泡注入血栓模型管腔后,超声可见均匀分布的点状高回声,血栓边界回声明显增强;扫描电镜下可见纤维蛋白网状结构明显破坏、纤维束断裂成细沙状,并可见变形融合的血细胞。结论 RGDS/rt-PA双负载靶向微泡性质稳定,与配体的结合率高,声学显像特征好,具备一定的PRT靶向性及溶栓能力。     

亲和素桥连构建携抗P选择素单抗靶向超声微泡及体外荧光鉴定

目的 体外荧光方法鉴定生物素-亲和素-生物素(BSB)桥连技术构建携带抗P-选择素单抗靶向超声微泡(MB-BSBp)的町靠性.方法 不同荧光标记物分别标记MB-BSBp的不同部位,观测微泡荧光强度(0、1、2和3级),以普通脂质超声微泡(MB)作对照.结果 加入FITC荧光亲和素孵育,生物紊化脂质微泡(MB-B)呈现明亮的绿色荧光(3级),而MB无荧光显示(0级).以两个浓度梯度(1:4和1:16)的DTAF荧光二抗(抗抗P-选择素单抗抗体)标记MB、MB-B、MB-BS和MB-BSBp,MB-BSBp在两个浓度梯度下均发出明亮的绿色荧光(3级);而MB-B、MB-BS仅在1:4时显示微弱的绿色荧光(1级),MB在两个浓度梯度下均无荧光显示(0级).结论 抗P-选择素单抗通过亲和素桥连有效装配在MB-B表面,体外荧光法是鉴定靶向微泡配体连接可靠性的简便方法.     

新型载药微泡联合超声靶向爆破技术治疗兔VX2肝癌

目的 观察聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米药物微球-脂质微泡复合体靶向治疗兔VX2肝癌的效果。方法 采用双乳化法制备包裹阿霉素的PLGA纳米药物微球(ADM-NP);然后通过碳二亚胺法将ADM-NP连接于氨基脂质微泡(MB-NH₂)表面,制备载阿霉素PLGA纳米药物微球-脂质微泡复合体(ADM-NP-MB-NH₂)。将30只新西兰大白兔肝VX2移植瘤模型随机分为3组,每组10只。A组为单纯ADM-NP辐照组,经耳缘静脉注入ADM-NP 5 ml;B组为混合辐照组,注入5 ml ADM-NP与脂质微泡混合溶液;C组为复合体辐照组,注入5 ml ADM-NP-MB-NH₂。在药物注射完毕的同时,对各组均采用频率1 MHz、声强0.5 W/cm²的超声波辐照120 s。于末次治疗24 h后处死荷瘤兔,固定标本并送检;比较各组的肿瘤生长率,计算肿瘤细胞增殖指数(PI)与凋亡指数(AI)。结果 A、B、C组肿瘤的生长率分别为(80.13±4.34)%、(59.66±7.93)%及(50.47±9.69)%,C组与A、B组比较差异有统计学意义(P均<0.05);肿瘤PI分别为(74.82±7.25)%、(60.77±8.48)%及(55.94±6.97)%,C组与A、B组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);AI分别为(31.70±6.42)%、(50.35±3.82)%及(72.47±5.93)%,C组AI与A、B组比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 采用ADM-NP与脂质微泡复合体联合UTMD治疗兔VX2肝癌可显著提高疗效。     

在生理血流条件下靶向超声微泡对P-选择素的靶向黏附效能

目的平行板流动腔评价在生理血流条件下携抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡（MBp）的靶向黏附效能。方法采用＂亲和素-生物素＂桥接法构建MBp;在3种浓度（10、100和1000ng/ml）小鼠P-选择素Fc段（PSFc）包被的平行板流动腔和固定剪切应力下,以及最大包被浓度和不同剪切应力（0.2-1.7dyn/cm^2）下分别检测MBp的每分钟结合数量（结合率）,以抗小鼠P-选择素单抗封闭组和空白组为对照。在3种包被浓度下检测MBp达半数解离的剪切应力。所有分组样本数均为3。结果两对照组均未见有明显的MBp结合。实验组MBp结合率随包被浓度的增高而增加（P〈0.05）,然而与剪切应力呈现双向性（P〈0.05）。MBp达半数解离的剪切应力随包被浓度的增加而增大（P〈0.05）。结论MBp在生理条件下可与PSFc特异有效地结合,体外对靶向超声微泡的靶向黏附效能评价将有助于判定超声分子成像的效果和靶向微泡的在体应用环境条件。     

靶向超声微泡造影剂诊断与治疗炎性肠病的研究进展

炎性肠病(IBD)是一种慢性肠道性疾病,病程迁延,严重影响患者的生活质量。随着超声分子影像学的发展,靶向超声微泡造影剂除可应用于IBD的诊断外,还可作为一种载体,实现所携带药物、抗体等的靶向释放,起到对IBD靶向治疗作用,在IBD的诊断和治疗领域展现出很好的应用前景。     

携载PSMA单抗靶向前列腺癌的纳米级脂质微泡的制备及体外寻靶能力

目的制备携载PSMA单抗靶向人前列腺癌的纳米级脂质微泡,并观察其体外寻靶能力。方法利用静电吸附法制备携载PSMA单抗靶向前列腺癌的脂质纳米级微泡,检测其一般特性;免疫荧光法检测抗体与纳米级微泡的结合情况;用细胞免疫荧光分析鉴定PSMA的表达及其在细胞膜上的定位;普通光镜下观察靶向微泡对前列腺癌细胞的寻靶能力,同时以胃癌细胞作对照。结果携载PSMA单抗的靶向纳米级微泡分布均匀,平均粒径为(623.70±66.05)nm,免疫荧光法显示微泡表面可见绿色荧光,细胞免疫荧光检测前列腺癌细胞膜高表达PSMA,体外寻靶实验显示该靶向微泡可与人前列腺癌LNCAP及C4-2细胞牢固结合,而与胃癌MKN45细胞不结合。结论本实验成功制备的携载PSMA单抗靶向人前列腺癌的纳米级脂质微泡具有较强的体外寻靶能力,能特异性地与前列腺癌细胞结合。     

一种新型靶向微泡-干细胞复合体的制备

[摘 要] 目的 制备一种新型靶向微泡-干细胞复合体。方法 采用“生物素-亲和素”桥连法构建携抗ICAM-1抗体的靶向微泡（MBICAM-1）。用带正电荷的多聚赖氨酸（PLL）对MBICAM-1进行包覆和修饰,使靶向微泡表面带正电荷。采用静电吸附法将PLL修饰的MBICAM-1与大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）共同孵育,制备MBICAM-1-MSC复合体,流式细胞仪检测靶向微泡与MSC的结合率。结果 MBICAM-1经PLL修饰后,微泡表面带正电荷,但微泡形态、粒径以及与损伤内皮细胞（HUVEC）的结合率与未经PLL修饰的MBICAM-1无显著性差异（P＞0.05）。PLL修饰的MBICAM-1与MSC结合形成MBICAM-1-MSC复合体,且MSC与MBICAM-1之间的比例为1:40时,二者之间结合率达（29.45±2.88）%。结论 成功制备MBICAM-1-MSC复合体,当MSC与MBICAM-1之间的比例为1:40时,其结合率最大。 [关键词] 靶向微泡;骨髓间充质干细胞;复合体     

靶向癌胚抗原载药纳米超声造影剂体外抑制卵巢癌细胞生长

目的 制备靶向癌胚抗原（CEA）载药相变型PLGA纳米粒（Ab-PTX-NPs）,探讨该纳米粒的体外寻靶及抑制肿瘤细胞生长的效能。方法 乳化溶剂挥发法联合碳二亚胺法制备靶向CEA载紫杉醇纳米粒（Ab-PTX-NPs）,采用马尔文粒径分析仪检测其粒径大小。采用高效液相色谱法检测紫杉醇包封率及载药量,恒温摇床透析法检测该纳米粒体外释药特征。激光共聚焦显微镜及流式细胞术观察该纳米粒体外寻靶情况,CCK-8试剂检测卵巢癌细胞存活率。结果 制备的Ab-PTX-NPs粒径为（397.70±99.95）nm,紫杉醇包封率及载药量分别为（67.26±4.15）%和（6.31±0.39）%。抗CEA单克隆抗体与纳米粒连接率为（92.74±5.75）%。共聚焦显微镜下观察到靶向组卵巢癌SKOV3细胞周围见较多造影剂黏附,流式细胞术测得靶向组细胞平均荧光强度明显高于其余各组（P<0.05）,CCK-8试剂法测得靶向组在24 h时,细胞存活率高于纯药组（P<0.05）,而低于无靶组（P<0.05）,当48 h时,靶向组与纯药组细胞存活率差异无统计学意义（P>0.05）。结论 成功制备靶向CEA载药相变型PLGA纳米粒,该纳米粒经低功率聚焦超声治疗仪（LIFU）致相变后可明显增强超声显影,且载药量高,释药快,靶向能力强。