氧化高密度脂蛋白对培养的人脐静脉内皮细胞血管紧张素转化酶表达的影响

目的 探讨氧化高密度脂蛋白(ox-HDL)对人血管内皮细胞血管紧张素转化酶(ACE)表达的影响.方法 人脐静脉内皮细胞株复苏、传代后取生长良好3～6代用于实验.分为①空白对照组:加无血清培养基;②不同浓度组:ox-HDL(终浓度分别为20、40、80mg/L)与人脐静脉内皮细胞孵育24h;③不同时间组:以终浓度为40mg/L氧化型高密度脂蛋白分别刺激6、12和24h.提取细胞总RNA及蛋白.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测血管紧张素转化酶mRNA表达,以蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测ACE蛋白表达量.结果 ox-HDL呈剂量(浓度)和时间依赖性使ACE基因及蛋白表达量增加.与对照组比较,ox-HDL各浓度刺激组ACE mRNA表达增加1.43、2.41、2.98倍,ACE蛋白表达增加为1.32、2.0、2.54倍(P均<0.01),不同浓度组间比较差异亦有统计学意义(P<0.01).于6、12和24h,ACE mRNA表达增加1.64、2.08、2.43倍,ACE蛋白表达增加1.52、1.78、1.99倍(P均<0.01).不同时间组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 ox-HDL呈剂量(浓度)和时间依赖性显著上调ACE基因及蛋白表达,并通过这一机制参与动脉粥样硬化形成.     

苦碟子对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC生长的影响

目的:通过观察苦碟子对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC增殖的影响,探讨苦碟子治疗糖尿病周围神经病变的机制.方法:以不同浓度(0μ l/ml、3.125μl/ml、6.25μl/ml、12.5μl/ml、25μl/ml、50μ/ml、100μl/ml)的苦碟子处理HUVEC细胞,分别于24小时、48小时后用四甲基偶氮唑盐...     

牙龈卟啉单胞菌对脐静脉血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察牙龈卟啉单胞菌（Pg)对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖的影响，探讨Pg对牙龈血管内皮细胞的毒性作用。方法：以厌氧袋法培养Pg，原代培养HUVEC，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）观察HUVEC的增殖状态。结果：活的和灭活的Pg都剂量依赖性地抑制HUVEC的增殖，活的Pg作用比灭活的Pg更为强烈，而Pg毒力株W83和非毒力株ATCC33277对HUVEC增殖的影响无显著差异。结论：Pg可能通过损伤牙龈组织的血管内皮细胞加重局部的炎性反应，可能是Pg诱导牙周组织破坏的病理机制之一。     

腺苷对脐静脉内皮细胞合成VEGF蛋白及表达VEGF mRNA的影响

目的:探讨腺苷对脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC)合成血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白及表达VEGF mRNA的影响.方法:实验分5组进行:组1为对照组,腺苷浓度0mol/L,组2～组5为实验组,腺苷浓度分别为10-4mol/L、10-6mol/L、10-8mol/L和10-10mol/L.用免疫组织细胞化学法检测VEGF蛋白质合成,原位杂交检测VEGF mRNA表达.结果:对照组和实验组均有VEGF蛋白在胞浆中表达,呈浅黄至深棕黄色颗粒,对照组的VEGF染色阳性细胞少,染色程度轻;10-4molv、10-6mol/L浓度的腺苷作用48h后,阳性细胞明显增加,染色深,10-8mol/L、10-10mol/L浓度的腺苷对VEGF染色基本无影响.对照组与实验组均有VEGF mRNA表达,对照组原位杂交后染色阳性细胞百分率为(29.00±4.18)%.10-4mol/L、10-6mol/L腺苷作用48h后,染色阳性百分率分别上升为(73.61±4.72)%和(68.42±2.28)%,与对照组比较有统计学意义(P＜0.05);10-8mol/L、10-10mol/L腺苷作用后染色阳性率分别为(34.04±5.92)%和(33.80±5.54)%,与对照组比较无统计学意义(P＞0.05).结论:腺苷有促进HUVEC合成和分泌VEGF蛋白的作用,并可上调VEGF mRNA的表达.     

高浓度胰岛素对无血清培养的人脐静脉内皮细胞一氧化氮产生的影响

目的　观察无血清培养条件下 ,高浓度胰岛素对人脐静脉内皮细胞 (HU VECs)产生一氧化氮 (NO即 EDRF)功能的影响 .方法　第 2～ 4代的 HUVEC以普通 DMEM培养液培养 3d后 ,试验组换用含 14.35 ,2 8.70和 5 7.40 nmol· L- 1重组人胰岛素的无血清无酚红 DMEM培养液培养 ,对照组采用普通无血清无酚红 DMEM培养液培养 .每 2 4h换液 1次至72 h,换液时利用 Griess反应比色法检测细胞培养上清中 NO代谢产物— NO2 - 离子的 2 4h累积量 .结果　无血清培养条件下 2 8.70和 5 7.40 nmol· L- 1 胰岛素培养 48h可以使HU VEC培养上清 NO2 -离子的 2 4h累积量显著减少 .对照组 (4 7.0± 4.0 ) nmol,2 8.70 nmol·L- 1 胰岛素组 (4 0 .9± 3.4)nm ol;5 7.40 nm ol· L- 1胰岛素组 (38.1± 1.9) nmol,P<0 .0 5 .结论　高浓度胰岛素 (>2 8.70 nmol· L- 1 )长时间 (>48h)作用可以减少无血清培养的 HUVEC NO的产生 .由于NO是心血管系统重要的保护因子 ,高浓度胰岛素可能通过本途径直接促进心血管系统疾病的发生和发展 .     

人脐静脉内皮细胞的培养

目的：培养的内皮细胞为基础和临床研究提供体外模型,并为进一步研究内皮细胞对造血的影响提供实验材料。方法：经胶原酶消化获得人脐静脉内皮细胞,用ＲＰＭＩ－１６４０加２０％的胎牛血清进行培养。结果：成簇状的内皮细胞最初形成于培养皿（或培养瓶）的底层,继而细胞迅速生长,融合成片,约７天细胞呈单层多角形镶嵌排列。透射电镜观察,原代培养细胞的胞质内含内皮细胞特有的细胞器（ＷＰＢｓ）。兔抗人Ⅷ因子相关抗原（ⅧＲ：Ａｇ）免疫组织化学染色实验证实,培养的内皮细胞含有ⅧＲ：Ａｇ。结论：本实验的各项结果从形态,免疫组化及透射电镜的观察均符合内皮细胞的特征,因此确信所培养的内皮细胞可提供作进一步深入的细胞生物学及对造血影响的研究。     

人脐静脉内皮细胞的原代培养

目的建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC)且操作方便的体外培养方法。方法采用不同浓度的Ⅱ型胶原酶(0.05%,0.1%和0.2%)对HUVEC进行灌注,并分别孵育不同的时间(10min,13min,15min和18min)进行消化,观察细胞的形态、数量以及生长融合情况。结果采用0.1%的胶原酶消化10-13min为最佳条件,经光学显微镜观察培养的细胞数量较多,生长、繁殖状态良好,培养3d左右细胞可达到融合状态。结论本实验建立的胶原酶法消化HUVEC培养方法简便,细胞获得量较多且生长状态良好。     

烧伤病人血清对培养脐静脉内皮细胞的影响

用培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）为模型，加入体表面烧伤面积３０％～５０％和７０％～９０％两组病人的血清，观察培养液中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ），前列环素（ＰＧＩ２）和一氧化氮（ＮＯ）的变化，并测定ＨＵＶＥ台，纤维状聚合体（Ｆ－ａｃｔｉｎ）含量和内皮素－１（ＥＴ－１）斑点杂交半定量，结果表明，加入烧伤血清后１ｈＥＴ－１ｍＲＮＡ量增加３倍并持续到１２ｈ，ＮＯ产量在３ｈ开始显著升高（Ｐ〈０．０５），持续     

冠心合剂对人脐静脉内皮细胞分泌血管生长因子bFGF的影响

目的：观察冠心合剂对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌血管新生因子bFGF的影响。方法：取SD大鼠40只,随机分为冠心合剂大、中、小剂量和空白组,每组10只,冠心合剂大、中、小剂量组以成人用药剂量的20、10、5倍剂量灌胃,共7天,末次灌胃后各组大鼠下腔静脉取血制备含药血清。采用体外培养HUVEC的方法,将HUVEC随机分为冠心合剂大、中、小剂量组、空白对照组和bFGF对照组,加入含药血清24h后,通过MTT法、ELISA法和RT-PCR法观察冠心合剂对HUVEC的增殖率、bFGF含量及bFGF mRNA表达的影响。结果：冠心合剂大剂量组HUVEC增殖率、bFGF含量及bFGFmRNA表达量与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）,但其作用不及bFGF对照组（P〈0.05）。结论：冠心合剂能提高HUVEC增殖率,增加bFGF含量,促进bFGFmRNA表达,进而促进血管新生。     

人脐静脉血管内皮细胞培养、冻存、复苏与鉴定

目的：探讨人脐静脉血管内皮细胞（humanumbicicalveinendothelialcell,HUVEC）体外分离、培养、冻存、复苏与鉴定的可靠方法。方法：采用改良的胶原酶灌注消化法对HUVEC进行分离、培养与鉴定,并遵循”慢冻快复”的原则进行冻存与复苏,同时使用Ⅷ因子相关抗原染色法进行鉴定。结果：分离的HUVEC生长良好,细胞总数可达I-3×10^2。Ⅷ因子相关抗原染色鉴定结果为95％以上阳性,冻存后复苏的细胞活性超过90％。结论：HUVEC可以从脐带获得并通过原代培养成为细胞系,获得了人脐静脉血管内皮细胞体外培养、冻存、复苏与鉴定的可靠方法。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达影响的初步研究

目的:观察辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体表达的影响.方法:将人脐静脉内皮细胞分为辛伐他汀组、TNF-α组、辛伐他汀+TNF-α组、IL-1β组、辛伐他汀+IL-1β组和空白对照组.采用免疫细胞化学方法,观察TNF-α和IL-1β对细胞中VEGF及其受体表达的影响,并观察辛伐他汀的干预作用.结果:TNF-α组和IL-1β组的VEGF及其受体表达明显高于空白对照组(P＜0.05),辛伐他汀十TNF-α组和辛伐他汀+IL-1β组表达分别明显低于TNF-α组和IL-1β组(P＜0.05).结论:辛伐他汀可以抑制炎性刺激导致的人脐静脉内皮细胞VEGF及其受体的表达.     

益心定悸方含药血清对人脐静脉内皮细胞VEGF表达影响的研究

[目的] 通过观察益心定悸方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响探讨其治疗冠心病快速心律失常的作用机制, 同时为临床应用提供客观依据。[方法] 用20只雄性Wistar大鼠制备含药血清, 将内皮细胞接种在两种血清培养基上, 采用免疫组化方法测定VEGF的表达。[结果] 含药血清组细胞边界和核结构清晰细胞核颜色深染, 正常血清组VEGF仅有微弱表达。[结论] 益心定悸方能够明显促进VEGF表达, 这可能是本方治疗冠心病快速心律失常的作用机制之一。     

VIP促进人脐静脉血管内皮细胞增殖及合成VEGF的初步研究

目的 通过观察血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)促进人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein vessel endothelial cells,HUVECs)的增殖以及刺激VEGF的合成情况,探讨VIP在创伤组织修复过程中的生物学效应.方法 体外培养HUVECs细胞系,分为有血清培养组和无血清培养组,这两组分别加入VIP和PBS进行干预,应用MTT法测定HUVECs的增殖情况,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血管内皮细胞生长因子(VEGF165)在HUVECs的合成.结果 VIP能促进血管内皮细胞的增殖,且两组都有VEGF生成,但VIP组VEGF的量显著高于PBS组.结论 VIP能促进HUVECs的增殖以及增强血管内皮细胞内VEGF的合成和分泌,在创伤组织修复过程中可能发挥促新生血管形成的作用.     

结直肠癌组织与血清血管内皮生长因子的相关性

目的探讨结直肠癌组织与血清血管内皮生长因子(VEGF)的相关性。为结直肠癌的预后判断和治疗后随访寻求一种简便、易测、可靠、无创的检测方法。方法分别应用免疫组化法和ELISA法,测定35例结直肠癌患者的组织和血清VEGF,并与53例非结直肠癌患者作比较。结果①结直肠癌组血清VEGF水平(813.14±511.87)μg/L明显高于对照组(241.40±164.08)μg/L,差异显著(P<0.001);②血清VEGF水平与性别、年龄、肿瘤部位及组织类型无明显相关性(P>0.05);③有淋巴结、肝脏及远处转移者血清和组织VEGF水平比无转移者显著增高(P<0.05;P<0.001);④血清与组织VEGF之间密切相关(P=0.000)。结论①血清和组织VEGF测定能够反映结直肠癌的发展和预后;②结直肠癌患者组织与血清VEGF水平密切相关,血清VEGF可替代组织VEGF的检测。     

烟曲霉醇联合健择抑制人肺腺癌细胞和脐静脉内皮细胞VEGF及其受体的表达

目的研究烟曲霉醇（TNP-470）联合健择（Gem）对人肺腺癌细胞（A549）和人脐静脉内皮细胞（ECV-304）血管内皮生长因子（VEGF）及其受体FLT-1、KDR表达的抑制作用。方法不同浓度的Gem（10^6-10^-4mg／m1）和TNP-470（10^-3mg／ml）单用或联合处理A549和ECV-304细胞，用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测药物对细胞的毒性及增殖的影响，用半定量RT-PCR法和蛋白免疫印迹法（Western-blot）检测药物对细胞VEGF及其受体FLT-1和KDR的基因及蛋白表达的影响。结果Gem和TNP-470对两种细胞的增殖活性均有抑制作用（Gem的IC50为10^-4mg/ml；TNP-470的IC50为10^-2mg／ml），Gem联合TNP-470能明显抑制两种细胞VEGF及受体的mRNA和蛋白表达水平。结论TNP-470联合Gem能显著抑制A549、ECV-304细胞的VEGF、FIX-1和KDR的核酸和蛋白的表达，具有协同抗肿瘤作用。     

脓毒症大鼠血清对内皮细胞的影响

目的 研究脓毒症大鼠血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响,探讨脓毒症的发病机制.方法 12只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组和脓毒症组.采用盲肠结扎穿孔术制备大鼠脓毒症模型.术后6 h采血收集血清和血浆,采用鲎试剂法定量测定血浆脂多糖(LPS)水平,酶联免疫吸附试验测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6水平.并将血清与HUVEC孵育8 h后分别应用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,采用Hoechst 33342/碘化丙啶荧光染色计算细胞坏死率,并应用细胞划痕实验测定0、12、24 h的细胞间残存距离.结果 脓毒症组LPS、TNF-α及IL-6水平均显著高于假手术组(P值均<0.01).脓毒症组血清刺激HUVEC后8 h的细胞活力显著低于假手术组(P<0.01).脓毒症组血清刺激HUVEC后的细胞坏死率显著高于假手术组(P<0.01).孵育12和24 h后,脓毒症组的细胞间残存距离均显著大于假手术组(P值均<0.01).结论 脓毒症大鼠血清中LPS、细胞因子的水平显著升高,对血管内皮细胞有明显的杀伤抑制作用.     

血管内皮生长因子及其Flt-1受体在白血病细胞中的表达

目的探讨人白血病细胞系血管内皮生长因子(VEGF)及其Fh-1受体的表达,进一步阐明VEGF在白血病细胞异常增殖中的作用机制.方法以人脐静脉血管内皮细胞系ECV304作为对照,采用RT-PCR半定量技术和免疫组化检测体外培养的人白血病细胞系K562和HL-60中VEGF及Flt-1的表达.采用MTT试验观察VEGF反义寡核苷酸(VEGF-AS)对白血病细胞体外增殖的影响.结果K562和HL-60细胞同时表达VEGF和Fh-1 mRNA和蛋白.VEGF-AS能够抑制白血病细胞体外增殖.结论在白血病细胞异常增殖中自分泌VEGF可能起着重要作用.     

人参三七组方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子分泌及其受体2表达的影响

目的：探讨益气活血中药人参三七组方对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体2（vascular endothelialgrowth factor receptor-2,VEGFR-2）表达的影响。方法：体外培养HUVEC,分为高剂量人参三七组方（0.4 mg/mL）组、中剂量人参三七组方（0.2 mg/mL）组、低剂量人参三七组方（0.1 mg/mL）组,另设碱性成纤维细胞生长因子（bovine basic fibroblast growth factor,bFGF,320 U/mL）阳性对照组和只加培养液的空白对照组。酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中的VEGF含量,免疫细胞化学法检测VEGFR-2阳性细胞数及其光密度值,蛋白印迹法检测VEGFR-2蛋白的表达。结果：与空白对照组比较,高剂量人参三七组方组和bFGF组细胞上清液中VEGF含量增加（P〈0.05）,VEGFR-2阳性细胞数及光密度值增加,细胞中VEGFR-2蛋白表达增强。结论：促进HUVEC分泌VEGF和表达VEGFR-2可能是人参三七组方促血管生成的基础。     

黄芪与当归对人脐静脉内皮细胞增殖及VEGF表达的影响

目的: 探讨黄芪与当归对内皮细胞(ECs)增殖周期及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法: 以体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为模型,HUVEC经分离、原代和传代培养与鉴定,选择第4 或第5代细胞进行实验;MTT法检测不同剂量黄芪与当归对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测黄芪与当归对HUVEC增殖周期的影响;半定量RT PCR检测黄芪与当归对HUVEC的VEGF mRNA表达的影响。结果:细胞周期检测显示黄芪及当归组S期细胞数显著增多(P<0.01)。黄芪+当归组G0 G1 期细胞数明显减少(P<0.05),S期和G2 M期细胞数明显增多(P<0.05)。RT PCR结果表明,黄芪与当归使HUVEC的VEGF mRNA表达明显增强,黄芪+当归(200μg/ml)组是对照组的1.82倍;当归(200μg/ml)组是对照组的1.88倍;黄芪(200μg/ml)组是对照组的1.51倍。结论:黄芪与当归及其复方具有促进内皮细胞增殖作用,黄芪+当归可明显促进HUVEC的DNA合成及有丝分裂。黄芪与当归可促进HUVEC的VEGF mRNA表达,提示黄芪与当归通过刺激VEGF表达而促血管新生。     

尼古丁对人脐静脉内皮细胞凋亡及坏死的影响

目的不同浓度尼古丁对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡及坏死的影响。方法用CD34以免疫组织化学法鉴定HUVECs。通过3种不同浓度的尼古丁(3、30、300 ng/ml)刺激HUVECs 24 h后,用流式细胞仪检测其凋亡及坏死率。结果低浓度尼古丁促进细胞凋亡最强,而随着尼古丁浓度的增加,细胞凋亡率反而逐渐降低,各组差异具有统计学意义(P<0.05);此外,随着尼古丁浓度增加,细胞坏死率也日益增多,各组差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞坏死率与尼古丁浓度呈正相关(r=0.675)。结论尼古丁对HUVECs凋亡的影响具有浓度依赖性,细胞坏死率与尼古丁浓度呈正相关。