黄芪多糖对LPS损伤小肠上皮细胞的保护作用

目的:探讨黄芪多糖(APS)在内毒素-脂多糖(LPS)损伤小肠上皮细胞(IEC-6)中的作用机制及对细胞因子和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法:以小肠上皮细胞株IEC-6为研究对象, 将培养的细胞分为6组: 对照组、LPS组、LPS APS 50 mg/L组、LPS APS 100 mg/L组、LPS APS 200 mg/L组和LPS APS 500 mg/L组. 采用RT-PCR法检测细胞因子TNF-α和IL-8 mRNA的表达, 采用凝胶电泳迁移率法分析NF-κB蛋白活性.结果: LPS损伤IEC-6细胞后, TNF-α, IL-8 mRNA水平和NF-κB蛋白定量表达均升高, 均显著高于对照组(TNF-a: 1.26±0.06 vs 0.65±0.05, IL-8 mRNA: 1.19±0.05 vs 0.57±0.06, NF-kB: 2.76±0.07 vs 0.07±0.03, P均<0.01). 而黄芪多糖呈浓度和时间依赖性地抑制LPS诱导IEC-6细胞分泌的TNF-α, IL-8等细胞因子的mRNA的表达水平(P<0.01), 并能降低NF-κB的表达活性(P<0.01).结论:APS具有抑制LPS刺激IEC-6细胞产生的TNF-α, IL-8炎性因子的作用, 并能降低NF-κB的表达活性, 其对LPS所致的肠道损伤具有保护作用.     

核因子-κB和细胞因子在溃疡性结肠炎中的表达及其意义

目的: 探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者肠黏膜活检组织中NF-κB的表达及其与细胞因子水平的关系.方法: 用免疫组化SP方法检测60例活动期UC内镜活检标本及30例正常对照石蜡组织中NF-κB表达情况, 同时用放免法检测UC组和正常对照组血清中IL-1β, TNF-α和IL-10的表达水平.结果: 60例UC组中NF-κB p65均为阳性表达,主要分布在结肠黏膜上皮细胞、腺上皮细胞和巨噬细胞. 对照组均为阴性和弱阳性表达,主要分布于上皮细胞. UC组的NF-κB p65表达平均灰度值与正常对照组比较差异有显著性(166.62±14.88 vs 142.30±19.01, P<0.05); 活动期UC组血清中IL-1β、TNF-α表达水平显著高于正常对照组(1.29±0.36 vs 1.29±0.36,4.47±1.08 vs 1.37±0.26, 均P<0.01), 而IL-10表达水平二组间差异无统计学意义. NF-κBp65的表达与活动期UC病情活动性及内镜分级有相关性( P<0.05或0.01).结论: NF-κB诱导、参与了UC的发生、发展过程, 并与UC病情活动性及内镜分级有较好相关性, 可客观反应UC的炎症活动情况; 促炎细胞因子IL-1β、TNF-α与抑炎性细胞因子IL-10的表达水平不一致, 可能与NF-κB诱导调控有直接关系.     

前列腺素E1改善高糖联合肿瘤坏死因子α损伤肾小球系膜细胞株细胞及机制研究

目的 观察前列腺素E1（PGG）对高糖联合TNF-α诱导的大鼠肾小球系膜细胞株（HBZY-1）损伤的影响及机制.方法 将HBZY-1细胞分为正糖（NG）组、高糖＋TNF-α（HT）组、高糖＋ TNF-α＋不同浓度PGE1（HTP1～5）组,采用MTT法测定细胞增殖,ELISA与RT-PCR法测定细胞上清液中单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、转化生长因子-β1（TGF-β1）以及白介素-6（IL-6）蛋白含量及mRNA表达,细胞免疫荧光法测定核因子-κB p65（NF-κB p65）核转位.结果 高糖联合TNF-α促进HBZY-1增殖,增加MCP-1、TGF-β1蛋白与mRNA,以及IL-6mRNA的表达（P＜0.05）,同时促进NF-κBp65的核转位;1 ng/ml的PGE1可抑制上述作用（P＜0.05）.结论 PGE1通过抑制NF-κB通路来抑制高糖联合TNF-α诱导的HBZY-1增殖,降低MCP-1、TGF-β1蛋白与基因,以及IL-6基因表达.     

双歧杆菌分泌型粘附素对肠上皮细胞应激反应的影响

目的 观察双歧杆菌分泌型粘附素对肠上皮细胞应激反应后核因子(NF)-κB DNA结合活性、细胞胞质核因子抑制蛋白κB(IκB)、细胞胞核NF-κB p65的表达和肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-8等细胞因子表达的影响.方法 经培养的肠上皮Lovo细胞分为5组,分别经LPS( 100 ng/ml)、H2O2( 200 μmol/L)直接刺激3h以及经双歧杆菌分泌型粘附素(30 μg/ml)预孵30 min后再予LPS( 100 ng/ml)、H2O2刺激(200 μmol/L)刺激3h,正常对照组未作任何处理.采用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)方法检测NF-κB DNA结合活性;Western印迹法分别检测细胞胞质IκB和细胞胞核NF-κBp65的表达;RT- PCR方法检测TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子mRNA的表达情况.结果LPS和H2O2刺激后,细胞表现出较高的NF-κB DNA结合活性[分别为正常对照组的(6.20±0.35)倍和(4.16±0.52)倍]和细胞胞核NF-κB p65的表达[分别为(0.64±0.05)和(0.67±0.06)],而细胞胞质IxB的表达则较弱[分别为(0.28±0.10)和(0.39±0.12)];以双歧杆菌分泌型粘附素预孵后,前二者活性明显降低,而后者的表达明显增强;LPS和H2O2处理后,TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子mRNA的表达水平均明显增高[LPS处理组分别为(0.92±0.10)、(0.38±0.03)、(1.44±0.25),H2O2处理组分别为(0.89±0.13)、(0.36±0.06)、(1.42±0.18)],而粘附素预孵后则可显著降低它们的表达水平.NF-κB DNA结合活性与TNF-α、IL-1β、IL-8三种细胞因子的mRNA表达水平均呈显著正相关.结论 双歧杆菌分泌型粘附素对LPS和H2O2诱导的肠上皮细胞NF-κB DNA结合活性有显著抑制作用,NF-κB的活化可能与TNF-α、IL-1β和IL-8等炎性细胞因子的表达调控有关.     

不同频率电针足三里对运动大鼠腓肠肌核因子-κB、血清肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β的影响

目的研究不同频率电针对运动大鼠腓肠肌核因子(NF)-κB、血清肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的影响。方法采用Bedford渐增负荷跑台跑运动模型,用韩式电针仪对运动性疲劳大鼠双侧足三里穴进行2/15 Hz、2/100 Hz两种不同频率的刺激,观察血清睾酮/皮质酮比值、腓肠肌NF-κB含量、血清TNF-α和IL-1β含量的变化。结果 1与安静对照组比较,运动组大鼠血清睾酮/皮质酮比值显著降低(P0.05,P0.01);2运动组大鼠腓肠肌NF-κB、血清TNF-α和IL-1β显著升高(P0.05,P0.01);3运动+2/15 Hz电针组和运动+2/100 Hz电针组两组大鼠腓肠肌NF-κB、血清TNF-α和IL-1β与运动后60 min组比较差异显著(P0.05,P0.01);4运动+2/15 Hz电针组大鼠腓肠肌NF-κB、血清TNF-α和IL-1β与运动+2/100 Hz电针组比较,差异显著(P0.05,P0.01)。结论 1急性运动后可显著增加大鼠腓肠肌NF-κB、血清TNF-α和IL-1β含量;2不同频率电针均可降低急性运动后大鼠腓肠肌NF-κB、血清TNF-α和IL-1β的含量;32/15 Hz可能是要筛选的电针消除运动性疲劳的最佳频率。     

脂质体介导核因子-κB诱捕物寡聚脱氧核苷酸对重症急性胰腺炎大鼠胰腺炎症因子mRNA表达和胰腺损伤的影响

目的:探讨脂质体(liposome)介导核因子-κB(nuclear factor κB,NF-κB)诱捕物(decoy)寡聚脱氧核苷酸(ODN)对重症急性胰腺炎大鼠胰腺NF-κB活性及受其调控炎症因子基因mRNA表达和胰腺损伤的影响.方法:除假手术组(n=10)外,其余SD大鼠以牛磺胆酸钠(STC)诱导建立重症急性胰腺炎模型后,分别于建模后1 h静脉注射裸ODN(n=10)、脂质体/decoy ODN复合物(n=10)、脂质体/scrambled ODN复合物(n=10)和生理盐水(n=10),注射4 h应用电泳迁移率变动分析(EMSA)NF-κB的活性,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胰腺组织ICAM-1,IL-1α,IL-2,TNF-α,VCAM-1 mRNA表达,同时检测血淀粉酶、胰腺组织湿/干重比率和胰腺组织髓过氧化物酶(MPO).结果:EMSA显示,脂质体/decoy ODN复合物组NF-κB活性明显低于生理盐水组、脂质体/scrambled ODN复合物组和裸ODN组,均有显著性差异(P＜0.05).RT-PCR结果显示,脂质体/decoy ODN复合物组ICAM-1,IL-1α,IL-2,TNF-α和VCAM-1 mRNA表达低于生理盐水组、脂质体/scrambled ODN复合物组和裸ODN组,均有显著性差异(ICAM-1:0.75±0.13 vs 1.39±0.15,1.37±0.16,1.32±0.17,P＜0.05;IL-1α:0.64±0.09 vs 1.34±0.20,1.30±0.14,1.25±0.20,P＜0.05;IL-2:0.23±0.08vs 0.74±0.13,0.71±0.12,0.69±0.14,P＜0.05;TNF-α:0.41±0.13 vs 1.30±0.17,1.26±0.17,1.23±0.20,P＜0.05;VCAM-1:0.21±0.06 vs 0.68±0.13,0.69±0.15,0.63±0.13,P＜0.05).与生理盐水组、脂质体/scrambled ODN复合物组和裸ODN组相比,脂质体/decoy ODN复合物组淀粉酶、胰腺组织湿/干重比率和胰腺组织MPO活性显著性降低(淀粉酶:50931.85±22432.15 nkat/L vs 188024.26±38659.56,188412.68±37988.26,183119.95±33636.23nkat/L,all P＜0.05;湿/干重比率:5.76±0.20 vs 6.77±0.18,6.72±0.18,6.35±0.12,P＜0.05;MPO活性:46.68±3.00 nkat/g vs 99.02±2.50,98.19±2.83,98.52±2.50 nkat/g,P＜0.05).结论:NF-κB decoy ODN可特异性抑制胰腺NF-κB活性及其调控的炎症因子ICAM-1,IL-1α,IL-2,TNF-α和VCAM-1 mRNA的表达,减轻胰腺损害.     

CO_2气腹对裸鼠胃癌移植瘤NF-κB p65、TNF-α和IL-6表达的影响

目的:探讨CO2气腹对胃癌细胞转录因子(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素6(IL-6)表达的影响.方法:将胃癌细胞MKN45种植于裸鼠腹腔,建立胃癌移植瘤动物模型,实验动物随机分为CO2气腹组、开腹组和对照组,观察各组肿瘤细胞的生长,采用RT-PCR检测NF-κB转录因子p65亚单元、TNF-α和IL-6表达的变化.结果:开腹组肿瘤病灶质量(mg)比CO2气腹组重,组间存在显著差异(0.72±0.02vs0.43±0.06,P<0.05).实验处理后24h,开腹组NF-κBp65、TNF-α和IL-6表达比CO2气腹组高,组间存在显著差异(1.09±0.12vs0.63±0.07;1.14±0.11vs0.31±0.05;0.65±0.08vs0.42±0.04,均P<0.05).结论:腹腔镜手术中,CO2气腹诱导更低的NF-κB p65、TNF-α和IL-6表达,对肿瘤生长的影响较小,本实验支持腹腔镜技术在胃癌治疗中的应用.     

NF-κB p65反义寡核苷酸对TNBS结肠炎小鼠肠黏膜细胞因子和NF-κB表达的影响

目的:探讨NF-κB p65反义寡核苷酸对实验性结肠炎BALB/c小鼠肠黏膜NF-κB表达的抑制作用和对黏膜肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-10、IL-1β)表达的影响,研究其对肠道炎症的治疗作用.方法:将50只BALB/c小鼠均分为模型对照组(UC组)、NF-κB p65反义寡核苷酸组(ASODN组)、错义寡核苷酸组(MSODN组)和正义寡核苷酸组(SODN组),采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠造模.造模后24h后对各组进行相应灌肠治疗,灌肠后第7天处死小鼠,行光镜下观察肠黏膜炎症并评分,免疫组化检测各组小鼠肠黏膜CTNF-α、IL-1β、IL-10和NF-κB表达.结果:ASODN组小鼠在结肠炎症评分较UC组、MSODN组和SODN组明显改善(均P<0.05).ASODN组小鼠TNF-α、IL-1β、NF-κB表达较UC组、MSODN组和SODN组明显减少(82.68±14.30 VS 168.48±11.89,166.49±11.63,176.49±12.33, P<0.05;42.42±5.77 VS 168.48±11.89,120.43±28.21,131.43±30.601, P<0.01;62.66±11.32 VS 158.38±12.49,161.09±12.73,168.64±11.83, P<0.01),而IL-10表达则显著增多(146.68±6.02 VS 62.50±11.57,58.44±10.92,54.24±10.64, P<0.01).结论:NF-κB p65反义寡核苷酸可抑制NF-κB的活化,降低TNF-α、IL-1β表达,升高IL-10的表达,减轻小鼠结肠炎症,可用于治疗实验性结肠炎.     

黄芪多糖在动脉粥样硬化发展过程中保护性作用的研究

目的:通过研究黄芪多糖(APS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人急性单核白血病细胞(THP-1)源性泡沫细胞胆固醇流出率、细胞内总胆固醇含量以及细胞膜上脂质流出通道ATP-结合盒转运子A1(ABCA1)表达水平的影响,探讨APS在动脉粥样硬化发展过程中的保护作用。方法:将培养的THP-1源性巨噬细胞分为4组:对照组、单纯TNF-α组、TNF-α+APS组和单纯APS组。分别用RT-PCR法、Western blotting法检测ABCA1的mRNA及蛋白表达水平,闪烁计数法计算胆固醇流出率,酶化学法检测细胞内脂质含量,酶联免疫吸附法(ELISA法)测核因子-κB(NF-κB)的水平。结果:单纯TNF-α组ABCA1的mRNA和蛋白表达量、胆固醇流出率显著低于对照组(P<0.01),细胞内总胆固醇含量、NF-κB的水平显著高于对照组(P<0.05),而单纯APS组与对照组在上述指标上差异无统计学意义(P>0.05);与单纯TNF-α组比较,TNF-α+APS组ABCA1的mRNA和蛋白表达量、胆固醇流出率显著升高(P<0.01),细胞内总胆固醇含量、NF-κB的水平显著降低(P<0.01)。结论:APS能够使泡沫细胞ABCA1的表达及胆固醇流出率上升,而细胞内总胆固醇含量显著下降,并能够减弱泡沫细胞中NF-κB的活化水平。这些发现提示APS能够拮抗TNF-α对于ABCA1的下调作用,从而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

PDTC对大鼠急性肺损伤TNF-α、IL-1β及核因子-κB蛋白表达的影响

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)在脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)中细胞因子TNF-α、IL-1β含量及NF-κB P65蛋白表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠56只,随机分三组.对照组(N组)8只,腹腔注射生理盐水3 ml/kg.ALI组(L组)24只,腹腔注射LPS 3 mg/kg.PDTC干预组(P+L组)24只,先腹腔注射PDTC 120 mg/kg,0.5h后再腹腔注射LPS 3 mg/kg.后两组分别于腹腔注射LPS后4、12、24 h作为观测时间点,观察BALF中TNF-α、IL-1β的含量及肺组织胞浆及胞核中NF-κB P65蛋白表达强度的变化.结果 L组各时相BALF中TNF-α、IL-1β较N组显著升高(P＜0.01),且随着时间延长增加明显,但P+L组TNF-α、IL-1β与L组比较显著减少(P＜0.05).L组各时相肺组织胞浆中P65蛋白的表达强度较N组显著降低(P＜0.01),而胞核中P65蛋白表达强度较N组显著升高(P＜0.01),但P+L组肺组织胞浆中P65蛋白的表达强度较L组升高(P＜0.05),而胞核中P65蛋白表达强度较L组降低(P＜0.05).结论 LPS引起BALF中TNF-α、IL-1β大量释放,肺组织NF-κB P65蛋白由胞浆向胞核转移而活化,NF-κB参与炎症的调控,在ALI中发挥重要作用.而PDTC可抑制炎性细胞因子的表达和释放,抑制NF-κB活化,有效减轻LPS所致大鼠ALI.