Genistein对TGF-β1诱导人胰腺癌细胞上皮-间质样转化的作用

目的: 研究Genistein对人胰腺癌细胞系Panc-1诱导细胞上皮-间质样转化的作用, 以探讨Genistein抑制胰腺癌侵袭作用的机制. 方法: 用TGF-beta1和不同浓度Genistein(0、1、25、50 mumol/L)处理Panc-1细胞, 对照组加入等量PSB. 采用Transwell小室法检测Genistein作用于TGF-beta1诱导Panc-1细胞后侵袭力的变化; RT-PCR技术检测波形蛋白(Vimentin)、E-钙依赖黏附素(E-Cadherin)的mRNA表达; Western blot蛋白印迹法检测E-Cadherin蛋白的表达; 应用显微镜观察分析细胞结构的改变. 结果: TGF-beta1对Panc-1细胞有显著诱导上皮-间质转化的作用, 并增加细胞侵袭力, Genistein不但对诱导后Panc-1细胞侵袭力有抑制, 对细胞上皮-间质样转化也有抑制, 且这种作用呈剂量依赖性. 0 mumol/L Genistein组细胞计数明显比对照组高(99.16±11.30 vs 65.46±8.99, P<0.05), 50 mumol/L Genistein处理诱导后细胞48 h, 细胞侵袭力下降, Vimentin mRNA表达水平降低, 而E-Cadherin mRNA和蛋白表达水平升高, 细胞形态学间质样特性被逆转. 结论: Genistein具有明显抑制TGF-beta1诱导的人胰腺癌细胞Panc-1侵袭力的作用, 这可能是其抗侵袭作用的机制之一.     

JDP2在TGF-β1诱导的人胰腺癌细胞系Panc-1上皮向间质转化中的作用

目的:研究JDP2与TGF-β1诱导的人胰腺癌细胞系Panc-1上皮向间质转化之间的关系.方法:实验分为空白对照组、JDP2转染组、空质粒转染组3组,并分别用P、P-J-T、P-V-T缩写代表.用pCEFL-HA-JDP2质粒和pCEFL空质粒瞬时转染人胰腺癌细胞系Panc-1,48h之后应用TGF-β1分别刺激JDP2转染和空质粒转染组细胞48h.以正常的Panc-1细胞为空白对照组,仅加等量的PSB.倒置显微镜下观察各组细胞的形态学变化的差异;应用RT-PCR及Westernblot的方法检测E-cadherin及vimentin的蛋白及mRNA表达变化;应用Transwell侵袭实验观察各组细胞的迁移能力.结果:P-J-T组能够明显抑制由TGF-β1诱导产生的EMT.与P组相比,P-J-T组大部分细胞没有明确的形态学上的变化,E-cadherin及vimentin蛋白及mRNA表达变化不明显,迁移能力亦无明确差异(48.0±5.3vs52.0±7.2),未成功诱导EMT;而P-V-T组Panc-1细胞大多数变成长梭形,细胞间紧密连接丢失,E-cadherin表达明显降低(mRNA表达:P<0.01;蛋白...     

三羟异黄酮对TGF-β1诱导的人胰腺癌细胞Panc-1侵袭力的影响及机制

检测不同浓度三羟异黄酮作用于转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胰腺癌细胞Panc-1后侵袭能力的变化、尿激酶型纤溶蛋白酶原激活物(uPA)的mRNA、uPA蛋白和基质金属蛋白酶2(MMP-2)、9(MMP-9)蛋白的表达.结果发现,三羟异黄酮作用于TGF-β1诱导Panc-1细胞后其侵袭能力较对照组明显下降,并呈剂量依赖性;uPA mRNA、蛋白表达以及MMP-2蛋白表达亦均明显少于对照组.认为三羟异黄酮抑制TGF-β1诱导的Panc-1细胞侵袭能力可能与其下调uPA和MMP-2的表达有关.     

溶血磷脂酸协同TGFβ1促进结肠癌细胞上皮间质转化的研究

目的探讨溶血磷脂酸(LPA)协同转化生长因子1(TGFβ1)的促上皮间质转化(EMT)作用。 方法观察TGFβ1及LPA诱导SW480细胞后细胞形态变化,Western blotting方法检测E-Cadherin、Vimentin的表达变化以及细胞增殖活性变化。 结果TGFβ1及LPA均能使SW480细胞形态发生EMT改变;两者联合诱导细胞EMT改变更为明显。空白对照组、LPA组、TGFβ1组、LPA组＋TGFβ1组,E-Cadherin表达依次下降;Vimentin表达未见明显差异。 结论LPA可能协同TGF-β1产生EMT作用,下调LPA的表达或可抑制肿瘤侵袭转移。     

利拉鲁肽对转化生长因子β1诱导上皮间质转化的作用及其机制

目的研究利拉鲁肽(Li)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的上皮间质转化(EMT)的作用及其可能机制。方法本研究为实验研究。培养人Ⅱ型肺泡上皮(A549)细胞, 药物处理分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1+Li(125 nmol/L)组和Li组(125 nmol/L)。采用Transwell实验检测细胞迁移能力;显微镜下观察并分析细胞形态学变化;免疫荧光观察细胞内紧密连接蛋白1(ZO-1)、Vimentin表达情况;Western blot检测各组ZO-1、Vimentin和Fibronectin表达及p-p38、p38、p-Erk、Erk蛋白含量。结果 Transwell实验结果显示, Li可以抑制TGF-β1诱导的A549细胞迁移;细胞形态学结果显示, Li可以减轻TGF-β1诱导的A549细胞伸长, 呈间充质化细胞的"纺锤样"形态;免疫荧光双标结果显示, Li抑制TGF-β1诱导的A549细胞ZO-1荧光强度下调以及Vimentin荧光强度的上调;Western blot结果显示, Li可以减少TGF-β1诱导的A549细胞表型转化标志物ZO-1的下调, 显著抑制Vim...     

STAT3加重TGF-β1诱导的肝癌细胞上皮-间质转化的发生

目的探讨IL-6/JAK/STAT3和Smad3/TGF-β1信号通路在肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)发生过程中的作用。方法分别予TGF-β1、IL-6、AG490刺激人肝癌细胞株(HepG2、Bel7402、MHCC97H、HCCLM3)后,qPCR检测Snail、STAT3的mRNA表达水平,蛋白质免疫检测p-STAT3/STAT3、p-Smad3/Smad3、TGF-β1以及EMT相关分子标志物Snail、E-Cadherin、Vimentin的蛋白表达水平。结果 TGF-β1可以诱导HepG2细胞EMT的发生,下调E-Cadherin的表达,上调Vimentin、Snai的表达。IL-6在肝癌细胞中通过刺激STAT3,激活Smad3/TGF-β1通路,进而上调EMT相关分子标志物Snail、Vimentin的表达。AG490(一种JAK2的特异性抑制剂)抑制p-STAT3/STAT3、p-Smad3及EMT相关分子标志物Snail的表达。结论STAT3在TGF-β1诱导的肝癌细胞EMT发生过程中作为一个正向调控因子,IL6/JAK/STAT3和Snail/Smad3/TGF-β1信号通路协同促进肝癌细胞EMT的发生。     

miR-365抑制TGF-β诱导的人肺癌细胞上皮-间质转化

目的研究miR-365在TGF-β诱导的人肺癌细胞A549上皮-间质转化过程中的作用。方法 TGF-β刺激A549细胞,观察细胞形态变化, RT-PCR检测细胞内miR-365的表达;通过感染慢病毒,使A549细胞中miR-365过表达,Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白E-cadherin的表达。结果 TGF-β刺激A549细胞后,细胞形态发生改变,呈长纤维状,胞内miR-365表达上升;过表达miR-365,E-cadherin表达升高。结论 miR-365可抑制TGF-β诱导的人肺癌细胞上皮-间质转化。     

Kruppel样因子8通过转化生长因子-β1介导的上皮间质转化促进胃癌细胞的侵袭转移

目的探讨在人胃癌细胞中Kruppel样因子(KLF)8是否参与了转化生长因子(TGF)-β1介导的上皮间质转化(EMT)作用促进胃癌细胞侵袭转移。方法 TGF-β1处理胃癌细胞SGC7901和MKN45后,采用Western印迹和实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测细胞中KLF8、上皮标志蛋白——钙黏附蛋白E(E-cadherin)和间质标志蛋白——波形蛋白(Vimentin)表达水平;采用小干扰RNA(siRNA)技术降低胃癌细胞MKN45中KLF8的表达水平,细胞侵袭试验和划痕试验检测细胞的体外侵袭和迁移能力,并且采用高内涵细胞分析试验检测细胞的运动速度。结果在胃癌细胞株中,TGF-β1刺激后,能够下调E-cadherin和上调Vimentin的表达,进而促进细胞发生EMT;进一步研究发现,在胃癌细胞MKN45中,TGF-β1能够增加KLF8 mRNA和蛋白表达水平(P0.05);Western印迹和qRT-PCR实验发现,siRNA干扰KLF8表达后,能够阻断TGF-β1诱导的EMT,进而部分逆转了E-cadherin的降低和Vimentin的升高;同时,抑制KLF8后,能够降低TGF-β1促进的细胞侵袭、迁移和运动能力。结论在胃癌细胞中,KLF8参与了TGF-β1诱导EMT过程,并且有可能成为胃癌治疗中的新治疗靶标。     

TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞间质转化及其机制探讨

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肺泡上皮细胞-间质细胞转化(EMT)过程及信号传导通路。方法体外培养肺腺癌细胞系A549细胞,以TGF-β1进行干预;采用Western blot免疫印迹法检测干预前后细胞标志物蛋白及信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1、Snail2的表达;采用RT-PCR检测干预前后细胞标志物mRNA表达;采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化。结果 TGF-β1干预后,随着时间的延长,A549细胞上皮细胞标志物E-cad和CK19蛋白及mRNA表达下调(P0.05);间质细胞标志物α-SMA、Vimentin蛋白及mRNA表达上调(P0.05);信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1表达上调(P0.05);倒置相差显微镜观察TGF-β1干预后A549细胞由干预前的鹅卵石状变为梭形,如同肌纤维母细胞。结论 TGF-β1可诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,其机制可能与P-Smad2/3、Snail1信号传导通路有关;TGF-β1可能是通过诱导肺泡上皮细胞间质转化的细胞效应,最终导致肺泡上皮细胞凋亡和纤维组织形成。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对TGF-β1诱导肾成纤维细胞细胞外基质表达的影响

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对转化生长因子β1(TGF-β1)致肾间质纤维化作用的影响,探讨其抗肾间质纤维化的潜在作用.方法:体外培养大鼠肾成纤维细胞株(NRK/49F),利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察PPARγ配体15d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGF-β1诱导的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤维连结蛋白(FN)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)mRNA表达的影响,利用Western Blot方法观察PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的FN蛋白表达的影响.结果:TGF-β1能显著增加NRK/49F细胞CTGF、FN和ColⅢmRNA表达,并呈剂量依赖和时间依赖效应.与TGF-β1刺激组相比,10 μM 15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组α-SMA、CTGF、FN和ColⅢmRNA表达量显著减少,FN蛋白表达量显著下降.结论:PPARγ激动剂可抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞CTGF表达和细胞外基质(ECM)合成.     

低表达Smad4对肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化的影响

目的:探讨低表达Smad4调控上皮间质转化影响肝癌细胞(hepatocellular carcinoma cells,HCC)侵袭转移的相关机制.方法:采用Western blot法观察低表达Smad4对β-catenin和Vimentin总蛋白表达水平的影响;逆转录PCR法测定低表达Smad4后,β-catenin和VimentinmRNA表达的变化;细胞免疫荧光法检测Smad4、β-catenin和Vimentin在肝癌细胞SMMC-7721及其转染组中的定位及荧光表达强度.结果:低表达Smad4后,相较于CON组和RNAi-NC组,在转染组RNAi-Smad4-2和RNAi-Smad4-12细胞中,β-cateninmRNA和相应总蛋白的表达水平明显增加(P<0.05),并促使其发生了核转位的改变;另一方面,在RNAi-Smad4-2和RNAi-Smad4-12两转染组细胞中,Vimentin的蛋白表达水平和相应胞浆荧光的表达强度比对照组明显下调(P<0.05),相应mRNA的表达水平在肝癌SMMC-7721细胞及其转染组无显著差异.结论:低表达Smad4可调控上皮间质转化相关标志物β-catenin和Vimentin的表达,发挥抑制肝癌SMMC-7721细胞上皮间质转化的作用.     

p38 MAPK和JNK信号通道在TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞上皮-间质转化中的意义

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）和c-Jun氨基端激酶（JNK）信号通道在转化生长因子β1 （TGF-β1）诱导的人肺泡上皮细胞上皮-间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）中的意义,从而进一步揭示肺纤维化的发病机制.方法 使用TGF-β1诱导A549细胞EMT,分别在蛋白水平（使用p38 MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125）和RNA水平（RNA干扰）抑制p38 MAPK和JNK信号通道,检测抑制后A549细胞的p38 MAPK和JNK的蛋白和mRNA,以及间质细胞表型蛋白包括结蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白和上皮细胞表型蛋白包括E-钙黏素、紧密连接蛋白-1、水通道蛋白-5的表达.结果 TGF-β1可以诱导A549细胞EMT,表现为间质细胞表型蛋白表达的增加和上皮细胞表型蛋白表达的减少,这一过程p38 MAPK和JNK通道表达也增加,无论蛋白水平抑制或基因沉默p38 MAPK和JNK均可减轻A549细胞的EMT.结论 p38 MAPK和JNK信号通道在TGF-β1诱导的A549细胞EMT过程中起重要作用.     

沙利度胺对肺泡上皮细胞上皮-间质转分化的作用

目的探讨沙利度胺对A549上皮-间质转分化的作用,阐明其抗肺纤维化的机理。方法 A549细胞分为3组,A:对照组;B:TGF-β1+DMSO组;C:TGF-β1+沙利度胺组。通过免疫印迹法检测A549细胞磷酸化p38 MAPK和JNK的蛋白,以及间质表型蛋白和上皮表型蛋白的表达;实时荧光定量PCR方法检测A549细胞p38 MAPK和JNK mRNA的表达。结果沙利度胺显著抑制(P0.05)TGF-β1诱导的A549细胞间质表型蛋白表达增加,可阻止(P0.05)A549细胞上皮表型蛋白表达的减少,显著减少活性MAPK蛋白及mRNA的表达(P0.05)。结论沙利度胺可能通过p38MAPK和JNK信号通道,从而抑制肺泡上皮细胞的上皮-间质转分化过程而发挥抗纤维化作用。     

去甲肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞SR-A1和转化生长因子-β1表达的影响

目的:探讨去甲肾上腺素对人THP-1源性巨噬细胞SR-A1和转化生长因子(TGF)-β1表达的影响.方法:不同浓度的去甲肾上腺素(10 pmol/L～10 μmol/L)作用THP-1源性巨噬细胞24 h,运用逆转录多聚酶链反应检测SR-A1和TGF-β1 mRNA的表达,Western-Blot检测SR-A1蛋白的表达,酶联免疫吸附试验检测TGF-β1蛋白的表达.结果:1 μmol/L及10 μmol/L的去甲肾上腺素作用THP-1源性巨噬细胞后,SR-A1 mRNA和蛋白表达上调,100 nmol/L 、1 μmol/L及10 μmol/L的去甲肾上腺素引起巨噬细胞中 TGF-β1 mRNA和蛋白水平均下降(均P＜0.05).结论:应激浓度的去甲肾上腺素能增加THP-1源性巨噬细胞SR-A1的表达,降低TGF-β1的表达.     

KIM-1在TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用

目的探讨肾脏损伤因子(KIM)-1在转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用。方法用TGF-β1刺激处理大鼠肾小管上皮细胞NRK52E,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平。在NRK52E中转染KIM-1 siRNA,给予TGF-β1刺激后,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mR-NA和蛋白水平。Western印迹法检测细胞中上皮间质转化(EMT)标志蛋白上皮钙黏附素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和纤维化因子结缔组织生长因子(CTGF)、1型胶原酶(Col1)、3型胶原酶(Col3)的表达。结果对照组+TGF-β1细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平明显高于对照组(P<0. 05)。干扰组+TGF-β1细胞中KIM-1表达水平显著低于对照组+TGF-β1,差异具有统计学意义(P<0. 05)。干扰组+TGF-β1细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,α-SMA表达水平降低,纤维化因子CTGF、Col1、Col3的表达也降低,与对照组+TGF-β1比较差异具有统计学意义(P<0. 05)。结论敲低KIM-1可以减少TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达,抑制肾小管上皮细胞EMT。     

TGF-β1诱导的上皮间质转化对人胆囊癌细胞系GBC-SD中侧群细胞表达的影响

目的:研究转化生长因子(TGF-β1)诱导的上皮问质转换(EMT)对人胆囊癌细胞系GBC-SD中侧群(SP)细胞表达的影响.方法:在体外培养的GBC-SD中加入TGF-β1后,相差倒置显微镜下观察细胞形态学变化,Western blot检测E-cadherin、Vimentin的表达改变,采用流式细胞术检测TGF-β1...     

Rac1对L02肝细胞株上皮细胞间质转化及增殖和凋亡的影响

目的检测Rac1在TGF-β1诱导的L02细胞上皮间质转化中的作用,及其对细胞增殖和凋亡的影响。方法应用不同活性的Rac1质粒pExRed-NLS Flag（空载体组）、pExRed-NLS Flag Rac1（野生型Rac1组）、pExRed-NLS Flag Rac1T17N（显性负调控Rac1组）、pExRed-NLS Flag Rac1G12V（持续活化型Rac1组）瞬时转染L02细胞,经5 ng/ml TGF-β1处理细胞。采用免疫印迹法检测融合蛋白Flag-Rac1表达,采用细胞免疫荧光及免疫印迹法检测Ck8和Vimentin表达,采用细胞划痕实验及Transwell法检测细胞迁移能力。使用不同浓度的Rac1特异性抑制剂NSC23766处理L02细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果四组质粒均成功瞬时转染到L02细胞中;与空载体组和野生型Rac1组比,持续活化型Rac1转染细胞Vimentin蛋白表达水平显著增高,CK8蛋白表达水平降低,细胞迁移能力增加;与空载体组和野生型Rac1组比,显性负调控Rac1转染细胞Vimentin蛋白表达水平降低,CK8蛋白表达水平增高,细胞迁移能力降低（P〈0.05）;在NSC23766处理L02细胞后,细胞增殖被抑制,但各处理组细胞凋亡无明显差异。结论 Rac1可促进TGF-β1诱导的L02肝细胞株上皮间质转化和细胞增殖,但对细胞凋亡无明显影响。     

Nr4a1拮抗剂抑制肺癌细胞的上皮-间质转化的作用机制

目的观察Nr4a1拮抗剂在αVβ6-ERK-ETS1通路中抑制肺癌细胞上皮-间质转化的作用。方法培养传代肺癌A549细胞系,分为实验组及对照组,两组均采用生长因子诱导上皮-间质转化过程,实验组采用Nr4a1拮抗剂阻断αVβ6-ERK-ETS1通路,对照组不采用拮抗剂,采用流式细胞术及Western印迹检测信号通路中相关蛋白表达水平。结果形态学上,实验组组细胞呈梭形或类似于成纤维细胞的形态,而对照组部分细胞呈圆形或卵圆形。Western印迹及流式细胞检测均发现对照组细胞上皮细胞标志物E-cadherin、γ-catenin及αvβ6表达均较处理前显著降低,而间质细胞标记物Nβ-cateinin、Vimentin表达则有不同程度升高(P<0.05)。结论 Nr4a1拮抗剂能够通过αVβ6-ERK-ETS1通路抑制肺癌细胞的上皮-间质转化。     

M2型巨噬细胞对大肠癌SW620上皮—间质转化的影响

目的探讨M2型巨噬细胞对大肠癌细胞上皮—间质转化的影响。方法采用人单核细胞白血病细胞株（THP-1）诱导成M2型巨噬细胞，用流式细胞术鉴定后与大肠癌细胞株SW620非接触式共培养（实验组），以其单独培养为对照（对照组）。分别在培养24、48、72h时用ELISA法测细胞液中TNF-α、TGF-β，用Western blot法测细胞中E—Cadherin、Vimentin蛋白。结果与对照组比较，观察组TNF-α、TGF-β水平及Vimentin蛋白表达明显上调，并随着培养时间的延长而增加；E—cadherin表达下调，并随着培养时间的延长而降低（P均〈0．05）。结论M2型巨噬细胞对SW620的上皮-间质转化有促进作用。     

MicroRNA-21在胃癌细胞中促进上皮-间质转化的研究

目的探讨MicroRNA-21在胃癌细胞上皮-间质转化中的作用及其机制。方法利用Lipofectamine 2000脂质体将miR-21 mimics、miR-21 inhibitor转染入AGS细胞中;Real-time聚合酶链反应(RT-PCR)法测定AGS细胞内miR-21的表达;采用划痕法、Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting方法检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达的表达变化。结果 AGS细胞转染miR-21 mimics后,细胞的迁移和侵袭能力均高于对照组(P<0.05),Western blot结果显示E-Cadherin、PTEN表达下降,Vimentin表达升高;AGS细胞转染miR-21 inhibitor后,细胞的迁移和侵袭能力均低于对照组(P<0.05);E-Cadherin、PTEN表达升高,Vimentin表达降低。结论 miR-21可以诱导AGS胃癌细胞迁移和侵袭。E-cadherin和PTEN表达下调和上调Vimentin可能是miR-21作用的分子机制。miR-21在胃癌肿瘤转移中可能起着重要作用,可能成为胃癌治疗的一个潜在靶点。