肝癌细胞不同制悬方法建立裸鼠移植瘤模型的比较

目的比较肝癌细胞不同制悬方法建立裸鼠皮下瘤及原位瘤模型,优选建模方法。方法将肝癌细胞分别采用PBS缓冲液(PBS组)、无血清DMEM溶液(DMEM组)和含10%血清的DMEM溶液(血清DMEM组)3种液体制悬后注入裸鼠皮下建立肝癌裸鼠皮下瘤模型,比较皮下瘤的体积、瘤重及成瘤率;将肝癌细胞分别采用PBS缓冲液(PBS组)、无血清DMEM溶液(DMEM组)和含10%血清的DMEM溶液(血清DMEM组)3种液体制悬后注入裸鼠肝脏建立肝癌裸鼠原位瘤模型,比较原位瘤的成瘤率。结果3组裸鼠皮下瘤模型的皮下瘤体积及瘤重相比,差异无统计学意义(P0.05),但是PBS组及DMEM组的成瘤率(90%和100%)明显高于血清DMEM组(40%),差异有统计学意义(P0.05);裸鼠原位瘤模型中PBS组的成瘤率(90%)明显高于DMEM组(40%)及血清DMEM组(20%),差异有统计学意义(P0.05)。结论采用PBS缓冲液或无血清DMEM溶液对肝癌细胞稀释制悬可以有效建立裸鼠皮下瘤模型,采用PBS缓冲液对肝癌细胞稀释制悬可以有效建立裸鼠原位瘤模型。     

人肝癌裸鼠移植模型的研究进展

肝癌的基础与临床研究迫切需要能真正模拟肝癌在人体内自然生长、侵袭及转移全部过程的动物模型.目前,人肝癌裸鼠移植模型是人体外最接近人类肝癌的整体实验模型,并且造模时间短,成功率高,按移植部位可以分为皮下移植、原位移植、腹腔移植以及转移模型.影响裸鼠移植模型建立的因素主要有人肝癌细胞或外科标本的特性、移植部位及移植癌细胞数量、裸鼠的品系和周龄以及生长环境和其他因素的影响.     

不同移植方法对脑胶质瘤大鼠骨髓间充质干细胞迁移能力的影响

目的观察移植方法对脑质瘤大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）迁移能力的影响。方法立体定向法建立大鼠C6脑胶质瘤模型。A组大鼠用小剂量缓激肽后经荷瘤侧颈内动脉灌注BMSCs组,B组经荷瘤侧颈内动脉灌注尾静脉灌注组,每组6只。免疫组化染色显示MSCs,观察其在正常脑组织和胶质瘤组织中的数量和分布规律。结果三组均可见BMSCs在胶质瘤组织中广泛分布,A组明显多于B、C组（P〈0.01）。BMSCs主要分布于肿瘤内部,在肿瘤与正常脑组织的交界处亦有分布。结论小剂量缓激肽有助于BMSCs进入胶质瘤组织。     

五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的作用及机制

目的探讨五味子多糖对裸鼠胶质瘤细胞的诱导凋亡作用的机制。方法体外提取和原代培养裸鼠胶质瘤细胞,将浓度为0、200、400和800μg/ml的五味子多糖作用于裸鼠胶质瘤细胞中培养48 h后,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测其上清液中Bax和Bcl-2的蛋白表达;细胞免疫组织化学法观察五味子多糖作用后裸鼠胶质瘤细胞Bax和Bcl-2阳性表达率。结果不同浓度五味子多糖作用细胞后,细胞培养上清中Bcl-2蛋白表达水平均下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),Bax/Bcl-2值均升高(P<0.01)。细胞免疫组化结果显示,400和800μg/ml多糖组Bax阳性表达率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。400和800μg/ml多糖组Bcl-2阳性表达率下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的机制可能是通过上调Bax/Bcl-2比值,使促凋亡因素占优势,从而使胶质瘤细胞发生凋亡。     

荷瘤裸鼠膀胱癌原位模型的建立

目的通过细胞移植法建立模拟人的膀胱原位癌荷瘤裸鼠模型，为临床膀胱癌的防治提供新的思路。方法将人膀胱移行细胞癌株T24原位移植到裸鼠膀胱内后定期用磁共振成像（MRI）检测，并进行解剖，组织病理学和免疫细胞学检查。结果裸鼠膀胱内的癌发生率为94．0％（47／50），组织病理学检查：Ⅰ级23例，Ⅱ级15例，Ⅲ级9例，免疫细胞学证实该模型具有人膀胱移行细胞癌株T24的特性。结论模拟人的荷瘤裸鼠膀胱癌原位模型符合临床上膀胱肿瘤向膀胱内生长的过程，具有很强的实用性。     

两种不同途径沉默STAT3对乳腺癌裸鼠移植瘤的影响

目的应用RNA干扰技术沉默信号转导子与转录活化子3（STAT3）基因,探讨其siRNA通过瘤内注射和腹腔注射两种转染途径对裸鼠乳腺癌移植瘤的影响。方法制作乳腺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为空白对照组、瘤内注射组和腹腔注射组。取肿瘤行HE及免疫组化染色,采用W estern B lot法检测STAT3表达情况。结果瘤内注射组和腹腔注射组出现大面积细胞坏死及细胞凋亡现象,STAT3为阴性,且STAT3表达明显低于空白对照组（P〈0.05）,但前两组间比较无统计学差异（P〉0.05）。结论两种转染途径均可沉默STAT3基因,抑制其表达和肿瘤生长,但两种途径之间无显著性差异。     

单克隆靶向转移人肝癌细胞株和裸鼠移植模型的建立

目的 建立具有器官转移亲嗜性的单克隆人肝癌细胞株和相应的裸鼠移植模型. 方法 取肺和淋巴结转移亲嗜性人肝癌荧光细胞株HCCLM3-R-LM1及HCCLM3-R-LnM1,通过极限稀释法进行单细胞培养,获得8个HCCLM3-R-LM1来源的单克隆细胞株(LM1-S2,-S3,-S4,-S5,-S11,-S15,-S21,-S23)和5个HCCLM3-R-LnM1来源的单克隆细胞株(LnM1-S7,-S11,-S13,-S17,-S20);将上述人肝癌单克隆细胞分别接种于4周龄的裸鼠皮下,3周后皮下瘤组织移植至裸鼠的肝脏,6周后观察裸鼠肺和腹腔淋巴结转移灶荧光面积,并与肺组织连续切片中的转移灶数目进行比较.同一株细胞的肺和淋巴结转移情况比较用Wilcoxon秩和检验,单克隆细胞株之间的肺、淋巴结转移情况比较用Kruskal-Wallis检验. 结果 在13株人肝癌单克隆细胞中,有6株细胞形成皮下瘤;移植至裸鼠肝脏后表现出不同的转移潜能和器官靶向特性.其中LM1-S3,LM1-S4,LM1-S5和LM1-S11单克隆细胞的肺转移积分吸光度值分别为80923±10162、1506000±297064、36 140±8210和508448±1342729(P＜0.01),但不发生淋巴结转移.LnM1-S11单克隆细胞的肺与淋巴结转移灶积分吸光度值分别为435 062±206 620和1254000±225171. 结论 成功建成了不同转移潜能和器官亲嗜性的人肝癌单克隆细胞株和裸鼠移植模型,其中LM1-S3,LM1-S4,LM1-S5和LM1-S11为肺特异亲嗜性的人肝癌单克隆细胞株,而LnM1-S11细胞为肺和淋巴结双重亲嗜性的人肝癌单克隆细胞株,为肝癌转移器官靶向性研究提供了理想的体内外模型.     

脑胶质瘤患者脑脊液肝细胞生长因子水平变化及意义

目的探讨脑胶质瘤患者脑脊液中肝细胞生长因子(HGF)水平变化及意义。方法选择原发脑胶质瘤患者56例(胶质瘤组),其中Ⅰ、Ⅱ级(低级别)26例,Ⅲ、Ⅳ级(高级别)30例;另选20例颅脑损伤、脑出血行减压术患者为对照1组,20例需要行腰麻手术的腹股沟疝患者为对照2组。采用ELISA法检测各组脑脊液HGF水平;分析脑脊液HGF水平与胶质瘤患者临床病理参数的关系。结果胶质瘤组脑脊液HGF水平为(658±35)pg/m L,其中低级别、高级别者分别为(428±27)、(893±78)pg/m L;对照1、2组分别为(168±25)、(147±18)pg/m L。胶质瘤组明显高于对照1、2组(P均<0.05),高级别患者高于低级别患者(P<0.05)。脑脊液HGF水平与脑胶质瘤患者性别、年龄、肿瘤直径及部位无关(P均>0.05)。结论胶质瘤患者脑脊液HGF水平升高,且水平越高提示恶性程度越高。     

人肝癌肺和淋巴结靶向转移细胞及裸鼠移植模型的建立

目的 克隆具有肺和淋巴结转移亲嗜性的人肝癌细胞并建立相应的裸鼠移植模型.方法 将荧光人肝癌细胞HCCLM3-R接种于4周龄的裸鼠肝脏,6周后在荧光解剖下观察并获取肺及腹腔淋巴结转移灶组织,经体外克隆培养,所获细胞分别标记为HCCLM3-R-LM1和HCCLM3-R-LnM1.接种上述两种细胞于4周龄裸鼠肝脏,观察各自肺和腹腔淋巴结转移灶荧光数量,并与肺组织连续切片中的转移灶数目进行比较.计量资料采用Wilcoxon秩和检验和Kruskal-Wallis秩和检验进行统计学分析.结果 HCCLM3-R-LM1、HCCLM3-R和HCCLM3-R-LnM1细胞接种于裸鼠肝脏后第6周,在肺和腹腔淋巴结中均能发现肿瘤转移.3株细胞接种后,裸鼠肺和腹腔淋巴结转移灶荧光面积分别为8687.00±1844.63和2570.00±318.20(P＜0.001),6457.67±832.62和10 994.33±2212.31(P＜0.001),2968.67±2571.00和24 416.00±7186.13(P＜0.001),每只裸鼠光镜下肺转移灶中位数分别为755、430、310个(P＜0.001),与荧光定量结果相吻合.结论 成功建成人肝癌肺和淋巴结亲嗜性转移细胞和裸鼠移植模型,其中HCCLM3-R-LM1细胞具有明显的肺转移特性,而HCCLM3-R-LnM1细胞具有明显的淋巴结转移特性,为肝癌器官靶向转移研究提供了理想的体内外模型.

Abstract：

Objective To establish a systematic site-specific metastatsis model of human hepatocellular carcinoma (HCC) in nude mouse.Methods HCCLM3-R cells were seeded into mice liver to establish xenograft mouse models.With the help of RFP,metastasis foci in lungs and lymph nodes in mice were detected using fluorescent stereomicroscopy and were removed.Cells derived from the metastasis foci were named HCCLM3-R-LM1 and HCCLM3-R-LnM1 respectively.HCCLM3-R-LM1 and HCCLM3-R-LnM1 cells were seeded into mice livers to analyze the lung and lymph node metastasis.Lungs of all tested mice were collected,examined by pathological evaluation and counted lung metastasis.Results Both lung and lymph node metastasis were found in HCCLM3-R-LM1,HCCLM3-R and HCCLM3-R-LnM1 cells and a significant difference was found between the lung and the lymph node metastasis levels in the three cells.The fluorescent areas (pixels) of lung and lymph node metastasis were 8687.00 ± 1844.63 versus 2570.00 ±318.20 (P = 0.0031) in HCCLM3-R-LM1 cells,6457.67±832.62 versus 10 994.33±2 212.31(P=0.0036) in HCCLM3-R cells,and 2968.67 ± 2571.00 versus 24 416.00 ± 7 186.13 (P = 0.0094) in HCCLM3-R-LnM 1 cells,respectively.The middle numbers of microscopic lung metastatic foci were 775,430 and 310in HCCLM3-R-LM1,HCCLM3-R and HCCLM3-R-LnM1 cells (P＜0.001),respectively,consist with the results quantified by RFP.Conclusion We established the systematic site-specific metastasis models which demonstrates lung- and lymph node-specific metastasis potential in nude mice and can be used as a model for researches on site-specific metastasis of HCC.     

裸鼠皮下泡型棘球蚴病移植瘤模型的建立

目的建立裸鼠皮下泡型棘球蚴病移植瘤模型,为进一步深入研究泡型棘球蚴病奠定基础。方法选取25只裸鼠进行20%泡型棘球蚴原头节混悬液0.1 ml颈背部皮下注射接种,观察记录病灶生长状况,术后6个月行台盼蓝染色观察原头节细胞活性。结果术后8 d左右可见皮下病灶结节;模型建立3个月后裸鼠存活率为92%(23/25),泡型棘球蚴感染率为100%(23/23);少量原头节死亡,台盼蓝染色蓝色,原头节细胞活力为98%。结论泡型棘球蚴能够成功移植于裸鼠皮下,可为进一步建立泡型棘球蚴病的动物模型提供参考。     

基于PC的胶质瘤三维可视化模型的建立

目的建立基于个人计算机（PC）平台胶质瘤三维可视化模型方法选取经病理证实的弥漫性胶质瘤患者的CT/MRI图像,在PC平台,利用Mimics 10.01软件,对颅骨、脑组织及肿瘤组织CT/MRI图像进行数据分割,分别进行三维数字模型重建,通过三维模型空间配准融合,建立胶质瘤三维可视化模型。结果在PC机平台利用Mimics软件处理后,得到胶质瘤三维可视化模型,能翻转、放大,清晰度高,立体感强,可直观、全面的观察病灶的形态及其局部解剖特征。结论利用PC及Mimics软件能建立符合临床应用要求的胶质瘤三维可视化模型。     

微囊化人胰腺癌细胞建立裸鼠胰腺癌模型研究

目的研究微囊化人胰腺癌细胞建立裸鼠胰腺癌模型效果,以期建立稳定的更为理想的胰腺癌动物模型.方法 分别以人胰腺癌细胞悬液和微囊化人胰腺癌细胞悬液建立皮下移植瘤模型,定期监测皮下肿瘤大小,绘制生长曲线并进行比较.分别以人胰腺癌细胞悬液和微囊化人胰腺癌细胞建立原位移植瘤模型,分别于模型建立后第4周和第8周进行正电子发射计算机...     

不同U87细胞数量对裸鼠原位恶性胶质瘤模型构建的影响

目的 观察不同数量的人恶性胶质瘤U87细胞对裸鼠原位恶性胶质瘤模型构建的影响。方法 将20只裸鼠随机分成A、B、C、D组各5只,于右侧纹状体分别注射0、0.05×105、0.2×105、1×105/μL的U87细胞悬液5μL。接种前及接种后4周称取体质量,接种4周后取脑组织测量肿瘤体积,并行脑组织病理检查。结果 接种后4周,D组体质量较A组降低(P<0.05),其他组间无统计学意义。A组无肿瘤形成,脑组织病理检查未见异常;B、C、D组均可见肿瘤组织,细胞核中Ki-67蛋白表达强阳性;肿瘤体积分别为(1.57±0.09)、(4.25±1.15)、(16.32±0.41)mm3,组间比较,P均<0.05。结论 U87细胞颅内接种可构建原位恶性胶质瘤模型,且接种细胞数量越多建模效果越好。     

EGF对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响及意义

目的探讨表皮生长因子（EGF）对人脑胶质瘤细胞U251增殖的影响。方法分别用10、50、100、200ng/ml的EGF作用于U251（实验组）,以不加EGF的细胞为对照组。采用倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测U251细胞增殖活力,细胞免疫组化染色法检测U251中Ki-67。结果与对照组比较,实验组贴壁瘤细胞数量明显增加,排列密集。随着EGF浓度提高,U251的增值能力增加,呈剂量依赖性（P〈0.05）,以100 ng/ml的EGF促细胞增殖能力最强;200 ng/ml的EGF对U251细胞促增殖作用减弱。在100 ng/ml的EGF作用下,U251中Ki-67的表达较对照组明显升高（P〈0.05）。结论一定浓度的EGF可以促进U251增殖;EGF可以双向调节U251细胞的生物学活性,在细胞信号传导通路中发挥重要作用。     

脑胶质瘤组织中BDNF和TrkB表达及临床意义

目的探讨脑源性神经营养因子（BDNF）及其受体酪氨酸激酶B（TrkB）在人脑胶质瘤发生、发展中的作用。方法选择脑胶质瘤组织标本48份（胶质瘤组）,正常脑组织48份（正常组）,采用免疫组化法检测两组BD-NF和TrkB蛋白表达,RT-PCR法检测BDNF和TrkBmRNA相对表达量,并分析BDNF和TrkB蛋白、mRNA与脑胶质瘤临床病理参数的关系,采用Spearman等级相关分析法分析BDNF、TrkB蛋白和BDNF、TrkBmRNA的相关性。结果胶质瘤组及正常组BDNF蛋白阳性率分别为77．1％．41．7％,TrkB蛋白的阳性率分别为81．2％、54．2％,两组比较P均〈0．05;胶质瘤组及正常组BDNFmRNA的相对表达量分别为0．76±0．15、0．48±0．07,TrkBmRNA的相对表达量分别为0．82±0．09、0．53±0．10,两组比较P均〈0．05。BDNF和TrkB蛋白、mRNA与脑胶质瘤病理分级相关,而与性别、年龄无关。BDNF、TrkB蛋白和BDNF、TrkBmRNA呈正相关。结论BDNF和TrkB在胶质瘤的发生、发展过程中可能起重要作用。     

SLP-2 siRNA对裸鼠胃癌移植瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨SLP-2siRNA对裸鼠胃癌移植瘤细胞增殖及凋亡的影响.方法:设计合成化学修饰的SLP-2siRNA,将胃癌细胞SGC-7901接种于裸鼠皮下建立裸鼠胃癌移植瘤模型,随机分为转染SLP-2siRNA组、阴性对照组和空白对照组,于肿瘤局部分别多点多次注射化学修饰SLP-2siRNA、阴性对照siRNA及生理盐水.检测3组移植瘤细胞增殖及凋亡状况,RT-PCR及免疫组织化学技术检测移植瘤细胞内SLP-2mRNA及蛋白的表达.结果:与两对照组相比,注射化学修饰的SLP-2siRNA后,裸鼠胃癌移植瘤细胞生长速度减慢、移植瘤体积减小(P=0.009,P=0.003).抑制瘤率分别为26.74%和30.15%,细胞凋亡无明显变化(P>0.05),肿瘤细胞内SLP-2mRNA及蛋白的表达量降低.结论:SLP-2siRNA可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长,但对细胞凋亡无影响,提示SLP-2基因参与促进胃癌细胞增殖.     

脑胶质瘤患者手术前后脑脊液中 TNF-α水平的变化及意义

目的：探讨脑胶质瘤患者手术前后脑脊液（ CSF）中TNF-α水平的变化及临床意义。方法选择脑胶质瘤患者37例（观察组）,另取腹股沟疝或大隐静脉曲张行腰麻手术患者42例（对照组）。分别于术前3 d、术后3～10 d采集CSF,采用ELISA法检测CSF中TNF-α水平。结果观察组手术前后TNF-α水平明显高于对照组（ P均＜0．01）,且其术后CSF中TNF-α水平明显高于术前（P＜0．01）。观察组手术前后病理分级Ⅲ级及以上者CSF中TNF-α水平明显高于I～Ⅱ级者（P均＜0．01）。结论脑胶质瘤患者CSF中TNF-α水平明显升高,并可作为其病理分级和预后判断的指标之一。     

两种细胞制作的人肝癌裸鼠模型转移性状的比较

目的 比较两种人肝癌细胞株(HCCLM3和SMMC-7721细胞)构建的人肝癌裸鼠模型的转移潜能.方法 实验分为两组:应用HCCLM3细胞构建的人肝癌裸鼠模型组为A组,SMMC-7721细胞构建的模型组为B组.比较A组和B组的原发灶的肿瘤大小和病理检查结果.比较各组的肝内转移率、转移数目,累及的肝叶数以及转移肿瘤体积的大小.所有数据由SPSS16.0软件分析,计量资料采用t检验,率的比较采用Fisher确切概率法,计数资料采用秩和检验.结果 A组的肝内转移率为100%(8/8)、肝内原发肿瘤体积为(6954±1945)mm~3,B组的肝内转移率为62.5%(5/8)、肝内原发肿瘤体积为(6034±2035)mm~3,两组肝内转移率和原发灶肿瘤体积大小比较,差异无统计学意义.肝内转移的数目、累及肝叶数、转移肿瘤的体积大小A组分别为4.5个(中位数)、3个和975 mm~3(中位数),B组分别为1个(中位数)、1个和274 mm~3(中位数),两组比较,Z值分别为-2.818、-2.289和-1.975,P值均<0.05,差异均有统计学意义.两组在肺转移率(P=0.001)和累及其他脏器个数(P=0.041)的比较,差异均具有统计学意义.结论 HCCLM3细胞制作的人肝癌裸鼠转移模型具有高转移潜能,可应用于人肝癌的生物性状的研究.     

人胃癌裸鼠原位移植模型的生物学行为研究

目的建立人胃癌裸鼠胃壁原位移植瘤模型，并与相应的皮下移植瘤作比较，以探讨宿主器官微环境对胃癌细胞浸润及转移等生物学行为的影响．方法将人胃癌细胞系ＭＧｃ８０３及其克隆株Ｃ１１癌细胞分别接种于裸鼠胃壁及背部皮下，比较原位和皮下移植瘤的成瘤率、生长率、生长方式及浸润、转移等生物学行为，以及体外回复培养后瘤细胞的增殖能力．结果胃壁原位及皮下移植瘤体内成瘤率、生长率及形态学上均无明显不同；其体外增殖能力也无显著性差异．但皮下移植瘤多呈局限性生长，无肝、脾、肾转移，其转移仅限于肺及个别局部淋巴结．胃壁原位移植瘤则浸润破坏胃壁各层组织结构，并直接蔓延到邻近各器官组织．其转移既有经血道至肝、肺、脾、肾等部位，也有经淋巴道至多数局部及远处淋巴结，其淋巴结的转移率较皮下移植瘤有显著增高（Ｐ＜００５）；且多伴有腹、盆腔内广泛种植性转移．结论裸鼠胃壁微环境较皮下组织更适合于人胃癌ＭＧｃ８０３及Ｃ１１移植瘤的浸润及转移的表达，该原位移植瘤模型的恶性生物学行为更接近临床胃癌患者的体内侵袭及转移的实际．     

cyclinA和p27kip1在脑胶质瘤中的表达变化及意义

目的探讨cyclinA和p27kip1在脑胶质瘤中的表达及意义。方法采用S-P免疫组织化学法检测10例正常脑组织、80例人脑胶质瘤组织中cyclinA和p27kip1的表达。结果 10例正常脑组织中未出现cyclinA阳性染色,cyclinA、p27kip1在Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤组织中的表达明显高于其在Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤组织中的表达(P均<0.05)。cyclinA和p27kip1在人脑胶质瘤中的表达呈负相关(r=-0.298,P<0.05)。结论 cyclinA和p27kip1在脑胶质瘤的发生中可能起重要作用,二者与胶质瘤的恶性程度相关。