姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠认知功能、炎症反应及海马区突触素表达的影响

目的 探讨姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠认知功能、炎症反应及海马区突触素表达的影响。方法 60只6月龄APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分为A组、B组和C组,各20只;A组采用姜黄素100mg/kg/d加入小鼠饲料喂养,B组采用姜黄素300mg/kg/d喂养,C组采用姜黄素600mg/kg/d喂养;3组均喂养6个月。治疗前、治疗3、6个月,采用Morris水迷宫实验评估小鼠认知功能,采用免疫吸附试验法检测尾静脉血血清白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎症因子水平;治疗6个月,采用免疫组化染色法检测小鼠海马 CA1 区突触素表达情况。结果 姜黄素治疗3、6个月,3组小鼠认知功能明显改善（P<0.05）,血清IL-6、TNF-α水平明显降低（P<0.05）。与A组比较,B组和C组治疗3、6个月认知功能明显改善（P<0.05）,血清IL-6、TNF-α水平均明显降低（P<0.05）,海马CA1区突触素表达水平明显升高（P<0.05）。而B组与C组均无统计学差异（P>0.05）。结论 姜黄素有助于改善APP/PS1双转基因小鼠海马突触素表达,抑制小鼠炎症反应,改善小鼠认知功能。     

小檗碱对三转基因阿尔茨海默病小鼠的学习记忆和海马PSD95突触相关蛋白表达水平的影响

目的 探讨小檗碱(BBR)对三转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠的学习记忆及海马组织PSD95突触蛋白表达水平的影响。方法 将30只三转基因(APP/Tau/PS1)AD小鼠按随机数字表法分成3组,即AD对照组、AD+25 mgBBR组、AD+50 mgBBR,每组各10只,后2组以灌胃方式且剂量分别为25 mg·kg^-1·d^-1、50 mg·kg^-1·d^-1,对照组给予等剂量生理盐水连续3个月灌胃处理; 采用Morris水迷宫方法探测各组AD小鼠行为学改变、空间记忆及探索情况; 免疫荧光染色检测各组小鼠海马组织突触后致密蛋白95(PSD95)阳性表达水平; Western blotting(WB)法检测各组三转基因AD小鼠海马脑组织PSD95蛋白、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达水平及微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)自噬水平。结果 AD+25 mgBBR组的逃避潜伏期的学习记忆能力、免疫荧光PSD95表达水平以及PSD995、LC3-Ⅱ、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平与AD对照组比较均有明显差异(P<0.05); AD+50 mgBBR组逃避潜伏期的学习记忆能力、免疫荧光PSD95表达水平以及LC3-Ⅱ、p-Akt、p-mTOR表达水平与AD对照组比较差异均更明显(P<0.05,P<0.01)。结论 应用50 mg小檗碱能较好改善三转基因AD小鼠的学习记忆、空间探索能力,其机制可能是通过增加自噬水平LC3-Ⅱ调控Akt/mTOR信号通路,增加突触蛋白PSD95的表达水平及突触数量,以改善AD相关临床症状。     

加兰他敏对APP/PS1转基因小鼠海马区星形胶质细活化及C/EBPβ表达的影响

目的研究加兰他敏对APP/PS1转基因小鼠海马区星形胶质细胞活化、C/EBPβ表达及行为学的影响。方法选取10月龄雄性APP/PS1转基因小鼠20只,随机分为模型对照组(10只)和治疗组(10只),同月龄、同背景的C57BL/6野生型雄性小鼠10只作为正常对照组。治疗组皮下注射加兰他敏溶液5mg/kg,2次/d,连续治疗8周,正常对照组和模型对照组给予皮下注射等量生理盐水。应用Morris水迷宫实验于干预治疗8周后开始测定各组小鼠空间学习记忆能力,连续7d,采用免疫组织化学、免疫荧光及Western-blot方法观察各组小鼠海马区星形胶质细胞活化及C/EBPβ表达水平。结果与正常对照组相比,模型对照组和治疗组小鼠Morris检测第5、6天平均逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少(P0.05,P0.05),而治疗组其逃避潜伏期较模型对照组缩短(P0.05),穿越平台次数增多(P0.05);同时治疗组小鼠星形胶质细胞活化被明显抑制,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的阳性表达面积〔(5.003±0.823)%〕及C/EBPβ的表达量(87.711±14.622)较模型对照组〔(7.116±1.040)%,119.920±16.901〕明显减少(P0.05,P0.05)。结论加兰他敏改善APP/PS1转基因AD小鼠的学习记忆能力可能与其抑制星形胶质细胞的活化及C/EBPβ的表达有关。     

电针对海洛因成瘾大鼠学习记忆及海马神经细胞凋亡的影响

目的:探讨电针对海洛因成瘾大鼠学习记忆及海马神经细胞凋亡的影响及机制.方法:采用递增法建立海洛因成瘾大鼠模型,设对照组、成瘾组、成瘾+电针处理组(电针组).三组大鼠跳台实验测试大鼠学习记忆,并取三组大鼠脑海马组织,运用流式细胞仪检测细胞凋亡).结果:跳台实验结果表明:与对照组比较,成瘾组大鼠学习记忆成绩降低(P<0.0...     

五味子酮对APP转基因鼠神经干细胞分化中Tau蛋白过磷酸化水平的影响

背景：华中五味子酮有强的抗氧化活性,可高效清除羟自由基和超氧阴离子,对处于活性氧应激状态下的细胞具有保护作用。神经元内神经原纤维缠结主要是由异常磷酸化的Tau蛋白组成,与阿尔茨海默病的严重程度呈正相关。 目的：探讨五味子酮在APP转基因小鼠神经干细胞诱导分化成神经细胞的过程中对Tau蛋白磷酸化的作用。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2006-07/2008-10在郑州大学医学实验中心完成。 材料：自中国协和医科大学遗传动物中心购得APP基因突变小鼠30只,五味子酮由河南省中医研究院药物所提供。 方法：剪取新生APP转基因小鼠尾尖,常规提取DNA,采用PCR法检测动物是否携带有APP基因,APP转基因阳性鼠记为“APP+”,APP转基因阴性鼠记为“APP-”。分别取APP+鼠和APP-鼠海马部位脑组织,体外分离培养神经干细胞,并将纯化的神经干细胞向神经细胞方向诱导分化。将从APP+鼠来源的细胞分为五味子酮组、APP+细胞对照组,将APP-鼠来源的细胞设为APP-细胞对照组。五味子酮组向细胞培养液中加入终浓度为50 μmol/L的五味子酮溶液,余2组加入相同容积的PBS,培养24 h。 主要观察指标：免疫荧光化学和免疫印迹分析测定APP+、APP-细胞Tau蛋白在262、396位点的磷酸化水平。 结果：与APP+细胞对照组比较,五味子酮组细胞荧光强度减轻,Tau[Ps262]、Tau[Ps396]的磷酸化水平均降低,且Tau[Ps396]位点的磷酸化水平降低尤为明显。APP-细胞对照组Tau[Ps262]、Tau[Ps396]磷酸化水平均较低。 结论：在APP转基因小鼠神经干细胞诱导分化过程中,五味子酮可以明显降低Tau蛋白在396、262位点的磷酸化水平,减轻神经元损伤,但其磷酸化程度并未达到阴性细胞水平。     

17β雌二醇对氯胺酮诱导发育期大鼠皮质神经细胞凋亡的影响

目的探讨17β雌二醇对氯胺酮诱导发育期大鼠额叶皮质区神经细胞凋亡的影响以及机制。方法30只7日龄雄性SD幼鼠,随机分为对照组(C组)、氯胺酮组(K组)、氯胺酮+17β雌二醇组(K+E组),每组10只。C组连续3 d腹腔注射等容量生理盐水;K组连续3 d腹腔注射75 mg/kg氯胺酮;K+E组连续3 d腹腔注射75mg/kg氯胺酮同时皮下注射600μg/kg 17β雌二醇。末次注药后24 h,取额叶皮质应用TUNEL法检测神经细胞凋亡,同时应用Western-blot法检测bcl-2,Bax以及cleaved-caspase-3蛋白的水平。结果与对照组比较,氯胺酮组皮质区凋亡细胞显著性增加(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著性下降(P<0.01),Bax蛋白水平显著性增加(P<0.01),Bcl-2/Bax显著性降低(P<0.01),cleaved-caspase-3蛋白水平显著性增加(P<0.01)。与氯胺酮组比较,氯胺酮+17β雌二醇组皮质区凋亡细胞显著性下降(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著性增加(P<0.01),Bax蛋白水平显著下降(P<0.01),Bcl-2/Bax显著性增加(P<0.01),cleaved-caspase-3蛋白水平显著性下降(P<0.01)。结论 17β雌二醇可对氯胺酮诱导的发育期大鼠大脑皮质区神经细胞凋亡产生保护作用,其机制可能与影响bc1-2和Bax蛋白表达有关。     

去卵巢小鼠学习记忆能力与海马超微结构的改变

目的 观察去卵巢(OVX)小鼠学习记忆能力及脑超微结构的改变.方法 12只雌性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(SHAM组),去卵巢组(OVX组),造模后继续喂养12w.采用Morris水迷宫测试认知能力,透射电镜检测小鼠大脑超微结构的改变.结果 与SHAM组对比,OVX组小鼠的逃避潜伏期显著增加(P＜0.05),穿...     

转基因鼠载脂蛋白E基因表达异常对学习和记忆能力的影响

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凋亡相关基因caspase-3和NF-κB在阿尔茨海默病Tg2576转基因小鼠海马内的表达(英文)

目的探讨阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)的发生、发展与神经细胞凋亡之间的规律,尤其是NF-κB在神经细胞凋亡中的调节作用。方法以0-180日龄的Tg2576转基因小鼠作为研究对象,正常野生型小鼠为对照,应用caspase-3和NF-κB免疫组织化学、免疫荧光双标、Nissl染色、RT-PCR等方法进行研究。结果随着小鼠日龄的增长,对照组与模型组小鼠的海马CA3区锥体细胞中,凋亡细胞密度和NF-κB阳性细胞密度逐渐下降;出生14d以后,模型组凋亡细胞密度和NF-κB阳性细胞密度均高于对照组(P<0.05),且小鼠海马caspase-3mRNA表达水平与caspase-3免疫组织化学结果基本吻合。模型组NF-κB和caspase-3的表达水平均高于对照组。结论凋亡相关基因NF-κB和caspase-3在AD的发病机制中可能起重要作用,NF-κB与神经细胞凋亡有正相关关系。此外,caspase-3与NF-κB共同表达于同一细胞中,提示NF-κB的激活可能参与神经细胞凋亡的调节。     

17β-雌二醇对去势大鼠脑缺血半暗带区神经细胞凋亡的影响

目的:研究17β-雌二醇(E2)对去势大鼠脑缺血半暗带区细胞凋亡的影响以及脑保护作用。方法:利用E2 治疗1周的36只去势SD大鼠制作大脑中动脉缺血再灌注(MCAO／R)模型,缺血90min后再灌注48h后制作石蜡切 片,行TTC染色、TUNEL凋亡染色,显微镜下观察染色结果。结果:正常组织染成粉红色,梗死灶染成白色。和未治疗 组相比,治疗组脑梗死体积比减小(P<0．01),且神经细胞凋亡的数量也明显减少(P<0．01)。结论:E2可减少梗死体积 比并能通过减少神经细胞凋亡发挥神经保护作用。     

β-淀粉样多肽诱导神经元凋亡和氧化应激机制的实验观察

目的 :观察 β 淀粉样多肽 (Aβ)的神经毒性作用及其氧化应激机制。 方法 :取 2 0只大鼠 ,每组 10只 ,实验组双侧海马内注射Aβ2 5 35,对照组注射生理盐水 ;HE染色和TUNEL方法检测凋亡 ;另一侧海马组织制成脑匀浆 ,比色法测定丙二醛 (MDA)、还原型谷光甘肽 (GSH)、过氧化氢酶 (CAT)和谷光甘肽过氧化物酶 (GSH Px)活力 ;统计学分析用t检验。结果 :HE染色和TUNEL法检测实验组可见散在凋亡神经元。与对照组相比 ,实验组MDA水平增加 ,GSH水平降低 ,CAT和GSH Px活力降低。结论 :Aβ可诱导神经元凋亡 ,其机制有氧化应激机制介导     

Ciliary Neurotrophic Factor Constitutively Expressed in the Nervous System of Transgenic Mice Protects Embryonic Dorsal Root Ganglion Neurons from Apoptosis

Ciliary neurotrophic factor (CNTF) is a potent survival factor for several neuronal populations. It is expressed postnatally by Schwann cells in the peripheral nervous system and by some glial and neuronal cells in the central nervous system. We used the promoter of the neurofilament light chain gene to produce transgenic mice that express CNTF in neurons from the beginning of neuronal differentiation. These transgenic animals may represent a suitable model to identify neuronal cell types responsive to CNTF in vivo and to study the mechanism of action of this neurotrophic factor. We show that dorsal root ganglion neurons of transgenic mice expressing CNTF in neurons are protected from apoptosis during embryonic development: 40% of these cells undergo apoptosis between embryonic day 12.5 and postnatal day 5 in transgenic mice whereas 60% do so in control animals. However, protection from apoptosis does not result in an increase in the total number of neurons at the end of development. We discuss our results with regard to CNTF potentialities in vivo and the significance of programmed cell death during development.     

阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因型与野生型小鼠学习记忆能力的比较

目的：比较不同年龄段阿尔茨海默病（AD）APPswe/PS1dE9双转基因型与野生型小鼠的学习记忆能力。方法：C57BL/6J雌鼠与C3H/HeJ雄鼠交配产下F1代,再将F1代与3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因型小鼠交配产下F2代。提取F2代小鼠鼠尾DNA,PCR扩增目的基因并鉴定。依据是否含APP和PS1基因分为转基因型组和野生型对照组,小鼠分别于6、8月龄行Morris水迷宫实验,11月龄行Y迷宫实验检测学习记忆能力。结果：繁育F2代小鼠33只,其中转基因型组18只,野生型对照组15只。6月龄转基因型与野生型小鼠定位航行实验潜伏期的差异无统计学意义,空间探索实验目标象限时间和路程百分比的差异无统计学意义（P〉0.05）。与8月龄野生型小鼠比较,转基因型小鼠定位航行实验第1天潜伏期延长（P〈0.05）。与11月龄野生型小鼠比较,转基因型小鼠达到学会标准的训练次数增加（P〈0.05）。结论：ADAPPswe/PS1dE9双转基因型与野生型小鼠比较,于11月龄时出现学习记忆能力障碍。     

The Effect of Phenobarbital on the Multiple Neuronal Activity in the Hippocampus of El Mice

Abstract: Phenobarbital (PB) (5, 25 and 50 mg/kg), which was administered intraperitoneally to evaluate the effect of it on El mice, inhibited convulsive seizures dose-dependently. On the other hand, microelectrodes were implanted continually into the hippocampus of El mice, after which changes in the neuronal activity caused by a seizure were studied, as well as the effect of PB (5, 25 and 50 mg/kg) on the neuronal activity. The neuronal activity increased during the convulsive seizure when compared to the neuronal activity as the mice moved about freely. Further, after the convulsive seizure, five or six groups of bursts were seen periodically. PB reduced the neuronal activity dose-dependently judging by the number of bursts in the initial group of bursts.     

Functional Analysis of Neurosteroidal Oestrogen Using Gene-Disrupted and Transgenic Mice

The brain aromatase (oestrogen synthase) hypothesis predicts that oestrogen plays important roles in both sexual behaviours and brain sexual differentiation. To elucidate the functions of oestrogen in the brain, we generated aromatase knockout (ArKO) mice, which showed undetectable oestrogen and enhanced androgen levels in blood. These ArKO mice exhibited an enhanced appetite and disorders in sexual motivation, sexual partnership preference, sexual performance, aggressive behaviour, parental behaviour, infanticide behaviour and exploratory (anxiety) behaviour. We characterised the brain-specific promoter of the mouse aromatase gene, and identified several crucial cis-acting elements and the minimal essential promoter region for brain-specific expression. Next, we introduced a transgene of human aromatase, controlled by the minimal promoter region, into the ArKO mouse. The resulting mouse (ArKO/hArom), whose preoptic area, hypothalamus and amygdala were exposed to oestrogens only in the perinatal period, and then to enhanced androgens and no oestrogens in adulthood, showed near recovery from behavioural disorders. These results suggest that local oestrogens acting in specific brain regions are involved in the organisation of sex-specific neural networks during the perinatal period. Finally, we examined effects of oestrogens on gene expression within specific brain regions in mice during the perinatal period using DNA microarray analysis. This assay revealed both up-regulated and down-regulated brain-specific genes, including those related to neuronal function. Specifically, genes involved in energy metabolism, cell proliferation/apoptosis and secretory/transport system were altered in ArKO mice compared to wild mice. These results suggest that brain oestrogens participate in the sexual differentiation of the brain by influencing gene expression.     

前脑缺血及再灌流对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 :探讨脑缺血及再灌流内皮素、降钙素基因相关肽和神经元凋亡变化规律及关系。方法 :前脑缺血及再灌流大鼠为模型 ,检测海马ET、CGRP含量和神经元凋亡。结果 :缺血后 1 5minET显著高于其他各组 ;再灌流后降低 ,1d时最低 ,2d时恢复正常。缺血后 1 5minCGRP显著低于其他各组 ;再灌流后升高 ,1d达高峰后下降。缺血后出现神经元凋亡 ,再灌流后仍增加 ,1d达高峰后下降。ET含量与凋亡细胞呈负相关。CGRP含量与凋亡细胞呈正相关。结论 :缺血和再灌流均可导致神经元凋亡。     

托吡酯对癫痫大鼠海马细胞外液氨基酸和神经元凋亡的影响

目的研究托吡酯对癫癎大鼠海马区细胞外液氨基酸和神经元凋亡的影响.方法采用戊四氮(PTZ)致癎模型,大鼠癫癎发作后连续给予托吡酯(TPM)80 mg·kg-1·d-1和卡马西平40 mg·kg-1·d-1,共14 d.以TUNEL方法标记DNA片段,原位检测海马凋亡的神经细胞.脑内微透析技术采集大鼠海马细胞外液,反相高效液相色谱技术测定氨基酸类神经递质的含量.结果TPM组、卡马西平组与对照组比较,凋亡细胞数存在显著差异(P＜0.001),TPM组与卡马西平组相比无显著差异(P＞0.05).TPM可明显升高海马细胞外液γ-氨基丁酸(GABA)水平,并降低谷氨酸(Glu)浓度.结论TPM可减轻大鼠癫癎发作后的神经元损伤,这种作用可能是氨基酸变化的结果;但在我们的实验中,没有发现TPM对癫癎后脑损伤比卡马西平有更明显的神经保护作用.     

神经生长因子对红藻氨酸诱导癫痫发作大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的　探讨外源性神经生长因子 (NGF)对癫痫发作所致海马神经细胞凋亡有无抑制作用。方法　采用红藻氨酸 (KA)诱导癫痫大鼠模型 ,以原位末端标记法 (TUNEL)标记 DNA片段 ,检测凋亡细胞在大鼠海马CA1区的动态变化及 NGF对其的影响。结果　海马 CA1区凋亡细胞在实验 2 4 h出现 ,4 8h明显增多 ,于 72h达高峰 ,7d时最少。给予 NGF脑室内注射后 ,在各相应时间点凋亡细胞数均明显减少 (P<0 .0 1)。结论　外源性 NGF能抑制癫痫发作所致的海马神经细胞凋亡 ,NGF对癫痫脑损伤有保护作用。     

癫痫发作大鼠海马神经元凋亡与caspase-3 mRNA表达的研究

目的 :研究癫大鼠海马神经元凋亡与caspase 3mRNA表达的关系。方法 :采用大鼠红藻氨酸 (KA)致模型 ,以原位末端标记 (TUNEL)检测癫后不同时间海马神经元凋亡 ;RT PCR检测caspase 3mRNA的表达。结果 :KA致后 1d ,海马CA1、CA3及CA4区开始出现凋亡细胞 ,3d时明显增多 ,7d时最多。KA致后 6h ,海马组织caspase 3mRNA表达显著增高 ,1、3、7d仍持续高水平表达。结论 :癫大鼠海马神经元凋亡与caspase 3mRNA的表达密切相关 ,caspase 3在神经元凋亡过程中起着重要的作用     

The Effects of Aging and Hormonal Manipulation on Amyloid Precursor Protein APP695 mRNA Expression in the Rat Hippocampus

In the rat hippocampus, neuronal morphology and survival are profoundly affected by adrenal steroids, and synaptic plasticity can be modulated by the ovarian sex steroids estrogen and progesterone, β-amyloid peptides, which accumulate in neuritic plaques and are derived from the amyloid precursor protein (APR), have been shown to be both trophic and toxic for hippocampal neurons. Of the various APR isoforms, APP695 is the predominant form found in rat brain and the APP695 mRNA is abundantly expressed in the hippocampus. In order to investigate the hypothesis that APR may serve as a mediator of the steroid effects, we have monitored the hippocampal expression of APP695 mRNA by in situ hybridization, with aging and with steroid manipulation. In aged female rats we observed a decrease in the level of APP695 mRNA relative to young female rats, while no such age difference was evident in male rats. Physiological, surgical and pharmacological manipulation of glucocorticoids appeared to have no effect on APP695 mRNA levels in the hippocampus. Treatment of young, ovariectomized female rats with estrogen and progesterone, resulted in an increase in hippocampal APP695 expression compared to untreated, ovariectomized controls.