慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定

目的：筛选并鉴定出慢性髓细胞性白血病（CML）K562细胞的寡核苷酸适体.方法：体外合成长度为88个碱基的随机单链DNA（ssDNA）文库,采用生物素-链霉亲和素磁珠法制备次级文库,以正常人血液中提取的中性粒细胞为反筛细胞,利用指数富集的配基系统进化（SELEX）技术筛选出与CMLK562细胞特异结合的适体.将筛选得到的适体回收纯化后连接pGEM-T质粒载体,经蓝白筛选后,随机挑选24个克隆子进行序列测定.采用荧光标记引物法检测ssDNA文库与K562细胞的亲和力,并用Clustal 2.05和DNA sis V2.5软件对适体序列进行一级结构同源性分析和二级结构预测.结果：经过13轮循环筛选,CML K562细胞适体的A值从0.12上升到1.25,至第13轮A值无明显增高.一级结构分析无同源序列,但可分为6个家族,其中5个家族各自具有保守序列,家族6无保守序列.二级结构分析表明,适体形成的茎环、凸环结构可能是与K562细胞特异性结合的结构基础.结论：利用SELEX技术成功筛选出高亲和性的CML K562细胞适体.     

急性髓系白血病细胞粘附分子表达特点

目的 研究急性髓系白血病(AML)中细胞粘附分子(CAM)的表达特点.方法 应用流式细胞仪间接免疫荧光技术检测85例AML中CAM的表达情况.结果 ①CAM表达阳性率:CD54 60.0%、CD11a 52.9%、CD49e 50.6%、CD49f 49.4%、CD11b 47.1%、CD11c 29.4%和CD15 16.5%;M1、M4和M5阳性率比较高,M0、M2和M3阳性率比较低,M7不表达CAM;②CD34阳性率60.0%.结论 AML中CAM表达与CD34细胞表达相一致.     

儿童急性淋巴细胞白血病髓系抗原的表达

急性淋巴细胞白血病 (ALL)是儿童最常见的急性白血病 ,约占白血病患儿总数的 75 %。应用单克隆抗体 (McAb)可精确地鉴定细胞表面或胞浆中免疫标志 ,分析细胞的分化阶段 ,对临床诊断、治疗与预后有重要的指导意义。大多数ALL患者的白血病细胞仅表达淋巴细胞抗原 ,但也有部分同时表达髓系抗原 ,ALL髓系抗原表达与临床及预后的关系目前尚无统一的结论。我们对本院收治的 2 9例儿童ALL免疫表型进行分析 ,旨在探讨儿童ALL髓系抗原表达与临床表现及预后的关系。1　资料与方法1.1.　一般资料　 2 9例均为 2 0 0 0年 1月— 2 0 0 3年 4月本院…     

急性淋巴细胞白血病髓系分化抗原的异常表达

目的:探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)髓系分化抗原(MyAg)的表达情况.方法:选择480例ALL患者,其中T细胞-ALL(T-ALL)92例,B细胞-ALL(B-ALL)388例,经血常规和骨髓细胞学检查确诊.抽取肝素抗凝骨髓,加入荧光标记的单克隆抗体,采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术免疫表型分析.结果:在480例ALL患者中,39.17%伴有MyAg的表达,最常见为CD13(25.42%),其在B-ALL各亚型中表达依次为B-前体ALL(40.00%)、前B-ALL(29.93%)、普通B-ALL(22.22%)、B-ALL(20.98%);CD13在T-ALL的阳性表达率为20.65%.CD33(16.04%)在B-ALL阳性表达率(17.27%)与T-ALL(10.87%)比较,差异无统计学意义.CD117也表达于ALL(4.17%),尤其是T-ALL(14.13%),而B-ALL阳性表达率为1.80%(P<0.01).结论:ALL最常表达的MyAg为CD13和CD33,CD117表达于T-ALL.     

急性髓系白血病细胞淋巴系分化抗原的表达

目的:探讨急性髓系白血病(AML)中淋巴系分化抗原(LyAg)的表达情况.方法:475例AML患者,FAB分型:AML-M0 31例,AML-M1 45例,AML-M2 218例,AML-M3 54例,AML-M4 18例,AML-M5 101例,AML-M6 4例,AML-M7 4例.采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术免疫表型分析.结果:在475例AML患者中,38.95%表达LyAg,其中T细胞相关抗原CD7表达最常见(27.58%),其在AML各亚型的表达依次为AML-M0 61.29%、AML-M1 40.00%、AML-M2 34.86%、AML-M5 16.83%.B细胞相关抗原CD19表达于少数AML患者(7.37%),主要是AML-M1(11.11%)、AML-M2(10.55%)和AML-M0(9.68%)患者.结论:CD7和CD19是AML最常表达的LyAg,其与AML-M0、AML-M1、AML-M2有关,与AML-M3关系不明显.     

急性髓细胞白血病细胞遗传学的研究进展

急性髓细胞白血病(AML)的发病率占整个急性白血病的77%,染色体异常涉及到FAB的各型。染色体异常不仅有数量的改变,而且有结构的变化,二者可同时发生,也可单独存在,在白血病获得完全缓解(CR)后可消失,复发时再出现,甚至出现新的染色体改变。1　数目异常8号染色体三体性( 8)　是AML中最常见的染色体异常[1]。可单独或同时伴有另外的染色体异常。大约17%的M3患者初诊时有 8,同时伴有t(15;17)。 8并非只见于某一特定的FAB的亚型,但在M1、M2和M5中多见,应用荧光点杂交技术能提高检出率[2]。除 8外,在AML中4、11、13、21和22号染色体的三…     

急性髓系白血病治疗进展

急性髓系白血病（AML）是一种常见的血液系统恶性肿瘤,我国AML的年发病率是1．62／100000,近年来有增加的趋势,且有越来越多的患者死于该病^［1］。AML分子遗传学的改变导致白血病细胞自我增殖、分化受阻、凋亡逃逸、自我更新增加、周期失控及弥漫侵润,随着细胞遗传学、免疫分型、分子遗传学以及最近展开的基因表达谱分析等领域的进展,对于急性白血病（AL）本质的认识也越来越深刻,与此同时．临床试验的开展也获得了相当的成功。     

急性髓系白血病干细胞研究进展

急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)是我国最常见的恶性血液病。根据白血病细胞分化受阻的阶段不同以及细胞遗传学上的差异将AML分为各亚型。以往的观点认为,不同分化阶段的髓系细胞恶性转化导致了AML表型上的差异。但种种体外分析表明,在白血病细胞群中,并非所有     

急性髓系白血病化疗早期细胞凋亡率与预后关系的研究

目的 探讨急性髓系白血病患者化疗早期细胞凋亡率与疾病预后的关系.方法 (1)所有对象均来源于2011年7月至2012年10月在潍坊医学院附属医院血液科接受住院化疗的初发AML患者20例;(2)所有患者均采用DA或IDA或HA方案诱导缓解;(3)应用流式细胞术(FCM)及AnnexinV-FITC/PI染色法检测患者化疗前1d及化疗第2d白血病细胞凋亡率.结果 (1)经诱导治疗7d后,完全缓解(complete remission,CR) 14例,未缓解(not remission,NR)6例;(2)化疗第2d白血病细胞凋亡率(9.31±2.42)％明显高于化疗前1 d(4.41±2.13)％,(P＜0.05);(3)化疗后CR组患者细胞凋亡率(10.12±2.23)％明显高于NR组(7.43±2.74)％(P＜0.05).结论 化疗早期细胞凋亡率可作为预测急性髓系白血病疗效的指标之一.     

bcl-2基因在急性髓系白血病细胞中的表达及意义

采用链霉亲和素过氧化酶免疫组织化学方法 (S -P法 )检测 30例初发成人急性髓系白血病(AML)患者的骨髓细胞bcl - 2蛋白表达 .结果 :( 1)AML患者骨髓细胞中bcl - 2蛋白阳性表达率为( 55 12± 2 3 78) % ( 19%～ 93% ) ,显著高于正常对照 (P <0 0 1) . ( 2 )AML按FAB分型各亚型间比较 :bcl- 2蛋白表达在M1,M2 型阳性率较高 ( 60 58± 19 0 5) % ;M3 型则较低 ( 2 1 50± 6 2 2 ) % ;M4 ,M5型最高( 69 64± 14 96) % . ( 3)经标准诱导治疗后 ,完全缓解 (CR)组的bcl- 2蛋白表达显著低于未缓解 (NR)组 (P <0 0 5) .提示 :bcl- 2蛋白在AML细胞中呈高表达 ,并为白血病化疗耐药的预后指标之一 .     

利用细胞-指数式富集的配体系统进化技术筛选肿瘤细胞DNA适配子

目的建立一种通用的细胞-指数式富集的配体系统进化（Cell—SELEX）技术平台,用于筛选特异性结合于肿瘤细胞的DNA适配子。方法采用PCR法建立随机双链DNA（dsDNA）寡核苷酸文库,用卵白素包被的琼脂糖珠从dsDNA库分离单链DNA（ssDNA）文库;以体外培养的肿瘤细胞作为正筛选的靶标,以相同组织来源的正常对照细胞作为负筛选的靶标,消减法进行Cell—SELEX筛选和PCR扩增以获取DNA适配子;流式细胞仪监测适配子的富集效率（亲和力）;采用常规分子生物学技术进行适西亡子的克隆、测序和序列分析。结果成功建立了ssDNA库,经过12轮Cell—SELEX筛选,获得了特异性结合于肿熘细胞的DNA适配子;挑选120个阳性克隆送测序,鉴定出21个适配子,采用NCBI网站提供的B]astn程序进行精确比对末发脱相似序列。结论本实验建立的技术平台可在较短时间内获取特异性结合于特定肿瘤细胞的DNA适配子。     

核酸适配子在疾病诊断研究中的应用

核酸适配子是通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)
技术从单链随机寡核苷酸文库中筛选得到的单链寡核苷酸配体,其与靶标的结合具有高特异性及高亲和力等优点,
使其能广泛地应用于疾病诊断研究。适配子在生化检测、新肿瘤标志物发现、分子成像、病原微生物检测等领域的
研究应用中均有报道,并显示出良好的应用前景。     

SELEX实验中核酸-蛋白复合物分离方法对富集库亲和力的影响

目的 比较SELEX实验中，核酸—蛋白复合物分离技术的差异对筛选富集库亲和力的影响。方法以β—转化生长因子Ⅱ型受体为靶目标，采用不同技术路线从ssDNA随机库中获取亲和富集库：技术路线1，靶目标预先被吸附到96孔微量滴定板后，再进行筛选，从滴定板上洗脱结合核酸；技术路线2，溶液中筛选、硝酸纤维膜截留核酸—蛋白复合物，从膜上回收结合核酸；通过膜结合测定、凝胶阻滞测定实验检测筛选富集库对靶目标的亲和力。结果 经4轮筛选后，技术路线1来源的富集库与初始随机库相似，对靶目标无亲和力；而技术路线2来源富集库对靶目标的亲和力较初始随机库有显著提高。结论 SELEX实验中，溶液中筛选、膜截留结合核酸的技术路线与固—液相筛选、固相中直接获取结合核酸的途径相比较，前一种方法更容易富集到与靶目标结合的目的序列。     

重组人造血生长因子对抗白血病药物作用的影响

采用流式细胞仪及ＩＮＴ细胞毒检测，研究造血生长因子（ｒｈＨＧＦ）对抗白血病药物细胞毒性的影响，并探讨ＨＧＦ与化疗药物联合应用的作用机理。研究结果表明：３种抗白血病药物柔红霉素（ＤＮＲ）、三尖杉酯碱（Ｈ）、足叶乙甙（ＶＰ１６）对白血病细胞敏感性存在较大差异；ＧＭＣＳＦ、ＩＬ３均能增加ＶＰ１６、ＤＮＲ对白血病细胞的杀伤作用；ＧＭＣＳＦ能提高Ｈ的细胞毒性作用，而对正常骨髓细胞，３种ｒｈＨＧＦ均不能增加３种化疗药物的细胞毒性     

All-trans retinoic acid as a single agent induces complete remission in a pat ient with acute leukemia of M2a subtype

Objective To present a special case with the karyotype and molecular marker of acute myelo id leukemia (AML)-M(2) who was induced to complete remission by all-trans reti noic acid (ATRA) alone.Methods A recently hospitalized young female patient with acute leukemia was initially d iagnosed as M(3) subtype based on morphological French-American-British (FAB) classification. Karyotype analysis using standard G and R banding techniques an d RT-PCR were applied to further define the diagnosis. After primarily culture d bone marrow cells from the iliac aspiration were tested for in vitro induced d ifferentiation, the patient was treated with oral all-trans retinoic acid alone , 60 mg per day until complete remission was achieved. Peripheral blood and bo ne marrow changes were monitored over the whole treatment course. Results The characteristic chromosomal aberration for M(3) , the t(15;17) reciprocal tran slocation, was not found while a t(8;21) translocation was verified. Furthermor e, an amplified product of the AML-1/ETO fusion gene instead of the PML/RARα f usion gene was detected by RT-PCR and the diagnosis was corrected from M(3) to M(2) . Primary cultured bone marrow cells can be fully induced to terminal diffe rentiation after 4 days exposure to ATRA. A hematological complete remission wa s achieved after 40 days treatment with ATRA as a single therapeutic agent, sug gesting an alternative pathway mediating ATRA-induced myeloid differentiation. Conclusion A leukemia patient with a subtype other than M(3) , such as M(2) in this case, ma y also be induced to complete remission by the mechanism of ATRA-induced termin al differentiation. This implies that there may be a pathway other than PML/RAR α fusion gene product which mediates ATRA-induced myeloid maturation in leukem ia cells.     

急性白血病患者骨髓单个核细胞中BAG-1及Bcl-2蛋白的表达

目的:探讨急性白血病(AL)患者骨髓单个核细胞中BAG-1和Bcl-2蛋白的表达及意义.方法:用免疫细胞化学SP染色法分别检测初治AL患者(112例)、急性白血病完全缓解 (AL-CR)患者(57例)、急性白血病难治复发(RRAL)患者(29例)及正常对照者(20例)的骨髓单个核细胞中BAG-1及Bcl-2蛋白的表达.结果:4组间BAG-1及Bcl-2蛋白阳性表达率差异有统计学意义(χ2=61.795、37.866,P<0.001),初治AL组和RRAL组中2者的阳性表达率均高于AL-CR组和正常对照组(P<0.001).初治AL患者骨髓单个核细胞中BAG-1蛋白阳性表达率与白细胞计数及髓外浸润有关(χ2=16.336、19.289,P<0.001),且BAG-1与Bcl-2的表达呈正关联(rP=0.587,P<0.001).结论:BAG-1可能协同Bcl-2参与了急性白血病的发生发展.     

急性白血病病人胞苷脱氨酶基因多态性对阿糖胞苷疗效的影响

目的 探讨急性白血病病人CDA基因第1号外显子基因多态分布以及追踪随访不同基因型患者的疗效与转归。方法 采用PCR扩增目的片段并直接测序采了解CDA基因G208A位点基因多态。结果 发现CDA基因第1号外显子存在G208A多态，有GG、GA和从3种基因型，其G等位基因频率为95．14％，而A等位基因频率为4．86％。同时发现未缓解比率在GG与GA和从两组之间无统计学差异（X^2=0．96，P〉0．05），但其复发率在两组之间存在差异（X^2=5．04，P=0．02〈0．05），GG基因型的患者复发率较低。结论 CDA基因第1号外显子在其研究人群中存在G208A多态，其不同的基因型对患者预后存在影响。     

急性髓系白血病Th1/Th2细胞因子和T细胞亚群的变化及其临床意义

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者化疗前后Th1/Th2类细胞因子水平、CD4 /CD8 T细胞亚群比例的变化及其临床意义.方法:采集AML患者的外周及骨髓血,以流式细胞仪检测单个核细胞免疫表型,以酶联免疫吸附试验检测血清和培养上清中IL-4、IFN-γ水平,以放射免疫法检测IL-2水平.结果:治疗前患者血清IL-4水平明显增高,而IFN-γ水平则相反,部分高危患者缓解后IL-4水平仍较高,并且CD4 /CD8 T细胞比例显著倒置.结论:AML患者存在Th1/Th2类细胞因子水平及CD4 /CD8 T细胞亚群比例的异常,有预后价值.     

白三烯B4受体在急性髓系白血病中的预后价值和功能富集分析

目的 运用生物信息学分析白三烯B4受体（LTB4R）在急性髓系白血病（AML）患者中的表达模式、预后价值和潜在生物学功能。方法 从癌症基因组图谱（TCGA）数据库和美国国立生物技术信息中心（NCBI）公共基因芯片数据平台（GEO）下载mRNA基因芯片数据集和临床基线资料数据集,利用R studio进行表达分析、生存分析、Cox风险回归分析、相关性分析研究LTB4R的表达模式和预后价值。利用UALCAN 平台研究 LTB4R表达水平与临床特征的关联。利用linkedomics平台筛选出LTB4R共表达基因进行GO和KEGG信号通路富集分析。应用STRING平台构建蛋白质相互作用网络。基于LTB4R表达水平将LAML数据集分组并筛选差异表达基因,继而进行GSEA分析。收集临床30例AML患者及21例健康对照者外周静脉抗凝血2 mL,分离单个核细胞,采用qRT-PCR对LTB4R和免疫检查点基因表达水平、相关性进行验证;分离外周血500 μL血清,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测LTB4R蛋白表达水平。结果 LTB4R表达水平在AML患者骨髓样本中显著增强（4.898±1.220 vs 2.252±0.215,P<0.001）,与不良预后相关[P=0.004,风险指数（HR）=1.74],并可做为AML预后的独立风险因素（P=0.019,HR=1.66）。同时LTB4R与FAB分型、细胞遗传学风险、染色体异常、NPM1突变相关。 LTB4R 的共表达基因富集到多个肿瘤发生相关的信号途径,例如粒细胞炎症、淋巴细胞激活、免疫反应信号传导、能量代谢等。GSEA分析显示差异基因富集于免疫细胞分化、活化、细胞因子信号途径等。临床实验证实AML患者样本中LTB4RmRNA（P=0.044）及蛋白表达水平增高（P=0.008）,并且mRNA表达水平与HAVCR2呈正相关（r=0.466,P=0.040）。结论 LTB4R 可做为AML的新型标志物和独立预后指标,潜在功能富集于肿瘤免疫、代谢相关信号通路,可为AML 疾病进程相关信号通路和分子网络研究提供线索。     

Arsenic trioxide downregulates the expression of annexin II in bone marrow cells from patients with acute myelogenous leukemia

Background Most patients with acute myelogenous leukemia （AML） suffer from disordered hemostasis. We have previously shown that annexin II （Ann II）, a high-affinity co-receptor for plasminogen/tissue plasminogen activator, plays a central role in primary hyperfibrinolysis in patients with acute promyelocytic leukemia （APL）. The expression of Ann II in cells from patients with major subtypes of AML and the effect of arsenic trioxide （As203） on Ann II expression in AML cells were investigated to determine whether As203-mediated downregulation of Ann II could restore hemostatic stability. Methods A total of 103 patients （48 females and 55 males; age, 19-58 years） were included. Plasma samples were collected before and after treatment as well as after complete remission. Ann II and plasminogen activation were measured in leukemic cells during treatment with 1 pmol/L As203. Results Before AS203 treatment, Ann II mRNA expression （real-time PCR） was the highest in M3 cells （P 〈0.05）, higher in M5 cells than that in M1, M2, M4, and M6 cells （P〈0.001）, and positively correlated with Ann II protein expression （flow cytometry） （r=0.752, P 〈0.01）. Exposure for up to 120 hours to As203 （1 μmol/L） had no significant effect on Ann II protein in M1 and M2 leukemic cells, but decreased Ann II protein expression twofold within 48 hours of exposure in M3 cells （P 〈0.05） and twofold within 96 hours in M5 cells （P 〈0.05）. The rate of plasmin generation was higher in APL, M5, and M4 cells than in M1, M2, and M6 cells. Conclusions As203 may reduce hyperfibrinolysis in AML by downregulation of Ann 11. Furthermore, As2O3 affects more than one form of AML （APL, M4 and M5）, suggesting its potential role in their management.