分泌抗破伤风类毒素人单克隆抗体的人鼠杂交瘤细胞系的建立

作者采用小鼠骨髓瘤细胞系与破伤风类毒素免疫的人外周血淋巴细胞进行融合，对影响人一鼠杂交瘤细胞制备人单抗成功的因素进行了探讨。按免疫时间(天)及体外刺激与否分为四组、其中以PWM TT体外刺激PBL(比体外不刺激)的细胞融合率高，且易建成稳定分泌抗体的细胞系。经5次克隆化后获得5株抗TT的人单抗杂交瘤细胞系。经双扩确定IgG2株，IgM3株。冻存10个月后复苏，传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人IgM的分泌量为0．42～1．15μg/ml。经染色体鉴定确为人-鼠杂种细胞。     

抗卵巢上皮癌人单克隆抗体HMD_4的制备及其特性的研究

本文报道用人-鼠杂交技术制备出一株分泌人IgG型单克隆抗体的人-鼠杂交瘤细胞系,通过早克隆化和反复再克隆化等使该株细胞已稳定分泌15月以上。染色体核型分析符合人-鼠杂交瘤特征。免疫印迹和免疫组化等方法证实该抗体可识别分子量为55KDa的卵巢上皮癌相关抗原,命名为HMD_4。本文还对如何保持种间杂交瘤分泌功能和人单抗筛选中如何克服内源性Ig问题进行了讨论。     

人骨髓间充质干细胞表面抗原单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备人骨髓间充质干细胞(MSCs)的特异性细胞表面抗原的单克隆抗体.方法以人骨髓MSCs为抗原,常规方法免疫Balb/c小鼠,细胞融合制备杂交瘤细胞,并用免疫荧光法在流式细胞仪上对杂交瘤产生的抗体进行初测和复测.结果通过分泌的抗体与人MSCs表面抗原特异性结合的鉴定,进行杂交瘤筛选,将复测为阳性的克隆连续克隆化培养,获得两株持续分泌抗人MSCs的杂交瘤细胞株:8g8、8f9.两株单抗经体外连续传代培养,生长良好,稳定分泌抗体.结论人骨髓MSCs的特异性细胞表面抗原单克隆抗体可望在MSCs的提纯和体外富集、特异性骨病的诊断等方面有广阔的应用前景.     

人肝癌培养细胞粗提膜相关抗原的单克隆抗体

用人肝癌培养细胞粗提膜免疫Balb/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤(SP_2/o)细胞在PEG作用下融合。以LLISA筛选抗体。通过免疫荧光和免疫酶标进行组织定位。初步获得一株抗人肝癌细胞膜相关抗原的单克隆抗体杂交瘤—命名FP—5。用此抗体在涂片上对人肝癌细胞膜呈阳性反应,在3例手术切除的人肝癌活检冰冻切片中,肝癌组织细胞亦呈阳性反应。FP—5细胞株染色体为83—108条,含1—2条中着丝点标记染色体。经6次克隆化体外培养6个多月,仍持续分泌特异性抗体,此抗体鉴定属鼠的IgM型。     

抗人肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

用国人肝癌细胞免疫BALB/c鼠,经三次细胞融合、反复筛选及克隆化,得到了15株杂交瘤;又经正常肝组织及肝癌细胞吸收试验,进一步选出两株杂交瘤。它们分别能持续稳定地分泌特异性抗人肝癌单克隆抗体A-QGY_1和A-QGY_2。此两株单克隆抗体只与体外培养或患者组织中的肝癌细胞产生反应,而不与正常成人和胎儿肝组织及其他多种正常或肿瘤组织发生反应,与乙肝病毒抗原及甲胎蛋白、癌胚抗原等也无免疫交叉反应。     

抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备及初步应用

将人绒毛膜促性腺激素(hCG)免疫的BALB/C小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,阳性孔经2～3次克隆化、液氮冻存后多次再克隆化和动物接种,获得了12株分泌抗hCG单克隆抗体(McAbs)的稳定杂交瘤株。12种McAbs除1种为IgM外,均为IgG_1;RIA滴度及亲和常数分别在0.2～7.0×10~4和0.4～5.1×10~8M~(-1)之间。有些McAbs已成功地用于血清和尿中hCG一步双位快速ELISA及滋养叶肿瘤组织切片的免疫细胞化学染色等。     

激发型鼠抗人4-1BBL单克隆抗体的研制

目的鼠抗人4—1BBL单克隆抗体的制备及其生物学特性研究。方法以高表达人4—1BBL分子的基因N-程细胞株L929／4—1BBL为免疫原免疫BALB／c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经过选择性克隆化培养及流式细胞术分析,筛选分泌特异性抗A4—1BBL单抗的杂交瘤细胞株;采用快速定性试纸法鉴定单抗亚类、间接免疫荧光法检测单抗对肿瘤细胞株的识别谱。进而,将所获抗人4-1BBL单抗体外刺激白血病细胞株U937,通过细胞计数法分析单抗对U937生长的影响。结果获得一株持续、稳定分泌鼠抗人4—1BBL单抗的杂交瘤细胞株,并将其分泌的单抗命名为39A8。单抗39A8可有效识别不同肿瘤细胞株表达的4—1BBL,经细胞计数分析,39A8对U937细胞的生长具有明显的促增殖作用。结论单抗39A8是可激发4-1BBL逆向信号的单克隆抗体,是研究4—1BBL分子及其功能的重要工具。     

抗人晚期糖基化终产物受体胞外段不同表位单克隆抗体的制备

目的 制备抗人晚期糖基化终产物受体(RAGE)胞外段单克隆抗体。方法 用纯化人重组RAGE胞外段(氨基酸序列23～342)免疫Balb／c小鼠，取其脾细胞与NS—1融合制备杂交瘤，经筛选和两次克隆化，从制备的腹水中纯化单克隆抗体。结果和结论 获得两株杂交瘤细胞B2．2和E10，其分泌单抗的亚型均为IgG2b。经ELISA、Westernblot和流式细胞仪鉴定，证明两株单抗均可结合重组RAGE及表达于细胞表面的RAGE，且两株抗体识别的位点为远隔表位，所建立的双夹心法可用于检测可溶性重组RAGE。这两株抗体将为研究RAGE相关疾病提供有效的工具。     

鼠抗粒细胞集落刺激因子单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

建立鼠粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的杂交瘤细胞系。方法将ＳＰ２／０小鼠骨央瘤细胞和用Ｇ－ＣＳＦ免疫的Ｂａｌｂ／ｃＩＨ ＶＮＵＮＥＲＴＦＸＬＥＱＤ 宜５００ＷＴ 进行融合，用ＥＬＩＳＡ进行克隆化筛选并对杂交瘤细胞分泌的单抗滴度进行检测。     

抗人胰岛素样生长因子-1单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备稳定分泌抗人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定.方法:用纯化后的hIGF-1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鉴定mAb的特异性,用间接ELISA法检测mAb腹水效价及mAb的亲和力,杂交瘤细胞染色体分析,鉴定Ig亚类.结果:获得2株能稳定分泌抗hIGF-1的mAb杂交瘤细胞系,Western blot分析显示,该mAb能与具有生物学活性的成熟IGF-1蛋白结合.腹水mAb效价可达6×104.mAb相对亲和力为2.1×109/mol～7.8×109/mol.2株单抗属IgM亚类.染色体分析符合杂交瘤细胞特征.结论:成功制备出抗hIGF-1的2株mAb杂交瘤细胞,为进一步用于hIGF-1的临床检测和实验研究创造了条件.     

抗破伤风类毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其中和效应的研究

采用破伤风类毒素（ＴＴ）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ小鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇（ＰＥＧ）ＷＭ４０００作用下进行配合，克隆化，通过ＥＬＩＳＡ法及毒素中和新价的检测获得两株（５Ｇ８，６Ｄ９）及多株亚株（５Ｇ８Ａ１０，５Ｇ８Ｂ９Ｃ１１，５Ｇ８Ｂ９Ｅ１等）有保护作用的细胞株，其中一株经过液氯冻存，复苏仍能正常分泌抗体。     

GENERATION AND PARTIAL CHARACTERIZATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST SOLUBILIZED MEMBRANE FRACTION OF HUMAN SPERMATOZOA

Human sperm membrane antigens extracted by deoxycholate (DOC) were used to immunizeBALB/c mice.Hybrid cell lines secreting sperm-specific monoclonal antibodies were generatedby cell fusion in a semi-solid medium and screened by indirect immunofluorescent assay usinglive and methanol-fixed sperm.Out of 850 hybrid clones from cell fusion,28 were shownto secrete sperm-specific antibodies which reacted with the acrosome,equatorial segment,whole surface plasma membrane or tail of spermatozoa.Finally,seven hybrid cell lineswere established and shown to secrete monoclonal antibodies which had no cross-reactivitywith arty human tissues other than testis and sperm.The majority were also shown toinhibit fertilization of mouse oocytes in vitro and human sperm penetration of zona-freehamster ova.Western blot analysis revealed that some of these antibodies reacted withsperm membrane antigens of distinct molecular size.     

分泌抗人A型、B型单克隆抗体细胞系的建立及初步应用

本文共得到分泌血型抗体的杂交瘤细胞6株,其中抗A 5株,抗B 1株。杂交瘤细胞系AN3/77、92、58、60、90(抗A)和AN1/4、25、45、40(抗B),经详细鉴定,其结果如下:(1)抗A 细胞系和抗B 细胞系在试管中传代3个月以上,稳定地分泌抗体,属鼠IgM。(2)小鼠腹腔接种后,腹水抗体效价为1:10000～1:20000(抗A)和1:320000～1:640000(抗B)。(3)吸附试验和阻断试验,证明抗A McAb 和抗B McAb 具有高度特异性。(4)随机抽样人血样品656份,用常规标准血清和本文所得两种单抗体,进行血型鉴定,结果二者完全相符。     

抗CLCN5单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗氯离子通道蛋白5（CLCN5）单克隆抗体（mAb）并对其进行鉴定。方法：用人CLCN5为抗原免疫BLAB／c小鼠，用常规方法进行细胞融合，经筛选及克隆化建立可稳定分泌抗CLCN5 mAb的杂交瘤细胞株；用ELISA及Western blot进行抗体的鉴定。结果：筛选到4株可稳定分泌抗CLCN5 mAb的细胞株；Western blot显示，在4株抗体中有1株在相对分子量为83kDa处出现1条特异性条带．说明该单克隆抗体可与HSG胞浆蛋白中的CLCN5蛋白特异性地结合。结论：本实验成功获得1株可特异性识别CLCN5的单克隆抗体细胞株，可用于肾结石、X-连锁综合征的进一步研究、临床诊断及相关试剂盒等的开发研制。     

分泌抗B型肉毒毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

我国由肉毒毒素引起的食物中毒以A、B型最常见。但用常规法制备的抗血清在两型间常有交叉反应,不适于分型鉴定之用。即使应用亲和层析交叉吸收纯化,仍难以获得B型特异性抗体。为获得高效价的型特异性抗体,本研究以B型肉毒类毒素免疫纯系BALB/c小鼠,注射3次后,血清抗体琼脂双     

分泌抗体的杂交瘤细胞株的制备

目的应用杂交瘤技术制备出分泌抗肺癌抗体杂交瘤细胞株,为肺癌的早期诊断和免疫治疗提供可能靶点．方法用肺癌细胞株作免疫原免疫健康BALB／C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得分泌高滴度抗肺癌抗体的杂交瘤细胞株,用间接ELISA和检测单抗体的特异性,双抗体夹心法测定免疫球蛋白同种型．结果通过细胞融合,筛选出2株持续分泌抗肺癌抗体的杂交瘤细胞株C5、B8,其分泌的抗体为IgM亚类,κ亚型,并和肺癌细胞发生特异性反应．结论成功完成细胞融合,制备了分泌抗体的杂交瘤细胞株．     

Studies on monoclonal anti-idiotypic antibodies to human B cell leukemia

Murine immunocytoma cell line, NS-1, was fused with spleen cells of Balb/C mice which had been stimulated by tolerogenic disaggregated human gamma globulin and immunized by purified serum IgM from the patient with chronic B cell leukemia (B-CLL). 10 hybridoma cell lines secreting monoclonal anti-idiotype (anti-Id) antibodies to human CLL were obtained. The McAbs were subclasses belonging to IgM and of IgG mouse. Specificity and biologic characters of the monoclonal anti-Id antibodies from culture fluid or ascites were assayed by ELISA, indirect mixed ELISA sandwich, ELISA inhibition, immunofluorescence (IF) and IF inhibition. The study also proved that monoclonal anti-Id antibodies could react with homologous IgM, but not with Ig from normal donors or a panel of patients with myeloma. The results of IF and IF inhibition assay showed that monoclonal anti-Id antibodies were bound to lymphocytes of patient with B-CLL. Their reactivity was inhibited by homologous IgM, but not by lymphocytes of patients with ALL or lymphoma. Monoclonal anti-Id antibodies were heterogenous reactive patterns with cell lines in vitro.     

Tetanus toxoid as an antigen for delayed cutaneous hypersensitivity

We studied the usefulness of tetanus toxoid (TT) as a skin test antigen in assessing cellular immune function. Hospitalized patients were skin tested with four antigens, and the response rates between these antigens were compared. Candida and mumps antigens resulted in significantly more positive responses than did TT or PPD. The response rate to the TT significantly declined in older patients, suggesting these persons may not be adequately immunized against tetanus. We found TT is not as useful as Candida or mumps antigens in the evaluation of cellular immune function in a hospitalized population but it may have some usefulness in the evaluation of energy. Negative skin test results may convert to positive after patients receive an immunizing dose of TT, as shown by our data. In addition, there were several patients with a positive response to TT and negative responses to the other common skin test antigens.     

抗人心肌肌凝蛋白轻链Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

以人心肌肌凝蛋白轻链I免疫Balb/c小鼠,取其脾淋巴细胞与NS-1细胞融合,经过筛选、克隆化和再克隆已获得3-D_3、2-D_9、1-E_(10)和2-E_(10)等4个分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经免疫酶标和放免方法测定抗体工作滴度为1:1万。流动式荧光密度计检测NS-1、小鼠脾和杂交瘤细胞DNA的含量,结果表明杂交瘤细胞的DNA含量相当于NS-1和小鼠脾细胞DNA含量之和。杂文瘤细胞传代半年以上稳定地分泌特异性的单克隆抗体。用两个单抗进行了抗原双决定簇的放免測定,并制备了高效价的小鼠腹水。