食管鳞癌抑癌基因甲基化表达的相关性分析

[目的]研究食管鳞癌肿瘤组织及外周血多基因甲基化状态,以及不同基因甲基化的相关性。[方法]应用real-time MSP技术对76例食管鳞癌患者肿瘤组织、配对的癌旁正常组织、术前外周血中APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A抑癌基因的甲基化状态进行检测。随机选取60名年龄配对的健康志愿者外周血浆DNA作对照。[结果]肿瘤组织APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A的甲基化率显著高于对应癌旁正常组织（P=0.000）。术前外周血中这5种基因的甲基化率显著高于健康对照组（P=0.000）。RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A甲基化有显著性相关,APC与这4个基因甲基化无相关性。[结论]食管癌患者癌组织及外周血抑癌基因APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A高甲基化,RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A甲基化有显著相关性。     

食管鳞癌组织DNA甲基化与肿瘤侵袭相关性的探讨

目的:研究食管鳞癌组织中多基因甲基化状态及其与临床病理特征的相关性.方法:提取76例食管鳞癌患者的新鲜冷冻肿瘤组织及癌旁正常组织,用酚氯仿法抽提组织中的DNA,然后用亚硫酸氢盐进行甲基化处理,最后用Real-time MSP技术分别检测了APC、RARβ2、CDH1、p16INK4a和RASSF1A 5个抑癌基因的甲基化状态,结合临床及病理资料用统计软件SPSS 17.0进行统计学分析.结果:食管癌组织中5个基因DNA甲基化率显著高于癌旁正常组织(P＝0.000).肿瘤组织中5个基因DNA甲基化率与临床病理分期、淋巴结转移及神经脉管浸润均显著相关,P＜0.050,且APC、p16INK4a和RASSF1A甲基化与肿瘤T分期显著相关,P＜0.050,RARβ2及CDH1基因甲基化与肿瘤T分期无显著相关性(P值分别为0.320,0.105).这5个抑癌基因甲基化与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤长度、分化程度、吸烟和饮酒等7项指标无显著相关性.经Logistic分析,家族肿瘤史是肿瘤组织APC基因DNA甲基化的独立相关因素[P=0.036,Exp(B)=34.675,95％CI(1.253～959.844)].结论:食管癌患者肿瘤组织APC、RARβ2、CDH1、p16INK4a和RASSF1A均存在高甲基化现象,肿瘤组织中DNA甲基化与肿瘤侵袭程度显著相关;家族肿瘤史是肿瘤组织APC基因DNA甲基化的独立相关因素.     

DNA甲基化在Barrett食管和食管腺癌的研究

 近年来大量研究表明,肿瘤相关基因启动子区的高甲基化是引发食管腺癌的重要原因之一,并与肿瘤的分化、侵袭、转移、分期和预后等密切相关,可作为食管腺癌临床检测和治疗的新靶点。     

DNA甲基化与肿瘤研究进展

 ＤＮＡ甲基化是基因复制后修饰 ,目前 ,认为也是一种新的基因调控机制。尽管 ,大量事实已证明ＤＮＡ甲基化在细胞的增殖、分化过程中起重要作用 ,但其确切功能尚不清楚[1] 。人类基因的三分之一由散在的重复ＤＮＡ片段组成 ,如ＡＬＵＳ和ＬＴＮＳ ,这些ＤＮＡ片段中又有许多ＣｐＧ二核苷酸聚集区称为ＣｐＧ岛[2 ] ,它们具有潜在的转录活性[3] 。大部分ＣｐＧ岛位与基因 5′端与基因的活性有关[4 ] 。目前研究发现许多抑癌基因 5′端均存在ＣｐＧ岛 ,并受甲基化的调控 ,此外 ,ＤＮＡ甲基化的改变 ,对染色体的构形及其结构均有重要影响。ＤＮＡ甲基化异常 ,通过上述两个方面的作用 ,影响着肿瘤的发生发展 ,本文就近年的研究进展作一综述。1　ＤＮＡ甲基化异常现象及形成原因肿瘤细胞ＤＮＡ甲基化异常现象主要表现为ＤＮＡ广泛的低甲基化和区域性的高甲基化共存于一种组织 ,以及总的甲基化能力增强。真正意义上主要是与细胞生长分化有密切关系的癌基因和抗癌基因。ＤＮＡ甲基化异常的程度与肿瘤的进展程度以及转移能力均相关 ,肖文华等[5] 在肝癌的研究中还发现 ,ＤＮＡ的异常甲基化状态不但反映肝癌的恶性程度 ,而且有助于判断预后。1.1...     

肿瘤患者血清DNA甲基化的研究进展

血清DNA是循环核酸的一种，DNA甲基化与肿瘤的发生发展有密切关系；甲基化特异性PCR(MSP)是血清DNA甲基化检测的灵敏方法，血清DNA甲基化在肿瘤的早期诊断、分期、治疗及预后监测等方面有重要意义，是目前肿瘤分子生物学研究热点之一，具有极大的应用价值。     

食管鳞癌DNA定量分析的临床意义

目的通过原发性食管鳞癌的DNA定量分析，探讨肿瘤细胞DNA含量与食管鳞癌的关系。方法采用CMIAS真彩色医学图像分析系统，对食管鳞癌术后标本以Feulgen法染色制成的石蜡切片进行检测，并计算出肿瘤细胞DNA相对倍体均值（简称11值）。结果u值随食管肿瘤增大而升高（P＜0．01）。u值随食管癌分期增高而升高（P＜0．01）。区域淋巴结有转移比无转移的u值大（p＜0．01）。u值随食管癌组织学分级增加而升高（p＜0．01）。结论食管鳞癌患者行DNA定量分析，可以帮助判断食管鳞癌的分期、恶性程度、预后和指导治疗。     

食管鳞癌中p16基因启动子区甲基化及其表达

 目的探讨食管鳞癌（ESCC）p16基因甲基化的状况及其表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法（MSP）分别检测75例食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用Envision免疫组化法检测食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果75例标本中，食管癌组织、癌旁组织和切缘细织p16基因甲基化率分别为41．3％（31／75）、13．3％（10／75）和6．67％（5／75）。癌组织和癌旁组织P16蛋白的阳性表达率分别为29．3％（22／75）和56．7％0（17／30）。31例癌组织p16基因甲基化阳性标本中有2例（6．4％）检测到P16蛋白的表达，而44例癌组织p16基因甲基化阴性标本中有20例（45．5％）检测到P16蛋白的表达。食管癌组织p16基因甲基化率显著高于癌旁组织和切缘组织（P〈0.01），P16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关。p16基因启动子区甲基化与食管癌的组织学分级、肿瘤部位无明显相关，与临床分期、淋巴转移密切相关。结论p16基因甲基化在食管癌发生发展中起着重要作用，食管鳞癌的分期和淋巴结转移与p16基因甲基化之间有密切关系。     

食管鳞癌患者血清RUNX3基因甲基化检测及临床意义

目的检测食管鳞癌患者血清中RUNX3基因启动子区域甲基化状态,探讨用于食管鳞癌早期诊断和预后评估的临床意义。方法留取70例食管鳞癌,20例食管良性病变及10例健康志愿者血清标本,甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）分析RUNX3基因启动子区域甲基化情况,并分析其与临床病理参数之间的相关性。结果70例食管鳞癌患者血清RUNX3基因启动子区域异常甲基化36例,检出率为51．4％,20例食管良性病变患者中有2例为不完全甲基化（10％）,而10例健康志愿者中检出率为0,差异有统计学意义（P〈0．001）;RUNX3基因启动子甲基化与患者临床分期和淋巴结转移相关。结论RUNX3基因启动子甲基化在食管鳞癌患者血清中有着较高的检出率,可望成为食管鳞癌早期诊断和预后评估的分子标志物。     

DNA甲基化与羟甲基化在乳腺癌中的研究进展

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,也是导致女性癌症患者死亡的第二大凶手。近几年,我国乳腺癌的发病率逐年升高,并且患病年龄呈低龄化趋势。乳腺癌发病机制复杂,与多种因素有关,如年龄、家族史和基因变异。随着表观遗传学的发展,DNA的修饰在乳腺癌发生发展中有着重要的作用。文章对DNA甲基化及羟甲基化在乳腺癌中的研究进行综述。     

食管鳞癌中DACT2基因表达及甲基化状态研究

[目的]检测食管鳞状细胞癌(ESCC)中DACT2基因表达及启动子区甲基化状态,探讨DACT2基因在食管鳞癌发生发展中的作用.[方法]分别应用逆转录—聚合酶链反应(RTPCR)以及甲基化特异性PCR(MSP)的方法检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)处理前后的食管癌细胞系(TE1、TE13、T.Tn、Eca109)以及食管鳞癌组织及相应癌旁组织中DACT2 mRNA表达情况及启动子区甲基化状态.[结果]经5-aza-dC处理后4种食管癌细胞系中DACT2基因的表达均增高.4种未经5-aza-dC处理的食管癌细胞系中DACT2基因呈高甲基化状态.应用5-aza-dC处理后,DACT2基因在4种细胞系中均呈非甲基化状态.DACT2基因在食管鳞癌组织中的表达显著低于癌旁组织(0.66±0.53 vs 0.95±0.64,t=-2.43,P=0.018),并与淋巴结转移密切相关(t=-2.030,P=0.048).食管鳞癌组织中DACT2基因的启动子区甲基化率显著高于癌旁组织(50.0％ vs 21.1％,x2=9.439,P=0.002),并与TNM分期、组织学分化程度和淋巴结转移密切相关(P均＜0.05).发生DACT2基因甲基化的食管鳞癌组织中DACT2基因的表达量显著低于未发生甲基化的食管鳞癌组织(0.46±0.32 vs 0.78±0.61,t=-2.341,P=0.023).[结论]DA CT2基因在食管鳞癌中的异常低表达与食管鳞癌的发生、发展密切相关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一.     

DNA甲基化与食管癌的关系

肿瘤细胞普遍存在DNA甲基化模式的改变,DNA甲基化异常包括原癌基因低甲基化和抑癌基因高甲基化。近年来研究结果表明,在食管癌发生过程中同样存在相关抑癌基因启动子区甲基化导致的基因表达的紊乱。其中由DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）和去甲基化酶的活性改变导致的抑癌基因CpG岛超甲基化的研究,已成为食管癌发病机制研究中的热点之一。综述DNA甲基化的特点及其抑制基因转录和表达的分子生物学机制;DNA异常甲基化与食管癌发生发展的关系;食管癌相关肿瘤抑制基因的甲基化谱构成了食管癌独特的表遗传学标志;目前常用的甲基化检测手段及各方法的优缺点;DNA甲基化和去甲基化研究的展望及所需要解决的的问题等。     

DNA甲基化与鼻咽癌

癌基因和抑癌基因表达失常是鼻咽癌发病的关键。鼻咽癌与细胞凋亡和细胞周期调控基因、细胞黏附分子编码基因、应激反应基因、DNA错配修复基因、维甲酸信号通路相关基因、Wnt信号通路相关基因以及RIZ1基因、DLC1基因、H19和COX-2基因等基因异常甲基化相关。     

SRY-box 17基因在食管鳞状细胞癌中异常甲基化及表达的研究

目的:检测食管磷癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)细胞株及组织标本中Wnt通路相关因子SRY-box 17基因的甲基化状态及表达情况,探讨其与食管鳞癌发生的相关性.方法:分别采用甲基化特异性-PCR(methylation specific-PCR,MSP)和RT-PCR的方法检测食管癌细胞株TE1、TE13及109例食管鳞癌及相应癌旁非肿瘤组织中SRY-box 17基因的甲基化状态及mRNA表达情况,并分析其与Wnit通路中心因子β-catenin蛋白表达的关系.结果:在食管癌细胞株TE1和TE13中,SRY-box 17基因mRNA均呈阴性或弱阳性表达,用甲基化抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dC)处理后,其mRNA全部恢复阳性表达;MSP检测结果显示,在食管癌细胞株中SRY-box 17基因均呈高甲基化状态;在食管癌组织标本中,SRY-box17基因的甲基率为89.0％ (97/109),明显高于癌旁组织的53.2％ (58/109)(P＜0.01);癌组织中SRY-box 17基因的甲基化率在Ⅲ和Ⅳ期肿瘤患者中明显高于Ⅰ和Ⅱ期患者(P＜0.05),而该基因的甲基化率与肿瘤患者的组织学分级无相关性;在癌组织中该SRY-box17mRNA的阳性表达率为28.4％(31/109),明显低于癌旁组织(P＜0.01).其mRNA表达的缺失率及通路中心因子β-catenin蛋白的异质表达率均与该基因的甲基化状态有相关性(P＜0.05).结论:食管鳞癌组织及细胞株中SRY-box 17基因均呈高甲基化状态,该基因的高甲基化可能是引起mRNA表达下调的重要机制之一,并可能通过Wnt/β-catenin信号转导通路的激活在食管癌的发生、发展中具有重要作用;对该基因的甲基化检测可能对食管癌的预后判断有一定的临床指导意义.     

微小 RNA 与食管鳞状细胞癌

微小 RNA（miRNA）可通过细胞信号转导、上皮间质转化、血管生成等调控机制影响食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和转移。特定的血清 miRNA 可作为食管鳞状细胞癌诊断、预后的新型肿瘤标志物。近来研究表明 miRNA 可提高食管鳞状细胞癌放疗敏感性甚至逆转多药耐药,具有极大的临床价值。     

高发区食管癌患者p16基因甲基化及其表达的比较研究

目的:比较p16基因甲基化在食管癌高发区河南林州(北方组)和广东揭阳(南方组)之间的异同,探讨p16基因甲基化在不同气候环境条件下的两地食管鳞癌(ESCC)发生中的作用。方法:采用甲基化特异性PCR方法(MSP)分别检测两地食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用EnVision免疫组化法检测两地食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果:南方组75例标本中,食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因甲基化率分别为41.3%(31/75)、13.3%(10/75)和6.67%(5/75);癌组织和癌旁组织p16蛋白的阳性表达率分别为29.3%(22/75)和56.7%(17/30);31例p16基因甲基化阳性标本中有2例(6.4%)检测到p16蛋白的表达,而44例p16基因甲基化阴性标本中有20例(45.5%)检测到p16蛋白的表达。北方组65例标本中,食管癌组织、癌旁组织、切缘组织p16基因甲基化率分别为52.3%(34/65)、16.9%(11/65)和7.69%(5/65);食管癌组织和癌旁组织p16蛋白的阳性表达率分别为32.3%(21/65)和66.7%(20/30);34例p16基因甲基化阳性标本中有4例(11.8%)检测到p16蛋白的表达,而31例p16基因甲基化阴性标本中有17例(54.8%)检测到p16基因的表达。两地组内癌组织p16甲基化率均显著高于癌旁组织和切缘组织,p16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关(P<0.01)。两地同类组织比较p16甲基化率和p16蛋白表达率均无显著性差异(P>0.05)。结论:p16基因异常甲基化后功能失活可能是南、北两地食管癌癌变过程的重要事件,在我国南北环境气候条件不同的两地高发区食管癌的发生中均起着重要的作用。本研究为环境因素和p16基因功能之间的生物学关联在食管癌的发生中提供了一定的证据。     

食管鳞癌术后放疗研究进展

手术是局限期食管癌的重要治疗手段,但单纯手术切除的 5 年生存率仅 20%~25%。早期研究显示术后放疗降低区域复发率,但并不能提高生存率。近期大部分研究显示Ⅲ期或淋巴结阳性患者能从术后放疗中生存获益,且pT_2-3N₀M₀期患者术后放疗可能获益。放疗靶区范围推荐以双侧锁骨上区、上纵隔、隆突下以及瘤床为主,大部分研究推荐下段病变应包括上腹部区域淋巴结。对局部晚期患者术后放疗联合化疗可能带来更大获益。关于食管鳞癌术后放疗意义、靶区设计及联合化疗等问题需个体化考量,需更多的临床证据。     

正常食管上皮和食管鳞状细胞癌组织中丙二醛-DNA加合物含量

目的 研究正常食管上皮和食管癌组织中致癌性丙二醛－DNA加合物（M1－dG)含量,探讨DNA氧化损伤与食管癌发生和发展的关系。方法 所有组织标本均来自食管癌高发区河南林县,32例正常食管上皮标本来源于组织活检,30例食管癌组织标本来源于外科手术切除的食管癌。DNA中M1－dG加合物含量以^32P-后标记方法测定。结果 在全部正常食管上皮和癌组织DNA中均检测到M1－dG加合物,但其含量（中位数）在正常食管上皮中为3．4／10^8核苷酸（范围为1．7／10^8-55.4/10^8核苷酸）,远低于食管癌组织的14.1/10^8核苷酸（范围为1.4/10^8-59.0/10^8核苷酸）,差异有极显著性（P＜0．0001）。该加合物水平与受试者的性别、年龄、吸烟状态以及涉及酒精氧化产生自由基的细胞色素p4502E1基因多态性无明显相关。结论 脂质过氧化产生的丙二醛对DNA的损伤可在食管上皮中累积,在癌组织中达相当高的水平,提示M1－dG加合物可能是导致食管癌发生和发展的重要因素。     

食管鳞癌组织中 CDK10基因启动子甲基化状态检测的临床意义

目的：探讨周期素依赖性激酶10（CDK10）在食管鳞癌中基因启动子甲基化状态及其与临床病理参数的关系。方法：应用甲基化特异性 PCR 检测 CDK10基因启动子在55例食管鳞癌组织及相应癌旁组织中的甲基化状态并结合临床病理资料进行分析。结果：在食管鳞癌组织中 CDK10甲基化阳性率（69．1％,38／55）显著高于癌旁对照组织（9．1％,5／55）（P ＜0．01）。CDK10甲基化与食管鳞癌淋巴结转移与临床分期显著相关（P ＜0．05）。结论：CDK10基因甲基化与食管癌淋巴结转移和临床分期密切相关。