不可分型流感嗜血杆菌通过p38 MAPK和NF-κB依赖的方式上调IL-8的表达

目的：探讨不可分型流感嗜血杆菌（NTHi）致肺泡上皮细胞炎症反应的分子机制。方法：A549肺泡上皮细胞株与NTHi（感染复数：10）共孵育15 min、30 min后收集细胞,用Western blotting检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）的磷酸化;4 h后用流式细胞仪检测胞内NF-κB p65亚单位的表达。预先用p38 MAPK抑制剂（SB203580）和NF-κB抑制剂（PDTC）与A549细胞共孵育1 h,然后加入NTHi,24 h后收集上清,以酶联免疫吸附法检测白介素8（IL-8）的水平。结果： NTHi能迅速地诱导p38 MAPK通路的磷酸化。 NTHi刺激4 h后A549细胞胞内NF-κB p65的表达较与未加细菌组明显增加（P<0.05）。NTHi刺激A549细胞24 h后上清中的IL-8较未加细菌组显著增加,差异显著（P<0.05）。与细菌攻击组比较,阻断p38 MAPK或NF-κB通路,能显著地降低A549细胞生成IL-8（P<0.05）。结论：NTHi 以p38 MAPK和NF-κB依赖的方式诱导肺泡上皮细胞的炎症反应。     

磷酸化ERK1/2对大鼠体外血小板聚集的可能作用

目的：观察两种激动剂诱导下，MEK1/2抑制剂PD098059对大鼠体外血小板聚集及磷酸化ERK1/2的影响。方法： 采用比浊法测定血小板最大聚集率，并观察最大聚集率发生时间，以及PD098059对血小板聚集的抑制率；采用Westernblot测定ERK1/2磷酸化表达。结果： 凝血酶和ADP均可诱导血小板聚集及 ERK1/2磷酸化的表达；PD098059ADP降低血小板最大聚集率及ERK1/2磷酸化表达；凝血酶与ADP诱导的血小板最大聚集率、最大聚集率发生时间及对PDO98059的反应均有差异。结论： ERK1/2为血小板聚集的信号转导途径之一；但在不同激活剂引起的血小板聚集中所起的作用不尽相同。     

内毒素急性肺损伤中p38MAPK、NF-κB 与HO-1的关系

目的: 探讨内毒素急性肺损伤中丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)、核转录因子κB( NF-κB)与血红素氧合酶-1(HO-1)的相互关系。方法: 健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为5组(n=8):对照组或生理盐水组(NS组)、内毒素组(LPS组)、血红素氧合酶-1诱导剂血晶素+内毒素组(Hemin+LPS组)、血红素氧合酶-1抑制剂锌原卟啉IX+内毒素组(ZnPPIX+LPS组)、p38MAPK抑制剂SB203580+内毒素组(SB+LPS组)。气管内滴注LPS或NS 6h后检测动脉血气,右肺肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞比、蛋白含量,右肺上叶肺组织湿/干重比;用Western blotting检测右肺下叶p38MAPK、NF-κB蛋白的表达;用免疫组化检测右肺中叶HO-1蛋白的表达,并进行病理学观察。结果: 与NS组比较,LPS组、Hemin+LPS组、SB+LPS组、ZnPPIX+LPS组肺组织湿/干重比明显增加(P<0.05),BALF中性粒细胞比、蛋白含量显著增加(P<0.05或P<0.01),动脉血PaO₂、PaCO₂和HCO^-₃显著下降(P<0.05),肺组织p38MAPK、NF-κB蛋白表达明显增高(P<0.05),HO-1强阳性表达(P<0.01或P<0.05);与LPS组比较,Hemin+LPS 组、SB+LPS组肺组织湿/干重比,肺泡灌洗液中性粒细胞比、蛋白含量明显减少(P<0.05),p38MAPK、NF-κB蛋白表达显著降低(P<0.05),HO-1的表达明显升高(P<0.05),而ZnPPIX+LPS组恰好相反;Hemin+LPS 组、SB+LPS组之间动脉血PaO₂、PaCO₂和HCO^-₃,BALF中性粒细胞比、蛋白含量,肺组织湿/干重比,肺组织p38MAPK/NF-κB及HO-1蛋白的表达均无显著差异(P>0.05)。ZnPPIX+LPS组肺组织损伤最重,LPS组次之,Hemin+LPS组和SB+LPS组最轻。结论: 在内毒素急性肺损伤中p38MAPK/NF-κB与HO-1相互抑制,各自独立发挥作用。     

ERK在慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：观察细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞的表达，以探讨ERK信号通路在气道平滑肌增殖中的作用。方法：病理图像分析慢性哮喘大鼠气道重塑，免疫组化法检测ERK和PCNA在肺内表达，激光共聚焦显微镜分析ERK1/2、磷酸化ERK1/2和PCNA在气道平滑肌的共表达，免疫印迹和原位杂交检测气道平滑肌中ERK和PCNA蛋白以及mRNA的表达。结果：慢性哮喘大鼠有气道平滑肌层增厚，出现结构重塑。ERK和PCNA在肺内表达增强，同时在气道平滑肌上有ERK和PCNA蛋白与mRNA表达增加。结论：ERK可能是介导慢性哮喘气道重建中平滑肌增殖的重要信号通路之一。     

ERK1/2信号蛋白在糖尿病小鼠肾组织中的表达

目的： 研究细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠肾组织中的表达及活化情况，从分子信号角度探讨糖尿病肾病肾纤维化的发病机制。方法：采用STZ腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型，并检测血糖、血肌酐、24 h尿白蛋白排泄率、肾重/体重、肾小球体积；用免疫组织化学方法检测糖尿病小鼠肾组织TGF-β₁、磷酸化ERK1/2和collagen Ⅲ的表达。结果： 腹腔注射STZ后，模型组小鼠均出现明显的多食、多饮、多尿和体重下降等糖尿病症状，血糖明显升高，血肌酐水平出现一过性增高，24 h尿白蛋白排泄率明显增加，肾重/体重比值增加，肾小球体积增大，肾小球细胞外基质明显增宽。正常肾组织有TGF-β₁和磷酸化ERK1/2的基础表达［分别为：5.26%±2.35%；（12.31±3.97）个/mm²］，糖尿病形成后，TGF-β₁、磷酸化ERK1/2水平在肾组织中的表达明显高于对照组，并持续增加到12周［分别为：15.63%±5.38% vs 对照组,P<0.01；（136.84±25.94）个/mm² vs 对照组,P<0.01］。正常肾组织有collagen Ⅲ的基础表达（1.58%±0.52%），糖尿病形成后collagen Ⅲ在肾组织中的表达均明显高于对照组，并持续增加到16周（15.28%±3.78% vs 对照组,P<0.01）。肾组织TGF-β₁、磷酸化ERK1/2的表达时相相似，并呈明显的正相关（r=0.87,P<0.01），并与肾组织collagen Ⅲ的表达相关（r=0.83,P<0.01）。结论： 细胞外信号调节激酶1/2的表达和活化可能参与小鼠糖尿病肾病肾纤维化的发病过程。     

不同年龄高血压大鼠心肌中MKP-1的表达及对心肌肥厚的影响

目的：研究不同年龄的自发性高血压大鼠（SHR）和Wistar Kyoto大鼠（WKY）心室肌组织中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及其磷酸酶（MKP-1）的表达以及与心肌肥厚的关系。方法： 用左心室重量与体重的比值作为心肌肥大指数并以此指标反映心肌肥厚；分别用Western blotting方法和RT-PCR法半定量测定心室肌组织中磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）的蛋白表达和MKP-1 mRNA的含量。结果： （1）SHR的血压自8周龄起明显高于WKY（P<0.01），心肌肥大指数明显大于WKY（P<0.05），ERK和MKP-1的表达均比WKY高（P<0.05）；（2）SHR的血压随年龄增长而升高（P<0.05），至14周趋于稳定，心肌肥大指数则在24周时出现激增（P<0.01）；（3）p-ERK随年龄增长呈递增趋势，而MKP-1呈递减趋势，且与心肌肥大指数和ERK的表达呈负相关（P<0.01）。结论： MKP-1在高血压大鼠随年龄和血压增加的心肌肥厚过程中起重要作用，其表达逐渐下降可能是导致ERK激活增加，进而引起心肌细胞肥大的重要原因。     

丝裂原活化蛋白激酶信号途径在心肌肥厚中的作用进展

Myocardial hypertrophy is an independent risk factor for cardiac events. Mitogen-activated protein kinases(MAPK), including extracellular signal-regulated kinases, C-jun N-terminal kinases and P38-MAPK, are the common intracellular pathway of transducing hypertrophic signs. All three MAPK subfamilies play an important role in development of myocardial hypertrophy.     

p38丝裂原活化蛋白激酶在糖尿病心肌病发病过程中的作用

Diabetic cardiomyopathy (DCM) is debilitating, often fatal, expensive to treat and common. The intracellular signals following diabetes that lead to diminished contractility, apoptosis, fibrosis and ultimately heart failure are not fully understood but probably involve p38 mitogen-activated protein kinase (p38), one of serine/threonine kinases which, when activated, cause cardiomyocyte contractile dysfunction and death. Pharmacological inhibitors of p38 suppress inflammation and are undergoing clinical trials of rheumatoid arthritis, chronic obstructive pulmonary disease, psoriasis and acute coronary syndrome. In this review, we discuss the mechanisms, circumstances and consequences of p38 activation in DCM. The purpose is to evaluate p38 inhibition as a potential therapy for DCM.     

激活的细胞外调节激酶及磷酸酶在房颤中的作用研究

目的:研究心房颤动患者心房肌细胞外调节激酶及磷酸酶基因表达的改变,探讨房颤发生时细胞信号转导途径的变化。方法:30例接受开胸手术者(包括房颤20例、窦性心律患者10例),手术时取左心房组织约200mg,采用RT-PCR、Westernblot技术,检测心房肌钙调磷酸酶调节亚单位(calcineurinB)、丝裂原激活的蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)mRNA表达量,细胞外调节激酶1(ERK1)、磷酸化细胞外调节激酶1(P-ERK1)蛋白表达量的改变。结果:房颤者calcineurinB、MKP-1mRNA、P-ERK1蛋白表达量显著高于窦性心律者,而ERK1蛋白表达无差异。结论:房颤患者心房肌细胞外调节激酶及磷酸酶呈激活状态,可能与心房颤动的发生与维持有关。     

NF-κB蛋白在柯萨奇病毒B3诱导的病毒性心肌炎小鼠心肌细胞焦亡过程中的调控作用

目的:探讨NF-κB蛋白对柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的病毒性心肌炎小鼠心肌细胞焦亡的调控作用.方法:将编号后的45只雄性BALB/c小鼠根据随机数表法平均分为3组,分别为对照组(normal组)、病毒性心肌炎组(CVB3组)和NF-κB蛋白抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)处理组(CVB3+PDTC组),每组各...     

PSMA对LNCaP细胞生长、迁移及ERK蛋白活性的影响

目的: 利用我们已经成功沉默前列腺特异性膜抗原(PSMA)的LNCaP前列腺癌细胞株,探讨PSMA对LNCaP细胞磷酸化胞外信号调节激酶(ERK)及细胞生长、迁移的影响,为进一步研究PSMA在前列腺癌发展中的作用提供理论基础。方法: 实验对象包括携带可稳定抑制PSMA表达siRNA慢病毒的LNCaP细胞组(实验组),携带对任何基因无干扰作用siRNA慢病毒的LNCaP细胞组(空转组),同时建立未进行处理的普通LNCaP细胞组(对照组),分别对在一般培养基及添加ERK蛋白上游抑制剂的3组细胞,使用Western blotting和细胞免疫化学的方法检测MAPK/ERK蛋白活性,并用MTT描绘细胞生长曲线、Transwell观察细胞迁移情况。结果: 在一般培养基的3组细胞中,Western blotting提示实验组磷酸化ERK蛋白表达明显低于对照组和空转组;免疫细胞化学结果显示实验组染色明显比对照组和空转组弱,阳性细胞数较少;MTT绘制生长曲线,得到实验组细胞的增殖生长能力较对照组、空转组降低;Transwell结果提示实验组较对照组和空转组细胞的增殖迁移能力降低。在ERK磷酸化被抑制的情况下,3组细胞磷酸化ERK蛋白均低表达,MTT及Transwell检测显示其生长迁移能力都处于低水平,且与在一般培养基中实验组的效应类似。结论: 初步发现PSMA可能通过上调前列腺癌LNCaP细胞ERK蛋白的活性,从而在其生长、迁移中起正向调节作用。     

15-HETE与ERK1/2在大鼠缺氧性肺动脉收缩中的作用

目的:为揭示缺氧性肺血管收缩机制,探讨细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)是否参与15-羟基二十碳四烯酸（15-HETE）收缩缺氧大鼠肺动脉的过程以及15-HETE对 ERK1/2活性的影响。 方法: 将大鼠置于氧气分数为12.0％的低氧箱中连续9 d形成缺氧模型。完整取出心肺，在显微镜下分离直径0.8-1.0 mm肺动脉剪为3 mm长的动脉环在组织浴槽内进行张力研究。比较15-HETE给药前后肺动脉环张力变化；用ERK1/2上游激酶抑制剂U0126孵育肺动脉环，比较U0126孵育前后15-HETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用；机械法去除动脉环内皮，再比较U0126孵育前后15-HETE的收缩作用。酶法分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞。Western blotting方法检测15-HETE作用时间（5-90 min）及浓度（10^-9-10^-6 mol/L）对 ERK1/2 的表达及活性的影响。 结果: 15-HETE对缺氧大鼠肺动脉环有收缩作用，呈浓度-效应关系，与正常对照组比较差异显著（P<0.05）；内皮完整和内皮去除的肺动脉环，U0126孵育前后，15-HETE的缩血管作用都受到抑制，差异显著（均为P<0.05）。Western bloting结果显示，15-HETE明显增强肺动脉血管平滑肌细胞ERK1/2的活性，随时间延长而降低，随浓度增加而增加，但对ERK1/2的蛋白表达无影响。 结论:15-HETE能上调大鼠肺动脉血管平滑肌细胞ERK1/2的活性，提示ERK1/2的活化是15-HETE收缩慢性缺氧大鼠肺动脉的一个重要环节。     

pGSK-3β和NF-κB在慢性支气管哮喘小鼠气道重塑中的表达水平及意义

目的探讨磷酸化糖原合成酶激酶3β(phosphor-Ser9 glycogen synthase kinase3β,pGSK-3β)和核因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB)的表达水平在慢性支气管哮喘气道重塑中的作用。方法 16只雄性BALB/c小鼠随机分为2组:支气管哮喘组与对照组,每组8只,通过卵蛋白致敏和雾化激发制备小鼠慢性支气管哮喘模型,对照组全部以生理盐水代替;2组小鼠分别在末次激发后24h内颈椎脱臼处死,取左肺通过HE染色,光学显微镜观察气道重塑情况;取右肺采用蛋白质印迹方法测定肺组织pGSK-3β、NF-κB、MMP-9的表达量。结果⑴支气管哮喘组出现管壁增厚,平滑肌增生、黏液分泌增加等气道重塑的特征性改变;⑵对照组pGSK-3β、NF-κB、MMP-9的表达水平均小于支气管哮喘组(P0.05),三者在慢性支气管哮喘小鼠中表达量增加。结论卵蛋白致敏反复雾化激发可导致气道重塑,GSK-3β/NF-κB信号转导途径在支气管哮喘气道重塑中起重要作用。     

NF-κB信号途径在小鼠狼疮性肾炎发病中的可能作用

目的:探讨NF-κB信号途径在小鼠狼疮性肾炎发病中的可能作用。方法:选取16周龄的雄性BXSB小鼠(狼疮性肾炎模型组)和同周龄C57BL/6小鼠(正常对照组)作为研究对象,透射电镜和PAS染色观察肾组织的超微结构形态改变;RT-PCR技术检测小鼠全血中HMGB1mRNA的表达变化。采用ELISA方法检测血清中HMGB1蛋白浓度;免疫组织化学检测肾组织中HMGB1和PCNA蛋白的表达变化;Western blot和流式细胞术检测肾组织中RAGE、p-NF-κB和IκB蛋白的表达。结果:16周时,与正常的C57BL/6小鼠相比,BXSB小鼠血清中BUN水平及尿中微球白蛋白水平明显升高;与正常的C57BL/6小鼠相比,BXSB小鼠全血中HMGB1mRNA水平和血清中HMGB1蛋白浓度明显升高;16周时,与正常的C57BL/6小鼠相比,BXSB基底膜明显增厚,部分足突融合,内皮细胞下可见团块状电子致密物沉积;与正常的C57BL/6小鼠相比,BXSB小鼠肾组织的肾小球中可见较多的PCNA阳性表达,肾小管上皮细胞核内也可见少量的表达;BXSB小鼠肾组织中HMGB1蛋白表达升高,HMGB1蛋白尤其在细胞增生明显而肥大的肾小球呈高表达,主要位于细胞浆和细胞外;而在C57BL/6小鼠肾脏组织中以小管细胞核表达为主;与对照组相比,BXSB小鼠肾组织p-NF-κB和RAGE蛋白表达明显升高;而IκB蛋白表达明显降低;HMGB1蛋白与p-NF-κB蛋白表达呈显著正相关(r=0.833,P=0.000);p-NF-κB蛋白与RAGE蛋白表达呈显著正相关(r=0.621,P=0.018);HMGB1蛋白与RAGE蛋白表达呈显著正相关(r=0.848,P=0.000);p-NF-κB蛋白与IκB蛋白表达呈显著负相关(r=-0.759,P=0.002)。结论:HMGB1在小鼠狼疮性肾炎中的致炎作用可能部分通过结合其受体RAGE,激活NF-κB信号途径,促进肾小球固有细胞的增生,从而导致增生性肾小球肾炎形成而实现的。     

内皮素在诱导人气管上皮下成纤维细胞转分化中的作用

目的： 探讨ET-1在诱导气道上皮下成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞过程中的作用及其信号与离子机制。方法: 将人气道上皮下成纤维细胞或种植在胶原凝胶中的成纤维细胞与经机械划伤加细菌脂多糖（LPS）刺激(L+M)的人气道上皮细胞株（16HBE）共培养，并加入ET受体A（ETRA）阻断剂BQ123或p38 MAPK、ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）特异性抑制剂，观察成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况与收缩反应性，以及p38 MAPK、ERK1/2信号通路的活化及其对α-SMA表达的影响；经钙离子荧光探针（Fluo-3/AM）负载，应用激光共聚焦显微镜观察成纤维细胞胞内钙的动态变化。结果: 损伤的气道上皮细胞诱导了上皮下成纤维细胞转分化为表达α-SMA、具有显著收缩反应能力的肌成纤维细胞，BQ123对其有一定的抑制效应；p38 MAPK、ERK1/2的特异性阻断剂（SB203580、PD98059）可钝化损伤上皮对成纤维细胞α-SMA表达的诱导作用。添加外源性ET-1增加成纤维细胞α-SMA表达并诱导p38 MAPK、ERK1/2信号通路的活化；同时，引起胞内钙水平的迅速上升。结论: 损伤的气道上皮细胞通过释放ET-1能够诱导上皮下成纤维细胞转分化为具有收缩反应性的肌成纤维细胞， p38 MAPK、 ERK1/2信号通路介导了这一过程，ET-1增强成纤维细胞Ca2+内流可能是启动其转分化的早期事件。     

丝裂原活化蛋白激酶p38的激活在四逆汤预处理诱导大鼠心肌延迟预适应中的作用

目的：探讨四逆汤能否诱导心肌延迟预适应及其机制。 方法： SD大鼠分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注(I/R）组、延迟缺血预处理组、四逆汤预处理组。延迟缺血预处理组采用经典大鼠冠脉结扎，缺血5 min，再灌5 min，反复循环3次，24 h后缺血1 h，再灌1 h。四逆汤预处理组给予四逆汤灌胃(5 mL·kg-1·d-1)连续3 d，末次灌药24 h后缺血1 h，再灌1 h。以心肌梗死面积、心肌酶为评价指标，测定心肌中NO2-/NO3-的含量并通过免疫组化检测大鼠心肌p38 MAPK及PKC的表达。 结果： 延迟缺血预处理组及四逆汤预处理组心肌梗死面积、血清CK、LDH的值明显少于I/R组，NO2-/NO3-含量显著高于I/R组，p38 MAPK和PKC发生转位且蛋白表达明显高于I/R组。 结论： 四逆汤能诱导心肌延迟预适应，其机制与p38 MAPK的激活可能有关。     

p38MAPK参与千金藤素诱导的心肌细胞凋亡

目的: 探讨千金藤素(CEP)致Sprague-Dawley(SD)乳大鼠心肌细胞的凋亡作用及其信号途径。方法: 应用MTT法检测千金藤素对心肌细胞活性的抑制作用;利用Hoechst 33342染色及Western blotting方法检测凋亡相关信号分子caspase-3,观察CEP致心肌细胞凋亡的作用;采用Western blotting法观测 CEP对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族3个主要信号分子c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38 MAPK磷酸化水平的影响,并利用ERK和p38 MAPK的特异性抑制剂,分别验证两种分子所介导的信号通路在CEP致心肌细胞凋亡中的作用。结果: (1)CEP能够剂量依赖和时间依赖地抑制心肌细胞的活性。(2)CEP作用于心肌细胞,出现细胞核碎裂现象和caspase-3激活。(3)CEP作用下p38 MAPK和ERK磷酸化水平显著增强,JNK的磷酸化状态未发生显著改变。(4)p38 MAPK磷酸化抑制剂SB203580显著减轻CEP对心肌细胞活性的抑制作用;ERK磷酸化抑制剂PD98059不能影响CEP对心肌细胞活性的抑制作用。结论: p38 MAPK参与CEP致心肌细胞凋亡作用。     

脂多糖诱导大鼠心肌细胞NF-κB、IκB-α的表达及意义

目的研究脂多糖(LPS)诱导大鼠心肌细胞NF-κB,IκB-α的表达及意义。方法100ng/mlLPS刺激心肌细胞0、0.5、1、2、4、6、8h和0、10、50、100ng/mlLPS刺激1h,免疫细胞化学检测NF-κBp65的表达,Westernblot检测IκB-α表达。结果LPS的刺激迅速激活心肌细胞NF-κBp65的表达,于1h时达高峰;IκB-α的表达先降低,后升高。结论LPS可诱导大鼠心肌细胞NF-κB的激活,并通过激活心肌细胞核因子-κB途径从而促进细胞损伤。