应用~(125)I—UdR释放法检测LAK细胞的杀伤作用

本文利用~(125)I-UdR标记K562、Raji靶细胞技术,建立体外测定LAK细胞的细胞毒方法。Raji细胞与K562细胞的标记条件相似,即在标记时间为4h、5×10~(-5)SMFUdR条件下,标记1×10~6细胞/ml。~(125)I-UdR最适用量为2—3μCi,效靶细胞孵育最佳时间为16-18h。~(125)I-UdR释放法检测的结果符合LAK细胞的一般特性。     

姜黄素逆转结肠癌细胞耐药的实验研究

目的：探索姜黄素逆转人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5FU作用及机制。方法：姜黄素、5-FU诱导细胞凋亡,采用MTT法检测细胞增殖以明确最佳实验条件;AnnexinV-FITC试剂盒检测细胞凋亡率;Western-blot分析耐药细胞株内cleaved-Caspase3、IL-6、STAT3蛋白表达水平。结果：姜黄素能逆转人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5FU的耐药程度;对照组、5-FU组、姜黄素组、联合用药组凋亡率分别为(2.5±2.1)%、(6.5±3.2)%、(19.9±7.2)%和(56.0±12.1)%;耐药细胞株中IL-6、STAT3蛋白表达明显高于亲本株;姜黄素的使用降低了耐药细胞株中IL-6、STAT3的蛋白表达量。结论：姜黄素能逆转人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5FU的耐药,其机制可能与下调IL-6/ STAT3有关。     

用胸导管引流细胞制备人白细胞间素Ⅱ条件的探讨

由于胸导管引流液中细胞成份和所处状态与脾脏、扁桃体细胞不尽相同,我们对胸导管引流细胞制备IL-2的实验条件进行了探讨,实验结果表明:采用含5%人AB血清的完全培养液将细胞调整为5×10~6/ml的浓度,加PHA150μg/ml,于37℃5%CO_2饱和湿度培养48h,收集含IL-2上清,是制备粗制IL-2的最佳条件。利用胸导管引流细胞制备人天然IL-2,不仅活性高、产量大,而且较用人脾、扁桃体淋巴细胞制备IL-2手续简便。粗制IL-2初步纯化后制成的临床肌肉注射制剂,经临床志愿者试用后无不良反应。     

重组人肿瘤坏死因子-α和5-氟尿嘧啶通过诱导死亡相关蛋白3表达抑制人胃癌细胞株的生长

目的　观察重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)- α和5- 氟尿嘧啶(5 FU)对人胃癌细胞株的生长抑制作用及其作用前、后人胃癌细胞株中死亡相关蛋白(DAP)3 的表达情况,探讨 DAP3 的临床意义。方法　选择不同浓度的 rhTNF α(0、50、100、200 ng/ml)和5 FU(0、1×10-6、1×10-5、1×10-4 mmol/L)作用于人胃癌细胞株BGC 823和HGC 27,采用酸性磷酸酶法测定各组细胞株的生长情况,确定rhTNF α和5 FU的有效浓度。采用蛋白质印迹法测定经有效浓度的rhTNF α和5 FU处理前、后人胃癌细胞株BGC 823和HGC 27中DAP3的表达情况。结果　酸性磷酸酶法测得100 ng/ml的 rhTNF α和1×10-5 mmol/L的5 FU可有效地抑制人胃癌细胞株 BGC 823 和 HGC 27 生长。人胃癌细胞株 BGC 823 和 HGC 27 中均未见 DAP3 表达,经 100 ng/ml 的rhTNF α或1×10-5 mmol/L的5 FU处理后 48 h,人胃癌细胞株 BGC 823 和 HGC 27 中均可见 DAP3 表达。结论　rhTNF α和5 FU通过诱导DAP3表达可抑制人胃癌细胞株BGC 823和HGC 27的生长,推测 DAP3 为一新的肿瘤治疗位点。     

体外诱生人白细胞介素-2的实验条件

探讨用植物血凝素(PHA)诱导人外周血单核的细胞(PBMC)产生白细胞介素-2(IL-2)的实验条件,并用PHA诱导正常人PBMC产生IL-2及用IL-2依赖细胞株(CTLL-2)增殖试验来滴定IL-2活性单位。结果:(1)PHA-M诱导人PBMO产生IL-2的最适条件:PBMC为1×10~3/ml、PHA-M浓度为0.5～1％、诱生时间为24h、RPMI1640营养液中需加入2～10％灭活的人AB型血清;(2)无论是PHA-M或PHA在较高剂量时(分别≥0.25％和6.25μg/m1)均抑制aTLL-2的生长;(3)用PHA-M诱导19例正常人PBMG产生IL-2,其活性单位为64±65u/mL(±SD,范围4～260)。     

正常人外周血单个核细胞白细胞介素-2受体荧光定量方法研究(简报)

本文探索了应用荧光分光光度计定量测定正常人外周血单个核细胞白细胞介素-2受体(IL_2R)的方法及其条件。以PHA与ConA诱导单个核细胞IL_2R表达的最适细胞浓度为3×10~6/ml。PHA和ConA最适浓度分别为100μg/ml和10μg/ml,PHA诱导较ConA为优。PHA诱导细胞IL_2R表达24小时达到高峰,尔后逐渐下降。第一抗体(抗—Tac)与第二抗体(荧光抗体)的最适浓度分别为1:50和1:32,两种抗体与单个核细胞孵育时间分别以20和10分钟为好。检测了同一标本不同复管的细胞(1×10~6)IL_2R结合荧光抗体M为(5.22±0.45)×10~(-10),变异     

钙调素拮抗剂EBB抗小鼠肝癌的实验研究

钙调素拮抗剂的抑癌作用及对化疗药的增效作用已有报道.本实验观察新合成钙调素拮抗剂O-4-乙氧基-丁基小柏胺(EBB)单独或与博莱霉素(BLM)联合应用,对小鼠肝癌的对抗作用. 以小鼠肝癌细胞(Hepatoma-22)为靶细胞,每孔5×10~4个/ml,与不同浓度EBB和BLM孵育72h后,作细胞计数,求得IC 50分别为1.3μg/ml和1.0μg/ml;每孔5×10~3个/0.1ml,与EBB和BLM孵育24h.用~3H-TdR参入法(0.2μCi/0.1ml)求得IC_(50)分别为1.0μg/ml及0.7μg/ml.EBB     

IL-10调控HaCaT细胞增殖及分化的分子机制

目的 探讨白细胞介素10 (IL-10)对皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)增殖影响和对氯化钙(Ca Cl2)诱导的角质形成细胞分化标志物的表达影响及其可能的分子机制。方法以不同浓度IL-10(0、3、10、30 ng/ml)处理Ha Ca T细胞不同时间(0、24、48、72 h),MTS分析细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期; IL-10(终浓度为10 ng/ml)预处理Ha Ca T 1 h，加入或不加Ca Cl2(终浓度为1.2 mmol/L)培养24、48、72 h,Western blot检测IL-10对Ha Ca T分化标志物表达影响;丝裂原蛋白激活激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)特异性抑制剂PD98059及磷脂酰肌醇激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-AKT)特异性抑制剂LY294002预处理Ha Ca T细胞，分别提取细胞总RNA和蛋白，荧光定量PCR(RTq PCR)和Western blot检测IL-10对Ha Ca T细胞分化标志物(Keratin1、Keratin5、Involucrin)表达影响。结果 MTS结果显示，在72 h内，IL-10...     

人外周血单个核细胞白细胞介素-2受体的荧光定量法研究

本文探索了应用荧光分光光度计定量测定正常人外周血单个核细胞介素-2受体(IL_2R)的方法及其条件.以PHA与ConA诱导单个核细胞IL_2R表达的最适细胞浓度为3×10~6/ml:PHA和ConA最适浓度分别为100μm/ml和10μg/ml,PHA诱导较ConA为优.PHA诱导细胞IL_2R的表达24h达到高峰,尔后逐渐下降.第一抗体(抗—Tao)和第二抗体(荧光抗体)与单个核细胞孵育时间分别以20min和10min为好.检测同一标本不同复管的细胞(1×10~6)IL_2R结合荧光抗体mol(简称M)为5.22±0.45×10~(10),变异系数(CV)为8.6％,表明该法稳定性较好.测定5例正常人细胞(1×10~6)IL_2R结合荧光抗体M为4.8±0.97×10~(10).CV为20.2％,结果表明该法能较客观检测出不同个体IL_2R表达.     

黄芪甲苷抑制NLRP3/IL-1β轴改善高糖诱导的血管平滑肌细胞炎症反应

目的:探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对高糖诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)炎症反应的作用及机制。方法:①采用不同浓度的葡萄糖(5.5、10、15、25 mmol/L)刺激VSMCs细胞24 h,或高浓度葡萄糖(25 mmol/L)处理VSMCs不同时间(0、6、12、24 h)。Western blot检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达;ELISA检测白介素-1β(IL-1β)含量。②采用不同浓度(0、10、20、40μg/ml)AS-Ⅳ干预VSMCs细胞24 h后,CCK8法检测并计算细胞活力。③将VSMCs细胞分为对照组、高糖组、AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+高糖组。先给予AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+高糖组20μg/ml AS-Ⅳ预孵育2 h后,再向高糖组和AS-Ⅳ+高糖组加入25 mmol/L葡萄糖刺激24 h。Western blot检测NLRP3蛋白表达;ELISA检测IL-1β含量。④构建si-NLRP3 RNA转染的VSMCs细胞。将细胞分为对照组、高糖组、si-NLRP3组和si-NLRP3+高糖组。细胞转染6 h后,高糖组和si-NLRP3+高糖组细胞加入25 mmol/L葡萄糖刺激24 h。PCR检测NLRP3 mRNA表达;ELISA检测IL-1β含量。⑤应用转染技术构建NLRP3过表达的VSMCs细胞。将细胞分为对照组、AS-Ⅳ组、NLRP3过表达组和NLRP3过表达+AS-Ⅳ组。细胞转染6 h后,AS-Ⅳ组和NLRP3过表达+AS-Ⅳ组加入20μg/ml AS-Ⅳ干预24 h。PCR检测NLRP3 mRNA表达;ELISA检测IL-1β含量。结果:①高糖刺激能够上调VSMCs细胞NLRP3和IL-1β蛋白表达(P0.01),且呈一定的浓度/时间依赖性,故选取25 mmol/L葡萄糖作用24 h进行后续研究。②10、20μg/ml AS-Ⅳ作用VSMCs细胞24 h后,细胞活力无显著变化(P0.05),选择20μg/ml浓度进行后续实验。③与对照组相比,AS-Ⅳ组细胞NLRP3蛋白表达量显著下调(P0.05),IL-1β含量显著降低(P0.05);与高糖组相比,AS-Ⅳ+高糖组NLRP3蛋白表达量显著减少(P0.01),IL-1β含量显著降低(P0.01)。④与对照组相比,si-NLRP3组细胞NLRP3 mRNA表达量显著降低(P0.01),IL-1β含量没有明显变化;与高糖组相比,si-NLRP3+高糖组NLRP3 mRNA表达量显著减少(P0.01),IL-1β含量显著降低(P0.01)。⑤与AS-Ⅳ组相比,NLRP3过表达+AS-Ⅳ组NLRP3 mRNA表达量显著增多(P0.01),IL-1β含量显著升高(P0.01)。结论:黄芪甲苷可能通过抑制NLRP3/IL-1β轴改善高糖诱导的VSMCs炎症反应。     

IL-3对人脐血基质细胞调控作用的实验研究

目的：为了探讨ＩＬ－３对人脐血基质细胞诱导形成及经诱导后的基质细胞对粒单系造血祖细胞生成的调节作用。方法：用体外液体培养法观察ＩＬ－３诱导人脐血基质细胞层的建立及不同浓度ＩＬ－３对基质细胞数和基质细胞上清液中ＧＭＣＳＦ活性的影响。结果：ＩＬ－３能够促进人脐血基质细胞形成，其作用与ＩＬ－３浓度有依赖性，最适浓度为６０ｎｇ／ｍｌ。当浓度增加到９０ｎｇ／ｍｌ时，脐血基质细胞数值明显降低。粒系造血刺激因子在脐血基质细胞建层后的１—２周活性最高。结论：ＩＬ－３可促进造血实质细胞生成及改善造血微环境。     

逆转录病毒转染的小鼠IL－3基因在NIH／3T3细胞中的表达

将小鼠白细胞介素３（ＩＬ－３）ｃＤＮＡ重组到逆转录病毒载体ｐＮ２Ａ质粒上，用电穿孔法将此重组子转染包装细胞系（ＰＡ３１７），经用Ｇ４１８（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）选择培养基筛选，得到产病毒效价为每ｍｌ５×１０４～２×１０５ＣＦＵ（ｃｏｌｏｎｙ－ｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ）的Ｇ４１８抗性细胞克隆。然后取其培养上清液转染ＮＩＨ／３Ｔ３细胞。通过检测被病毒转染的ＮＩＨ／３Ｔ３细胞培养上清液对小鼠骨髓细胞的增殖反应（ＭＴＴ法）和促分化作用（ＣＦＵ培养法），表明转染的ＮＩＨ／３Ｔ３细胞克隆能分泌ＩＬ－３。此结果为进行ＩＬ－３转基因治疗研究奠定了实验基础。     

蛇毒抗高凝状态酶对小鼠骨髓造血系统的影响

目的:研究蛇毒抗高凝状态酶(AHCSE)对实验性小鼠骨髓造血系统的影响和作用机制。方法:将小鼠随机分为四组,分别用AHCSE,阿霉素,AHCSE+阿霉素,生理盐水经尾静脉注射,10d后观察并测定血清白细胞介素-3(IL-3)含量,骨髓粒细胞比例及粒红比,脾系数。结果:蛇毒抗高凝状态酶能刺激骨髓造血细胞显著增生,血清IL-3含量,骨髓粒细胞比例及粒红比,脾系数AHCSE较其他三组明显增加,有统计学意义(P<0.05)。结论:AHCSE能显著刺激骨髓增生可能与激活细胞免疫机制使细胞因子IL-3增加有关。     

泻肝方药血清免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3、IFN-γ的影响

目的：检测免疫介导再生障碍性贫血(简称再障)小鼠骨髓造血细胞在含泻肝方血清的液体培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度，探讨泻肝方药治疗再障的作用机理。方法：用泻肝方灌喂DBA/2大鼠，抽取、制备含中药血清；Balb／C小鼠经^60Co5 Gy γ射线照射后由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液形成免疫介导再障模型。在含泻肝方血清的液体培养体系中培养再障小鼠骨髓造血细胞，检测培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度。结果：泻肝方药对再障小鼠IL-3、IFN-γ的总量无明显影响。结论：泻肝方药可能通过使局部IFN-γ浓度降低进而影响造血干／祖细胞增殖、分化。     

Changes of Regulatory T Cells in Graves' Disease

The immune mechanism of Graves' diseases (GD) and the roles of regulator T cells were investigated. In 32 patients with GD (GD group) and 20 healthy volunteers (control group), flow cy-tometry was used to detect the proportion of CD4 CD25 cells, MACS to isolate CD4 CD25 cells, RT-PCR to assay the expression of FOXP3, and ELISA to test the level of IL-10, respectively. It was found that there was no significant change in the proportion of CD4 CD25 T cells between GD group and control group (P>0.05), while secretion of IL-10 and expression of FOXP3 in GD group were lower than control group (P<0.01 and P<0.05, respectively). In conclusion, though the proportion of regulatory T cells of peripheral blood lymphocytes in the patients with GD, the functions of them were significantly weakened, which might be a pathogenic factor in GD.     

淫羊藿甙促进小鼠脾细胞IL-3 mRNA及IL-6 mRNA 的表达

淫羊藿甙(lcariine,ICA) 是从中药淫羊藿中提取的一种具有生物活性的成分,有免疫激活作用,能增强T细胞功能[1],促进抗体生成[2],有减弱小鼠产生Ts细胞的作用[3]. 近来研究表明,ICA具有诱生IL-2,IL-3和IL-6等细胞因子的作用[4],但其免疫药理作用的分子机制罕见报道.本实验通过斑点杂交方法观察了ICA 对小鼠体外脾淋巴细胞IL-3 mRNA和IL-6 mRNA 表达的影响.     

IL-10和FOXP3在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨IL-10和FOXP3在非小细胞肺癌中的表达及其与患者预后的相关性。方法运用免疫组织化学方法检测47例非小细胞肺癌组织中IL-10和FOXP3的表达,分析其与患者预后的关系。结果 IL-10在肺癌细胞的阳性表达率为70.21%,表达水平与临床分期正相关,与患者预后呈负相关(P<0.05)。FOXP3在癌组织内淋巴细胞的阳性表达率为46.80%;表达水平与病理分级及临床分期正相关(P<0.05),与IL-10表达呈正相关(P<0.05)。结论 NSCLC中IL-10表达与FOXP3表达及预后相关,可作为判断预后的指标。     

Changes of Regulatory T Cells in Graves＇ Disease

The immune mechanism of Graves＇ diseases （GD） and the roles of regulator T cells were investigated. In 32 patients with GD （GD group） and 20 healthy volunteers （control group）, flow cytometry was used to detect the proportion of CD4^＋CD25^＋ cells, MACS to isolate CD4^＋ CD25^＋ cells, RT-PCR to assay the expression of FOXP3, and ELISA to test the leyel of IL-10, respectively. It was found that there was no significant change in the proportion of CD4^＋CD25^＋ T cells between GD group and control group （P〉0.05）, while secretion of IL-10 and expression of FOXP3 in GD group were lower than control group （P〈0.01 and P〈0.05, respectively）. In conclusion, though the proportion of regulatory T cells of peripheral blood lymphocytes in the patients with GD, the functions of them were significantly weakened, which might be a pathogenic factor in GD.     

白细胞介素2和3活化的骨髓细胞杀灭肿瘤细胞和造血的作用

肺癌患者的骨髓有核细胞用IL-2活化后对自身肺脓癌细胞具有很强的杀伤能力,与外周血相比,杀伤活性高、有效活性时间长,表明可用骨髓有核细胞制备高能长效杀瘤活性细胞,进行癌的过继性细胞免疫治疗。先用IL-2培养,48h后加入IL-3培养,既可保持IL-2诱导的杀瘤活性,又有与新鲜骨髓同样的造血能力,可用本文方法净化骨髓中的肿瘤细胞作自身骨髓移植。     

正常鼠和免疫鼠CD3AK细胞和LAK细胞杀伤活性的比较研究

实验取正常鼠和Ｐ８１５肿瘤细胞致敏的免疫鼠脾细胞，经抗ＣＤ３抗体与低剂量ＩＬ－２或高剂量ＩＬ－２分别诱生为ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞，用改良的乳酸脱氢酶释放法以Ｐ８１５细胞和ＹＡＣ－１细胞为靶细胞，测定ＣＤ３ＡＫ和ＬＡＫ细胞的杀伤活性。结果表明：正常鼠ＣＤ３ＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性高于ＬＡＫ细胞，对ＹＡＣ－１细胞的杀伤活性低于ＬＡＫ细胞。免疫鼠ＬＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性明显增高，高