基因转染DKK1对17β-雌二醇促进子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞VEGF和MMP-9表达的影响

目的 利用基因转染pcDNA3.1-DKK1阻断Wnt/β-catenin信号通路,观察对17β-雌二醇(17β-E 2)作用后子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞(ESCs)中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA及蛋白表达的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路在介导雌激素促进异位内膜粘附、侵袭和转移中的作用.方法 体外分离培养内异症患者ESCs,利用Lipofectamine TM 2000,分别将pcDNA3.1-DKK1质粒,pcDNA3.1空载质粒转入ESCs.选用10 -10 mol/L 17β-E 2处理ESCs不同时间,RT-PCR和Western blot检测转染DKK1前后ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达.结果 17β-E 2能明显促进内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白的表达,于10 -10 mol/L作用48 h最明显(P ＜0.05).转染pcDNA3.1-DKK1质粒组内异症患者ESCs VEGF和MMP-9 mRNA及蛋白表达较空白组和空载体组均显著下降(均 P ＜0.05).结论 阻断Wnt/β-catenin信号通路能明显抑制17β-E 2对内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达的促进作用.雌激素可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进内异症患者在位子宫内膜的异位种植.     

Wnt／β-catenin 信号通路4个基因在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的：探讨 Wnt/β-catenin 信号通路 Wnt-7a、Frlzzled、β-catenin 和 MMP-9基因在子宫内膜异位症患者在位内膜组织、异位内膜组织和正常子宫内膜组织的表达及其意义。方法采用免疫组织化学 SP 方法和Western blot 方法分别检测子宫内膜异位症患者在位内膜组织、异位内膜组织和正常子宫内膜组织中 Wnt-7a、Fr-lzzled、β-catenin 和 MMP-9基因蛋白质表达水平;用实时定量 RT-PCR 方法检测 Wnt-7a、Frlzzled、β-catenin 和MMP-9基因的 mRNA 表达水平。结果免疫组织化学实验显示,Wnt-7a 在3种内膜组织中均无表达,3种不同组织的内膜中 Frizzled、β-catenin 和 MMP-9蛋白质在异位组织表达明显高于正常内膜组织（P ＜0．01）;在异位内膜组织表达明显高于在位内膜组织（P ＜0．05）。Western blot 实验显示 Wnt-7a、Frizzled、β-catenin 和 MMP-9在子宫内膜异位组织蛋白质表达水平高于正常子宫内膜组织和在位子宫内膜组织。Wnt-7a、Frlzzled、β-catenin 和MMP-9基因 mRNA 表达水平异位内膜组织高于在位内膜组织和正常内膜组织,Wnt-7a、Frlzzled、β-catenin 基因mRNA 表达水平在位内膜组织高于正常内膜组织,MMP-9基因 mRNA 表达水平在位内膜组织低于正常内膜组织。结论Wnt/β-catenin 信号通路 Wnt-7a、Frlzzled、β-catenin 和 MMP-9基因可能共同参与了子宫内膜异位症的发生,并且β-catenin 可能通过对上游 Wnt-7a、Frizzled 和下游信号靶基因 MMP-9mRNA 的传导调控成为子宫内膜异位症疾病发展过程中的作用机制。     

阻断Wnt/β-catenin信号通路对17β-雌二醇作用后子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞活化的影响

目的 探讨17β-雌二醇(17β-E2)作用后子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cell,ESC)内是否存在功能性Wnt/β-catenin信号通路的激活,以及阻断该信号通路对ESC活化的影响.方法 体外分离培养内异症患者在位ESC,用0.1 nmol/L 17β-E2处理ESC 48 h.免疫细胞化学染色检测17β-E2作用后β-cate-nin在ESC中的表达.通过转染T细胞因子(T-cell facter,TCF)依赖的荧光索酶报告质粒(PGL3一OT)检测ESC内的Wnt/β-catenin信号,以PGL3-OF为阴性对照.将TCF的显性负性突变体(dominant negative TCF,dnTCF)表达质粒转染ESC,阻断Wnt/β-catenin信号的转导,用Western blot法检测ESC血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达变化.结果 免疫细胞化学染色发现17β-E2能促进β-catenin在ESC核内的表达.17β-E2(0.1 nmol/L)作用后,转染相同量的质粒,PGL3-OT组细胞荧光活性明显高于PGL3-OF组(P<0.01).Western blot检测结果显示17β-E2能明显促进ESC VEGF和MMP-9的表达;转染dnTCF-3阻断Wnt/β-catenin信号通路,ESC中VEGF和MMP-9的表达较转染空载体(pcDNA3)组均显著下降(均P<0.01).结论 17β-E2能促进内异症患者ESC Wnt/β-catenin信号通路的激活,阻断该信号通路可抑制ESC的活化.     

子宫内膜异位裸鼠模型的建立及血管生成的观察

目的建立子宫内膜异位(EMs)裸鼠模型,观察异位病灶血管生成情况。方法建立EMs裸鼠皮下种植和腹腔注射模型,观察异位病灶的形态特点,用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)及微血管密度。结果皮下种植组10只,成模9只,腹腔注射组10只,成模8只。异位病灶呈现增生期子宫内膜特点,VEGF表达阳性,并有微血管形成。结论成功建立EMs裸鼠皮下种植及腹腔注射模型,异位病灶新生血管较多,该模型可用于人EMs血管生成及抗血管生成治疗的研究。     

裸鼠人子宫内膜异位症模型建立与病灶血管形成相关检测

[目的]探讨裸鼠人子宫内膜异位症模型的建立方法,研究血管内皮生长因子(VEGF)表达、微血管生成与异位人内膜病灶病理组织发生的关系.[方法]分别采用皮下接种、腹腔放置与腹腔注射的方法,建立裸鼠人子宫内膜异位症模型,连续切片观察病灶的血管生成,再使用S-P免疫组化染色法检测10例成模裸鼠的14处病灶中VEGF的表达及微血管密度(MVD).[结果]实验裸鼠共18只,皮下接种组10只,8例成模;腹腔放置组4例,1例死亡,2例成模;腹腔注射组4只,均无成模.连续切片结果发现于种植第4天组织内出现血管生长,异位人子宫内膜病灶的VEGF表达阳性率腺上皮动情前期10.1±3.2,动情后期12.5±5.4;间质动情前期4.9±2.5,动情后期5.2±3.7;MVD动情前期(80±15)/mm2,动情后期(84±23)/mm2,腺上皮表达VEGF有增多趋势.[结论]成功建立裸鼠皮下与腹腔人异体移植模型,同时发现异位人内膜于种植第4天出现血管生长.模型病灶种植后15d检测到血管增生与腺上皮VEGF的表达增高,可适宜进行抗血管生成治疗评估.     

子宫内膜异位症中nm23-H1和β-catenin基因表达及意义

目的:检测β连环蛋白(β-catenin)、nm23-H1在子宫内膜异位症(EMs)患者异位的间质细胞和正常组的间质细胞中的表达情况,研究其表达的差异,探讨nm23-H1和β-catenin在EMs中的作用以及病理机制。方法:收集10例EMs患者的异位病灶(卵巢)和10例正常对照组子宫内膜组织标本,利用分离法,培养原代间质细胞,通过nm23-H1的siRNA的转染试剂作用24~48 h,采用qRT-PCR方法检测两基因在两组中的表达变化。结果:(1)在EMs的间质细胞中,nm23-H1的表达量较正常组降低,而β-catenin的表达量较正常组增高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)在EMs组和正常组的间质细胞中,经转染后nm23-H1基因的表达水平均有所减少,β-catenin的表达水平较前均有所增加,两者的变化也有统计学意义(P<0.05)。结论:nm23-H1、β-catenin相互作用调控EMs的发展,β-catenin可能接受nm23-H1基因的调节在子宫内膜异位症中发挥重要作用。     

VEGF在人子宫内膜异位症裸鼠模型组织中的表达及意义

目的 建立人子宫内膜异位症(EMs)裸鼠模型,检测血管内皮生长因子(VEGF)在正常在位内膜及裸鼠异位内膜的表达,探讨其在EMs发生发展中的作用.方法 分别采用皮下种植和腹腔注射的方法,建立EMs裸鼠模型,光镜下观察异位病灶的形态学特点,并采用免疫组化法检测正常在位内膜及裸鼠异位内膜中VEGF蛋白表达水平.结果 实验裸鼠共20只,皮下种植组10只,8只成模,腹腔注射组10只,7只成模,异位病灶在光镜下呈现增生期特点;正常在位内膜10例,VEGF蛋白在异位内膜中的表达有增多趋势(t=2.632,P<0.05).结论 成功建立人EMs裸鼠皮下种植及腹腔注射模型,检测到VEGF表达较正常在位内膜增多,该模型可用于进行人EMs血管生成及抗血管生成治疗的研究模型.     

内皮抑素在人子宫内膜异位症裸鼠模型中的治疗作用

目的建立人子宫内膜异位症(内异症)裸鼠模型,探讨内皮抑素治疗内异症的作用。方法采用皮下种植方法,建立内异症裸鼠模型,光镜下观察异位病灶的形态学特点,采用免疫组化法检测内皮抑素的不同给药方法裸鼠异位内膜中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果实验裸鼠共25只,20只成模,以内皮抑素按2mg/(kg.d)分别自尾静脉注射(静脉注射组8只)及局部注射(局部注射组7只),对照组注射5只(局部注射)同体积PBS,比较3组异位病灶VEGF的表达。注射内皮抑素的两组异位病灶的VEGF表达均明显降低,差异均有显著性(P<0.05),而两组之间比较,局部注射组VEGF的表达较静脉注射组低,差异有显著性(P<0.05)。结论成功建立人子宫内膜异位症裸鼠皮下种植模型,通过不同给药途径内皮抑素对内异症裸鼠异位内膜VEGF分泌的抑制、局部给药效果好于全身用药,给今后内皮抑素应用于临床治疗子宫内膜异位症提供了实验依据。     

内皮抑素在人子宫内膜异位症裸鼠模型中的治疗作用术

目的 建立人子宫内膜异位症(内异症)裸鼠模型,探讨内皮抑素治疗内异症的作用.方法 采用皮下种植方法,建立内异症裸鼠模型,光镜下观察异位病灶的形态学特点,采用免疫组化法检测内皮抑素的不同给药方法裸鼠异位内膜中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平.结果 实验裸鼠共25只,加只成模,以内皮抑素按2 mg/(kg·d)分别自尾静脉注射(静脉注射组8只)及局部注射(局部注射组7只),对照组注射5只(局部注射)同体积PBS,比较3组异位病灶VEGF的表达.注射内皮抑素的两组异位病灶的VEGF表达均明显降低,差异均有显著性(P＜0.05),而两组之间比较,局部注射组VEGF的表达较静脉注射组低,差异有显著性(P＜0.05).结论 成功建立人子宫内膜异位症裸鼠皮下种植模型,通过不同给药途径内皮抑素对内异症裸鼠异位内膜VEGF分泌的抑制、局部给药效果好于全身用药,给今后内皮抑素应用于临床治疗子宫内膜异位症提供了实验依据.     

消瘤方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响

目的:探讨消瘤方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响。方法:雌性8~12周龄SD大鼠,采用自体移植法手术造模成功后,随机分为模型组、西药组、消瘤方高剂量与低剂量组;另设正常组、假手术组为对照。模型组和假手术组灌胃0.9%Na Cl溶液,西药组灌胃丹那唑混悬液,消瘤方高、低剂量组灌胃不同剂量(55.0、27.5 g·kg-1·d-1)的消瘤方药液,连续给药4周。剖腹观察子宫内膜组织种植及生长情况,并采用Western-blot法检测药物干预后模型大鼠在位及异位子宫内膜细胞Wnt7a、β-catenin蛋白表达的变化。结果:模型组异位内膜组织生长良好,中药高剂量与西药组异位内膜组织萎缩,而各组在位的子宫内膜组织肉眼观察无明显变化;与模型组比较,中药高剂量组和西药组在位、异位内膜细胞中Wnt7a、β-catenin蛋白的表达水平下降(P0.05),且均优于中药低剂量组(P0.05)。结论:消瘤方可促进子宫内膜细胞凋亡,并可抑制Wnt通路的关键调节因子。     

Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59抑制子宫内膜异位症子宫内膜干细胞的增殖

目的分析Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59对子宫内膜异位症(EM)子宫内膜干细胞增殖的影响。 方法分离纯化获得子宫内膜干细胞,随机分为对照组、低剂量组(5 mmol/L Wnt-C59)和高剂量组(30 mmol/L Wnt-C59)。MTT法分析各组细胞增殖情况,Western blotting法分析细胞凋亡蛋白及Wnt/β-catenin通路蛋白的表达变化,酶联免疫吸附测定法分析LC3、Beclin1水平变化。结果与对照组比较,低剂量组和高剂量组细胞增殖受到明显抑制,Wnt3a及β-catenin蛋白水平明显降低,细胞凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-9水平明显升高,LC3、Beclin1蛋白水平明显升高(P＜0.05),且高剂量组均更为明显(P＜0.05)。Pearson相关性分析显示,Wnt3a及β-catenin蛋白水平均与细胞增殖抑制率呈负相关(P＜0.05)。结论Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59能有效抑制EM子宫内膜干细胞增殖,促进其凋亡、自噬作用,其作用可能与其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制有关。     

靶向NF-κB的siRNA抑制人子宫内膜异位种植的实验研究

目的:观察NF-κB p65 siRNA对人子宫内膜在异位种植于裸鼠的影响,以明确NF-κB在子宫内膜异位症（EMs）发生发展的作用,为EMs治疗探索新的途径。方法:将EMs患者在位子宫内膜组织分别注入30只裸鼠,随机分为3组,每组10只,3d后分别给予生理盐水、NF-κB p65 siRNA或阴性siRNA干预,观察各自子宫内膜种植成功率及内膜的病理特点。结果: NF-κB p65 siRNA干预组子宫内膜种植成功率（20%）低于其他两组(80%,70%)（p<0.05）;且成活的异位内膜腺体发育不良,组织中NF-κB、VEGF及ICAM-1表达亦减少,与其他两组差异有显著性（p<0.05）;接种组与阴性干预组间比较差异则无显著性（p>0.05）。结论: NF-κB参与调控EMs的发生发展,沉默NF-κB基因可以显著抑制异位病灶的种植和生长;NF-κB是通过降调VEGF及ICAM-1等发挥作用的。     

子宫内膜异位症

子宫内膜异位症；子宫内膜异位症患者腹腔液中巨噬细胞和不育的关系；不同部位子宫内膜异位症与血清CA125水平的关系；MMP-9和TIMP-3在内异症患者子宫内膜中的表达；孕激素受体亚型在卵巢子宫内膜异位囊肿组织的表达；基质金属蛋白酶及其抑制物与子宫内膜异位症关系的研究；基质金属蛋白酶9及其组织抑制剂1在子宫内膜异位症组织中的表达。     

定坤丹对子宫内膜异位症大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响

目的 探索定坤丹对子宫内膜异位症(EMs)大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。方法 通过异位移植子宫内膜组织,构建EMs大鼠模型,随机分为5组：模型组(M组)、定坤丹低(1.13 g/kg)剂量组(DKP-L组)、定坤丹中(2.26 g/kg)剂量组(DKP-M组)、定坤丹高(4.52 g/kg)剂量组(DKP-H组)、孕三烯酮(60 mg/kg)组(GES组),每组12只,另取12只正常SD大鼠只开腹不异位移植子宫内膜组织,设为假手术组(Sham组),以药物分组干预后处死大鼠,测定各组大鼠异位子宫内膜质量与体积,免疫组织化学染色检测大鼠异位子宫内膜微血管密度(CD31阳性率)与VEGF、MMP-9表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清VEGF、MMP-9、iNOS、TNF-α水平;蛋白免疫印迹实验检测大鼠异位子宫内膜PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达。结果 与Sham组相比,M组大鼠异位子宫内膜微血管密度、VEGF与MMP-9表达、血清VEGF、MMP-9、iNOS及TNF-α水平、异位子宫内膜织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/...     

VEGF CD44v6 MMP-9在子宫内膜异位症组织中的表达及临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、黏附分子CD44v6、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)在子宫内膜异位症发病机制中的作用及临床意义。方法通过免疫组化S-P法分别对60例卵巢异位内膜、52例子宫内膜异位症在位子宫内膜和44例正常子宫内膜组织分别行VEGF、CD44v6和MMP-9的检测,并进行观察和对比。结果 VEGF、CD44v6、MMP-9在卵巢异位内膜中的表达与在位内膜组和正常内膜组比较,有明显增强(P<0.01);在位内膜与正常子宫内膜相比,VEGF在位内膜中的表达高于正常内膜中的表达,有统计学意义(P<0.01),CD44v6及MMP-9在在位内膜中的表达略高于正常内膜中的表达,但无统计学意义(P>0.05)。结论 VEGF、CD44v6、MMP-9在卵巢异位内膜中呈高表达状态,异位内膜组VEGF和CD44v6之间呈正相关(r1=0.462,χ2=42.038,P=0.000);MMP-9与CD44v6之间呈正相关(r2=0.558,χ2=70.534,P=0.000);MMP-9与VEGF呈正相关(r3=0.397,χ2=29.187,P=0.000),表明与异位内膜的高侵袭性和高血管新生能力有关,可能在EMS的发生发展中起重要作用。     

Survivin和MMP-9在子宫内膜异位症中的表达及相关性分析

目的通过检测Survivin（凋亡抑制基因）及MMP-9（基质金属酶蛋白9）在子宫内膜异位症（endom-otriosis,EMS）患者在位内膜、异位内膜组织中的表达,探讨其在子宫内膜异位症发生发展中的作用及两者的相关性。方法采用免疫组化二步法检测40例患者异位子宫内膜组织、在位内膜组织及40例正常子宫内膜（单纯子宫肌瘤）组织中Survivin及MMP-9的表达情况,Survivin及MMP-9二者相关性检验采用Spearman等级相关。结果 Survivin在子宫内膜异位症患者异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜组织中阳性表达率分别为77.5%、60.0%和7.5%;MMP-9在三组子宫内膜阳性表达率分别为72.5%、62.5%和20.0%;两种蛋白在三组中的表达差异具有统计学意义（P〈0.05）。Survivin与MMP-9在子宫内膜异位症中表达呈正相关（P〈0.05）。结论 Survivin蛋白和MMP-9在子宫内膜异位症患者的在位及异位内膜均高表达,二者在子宫内膜异位症的发生发展中有协同作用。     

慢病毒介导靶向survivin基因的shRNA抑制子宫内膜在裸鼠腹腔种植生长

目的研究慢病毒介导生存素(survivin)基因特异性短发夹状RNA(shRNA) 对人子宫内膜在裸鼠腹腔种植生长的影响。
方法将45只裸鼠随机分为实验组、阴性对照组及空白对照组,每组15只,将子宫内膜异位症患者在位内膜注射入裸鼠腹腔,同
时将survivin-shRNA慢病毒、空载慢病毒及磷酸盐缓冲液分别注射至3组裸鼠腹腔内,2周后观察各组子宫内膜种植成功率,光
镜下观察异位病灶的形态学特点,免疫组化方法检测各组病灶中survivin 的表达水平。结果实验组子宫内膜种植成功率
（26.67%）明显低于阴性对照组（73.33%）及空白对照组（80%,P<0.01）;实验组成活的异位内膜腺体发育不良,间质伴有不同程
度的坏死;该组病灶中survivin蛋白表达亦明显下降,与两对照组比较差异有显著性（P<0.001）。结论慢病毒介导survivin基因
特异性shRNA能够通过靶向沉默survivin基因明显抑制人子宫内膜在裸鼠腹腔中的种植生长。
     

基质金属蛋白酶3、9在子宫内膜异位症中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶及其抑制剂在子宫内膜异位症发生及发展中的作用及临床意义。方法采用免疫组化SP法分别测定MMP-3、MMP-9在卵巢子宫内膜异位症患者的异位内膜30例（A组）及其在位内膜16例（B组），子宫腺肌症患者的异位内膜40例（c组），子宫肌瘤患者的子宫内膜20例（正常对照D组）的表达强度。结果卵巢子宫内膜异位症患者和子宫腺肌症患者的异位内膜中MMP-3、MMP-9的表达强度明显高于正常子宫内膜（P〈0．05）；卵巢子宫内膜异位症患者和子宫腺肌症患者的异位内膜中MMP-3、MMP-9的表达强度无明显差异（P〉0．05）；MMP-3、MMP-9，在卵巢子宫内膜异位症患者的在位内膜中的表达与在正常对照组子宫内膜中的表达无明显差异。结论MMP-3、MMP-9可能参与子宫内膜异位症和子宫腺肌症的发生和发展。     

子宫内膜异位症患者在位内膜的基因表达与复发相关性研究

目的：研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)表达在子宫内膜异位症(EM)复发患者的相关性。方法利用RT-PCR检测基因表达方法检测EM患者未复发7例，复发15例诊刮取子宫内膜进行通过RT-PCR检测基因表达；另随机选取非子宫内膜异位患者8例作同样的检测成为对照组。结果 RT-PCR基因表达显示MMP-2、MMP-9在位内膜对照组、未复发组、复发组被检者的检测值呈上升趋势，而VEGF呈下降趋势。检测值VEGF在对照组、未复发组及复发组中，MMP-2检测值在正常组与复发组有统计学差异(P<0.05)。结论 EM复发患者MMP-2、MMP-9检测值较高，VEGF检测值较低，对判断EM患者复发评估预后有一定的临床价值。     

MMP-2、TIMP-2及VEGF蛋白在子宫内膜异位症裸鼠模型组织中的表达及意义

目的建立裸鼠子宫内膜异位症（EMs）模型，检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）、血管内皮生长因子（VEGF）在异位内膜及正常内膜的表达，探讨其在EMs发生、发展中的作用。方法将育龄妇女正常分泌晚期子宫内膜注入裸鼠盆腹腔，建立EMs裸鼠模型，光镜下观察异位病灶的形态学特点，并采用免疫组化方法（PV-6001／6002法）检测异位内膜MMP-2、TIMP-2、VEGF蛋白表达水平，与种植前子宫内膜比较。结果光镜下观察，异位病灶具有增生期特点；且异位内膜较正常内膜MMP-2／TIMP-2比值增高（t=12．919，P〈0．01），VEGF蛋白表达增强（t=2．647，P〈0．05）。结论裸鼠模型是EMs早期临床研究的理想模型；MMP-2／TIMP-2比值升高及VEGF表达增强与异位内膜的高侵袭性和高血管新生能力有关，在EMs的发生发展中起重要作用。