乙肝转阴散对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用

目的 :研究乙肝转阴散(YGZYS)对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎E抗原(HBeAg)分泌的影响。 方法 :采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测YGZYS对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC₅₀)和最大无毒浓度(TC₀);在TC₀基础上观察药物5个不同浓度作用于HepG2.2.15细胞,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养4 d和8 d的细胞上清液HBsAg和HBeAg的滴度。 结果 :TC₅₀ 5.386 g ·L^-1,TC₀ 0.736 g ·L^-1。提示YGZYS对HepG2.2.15细胞毒性作用较低。在无毒浓度下,YGZYS能有效地抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg;且治疗指数(TI)均大于2,说明YGZYS为高效低毒的抗HBV药物。 结论 :YGZYS可有效地抑制HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的分泌,且毒性较低。     

夜香树多糖诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡作用的探讨

目的:探讨夜香树多糖对人骨肉瘤细胞MG-63凋亡诱导作用并研究其可能的作用机制。方法:从夜香树叶中提取夜香树多糖,分别用终质量浓度为2.5,5,10 mg·L^-1的夜香树多糖处理处于对数生长期的MG-63细胞,另设MG-63细胞为空白组;不同质量浓度夜香树多糖作用72 h后,采用MTT法检测MG-63细胞增殖抑制作用;不同质量浓度夜香树多糖作用46 h后,采用透射电镜观察经处理过的细胞超微结构的改变,采用流式细胞术检测夜香树多糖对MG-63细胞凋亡率的影响,Western blot法分析半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3),Caspase-8,Caspase-9和B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)的蛋白表达水平。结果:夜香树多糖显著抑制人骨肉瘤细胞MG-63增生,在5~10 mg·L^-1质量浓度显著抑制细胞增殖,并呈浓度和时间的依赖性;电镜下可发现夜香树多糖能诱导细胞凋亡,胞质内出现大量空泡,细胞核染色质固缩,细胞表面绒毛减少;流式细胞仪检测表明,5 mg·L^-1夜香树多糖可使MG-63细胞阻滞在G₀/G₁;夜香树多糖能剂量依赖诱导MG-63凋亡,浓度依赖性的降低MG-63细胞的Bcl-2蛋白表达和升高Caspase-8的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:夜香树多糖能抑制MG-63细胞增殖,诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡,与作用剂量和作用时间呈正相关,这一过程可能与夜香树多糖下调Bcl-2和激活Caspase-8有关。     

松果菊苷对乙肝病毒复制和抗原表达的影响

以HBV基因转染的HepG2.2.15细胞为体外模型,研究松果菊苷对乙肝病毒(HBV)复制和抗原表达的影响,采用ELISA法测定细胞上清乙肝表面抗原(HBsAg)和E抗原(HBeAg)水平;采用荧光定量PCR法检测HBV DNA水平。以HBV转基因小鼠为体内模型,研究松果菊苷对HBV复制的影响,首先采用荧光定量PCR法检测转基因小鼠肝组织HBV DNA水平,采用ELISA法检测小鼠血清HBsAg和HBeAg水平;同时检测血清转氨酶水平和肝组织病理变化;然后将HBV表达阳性的转基因小鼠随机分为5组:对照组、拉米夫定(50 mg·kg^-1)组和松果菊苷高、中、低剂量(50,25,12.5 mg·kg^-1)组。每天灌胃给药1次,连续给药30 d。第31天分离小鼠血清检测HBV DNA,HBsAg和HBeAg水平;提取肝组织DNA测定其HBV DNA水平,同时作肝组织病理检查。结果表明:松果菊苷在50,100 mg·L^-1作用HepG2.2.15细胞6 d后能显著抑制HBsAg和HBeAg表达,其最高抑制率分别为42.68%,46.29%;同时在100 mg·L^-1对HBV DNA具有抑制作用。此外,松果菊苷在50 mg·kg^-1剂量时能显著抑制HBV转基因小鼠HBsAg与HBeAg表达,其抑制率分别为42.82%,29.12%,同时对转基因小鼠血清HBV DNA水平有显著抑制作用。提示松果菊苷对HBV复制和抗原表达具有较强抑制作用。     

当归多糖调控人白血病干细胞衰老的机制研究

目的: 探讨当归多糖(Angelica sinensis polysaccharide,ASP)体外诱导人白血病干细胞衰老的相关机制。 方法: 免疫磁性分选法分离人急性髓系白血病患者骨髓白血病干细胞(leukemia stem cells,LSCs);不同质量浓度的当归多糖(20~80 mg·L^-1)体外诱导LSCs 48 h,CCK-8检测LSCs增殖能力;甲基纤维素半固体培养法检测LSCs形成白血病细胞集落(CFU-LC)能力;透射电子显微镜分析细胞超微结构变化;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老;qRT-PCR分析LSCs衰老相关基因p53,p21,p16和Rb表达;Western blotting 检测P16,Rb,CDK4和Cyclin E蛋白表达。 结果: 分选后LSCs纯度达(91.15±2.41)%,形态良好。经不同浓度当归多糖作用后,LSCs呈现明显的的浓度依赖性增殖抑制。40 mg·L^-1当归多糖作用LSCs 48 h,其SA-β-Gal染色阳性细胞率明显升高,CFU-LC形成能力下降;超微结构显示细胞线粒体肿胀,溶酶体数量增多,异染色质边集;衰老相关基因p53,p21,p16和Rb表达上调;衰老相关蛋白P16和Rb表达上调, CDK4和Cyclin E表达下调。 结论: 当归多糖在体外能诱导人LSCs衰老,推测其可能机制与当归多糖调控P16-Rb信号通路有关。     

硫酸-紫外法与苯酚-硫酸法测定千两茶中总多糖的比较

目的： 比较苯酚-硫酸法与硫酸-紫外法在测定千两茶多糖含量上的差异。 方法： 千两茶粉经水提醇沉,Sevage法除蛋白后,采用苯酚-硫酸法和硫酸-紫外法测定茶多糖含量。 结果： 苯酚-硫酸法标准曲线方程为Y=4.755 0X-0.029 5（R²=0.990 4）,硫酸-紫外法标准曲线方程为Y=4.770 0X-0.065 1（R²=0.993 1）,均在0.02~0.1 g·L^-1有良好的线性关系。所测茶多糖质量分数分别为2.00%,3.21%,其差异有统计学意义。 结论： 硫酸-紫外法作为一种多糖检测新手段,可简便测定多糖含量。     

竹节参醇提物对LPS诱导RAW264.7细胞炎症的保护作用

目的： 观察竹节参醇提物对脂多糖（LPS）刺激小鼠单核巨噬白血病细胞RAW264.7细胞炎症保护作用的初步 探讨。 方法： 用不同质量浓度的竹节参醇提物处理RAW264.7细胞,噻唑蓝（MTT）法检测细胞活性;检测LPS刺激的RAW264.7细胞一氧化氮（NO）释放量以及竹节参醇提物干预后RAW264.7细胞NO释放量;酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、 白介素1β（IL-1β）分泌;聚合酶链反应（PCR）法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达;免疫印迹（Western blot）法检测胞浆胞核核转录因子-κB（NF-κB）蛋白表达。 结果： 竹节参醇提物作用RAW264.7细胞的安全范围<100 mg·L^-1;LPS的用药质量浓度为1 mg·L^-1;与LPS模型组相比,竹节参醇提物0.1,1,10,40 mg·L^-1能有效抑制NO释放（抑制率分别为31.2%,41%,46.1%,55.2%）和抑制TNF-α,IL-1β的分泌（P<0.05或P<0.01）;竹节参醇提物10,40 mg·L^-1能下调LPS模型组iNOS mRNA表达且抑制NF-κB的核移位。 结论： 竹节参醇提物对LPS刺激的RAW264.7细胞炎症具有保护作用,其保护机制可能与调控NF-κB通路,进而抑制NO的释放,降低TNF-α,IL-1β,iNOS表达有关。     

黄芪多糖对斑马鱼发育及与衰老相关基因表达的影响

 目的 研究黄芪多糖抗衰老的作用机制。方法 β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）及吖啶橙（AO）的荧光染色分析黄芪多糖对斑马鱼胚胎细胞衰老及凋亡的影响;RT-PCR检测与衰老相关基因的表达。结果 当黄芪多糖质量浓度为0.25 mg·mL^-1时,可以延缓斑马鱼细胞凋亡;增强斑马鱼端粒酶基因（TERT）基因的表达,降低bax、p21、p53基因的表达。结论 黄芪多糖具有改善细胞复制性衰老的作用,其分子机制可能与上调TERT和下调p21、p53和bax基因的表达,从而起到一定的抗衰老作用。     

红景天苷对缺氧/缺糖损伤神经细胞的保护作用

目的 :以SH-SY5Y细胞缺氧 /缺糖损伤为模型 ,观察红景天苷对神经细胞保护的作用。方法 :流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率 ,用试剂盒显色法测定LDH的含量。结果 :缺氧 /缺糖损伤 2h可诱导神经细胞凋亡和坏死 ,分别为 18.5 9% (P<0.01)和 4 .94 % (P<0.01)。形态学观察也发现大量神经细胞染色质凝聚 ,核碎裂 ,凋亡小体产生 ,并显著增加细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度和LDH的释放 ,分别为 8.46nmol·L^-1(PP<0.01)和 16 .5 9% (P<0.01) ,并随缺氧 /缺糖损伤时间的延长而明显增高 ;红景天苷 (1～ 3μmol·L^-1)能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,减少LDH的释放 ,其作用随剂量增加而作用增强。结论 :红景天苷具有抑制SH-SY5Y细胞凋亡的作用 ,可对神经细胞起到保护作用 ,这种作用可能与其降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度有关。     

甘草苷对原代海马神经细胞的保护和营养作用

目的:研究甘草苷(liquiritin,LQ)对β-淀粉样蛋白(Aβ_25～35)所致大鼠原代神经细胞损伤的保护作用和营养作用。方法:采用大鼠原代海马神经元Aβ_25～35损伤模型,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力、流式细胞术检测神经细胞凋亡、荧光探针法检测细胞内钙离子浓度,考察LQ神经保护作用;通过考察LQ诱导海马神经元轴突延长的作用和流式细胞术检测其对海马神经干细胞分化为胆碱能神经元作用观察其神经营养作用。结果:10μmol.L^-1Aβ_25～35显著降低细胞的存活率;明显升高细胞内钙离子水平;诱导细胞凋亡发生,凋亡率达28%。预先给预0.1,1,10μmol.L^-1浓度的LQ处理细胞6 h,可显著抑制Aβ_25～35导致的细胞死亡,能够明显降低Aβ_25～35导致的细胞内钙离子浓度升高,流式细胞检测凋亡率分别降低到10%,15%,22%,提示LQ能够拮抗Aβ_25～35导致的细胞凋亡。LQ能够显著增加神经生长因子(NGF)介导的海马神经元轴突延长,特异性的促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂能够部分阻断该作用。另外,LQ可以诱导神经干细胞体外定向分化为胆碱能神经元。结论:甘草苷对Aβ_25～35导致的大鼠原代神经细胞损伤具有神经保护作用,同时甘草苷对原代海马神经元有营养作用。     

中国圆田螺多糖体外抗乙肝病毒的实验研究

目的:探讨中国圆田螺多糖(PCC)体外抗乙肝病毒的生物学活性.方法:以HepG2 2.2.15细胞系为体外实验模型.MTT法检测细胞毒性,将不同安全浓度的PCC及阳性对照药物3TC作用于此细胞系,实验同时设不加药物的细胞对照,第9天收集细胞培养上清液.采用ELISA法测定各组细胞培养上清液中HBsAg,HBeAg水平,荧光探针定量PCR检测HBV-DNA含量.结果:PCC在HepG2 2.2.15细胞培养中的TCo为1g·L-1,TC50 ＞10 g·L-1,对细胞毒性较小.PCC对HepG2 2.2.15细胞HBsAg,HBeAg分泌的IC50分别为0.501,0.401 g·L-1,SI分别为＞19.96和＞24.94.PCC可以有效抑制HBsAg,HBeAg的分泌,且PCC对HBeAg的抑制效果优于HBsAg.PCC在0.1,1g·L-1(P＜0.05)对HepG2 2.2.15细胞中的HBV-DNA有明显的抑制作用.结论:中国圆田螺多糖具有一定的体外抗HBV活性,且毒性较小,具有良好的应用前景.     

蜗牛多糖体外抗乙型肝炎病毒作用研究

目的:探讨蜗牛多糖抗乙肝病毒活性。方法:将不同浓度蜗牛多糖与HepG2.2.15细胞株共培养,以拉米夫定为阳性对照药,用ELISA法检测HBsAg和HBeAg分泌水平,实时荧光定量PCR检测HBV DNA含量,计算抑制率。结果:蜗牛多糖在体外能有效抑制HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg分泌,最大抑制率分别为42.8%和52.1%;对HBV DNA的复制有一定抑制作用(P<0.05)。结论:蜗牛多糖在体外具有显著的抗乙型肝炎病毒作用,且毒性较小,具有良好应用前景。     

青钱柳提取物对HepG2 2.2.15细胞HBsAg和HBeAg表达的影响

目的研究青钱柳提取物体外抗乙肝病毒作用。方法青钱柳用75%乙醇提取后按溶剂极性萃取,获得的三氯甲烷部位经柱层析得到Fr.2组分。体外培养HepG2 2.2.15细胞,MTT法检测青钱柳提取物Fr.2组分对HepG22.2.15细胞的细胞毒作用,用ELISA法检测HepG2 2.2.15细胞培养液中HBsAg和HBeAg的表达。结果青钱柳提取物Fr.2组分对HepG2 2.2.15细胞无明显的细胞毒作用。与对照组比较,Fr.2组分对HBsAg和HBeAg的表达均有显著性抑制作用(P<0.01或0.05)。结论青钱柳提取物体外具有较强的抗乙肝病毒作用。     

六月青含药血清对HepG2.2.15细胞系HBsAg与HBeAg表达的影响

目的 观察六月青(Liuyueqing,LYQ)含药血清的体外抗乙型肝炎病毒的作用.方法 以MTT法检测药物在体外对HepG2.2.15细胞的生长抑制作用,采用酶联免疫法(ELISA法)检测HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg、HBeAg的滴度.结果 LYQ含药血清对HepG2.2.15细胞50%生长抑制率的给药剂量为11.56 g·(kg·d)-1;而对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg 50%生长抑制率的给药剂量为0.178 g·(kg·d)-1,其治疗指数(TI)为64.94;另外,LYQ含药血清对HBeAg抑制作用不明显.结论 LYQ含药血清在体外有显著的抗HBV的作用,且毒性较低.     

复方华蟾素口服液抗乙型肝炎病毒体外实验研究

本研究以乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（ＨＢＶＤＮＡ）转染细胞系（２．２．１５细胞株）为模型，对复方华蟾素口服液体外抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）活性进行了研究。结果显示：该药对乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和乙型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）半数抑制剂量（ＩＤ５０）分别为０．０８ｍｇ／ｍｌ和０．０７ｍｇ／ｍｌ，半数中毒剂量（ＣＤ５０）为２．５ｍｇ／ｍｌ，治疗指数（ＴＩ）分别为ＨＢｓＡｇ３１．３、ＨＢｅＡｇ３５．７     

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??OBJECTIVE To establish an interferon-resistant hepatitis B virus cell model and provide experimental basis for further investigating the mechanism of HBV resistance to interferon. METHODS HepG2.2.15 was continuously grown in the presence of 10,30,50 and 70 u??mL^-1 of interferon ??-2b for up to 48 weeks. The HepG2.2.15/IFN??-2b cell model was constructed after 48 weeks of induction. The cells were treated with the best-effect concentration. Then, the levels of HBsAg, HBeAg, and HBV DNA in the supernatant of cell culture medium before and after the treatment were compared. RESULTS After stimulation with low concentrations of IFN??-2b for 12 weeks, the 50 u??mL^-1 group showed significant resistance to the best-effect concentration of IFN??-2b. Compared with the levels before stimulation, the inhibition rate on HBsAg, HBeAg, and HBV DNA decreased by 25.48%, 8.40%, and 15.43%, respectively, suggesting that 50 u??mL^-1 was the best-stimulation concentration. After stimulated with 50 u??mL^-1 IFN??-2b for 12-48 weeks, the results showed that the inhibition rate on HBsAg, HBeAg, and HBV DNA after 36 weeks was the most significant. CONCLUSION Continuous induction with 50 u??mL^-1 IFN??-2b for 36 weeks could most easily induce drug resistance in HepG2.2.15 cells.     

槐果碱体外对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg HBeAg的影响

目的:探讨槐果碱的体外抗乙型肝炎病毒作用。方法:采用HepG2.2.15细胞模型进行体外培养,给予不同浓度槐果碱,以拉米夫定作阳性对照,作用9天后检测上清液中HBsAg、HBeAg的分泌,观察药物对HepG2.2.15细胞分泌HBV病毒抗原的影响,同时以MTT法检测药物在体外对HepG2.2.15细胞的生长抑制作用,从而评价药物的抗HBV作用。结果:药物作用9天后,槐果碱对HepG2.2.15细胞的50%生长抑制率(TC50)为0.002M,对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的50%抑制率(IC50)为4.9uM,其治疗指数(TI=TC50/IC50)为408.16;而拉米夫定对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制率在所选浓度范围内均低于50%。槐果碱对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg的抑制率在所选浓度范围内均低于50%,但明显优于拉米夫定对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg的抑制率。结论:槐果碱在体外具有显著的抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的作用,是一个高效低毒的抗乙肝病毒的有效药物。     

甘草甜素对HepG2．2．15细胞株HBV感染的影响

目的探讨甘草甜素（GL）对HepG2．2．15细胞上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA的作用,及对细胞存活率的影响。方法实时荧光定量PCR检测HBVDNA的表达,ELASA检测HBV所分泌抗原,MTT检测细胞的增殖活性,计算细胞存活率。结果给药后各组HBsAg分泌结果显示总体均数间差异显著（P=0．000）,GL各组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）,抑制作用存在剂量依赖关系;而对HBeAg水平的影响因剂量不同而表现为升高和降低两种趋势,除50pg／mL组外,其余各组与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）,但800μg／mL组HBeAg分泌增加,400μg／mL以下组为HBeAg降低;HBVDNA的表达显示GL各组与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）,但400pg／mL以下组为HBVDNA降低,800μg／mL组出现HBVDNA复制增强;MTT实验显示,200μg／mL以下3个剂量组均可促进细胞增殖（P〈0．01）,400、800μg／mL2组均显著抑制细胞增殖（P〈0．01）;MTT分别与HBeAg和HBVDNA水平呈显著负相关（P〈0．01）,但与HBsAg呈显著正相关（r=0．869,P=0．000）。结论GL对HepG2．2．15细胞株上清中的HBeAg和HBVDNA水平可能具有双向作用,而对HBsAg具有剂量依赖的抑制作用,提示GL的使用应注意选择适应证及合适的剂量。     

赋肝能抗病毒作用实验研究

 目的研究中药制剂赋肝能(由植物鹅绒蒌陵菜Potentilla asserina L.分离提取而得的主要活性成分)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用。方法建立以HBV转染的人肝癌细胞系(Hep G2)2.2.15细胞系为体外模型,HBV静脉感染、血清DHBV DNA(duck hepatitis B virus DNA)呈强阳性的北京鸭为体内模型,分别观察2.2.15细胞含药培养基中HBsAg和HBeAg及鸭血清中DHBV-DNA水平。结果 体外实验中,8 d时,各剂量组赋肝能对HBsAg和HBeAg均有明显抑制作用。大剂量赋肝能对HBsAg和HBsAg有显著抑制作用(P＜0.01)。体内实验观察,大剂量和中剂量赋肝能对DHBV-DNA有明显抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),其抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性。结论赋肝能对乙型肝炎病毒具有明显抑制作用,可能成为较好的治疗乙型肝炎的临床用药。