甘西鼠尾草对缺氧/复氧H9c2大鼠心肌细胞的保护作用

目的探究甘西鼠尾草对培养H9c2大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法采用体外细胞培养方法培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤心肌细胞模型,用甘西鼠尾草进行细胞给药,干预细胞生长过程。将培养的H9c2大鼠心肌细胞随机分为6组,分别为缺氧/复氧模型组(hypoxia/reoxygenation,H/R组);正常对照组(control,C组);缺氧/复氧模型+维拉帕米(verapamil)阳性对照组(H/R+V组);缺氧/复氧模型+甘西鼠尾草低、中和高剂量(0.01、0.1和1.0mg·L~(-1))干预组(H/R+L、M、H组)。使用噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率;收集所培养的细胞上清液测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性;使用荧光酶标仪,测定能够反映细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平高低的荧光吸光度值。结果甘西鼠尾草可明显提高心肌细胞存活率,有效减少细胞内LDH漏出量和胞浆内MDA的含量,并降低细胞内ROS水平。结论甘西鼠尾草对缺氧/复氧损伤心肌细胞具有显著的保护作用,其作用机制可能与其增强细胞清除氧自由基能力、减少脂质过氧化物的产生有关。     

云南鼠尾草提取物对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

摘 要 目的：研究云南鼠尾草提取物对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用的机制。方法: 建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,并采用云南鼠尾草提取物进行干预。将体外培养的H9c2大鼠心肌细胞随机分为6组：正常对照（C）组、缺氧/复氧模型（H/R）组、缺氧/复氧模型+维拉帕米阳性对照（H/R+V）组、缺氧/复氧模型+云南鼠尾草低（H/R+L, 0.01 mg·L^-1）、中（H/R+M, 0.1 mg·L^-1）、高（H/R+H, 1.0 mg·L^-1）剂量组。采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞存活率,利用检测试剂盒测定丙二醛（MDA）的含量和乳酸脱氢酶（LDH）的活性,通过荧光酶标仪测定荧光吸光度（A）值反映细胞内活性氧 （ROS）水平。结果: 与模型组比较,云南鼠尾草低、中、高剂量组均能显著提高心肌细胞存活率（P＜0.05或P＜0.01）,云南鼠尾草高剂量组显著减少细胞内LDH漏出量（P＜0.05或P＜0.01）、胞浆内MDA的含量（P＜0.01）和细胞内ROS水平（P＜0.05）。结论: 云南鼠尾草提取物对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,其相关作用机制可能与其减少脂质过氧化物和清除细胞氧自由基有关。     

瓜蒌皮提取物对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞的保护作用及其机制研究

目的:研究瓜蒌皮提取物对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞的保护作用及其机制。方法:以采用连二亚硫酸钠(Na_2S_2O_4)为化学缺氧剂,建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,筛选不同浓度Na_2S_2O_4(0.625～10 mmol/L)和不同缺氧时间(10～60min)、复氧时间(2～8 h)的造模条件,以及瓜蒌皮提取物给药浓度(12.5～400μg/mL)。将细胞分为正常组、模型组、瓜蒌皮提取物不同剂量组(即TPE低、中、高剂量组,25、50、100μg/mL)和阳性对照组(槲皮素,25μmol/L),加入相应药物进行预处理24 h后,再建立缺氧/复氧损伤模型。采用MTT法检测各组细胞存活率;采用酶联免疫吸附法检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;采用流式细胞术观察细胞凋亡情况;采用Western blotting法检测细胞中Bax、Bcl-2的蛋白表达水平。结果:心肌细胞缺氧/复氧损伤造模条件为Na_2S_2O_4造模浓度2.5 mmol/L,缺氧时间30 min,复氧时间4 h;12.5～400μg/mL的瓜蒌皮提取物对细胞均无毒性。分组处理后结果显示,与空白组比较,模型组细胞存活率显著降低、凋亡率显著升高,细胞中CK-MB、LDH、MDA水平均显著升高,SOD水平显著降低,Bax的蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值均显著升高,Bcl-2的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,瓜蒌皮提取物各剂量组细胞上述变化均被逆转(P<0.05或P<0.01)。结论:瓜蒌皮提取物对缺氧/复氧损伤心肌细胞具有一定的保护作用;其机制可能与抑制细胞中脂质过氧化物的增加、提高细胞清除活性氧自由基的能力、上调Bcl-2/下调Bax蛋白表达等,从而抑制细胞凋亡有关。     

血塞通(三七皂苷)对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤的抑制作用

目的 研究三七皂苷(血塞通)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制.方法 将H9 c2心肌细胞随机分成5组:对照组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂组.对照组细胞正常培养不做任何处理;模型组调整培养基,再进行缺氧/复氧处理;低剂量实验组、高剂量实验组和Nrf2抑制剂组...     

圣草次苷激活Nrf2信号通路保护H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤作用研究

目的 建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤模型,考察圣草次苷改善心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法 利用无糖无血清培养基结合厌氧（94%N₂、5%CO₂、1%O₂）处理H9c2心肌细胞4h后,更换新鲜完全培养基再放入正常孵箱复氧24h,制备H/R损伤模型。在造模前12h给予圣草次苷（5、10、20μg·mL^-1）,细胞活力及乳酸脱氢酶（LDH）检测实验中选择灯盏乙素（20μg·mL^-1）作为阳性药,对照组及模型组给予等体积DMSO。MTT法测定细胞存活率;试剂盒检测细胞培养上清液中LDH水平;试剂盒检测细胞内丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力;TUNEL染色检测细胞凋亡;DCFH-DA和JC-1探针分别检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体膜电位改变;Western blotting检测核蛋白中转录因子（NF）-E2相关因子2（Nrf2）和总蛋白中血红素氧合酶1（HO-1）、γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）水平。结果 与对照组比较,H/R损伤诱导的模型组细胞存活率明显下降,凋亡明显增加,LDH水平明显升高,细胞内MDA水平明显升高,SOD、CAT、GSH-Px活力明显降低,ROS释放明显增多,线粒体膜电位明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.01）;与模型组比较,圣草次苷可剂量相关性地改善上述变化,其中10、20μg·mL^-1组均差异显著（P＜0.01）。Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组细胞Nrf2核转位以及HO-1、GCL表达水平无显著变化;与模型组比较,圣草次苷10、20μg·mL^-1显著增加Nrf2核转位及HO-1、GCL表达水平（P＜0.01）。结论 圣草次苷能够保护H/R诱导的H9c2心肌细胞损伤,其可能通过激活Nrf2抗氧化信号通路,增加细胞内源性抗氧化能力,抑制氧化应激损伤,保护线粒体功能以阻止细胞凋亡的发生。     

阿托伐他汀对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨阿托伐他汀保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制,为临床防治缺血再灌注损伤寻找新思路。方法分离SD乳鼠(出生1～3d)心肌细胞进行原代培养,建立H/R模型,取培养第3d的心肌细胞随机分成3组:正常对照组(CON组)、H/R组、H/R+ATV组。应用MTS法检测心肌细胞的存活率;化学发光免疫分析法检测心肌细胞特异性损伤指标肌钙蛋白I(cTnI)的含量;采用SYBR GREEN荧光定量PCR检测各组HIF-1α、VEGF mRNA表达水平。结果与CON组比较,H/R组心肌细胞存活率明显降低(P<0.05),血清肌钙蛋白I明显升高(P<0.05),HIF-1α和VEGF mRNA表达水平显著升高(P<0.05);用阿托伐他汀预处理后心肌细胞存活率明显升高(P<0.05),血清肌钙蛋白I明显降低(P<0.05),HIF-1α和VEGF mRNA表达水平进一步升高(P<0.05)。结论阿托伐他汀可能通过上调HIF-1α及VEGF的表达水平进而保护缺氧/复氧损伤的心肌细胞。     

荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的改善作用

目的:研究荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的的改善作用及机制.方法:将H9c2心肌细胞为正常对照组、模型组和荭草花提取物低、中、高浓度组(20、40、80μg/mL),除正常对照组外,其余各组细胞以800μmol/L CoCl2复制缺氧复氧损伤模型,然后观察细胞凋亡情况,并分别检测细胞中ROS水平、钙离子水平...     

葛根素对外周血内皮祖细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的：研究葛根素对外周血内皮祖细胞（EPCs）缺氧/复氧损伤的保护作用。方法：采用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合,使用专用培养基EGM-2,成功分离纯化EPCs,通过形态学、细胞表面分子标志物检测、内皮祖细胞吞噬功能对其鉴定;采用Krebs液建立缺氧/复氧损伤模型,用葛根素干预后,采用MTT法测定细胞活力、2,4-二硝基苯肼显色法测定细胞外乳酸脱氢酶（LDH）释放量、黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量、硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）含量;Western blot法考察胞核、胞质Nrf2和全细胞HO-1蛋白表达。结果：与模型组相比,葛根素20.8 mg·L^-1及41.6 mg·L^-1组显著提高细胞活力（P<0.05,P<0.01）;葛根素20.8 mg·L^-1及41.6 mg·L^-1能显著降低NO、MDA含量和LDH释放量（P<0.01）;葛根素20.8 mg·L^-1,41.6 mg·L^-1,83.2 mg·L^-1均显著提高缺氧/复氧后细胞SOD活性（P<0.01）,并上调细胞HO-1、胞核Nrf2蛋白表达（P<0.01）,显著降低胞浆Nrf2蛋白表达（P<0.01）。结论：葛根素可显著拮抗缺氧/复氧对EPCs的损伤,可能与其抑制细胞过氧化损伤,增强细胞抗氧化能力有关。     

神经生长因子对H9c2心肌细胞缺氧/复氧后凋亡的保护作用及其机制

目的探讨神经生长因子(NGF)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)后凋亡的保护作用及其机制。方法将培养的H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、NGF组(N组)、NGF+PI3k受体特异性阻断剂LY294002组(N+L组)和LY294002组(L组)。C组用正常培养液在通有95%空气+5%CO2的37℃培养箱内正常培养8 h;H/R组用预先经95%N2+5%CO2的混合气饱和1 h的模拟缺氧液置换正常培养液后,放入通有95%N2+5%CO2的37℃培养箱缺氧培养4 h,然后将模拟缺氧液换用预先经95%空气+5%CO2饱和的正常培养液,在正常条件下复氧4 h;N组、N+L组和L组先缺氧培养4 h(缺氧条件同H/R组),再分别用预先经95%空气+5%CO2饱和的含NGF、NGF+LY294002和LY294002的正常培养液置换模拟缺氧液,在正常条件下复氧4 h。NGF和LY294002的终浓度分别为0.05 mg·L-1和3 mg·L-1。CCK-8比色法测定各组细胞的存活率;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测胞内Akt磷酸化水平及内质网应激蛋白Caspase-12蛋白的表达。结果 N组与N+L组或H/R组或L组相比能明显提高H9c2心肌细胞经H/R损伤后的存活率,减少细胞凋亡率,上调Akt磷酸化水平,降低内质网应激蛋白Caspase-12表达;LY294002明显抑制了NGF对Akt磷酸化水平的上调作用。结论 NGF对经H/R损伤的H9c2心肌细胞有抗凋亡作用,其机制可能与PI3k-Akt通路有关。     

1-磷酸鞘氨醇后适应对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 研究1-磷酸鞘氨醇（S1P）后适应对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 将培养的H9c2心肌细胞随机分为5组,即①正常（Con）组;②缺氧/复氧（H/R）组;③S1P低浓度（L）组;④S1P中浓度（M）组;⑤S1P高浓度（H）组。测定各组H9c2心肌细胞的存活率; 收集细胞培养液测定超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率;Fura 2-AM标记细胞内游离钙离子,检测荧光强度以反映细胞内游离钙离子浓度的变化;Western Blot法测定保护性蛋白热休克蛋白70 （HSP70）的表达情况。结果 对于H/R 损伤的H9c2心肌细胞,S1P能够提高细胞的存活率,降低细胞内MDA含量及细胞内钙离子浓度,提高细胞内SOD活力,增强抗凋亡蛋白HSP70的表达,且呈一定的浓度依赖性。结论 S1P可以减轻心肌细胞氧化应激损伤,改善心肌细胞活力并减少凋亡。S1P对心肌细胞的保护作用可能是通过减少Ca2 超负荷,增加抗凋亡蛋白HSP70表达来实现的。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇通过抑制线粒体凋亡通路抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤中线粒体凋亡通路的影响,并探讨其分子作用机制。方法建立H9c2心肌细胞H/R损伤模型,将H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、F_2低、中、高剂量组。流式细胞术分析测定细胞凋亡率;采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞色素C(Cyto C)、Bcl-2、和Bax蛋白表达变化;比色法测定caspase-3的活性。结果与H/R组相比,F_2低、中、高剂量组可明显降低H9c2细胞缺氧/复氧损伤后细胞凋亡率;提高Bcl-2/Bax比值;抑制线粒体中Cyto C的释放;减少caspase-3的活性。结论 F_2能够降低H/R后H9c2心肌细胞凋亡率,其机制可能与抑制线粒体通路的细胞凋亡有关。     

脑源性神经营养因子可减轻 H9c2 心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的 探讨脑源性神经营养因子（BDNF）预处理对 H9c2 心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的影响及其作用机制。方法 体外培养 H9c2 心肌细胞并以缺氧 （95%N2+5%CO2） 培养 4 h 后复氧 （95%O2+5%CO2） 培养 12 h 建立 H/R 模型, 并分为 Control 组、 H/R 组、 不同浓度 （1、 10、 100 μg/L） BDNF 预处理后 H/R 组、 酪氨酸蛋白激酶受体 B （TrkB）inhibitor 组 （同时加入 100 μg/L BDNF 和 1∶1 000 的 TrkB inhibitor 预处理后 H/R 组）。利用 MTT 方法检测各组心肌细胞的细胞存活率; 并测定各组心肌细胞 H/R 损伤后乳酸脱氢酶（LDH）、 肌酸激酶（CK）、 丙二醛（MDA）、 超氧化物歧化酶（SOD）含量及活性; 流式细胞术测定各组心肌细胞的凋亡率; Western-blot 检测 TrkB、 Bcl-2、 Bax 蛋白表达。结果 与 Control 组相比, H/R 组细胞存活率明显下降, LDH、 CK 和 MDA 含量升高, SOD 活性降低, 细胞凋亡率升高, 抗凋亡 Bcl-2 蛋白表达下降, 促凋亡 Bax 蛋白表达升高（均 P < 0.05）。与 H/R 组相比, 不同浓度 BDNF 预处理H9c2 心肌细胞后 H/R, 各组细胞存活率均明显上升, CK、 LDH、 MDA 含量逐渐下降, SOD 活性升高, 细胞凋亡率下降, TrkB 和 Bcl-2 蛋白表达升高, 而 Bax 蛋白表达降低, 但 BDNF 的作用均受到 TrkB inhibitor 的抑制。结论 BDNF预处理能够提高 H9c2 心肌细胞 H/R 损伤的细胞存活率, 通过降低细胞凋亡率和提升细胞抗氧化能力而发挥保护作用, 并与 BDNF-TrkB 信号通路有关。     

H2O2预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

摘要 目的 探讨H2O2预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧引起H9C2细胞凋亡的影响。方法 大鼠心肌细胞系（H9C2）经体外培养扩增,使用对数生长期细胞做实验处理。分别使用0、5、10、20、50、100μmol/L浓度 H2O2处理H9C2细胞,流式细胞仪（FCM）、MTT法和免疫印迹法（Western blot法）检测不同浓度H2O2处理对H9C2细胞凋亡率、增殖活性和STAT3磷酸化水平的影响,以确定最佳H2O2预处理浓度。观察低浓度H2O2预处理对缺氧/复氧所引起细胞损伤的影响,细胞随机分为4组,①对照组：常规培养;②缺氧／复氧组：预先在 5％CO2,95%N2培养箱中培养 120min,复氧30min ;③H2O2预处理组：给予H2O2处理90min换液,24h后缺氧/复氧处理;④AG490+ H202组：在H2O2预处理前10min给予10μmol/L AG490处理,其余处理同H2O2预处理组。AnnexinV-FITC/PI双染法及流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡,MTT法检测H9C2细胞增殖活性,免疫印迹法（Western blot法）检测STAT3磷酸化水平。结果20μmol/L组的STAT3磷酸化水平明显高于其他各浓度组（P<0.01）,心肌细胞凋亡率亦明显低于50μmol/L及100μmol/L浓度组（P<0.01）,而其心肌细胞增殖活性及细胞凋亡率与5μmol/L及10μmol/L浓度组无明显差异; H2O2预处理能降低大鼠心肌细胞凋亡率（P<0.05）,增加心肌细胞活性（P<0.05）上调P- STAT3水平（P<0.05）。缺氧损伤后给予AG490处理可使H2O2预处理保护作用消失。结论20μmol/L H2O2预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有适应性保护作用。可能机制是激活 JAK2-STAT3通路发挥抑制细胞凋亡作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对心肌细胞缺氧/复氧损伤的抑制作用及其机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的抑制作用及其机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,随机分为正常(N)、缺氧/复氧(H/R)、EGCG低剂量(L)、中剂量(M)和高剂量组(H),共5组(n=6)。建立细胞缺氧/复氧模型,给予EGCG预处理,用CCK-8法测定细胞存活率;Annex V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;按照试剂盒说明书检测细胞培养液T-AOC、TNF-α含量;用Western blot法检测Akt蛋白及磷酸化水平;用荧光定量PCR法检测PI3K、Akt、caspase-3基因表达。结果与模型组相比,EGCG能增加H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤后的存活率,减少细胞凋亡,提高T-AOC水平,降低TNF-α含量,增加PI3K、Akt和p-Akt表达,减少caspase-3的表达。结论 EGCG通过影响PI3K/Akt信号通路,减少细胞凋亡,保护心肌细胞。     

白花丹醌对TBHP诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用研究

目的：探讨白花丹醌（plumbagin,PLB）对叔丁基过氧化氢（TBHP）诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法：评估PLB对TBHP （75 μmol·L^-1）诱导的活性氧（ROS）介导的H9c2心肌细胞的氧化应激和细胞凋亡的保护作用。结果：用5,10和20 μmol·L^-1 PLB预处理后,可显著恢复TBHP诱导的H9c2细胞中的细胞活力,显著降低肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）活性。TBHP导致心肌细胞凋亡增加,而PLB预处理以剂量依赖性方式抑制TBHP诱导的细胞凋亡。此外,经PLB处理后,微管相关蛋白1a/1B轻链3B （LC3）-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达水平升高,提示PLB能够诱导心肌细胞自噬。结论：PLB对TBHP诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,该作用可能与PLB抑制ROS介导的氧化应激、凋亡和自噬作用有关。     

新型褪黑素受体激动剂Neu-P11激活AMPK减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的研究新型褪黑素受体激动剂Neu-P11对心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用及分子机制。方法实验分为对照组、缺氧/复氧模型组(H/R组)、H/R+Neu-P11组、H/R+Compound C组、H/R+Neu-P11+Compound C组。构建H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型,检测各组心肌细胞凋亡情况,细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、SOD活性及MDA含量及心肌细胞AMPK的活性。结果与缺氧/复氧组细胞相比,Neu-P11预处理组细胞凋亡率明显减少,CK、LDH、MDA含量明显下降,SOD活性增加,心肌细胞AMPK活性明显增高,而AMPK特异性抑制剂Compound C可以阻断Neu-P11的保护作用。结论 Neu-P11能够减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,这一保护作用与激活AMPK有关。