干滤纸血片制备环境的理化因素对实验结果的影响

目的观察新生儿疾病筛查干滤纸血片(dried blood spots)制备环境中显著影响实验结果的理化因素。方法研究组1:收集正常标本60例、阳性标本120例,于对照条件及10种特定环境下制备干滤纸血片。研究组2:另收集正常标本30例、阳性标本80例,于对照条件及7种甲醛浓度环境下制备干滤纸血片。用荧光法或时间分辨荧光免疫分析法检测标本中苯丙氨酸(Phe)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、促甲状腺激素(TSH)、17α-羟孕酮(17α-OHP)水平。用SPSS 22.0软件进行统计学分析。结果 10种环境下制备的干滤纸血片Phe检测结果与对照组差异无统计学意义(P0.05),甲醛敏感阈为4.62~6.95 ppm/18 h;37℃烘箱、潮湿、紫外线照射、新装修环境、乙醇、冰醋酸、甲醛等环境下制备的干滤纸血片G6PD检测结果低于对照组(P0.05),甲醛敏感阈为0.30~0.38 ppm/4 h及0.21~0.24 ppm/18 h;潮湿、紫外线照射、甲醛环境下制备的干滤纸血片TSH检测结果低于对照组(P0.05),甲醛敏感阈为0.32~0.52 ppm/4 h及0.38~0.45 ppm/18 h;潮湿、紫外线照射、甲醛环境下制备的干滤纸血片17α-OHP检测结果低于对照组(P0.05),甲醛敏感阈为4.37~4.62 ppm/4 h及0.38~0.45 ppm/18 h。冷风快速吹干与2~8℃冷库环境下制备干滤纸血片4项检测结果与对照组差异均无统计学意义(P均0.05)。结论干滤纸血片制备环境的理化因素与新生儿疾病筛查的准确性密切相关,甲醛、乙醇、冰醋酸、紫外线照射、高温、潮湿及装修污染等是干滤纸血片制备环境的必要管控因素;冷风快速吹干与2~8℃冷库过夜可作为新生儿筛查干滤纸血片制备的备选方法。     

滤纸干血片唐氏综合征产前筛查AFP和β-hCG检测的影响因素

目的 探讨滤纸干血片唐氏综合征产前筛查过程中可能影响AFP和β-hCG测定结果的因素.方法 观察不同的洗脱时间、不同保存条件和取样部位、末梢血/静脉血干血片等因素对滤纸干血片检测结果的影响.结果 末梢血和静脉血滤纸干血片检测结果相同.血片边缘取样和中央取样对检测结果没有影响.滤纸干血片完全洗脱时间为1小时.在25℃放置7天时,β-hCG检测结果偏高.结论 AFP和β-hCG在滤纸干血片中可稳定存在.采用冷链运输,按照标准流程进行操作,可保证滤纸干血片唐氏综合征产前筛查质量.     

干血滤纸片法测定17-羟孕酮及临床应用

先天性肾上腺皮质增生症 (ＣＡＨ)是小儿遗传代谢病中一种危害严重的疾病 ,其中约 90 %～ 95 %因 2 1 羟化酶缺陷所致。血 17 羟孕酮 (17 ＯＨＰ)水平的测定是ＣＡＨ诊断和疗效评估的一个重要指标[1,2 ] 。本研究报告建立干血滤纸片测定 17 ＯＨＰ的酶免疫吸附试验法 (ＥＬＩＳＡ)及其在治疗ＣＡＨ时的监测结果。一、材料和方法1.对象 :本院儿科内分泌专科门诊随访的ＣＡＨ患儿 39例 ,均为 2 1 羟化酶缺乏症。其中随访和系统治疗患者 31例 ,男 18例 ,女 13例 ,诊断时年龄为 0 .1～ 8.5岁 ;失盐型 13例 ,非失盐型 18例。除失盐型在新生儿期有…     

自制吹干装置在滤纸干血片样本制备中的应用

目的 探讨自制吹干装置在滤纸干血片样本制备中的应用价值.方法 将50μL全血滴在直径为12 mm的滤纸片上,分别以自然晾干和自制吹干装置干燥2种方式干燥血片.记录不同实验条件下血片干燥状态随时间变化的情况.采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测滤纸干血片样本中8种氨基酸和15种酰基肉碱水平,比较不同打孔部位[中...     

串联质谱检测干血滤纸片氨基酸方法的建立

目的　建立可靠的串联质谱技术检测干血滤纸片中氨基酸方法,以便用于氨基酸代谢紊乱疾病的筛查和诊断。方法　取含不同浓度氨基酸(苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、瓜氨酸和缬氨酸)的血滤纸片,用含已知量相应氨基酸内标的甲醇萃取,盐酸正丁醇衍生后,用串联质谱仪检测血片中氨基酸谱及其浓度。分析该方法的精确性、样品回收率及浓度相关性。结果　氨基酸批内和批间变异系数分别为6. 3% ~9. 7%、9. 9% ~14. 3%。低浓度回收率为92% ~100%,中等浓度回收率为94% ~104%,高浓度回收率为98% ~107%。不同浓度的氨基酸实测浓度与加入浓度之间的相关系数为0. 999 0~0. 999 9。结论　串联质谱技术检测干血滤纸片中氨基酸能够达到较高的精确性、准确性和回收率,为临床进行氨基酸分析提供了一项新技术,可用于新生儿遗传代谢病筛查、高危儿童遗传代谢病的诊断及其他与氨基酸代谢有关的疾病诊治。     

串联质谱检测干血滤纸片氨基酸方法的建立

目的建立可靠的串联质谱技术检测干血滤纸片中氨基酸方法,以便用于氨基酸代谢紊乱疾病的筛查和诊断。方法取含不同浓度氨基酸(苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、瓜氨酸和缬氨酸)的血滤纸片,用含已知量相应氨基酸内标的甲醇萃取,盐酸正丁醇衍生后,用串联质谱仪检测血片中氨基酸谱及其浓度。分析该方法的精确性、样品回收率及浓度相关性。结果氨基酸批内和批间变异系数分别为6．3％～9．7％、9．9％～14．3％。低浓度回收率为92％～100％,中等浓度回收率为94％～104％,高浓度回收率为98％～。107％。不同浓度的氨基酸实测浓度与加入浓度之间的相关系数为0．9990～0．9999。结论串联质谱技术检测干血滤纸片中氨基酸能够达到较高的精确性、准确性和回收率,为临床进行氨基酸分析提供了一项新技术,可用于新生儿遗传代谢病筛查、高危儿童遗传代谢病的诊断及其他与氨基酸代谢有关的疾病诊治。     

串联质谱法快速检测干血滤纸片酰基肉碱含量

目的 建立一种串联质谱法对干血滤纸片中的酰基肉碱进行快速分析,以用于脂肪酸代谢障碍性疾病和有机酸血症诊断及治疗效果的监测.方法 取8种不同浓度的酰基肉碱的干血滤纸片(直径5 mm),用甲醇(含已知浓度的相应酰基肉碱同位素内标)对其进行萃取,不进行衍生化,萃取物过滤后直接进入ESI+-MS/MS上机分析测定;采用多反应监测模式(MRM),以标准品制作标准曲线,同位素内标法定量建立分析方法,进行回收试验、精密度试验、干扰试验及准确度试验.结果 各标准曲线相关系数r2>0.994.低浓度各种酰基肉碱回收率为85 %～103.5%,准确度在91.8%～110.0%;中浓度各种酰基肉碱回收率为85%～96%,准确度在87.6%～110.1%;高浓度酰基肉碱回收率为94%～100.1%,准确度在95.7%～110.1%.实测值与加入浓度之间的相关系数(r)为:0.997～1.000.各种酰基肉碱批内变异系数(CV)1%～10%和批间变异系数(CV)5%～13%.内标液保存1～21天的检测均值均在CDC提供的参考范围内,而批内CV%均＜10%.263例0～6岁健康儿童血滤纸片中酰基肉碱浓度因受年龄因素影响,按不同年龄组划分各种肉碱参考范围.结论 非衍生化串联质谱法分析干血滤纸片中的酰基肉碱含量,样本前处理简单,能够达到较高的精确度和准确度,无常规串联质谱中的衍生化、氮吹和复溶等步骤,大大节省了的标本处理时间,是一项简便、快捷、准确的检测方法,可以用于脂肪酸代谢障碍性疾病和有机酸血症诊断及治疗效果监测.     

高质量滤纸血片用于新生儿4种疾病筛查的方法改进

目的 探讨为疾病筛查中心提供优质干滤纸血片用于新生儿4种疾病筛查的改良措施.方法 根据新生儿的解剖和血液循环的特点,科学的选取采血部位和把握采血时机（选择血液循环良好时）进针,熟练掌握采血技巧.通过滤纸血片晾架的应用,使血片晾干过程规范化,并且及时安全送检.结果 一次采血成功率（96.87%）及干滤纸血片合格率（100%）明显提高,足跟红肿率（1.45%）明显降低,三项统计两组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）,无一例因晾血不妥而复采.结论 通过掌握科学的采血技巧、加强晾血过程的管理、及时安全送检,极大地提高了干滤纸血片合格率,提高了疾病筛查的准确性.     

滤纸片收集样品分离恶性疟原虫DNA的方法

滤纸片收集样品分离恶性疟原虫ＤＮＡ的方法牟玲（沈阳市传染病院，沈阳１１０００６）罗恩杰（中国医科大学寄生虫学教研室）关键词恶性疟原虫滤纸片干血滴ＤＮＡ分离聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术以其操作简便、特异性强、敏感性高为特征，被广泛地应用于疟疾的诊断、流行...     

影响新生儿干血片G6PD筛查试验结果的相关因素分析

目的分析新生儿干血片红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)筛查试验过程中可能产生影响的各类因素,为提高临床质控水平、有效减少检测过程中的外在影响因素提供参考。方法以该院2013年6月至2014年5月862例新生儿为研究对象,分别进行受试新生儿基本资料、标本留置时间、温度、打孔部位、血片去除、加酮试剂后仪器测定时间的分组研究,探讨G6PD测定结果的影响因素。结果季节性上,春夏季新生儿G6PD水平明显低于秋冬季;分娩方式上,阴道产G6PD水平明显低于剖宫产;标本留置时间上,留置时间越长,G6PD水平越低;温度方面,2~8℃冷藏G6PD水平明显高于室温;血片去除方面,去除血片的G6PD水平明显高于不去除血片;加酮试剂后仪器测定时间方面,随着测定时间的延长,G6PD水平逐渐下降。干血片G6PD检测结果在季节、分娩方式、标本留置时间、温度、血片去除和加酮试剂后仪器测定时间方面检测数据比较,差异均有统计学意义(P0.05)。性别和打孔部位对G6PD水平变化无明显影响(P0.05)。结论应在新生儿G6PD筛查过程中建立起完善有效的管理与质控机制,加强管理,并根据影响因素适当调整临床诊断的临界点,以减少假阴性或假阳性的产生,提高临床新生儿筛查的工作质量。     

液-质联用串联质谱检测干血滤纸氨基酸水平的影响因素

目的分析液-质串联质谱检测干血滤纸片氨基酸水平的影响因素,寻找消除这些影响因素的方法。方法设立3个影响因素组:①不同打孔位置组;②4℃条件下,不同滤纸片保存时间组;③室温条件下,不同放置时间组。比较在上述条件下检测干血滤纸片的氨基酸水平。结果不同的打孔位置对于19种氨基酸的测定没有明显的影响。不同的纸片保存时间对多数氨基酸的测定没有明显的影响,但是Glu、Gly、Pro、Ser 4种氨基酸的水平随着纸片保存时间的不同而发生了明显的变化;不同的放置时间对多数氨基酸的测定没有明显影响,但是Arg、Gln、Glu、Lys、Tyr 5种氨基酸的水平随着放置时间的不同而发生了明显的变化。结论在使用串联质谱法检测干血滤纸片上的氨基酸水平时应使用新鲜纸片,及时进行预处理,从而保证结果的稳定性和准确性。     

滤纸干血片毛细管电泳技术在新生儿α-珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的应用

目的探讨干血片毛细管电泳技术在新生儿α-珠蛋白生成障碍性贫血(以下简称α-地贫)筛查中的应用价值。方法使用干血片毛细管电泳仪对46 718例新生儿足跟血滤纸干血片标本进行血红蛋白(Hb)电泳分析,检测HbA、HbF、HbA2和异常Hb的水平,对筛查表型阳性的病例召回进行基因分析。结果 46 718例新生儿足跟血滤纸干血片标本中检测出巴特血红蛋白(Hb Bart′s)阳性者2 598例,筛查阳性率5.56%(2 598/46 718);召回544例经基因分析确诊477例α-地贫基因携带者,故Hb Bart′s带筛查与基因确诊的符合率为87.68%(477/544)。进一步分析其临床表型与Hb Bart′s水平的关系可见,随着临床表型的加重,Hb Bart′s水平逐渐增加,且差异有统计学意义(P=0.000)。结论滤纸干血片毛细管电泳分析技术与基因分析有较好的一致性,可根据Hb Bart′s水平的多少初步判断α-地贫的临床分型。     

干片法及试剂法检测Fib的结果及评价

应用日本A＆T corporation生产的DRIHEMATO SYSTEM CG02血凝仪（干片法）与IL公司ACL-200血凝仪（试剂法）对80例标本进行了纤维蛋白原（Fib）的检测，并对实验结果做相关性分析，以评价不同仪器检测结果的可比性。     

滤纸片干血斑检测TT病毒DNA

目的 建立一种快速、方便、准确的方法检测TT病毒的基因片段。方法 采集被检者全血滴在经EDTA--蛋白酶预处理的滤纸片上,室温干燥后,密封并保存于-20℃,然后进行PCR检测;同时取血清用传统方法作对照。结果 在相同时间内,本法测得的结果,与传统方法所得结果无异。结论 该方法具有特异、敏感、方便等特点,用此法检测TTV DNA是切实可行的。     

新生儿干血片葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定的影响因素分析

目的探讨新生儿干血片葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）筛查过程中可能影响G6PD测定结果的因素。方法观察采血季节、新生儿性别及分娩方式、血样采集后样本的贮存条件及时间、干血片取样部位、加酮试剂后血片是否去除和加酮试剂后仪器测定时间等因素对检测结果的影响。结果采血季节、新生儿的分娩方式（顺产及剖宫产）、样本贮存条件及时间、加酮试剂后血片的处理方式及仪器测定时间的不同均可引起G6PD结果的差异。新生儿性别及于血片取样部位对G6PD的测定结果没有影响。结论影响新生儿干血片G6PD筛查试验结果的因素众多,选择最佳检测条件,才能较好保证筛查试验质量。     

新生儿干血片葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定的影响因素分析

目的探讨新生儿干血片葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)筛查过程中可能影响G6PD测定结果的因素。方法观察采血季节、新生儿性别及分娩方式、血样采集后样本的贮存条件及时间、干血片取样部位、加酮试剂后血片是否去除和加酮试剂后仪器测定时间等因素对检测结果的影响。结果采血季节、新生儿的分娩方式(顺产及剖宫产)、样本贮存条件及时间、加酮试剂后血片的处理方式及仪器测定时间的不同均可引起G6PD结果的差异。新生儿性别及干血片取样部位对G6PD的测定结果没有影响。结论影响新生儿干血片G6PD筛查试验结果的因素众多,选择最佳检测条件,才能较好保证筛查试验质量。     

滤纸干血片法毛细管电泳Hb Bart′s带筛查新生儿α-珠蛋白生成障碍性贫血的应用价值评价

目的评估滤纸干血片毛细管电泳技术检测Hb Bart′s带在新生儿期筛查α-珠蛋白生成障碍性贫血的临床应用价值。方法对2 987例新生儿足跟血标本应用滤纸干血片毛细管电泳技术检测Hb Bart′s带水平并同时做基因分析,采用四格表法分析Hb Bart′s带对α-珠蛋白生成障碍性贫血的筛查价值。结果共检出Hb Bart′s带阳性标本131例,筛查阳性率为4.39%(131/2 987)。经基因分析,共检出2类6种α-珠蛋白生成障碍性贫血基因共226例。Hb Bart′s带对α-珠蛋白生成障碍性贫血诊断敏感度为50.00%(113/226),假阳性率为0.65%(18/2 761);特异性为99.35%(2 743/2 761);假阴性率(即漏诊率)为50.00%(113/226);其中Bart′s带对H病的筛查敏感度高达100.00%,标准型α-珠蛋白生成障碍性贫血的筛查敏感度为90.99%(101/111),对-α(3.7)/αα、-α(4.2)/αα静止型及非缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血的筛查敏感度较低。结论滤纸干血片毛细管电泳Hb Bart′s带在新生儿期筛查α-珠蛋白生成障碍性贫血有很高的特异性。对H病及标准型α-珠蛋白生成障碍性贫血亦有较高的筛查敏感度,但是对静止型及非缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血的筛查价值有限。     

可溯源干血片样本类固醇激素标准曲线的建立

目的 建立可溯源的干血片样本19种类固醇激素液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)标准曲线。方法收集乙二胺四乙酸抗凝新鲜全血,用0.9%NaCl溶液清洗血细胞,将清洗后的血细胞和无类固醇激素的血浆按0.55∶0.45比例混合,制备模拟全血。根据拟制备标准曲线浓度添加不同量类固醇激素至模拟全血样本中,制备不同浓度的类固醇激素标准曲线干血片。采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测各标准曲线干血片类固醇激素含量,分析其线性范围,并对类固醇激素标准曲线干血片进行性能验证。结果 类固醇激素标准曲线干血片中孕烯醇酮、孕酮、可的松、脱氢表雄酮的线性范围为0.25～100 ng/mL,11-脱氧皮质酮、21-脱氧皮质醇、18-羟皮质醇、11-酮睾酮的线性范围为0.05～20ng/mL,皮质酮、11-羟睾酮的线性范围为0.025～10 ng/mL,17-羟孕酮、18-羟皮质酮、11-脱氧皮质醇、雄烯二酮、11-羟雄烯二酮、睾酮的线性范围为0.1～40 ng/mL,皮质醇的线性范围为1.5～600 ng/mL,17-羟孕烯醇酮的线性范围为0.2～80 ng/mL,硫酸脱氢表雄酮的线性范围为25～1...     

串联质谱分析干血滤纸片酰基肉碱方法的建立

目的建立串联质谱方法进行干血滤纸片酰基肉碱(acylcamitine)分析，以便应用于临床相关疾病诊治和新生儿遗传代谢病筛查。方法取含不同浓度的8种酰基肉碱的干血滤纸片(直径3mm)，包括乙酰肉碱(C2)、丙酰肉碱(C3)、丁酰肉碱(C4)、异戊酰肉碱(C5)、己酰肉碱(C6)、辛酰肉碱(C8)、肉豆蔻酰肉碱(C14)和棕榈酰肉碱(C16)。用含已知量相应酰基肉碱内标的甲醇萃取、盐酸正丁醇衍生后，用串联质谱仪检测酰基肉碱及其浓度。分析该方法的精确性、样品回收率及实测值与加入浓度之间的相关性。结果酰基肉碱批内变异系数为6．3％-9．9％，批间变异为10．3％-13．3％。低浓度酰基肉碱回收率为98％-106％，中等浓度酰基肉碱回收率为97％-109％，高浓度酰基肉碱回收率为94％-108％。实测浓度与加入浓度之间的相关系数为0．9986—0．9999。结论串联质谱技术进行血滤纸片酰基肉碱分析，有较高的回收率，能够达到较高的精确性和准确性，为临床进行酰基肉碱分析提供了一项新技术。     

多层膜干片法测定血镁及临床应用

目的探讨低镁血症检测的临床意义.方法应用多层膜干片法测定血清镁.结果在366例住院患儿检出低镁血症(<0.66 mmol/L)79例,其中新生儿低镁血症20例,儿童(1个月～14岁)低镁血症59例.结论引起临床低镁血症的疾病常见于腹泻、新生儿肺炎、低血钙性惊厥、营养不良等疾病.检测新生儿血钙需同时作血镁测定.