抑制自噬基因Beclin 1的表达对耐药卵巢癌细胞A2780/DDP顺铂敏感性的影响及相关机制研究

[目的]观察抑制自噬基因Beclin1的表达对卵巢癌耐药细胞A2780/DDP顺铂敏感性的影响并探讨其中机制。[方法]利用脂质体将自噬基因Beclin1RNA干扰质粒pSUPER-Beclin1和对照质粒pSUPER-non分别转染耐药卵巢癌细胞A2780/DDP,筛选稳定表达株,检测顺铂作用下各组细胞(pSUPER-Beclin1组、pSUPER-non组和未转染组)生长抑制率、半数抑制浓度(IC50)、自噬和凋亡率的变化。[结果]A2780/DDP细胞转染干扰质粒pSUPER-Be-clin1后,细胞内Beclin1蛋白的表达明显下降;比较3组细胞顺铂48hIC50,pSUPER-Beclin1转染组最低(P﹤0.01);对3组细胞自噬与凋亡水平的检测显示,抑制Beclin1蛋白表达,在顺铂作用下,细胞自噬水平明显下降,而凋亡细胞比例明显升高,凋亡蛋白Caspase-3的表达亦明显上调,实验组与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]抑制耐药细胞A2780/DDP自噬基因Beclin1的表达,可通过抑制自噬,增强凋亡提高耐药细胞对顺铂的敏感性。     

自噬基因Beclin1过表达诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡的研究

目的:探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达对其体外生长活性的影响。方法:构建自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,将其稳定转染SKOV3细胞,实现Beclin 1在SKOV3中的过表达;用MTT法分析Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,用流式细胞仪检测凋亡和自噬情况,电镜和荧光显微镜下观察自噬现象。结果:pcD-NA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后Beclin 1在mRNA和蛋白水平均高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组。Beclin 1在SKOV3中的稳定过表达后G1期细胞明显增多,S期细胞比例明显减少,细胞增殖受到抑制,凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后MDC标记的自噬囊泡平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在电镜下可见大量自噬囊泡形成。在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC标记的自噬囊泡明显增加。结论:自噬基因Beclin1过表达可诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。     

沉默长链非编码PCAT-1对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的影响

目的探究沉默长链非编码RNA (lncRNA) PCAT-1对乳腺癌细胞阿霉素(ADM)耐药性的影响。方法 qRTPCR实验检测PCAT-1的mRNA表达水平;通过小RNA干扰技术下调MCF7细胞中PCAT-1的表达,CCK-8和MTT实验检测MCF7、MCF7/ADM细胞增殖的活性; TUNEL实验检测MCF7/ADM细胞凋亡。结果 PCAT-1在乳腺癌组织和MCF7细胞中的mRNA表达水平明显高于癌旁组织和人乳腺上皮细胞MCF10A。PCAT-1在MCF7/ADM细胞的mRNA表达水平明显高于MCF7细胞。沉默PCAT-1可以促进ADM对MCF7、MCF7/ADM细胞增殖的抑制作用。沉默PCAT-1能够增强ADM诱导的MCF7/ADM细胞的凋亡。此外,沉默PCAT-1可以促进Bax的表达,抑制Bcl-2和PCNA的表达。结论沉默PCAT-1增强ADM对乳腺癌细胞的毒性作用。     

自噬相关基因Beclin1和Atg5在宫颈癌中的表达及临床意义

目的探讨良、恶性宫颈癌及正常宫颈组织中自噬相关基因Beclin1和Atg5的表达情况,分析其在宫颈癌病程发生发展中的作用。方法将广东省廉江市人民医院收治的91例患者分为宫颈癌组、上皮内瘤变组和正常宫颈组,分别取各组宫颈组织并通过western blot、免疫组化及PCR法检测Beclin1和Atg5的表达情况。结果Beclin1和Atg5在宫颈癌组中mRNA和蛋白表达水平均显著低于正常宫颈组和上皮内瘤变组。结论宫颈癌组织中Beclin1和Atg5表达较正常宫颈组织显著下降,提示宫颈癌的发生发展可能与自噬相关基因Beclin1和Atg5的活性降低有关。     

SGK1基因沉默对人乳腺癌细胞生长抑制作用

目的观察血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)基因沉默对人乳腺癌细胞生长抑制作用,为探讨乳腺癌治疗靶点提供实验依据。方法采用RNA干扰技术,以pGenesil 3为载体,建立针对SGK1的短发卡RNAC(shRNA)干扰质粒pGen-3-siSGK1和阴性对照质粒pGen-3-control,转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,经筛选得到稳定SGK1基因沉默的乳腺癌细胞模型;采用实时定量PCR法、免疫荧光法以及蛋白免疫印迹法,检测shRNA干扰组、阴性对照组及未转染组细胞中SGK1的表达;采用体外浸润实验、细胞迁移实验检测各组细胞的侵袭和转移能力,噻唑蓝比色法检测细胞体外生长能力。结果成功构建针对SGK1基因的shRNA干扰质粒,建立稳定的SGK1基因沉默乳腺癌细胞模型;模型细胞中SGK1蛋白表达量与对照组相比下降了60%(P<0.01);β-catenin与SGK1表达条带亮度均明显下降;PGen-3-siSGK1组SGK1 mRNA相对含量(RQ) 为0.35,低于其他2组(分别为0.96、1.00),与pGen-3-control组相比下降了65.5%,差异有统计学意义(P<0.05),高倍显微镜视野下,pGen-3-siSGK1组的穿膜细胞数为22个/HPF,其他2组分别为66、62个/HPF;pGen-3-siSGK1组的细胞迁移率为17.01%,其他2组分别为72.22%、68.47%;凝血酶不同浓度下pGen-3-siSGK1组细胞生长均受到抑制,生长速度缓慢,其中0.1、1.0 U/mL浓度下,细胞含量(吸光度)分别为0.10、0.05,远低于其他2组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论SGK1基因沉默可抑制SGK1基因表达,可使人乳腺癌细胞MDA-MB-231株的浸润能力、迁移能力下降,抑制乳腺癌细胞生长。     

Beclin1介导的自噬在辐射诱导细胞早衰中的作用

自噬是机体及细胞必不可少的调节过程,在维持细胞的正常生理状态过程中发挥重要的作用.Beclin1是自噬的核心功能基因之一,其影响自噬体形成,并通过自噬影响肿瘤的发生和发展.研究发现Beclin1在p62蛋白介导的早衰调控中发挥一定作用,电离辐射可引起细胞发生自噬及早衰等细胞反应,导致细胞死亡.研究Beclin1介导的自...     

亚硒酸钠对肺癌A549细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3的作用

目的观察亚硒酸钠对肺癌细胞株A549细胞株自噬相关蛋白Beclin1、LC3的作用。方法将人肺癌A549细胞株分为0、0.5、2.5、5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠共5组,用不同浓度的亚硒酸钠培养液培养24h、48h后,用免疫细胞化学染色和Western blot印迹法检测亚硒酸钠对自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达的影响。结果人肺癌A549细胞株用不同浓度的亚硒酸钠培养24h,48h后,细胞数量逐渐减少,细胞肿胀,变大变圆,染色质凝集、核固缩并断裂。免疫细胞化学和Western blot印迹法结果均显示:随着亚硒酸钠浓度增加,肺癌A549细胞中Beclin1和LC3蛋白免疫细胞化学染色的平均光密度(MOD)有明显提高(P0.05)。结论亚硒酸钠可以抑制肺癌A549细胞生长,诱导肺癌A549细胞自噬。     

自噬基因Beclin1在喉鳞癌患者中的表达及临床意义

目的：探讨自噬基因Beclin1在喉鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测77例喉鳞癌组织和22例正常组织中Beclin1的表达,分析Beclin1的表达与喉鳞癌生物学行为的关系。结果：Beclin1表达主要位于细胞浆,与正常组织比较,喉鳞癌组织中Beclin1的蛋白表达阳性率明显降低（P〈0.05）;Beclin1表达与喉癌的临床分型无关（P〉0.05）,与喉癌的T分期、分化程度及淋巴结转移相关（P〈0.05）。结论：Beclin1表达缺失可能是喉鳞癌形成过程中的重要机制之一,可能成为探讨肿瘤发生和抑制肿瘤浸润转移研究的新靶点。     

自噬基因Beclin 1与膀胱癌发生发展及其预后相关性分析

目的探讨自噬基因Beclin 1在膀胱移行细胞癌（BTCC）组织中的表达和其在膀胱癌发生发展中的作用及预后的相关性。方法免疫组化EnVision法检测58例BTCC组织和20例正常膀胱组织中Beclin 1的表达,分析其与BTCC的分级、分期、侵袭及转移等生物学行为的关系,并对BTCC患者进行随访以期了解Beclin 1对患者生存率的影响。结果 Beclin 1在58例BTCC组织中阳性表达率明显低于正常膀胱黏膜组织中的表达（χ2=9.24,P〈0.01）。Beclin 1的表达与病理分级、TNM分期、生长方式、淋巴结转移有关（P〈0.05）。Beclin 1表达阳性患者的5年生存率明显优于Be-clin 1表达阴性的患者（P〈0.01）。Cox回归多因素分析表明Beclin 1表达是与患者5年生存率相关的独立预后因素（P〈0.05）。结论 Beclin 1在BTCC组织中表达下调,并可以作为BTCC预测发生发展和判断预后的生物学标志物。     

E1A基因对人乳腺癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的探讨E1A基因对人乳腺癌细胞化疗药物的增敏作用及相关机制。方法通过脂质体介导到将E1A基因导入人乳腺癌细胞系MCF-7,经G418筛选获得稳定表达E1A的转染细胞（MCF-7-E1A）。用不同浓度的表阿霉素、泰素帝及5-氟尿嘧啶等化疗药物处理细胞,通过MTT法测绘细胞存活曲线,观察E1A基因对表阿霉素、泰素帝和5-氟尿嘧啶等化疗药物敏感性的影响;用同一浓度的泰素帝和5-氟尿嘧啶处理细胞,观察E1A基因在不同时间对癌细胞存活率的影响。结果转染E1A基因的人乳腺癌细胞（MCF-7-E1A）对表阿霉素和泰素帝的敏感性显著增加,与MCF-7和MCF-7-vect细胞系比较,MCF-7-E1A细胞对表阿霉素和泰素帝的敏感性分别增加了11倍和15倍;对5-氟尿嘧啶的增敏作用不明显。结论E1A基因能显著增加人乳腺癌细胞对表阿霉素和泰素帝等化疗药物的敏感性。该作用可能与E1A基因抑制该细胞的HER-2/neu基因的表达有关,使人乳腺癌细胞周期再分布,出现S期抑制和G2/M期阻滞,为恶性肿瘤上化疗和基因治疗联合应用的可能性提供实验依据。     

新辅助化疗对乳腺癌细胞自噬及增殖的影响

目的分析新辅助化疗对乳腺癌细胞自噬及增殖的影响。方法将2018年2月—2021年1月医院收治的乳腺癌患者位研究对象,选择其中单独应用乳腺癌改良根治术治疗的40例患者为对照组,采用新辅助化疗治疗的40例患者为观察组。治疗前后,对患者的细胞自噬及增殖情况进行对比分析。检测的指标包括增殖性抗原67(Ki-67)和微管相关蛋白轻链3B(LC3B)表达水平,检测方法为免疫组化SP法。并对患者治疗期间的肿瘤细胞凋亡指数(Apoptotic,AI)进行评估。分析新辅助化疗在乳腺癌中的应用价值。结果观察组患者治疗后的Ki-67及LC3B表达水平均有明显变化,且观察组Ki-67表达水平≤14%比例高于对照组,LC3B表达水平强阳性比例升高情况高于对照组;观察组AI指标高于对照组;组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论新辅助化疗应用在乳腺癌的治疗中,有助于改善患者细胞自噬水平及增殖水平,从而有效发挥促进疾病转归的效果。     

细胞自噬与乳腺癌的关系研究进展

<正>乳腺癌作为女性最常见的恶性肿瘤之一,近些年来其发病率逐步上升。2012年统计发现,在全球范围内约有170万新发的乳腺癌病例,其中约有52万名女性死于乳腺癌~([1])。最新数据显示,2015年仅在中国就约有30. 4万例新发乳腺癌病例,在女性恶性肿瘤发病率中排名第一~([2]),成为女性恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一。因此,近年来,对于乳腺癌发     

自噬相关蛋白14对氟致人神经母细胞瘤细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨自噬相关蛋白14(ATG14)在氟致神经毒性中的作用.方法 不同浓度氟化钠(NaF)(0、20、40、60 mg/L)染毒人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)24 h,采用CCK-8试剂盒测定细胞存活率,流式细胞术测定凋亡率,免疫印迹法测定UNC-51样激酶1(UNC-51-like kinase 1,ULK...     

微生物感染对稽留流产患者自噬相关蛋白Beclin1、LC3及P62表达水平的影响

目的 探讨微生物感染对稽留流产患者自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及P62表达水平的影响。方法 选取2017年9月-2020年9月海口市妇幼保健院收治稽留流产患者90例,根据患者术前宫颈分泌物感染情况或者血清免疫球蛋白M(IgM)阳性情况分为感染组和未感染组,采用酶联免疫法检测患者术前血清Beclin1、LC3和P62水平,采用蛋白印迹法检测患者流产绒毛组织中Beclin1、LC3和P62蛋白表达情况,使用受试者工作特征曲线(ROC)分析术前血清Beclin1、LC3、P62水平及其联合检测时对微生物感染稽留流产的预测效能。结果 感染组中解脲支原体感染21例(40.38%)、沙眼衣原体18例(34.62%)、TORCH感染13例(25.00%),感染组患者术前血清Beclin1、LC3水平和流产绒毛组织Beclin1、LC3蛋白表达均高于未感染组(P<0.05),而术前血清P62水平和流产绒毛组织P62蛋白表达均低于未感染组(P<0.05);术前血清Beclin1、LC3、P62及其联合检测对感染稽留流产的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.789...     

沉默Dyrk1B基因对宫颈癌细胞生物学功能的影响

目的通过沉默在宫颈癌C4-1和Hela细胞Dyrk1B基因,观察Dyrk1B基因对宫颈癌细胞生物学功能的影响。方法应用慢病毒转染宫颈癌C4-1和Hela细胞沉默Dyrk1B基因作为沉默组,同时以空载病毒转染组为对照组。通过荧光显微镜观察2组转染效率,采用RT-PCR法检测Dyrk1B mRNA表达水平,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖能力以及对DDP的敏感性。结果慢病毒转染宫颈癌C4-1和Hela细胞转染效率无差异,沉默组Dyrk1B mRNA表达均低于空载对照组,宫颈癌C4-1和Hela细胞沉默组细胞的凋亡率较空载对照组增加,而宫颈癌C4-1细胞沉默组增殖较空载对照组降低,宫颈癌C4-1和Hela细胞沉默组较空载对照组比较IC50值均降低。结论慢病毒转染宫颈癌C4-1和Hela细胞沉默Dyrk1B基因表达可增加凋亡率,而细胞增殖能力下降,并且提高宫颈癌C4-1和Hela细胞对顺铂的敏感性。     

沉默Bax Inhibitor-1基因对子宫肌瘤细胞凋亡的影响及机制研究

目的 在子宫平滑肌瘤中探究Bax抑制因子1(Bax inhibitor-1,BI-1)的表达及其对子宫平滑肌瘤细胞的作用与相关机制.方法 应用RT-PCR及Western blot实验检测20对子宫平滑肌瘤组织样本与瘤旁组织中BI-1的mRNA及蛋白表达;分离培养原代子宫平滑肌瘤细胞并应用α-Actin免疫细胞染色进行...     

PI3KC3/Beclin1复合物对染矽尘NR8383细胞自噬的调控作用

[目的]探讨PI3KC3/Beclin1复合物在染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)自噬中的调控作用。[方法]常规培养NR8383细胞,随机分为4组:对照组,矽尘组,3-MA组和3-MA干预组,分别孵育1、3、6、12、20 h后收集样品。采用蛋白免疫印迹方法检测自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬底物蛋白p62以及自噬相关蛋白Beclin1、PI3KC3;采用激光扫描共聚焦显微镜观察孵育不同时间的自噬免疫荧光表达情况;采用免疫共沉淀检测Beclin1复合物表达。[结果]免疫荧光结果显示,矽尘组LC3点状聚集绿色荧光亮斑随时间先增强后减弱,在6 h时荧光最强,且各时间点较对照组和3-MA干预组荧光亮斑增强;3-MA干预组LC3荧光标记绿色亮斑先增强后减弱,弱于矽尘组,但强于对照组。加入溶酶体抑制剂二磷酸氯喹后,各组LC3绿色荧光信号随时间均呈现增强的趋势。Western blot结果显示,矽尘组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值呈先增加后减少趋势,且在各个时间点均高于对照组(P 0.05);在LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值达最高的6 h时间点,矽尘组的值是对照组的248%,是3-MA组的372%。3-MA干预组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值也呈先增加后减少趋势;除1 h时间点外,余各时间点均低于矽尘组,但高于对照组(P 0.05);在LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值达最高的6 h时间点,3-MA干预组的值是矽尘组的90%,是对照组的223%。Beclin1、PI3KC3蛋白表达趋势与LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值一致,p62蛋白表达趋势与LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值相反。免疫共沉淀显示,矽尘组Beclin1与PI3K结合增加,3-MA干预后两者结合减少。[结论]矽尘诱导NR8383细胞的自噬活动随时间发生不同程度的改变,3-MA可下调矽尘诱导的NR8383细胞自噬活动,推测PI3KC3/Beclin1信号通路参与矽尘诱导肺泡巨噬细胞的自噬过程。     

Survivin基因沉默对胰腺癌细胞Patu8988增殖及其对吉西他滨敏感性的影响

目的研究Survivin基因沉默对人胰腺癌Patu8988细胞增殖和对化疗药物吉西他滨敏感性的影响。方法设计合成Survivin的siRNA序列,Lipofectamine^TM 2000转染入Patu8988细胞。采用RT．PCR和Western blot检测Survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期。通过MTY法和细胞克隆形成试验法观察Survivin基因沉默后Patu8988细胞对吉西他滨的敏感性。结果Survivin基因沉默48h后,Patu8988细胞的Survivin基因和蛋白表达明显降低,基因表达分别为：对照组：0．78±0．03,空白组：0．82±0．06,实验组：0．52±0．05;蛋白表达分别为：对照组：0．77±0．21,空白组：0．77±0．26,实验组：0．57±0．03,差异有统计学意义（P〈0．05）。细胞周期被阻滞在G0／G1期,S期细胞数减少,其差异有统计学意义（P〈0．05）。Survivin基因沉默组细胞对吉西他滨的敏感性显著性增强。结论Survivin特异性siRNA能显著沉默Patu8988细胞Survivin基因,抑制细胞增殖,并增强Patu8988细胞对吉西他滨的敏感性。