大鼠血清和尿液中4种鹅膏肽类毒素代谢特征的超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱分析

目的建立血清和尿液中4种鹅膏肽类毒素的超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱测定方法,考察和分析4种鹅膏肽类毒素在大鼠体内的代谢特征,为中毒样品的采集提供科学依据。方法血清样品用乙腈+0.1%TFA二氯甲烷提取,残渣用流动相溶解;尿液样品则直接过0.22μm微孔滤膜;样品溶液经HSS T3色谱柱分离后用ESI-QTOF MS进行测定;选取SD健康大白鼠分别用4种鹅膏肽类毒素染毒,按需收集不同时间段的尿液和血液进行分析。结果血清和尿液样品的检出限分别为10 ng/ml和5 ng/ml,加标回收率分别为77.4%~95.6%和73.8%~103.8%,相对标准偏差在3.0%~18.0%和1.2%~25.4%。大鼠染毒尿液中均检出4种毒素,鹅膏毒肽的含量明显比鬼笔毒肽的含量高,大鼠染毒血清中仅14%检测到毒素的存在。结论检测方法适用于中毒事件生物样品中4种鹅膏肽类毒素的检测和确证分析,采集中毒8 h内的尿液对检出鹅膏毒肽的几率最大。     

尿液和血浆中蘑菇毒肽测定的方法学研究

目的开展尿液和血浆中3种鹅膏毒肽和3种鬼笔毒肽测定的方法学研究。方法尿液和血浆样本经乙腈沉淀蛋白后,HLB固相萃取柱萃取净化,超高效液相色谱-串联质谱法测定α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基三羟鬼笔毒肽6种蘑菇毒肽,基质匹配制作工作曲线,外标法定量;对样本测定条件进行优化,减小基质干扰以提高方法的灵敏度;研究方法的适用性,考察方法的专一性、线性、灵敏度、精密度和加标回收率。结果尿液和血浆中6种毒肽的检出限均低于0.06 ng/ml;在0.2~20 ng/ml范围内,线性关系良好;相关系数R2均大于0.999 3;相对标准偏差均小于12.1%;对于上述两种基质,加标回收率在79.6%~104.8%之间。结论方法灵敏、准确、专一性好,适合于突发毒蕈中毒事件中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基三羟鬼笔毒肽的确证分析,也适合对中毒患者临床治疗进行效果评价。     

蘑菇中5种蘑菇毒素的超高效液相色谱-串联质谱同时测定法

目的建立测定蘑菇样品中5种蘑菇毒素的超高效液相色谱-串联质谱法。方法样品经提取液涡旋、离心沉淀提取,固相萃取(SPE)柱富集净化,以HSS T3色谱柱(2.1×100 mm,1.7μm)为分析柱,以2 mmol/L乙酸铵水溶液和乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,以电喷雾电离(ESI)正离子多反应监测模式进行定性及定量检测,外标法定量。结果目标化合物在50～500μg/L范围内线性良好,相关系数0.99。5种毒素(α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽)的检出限为0.07 mg/kg,3个加标水平的回收率为88.4%～115.0%,相对标准偏差(RSD)为1.7%～9.2%。结论该方法准确、快速、灵敏,适用于蘑菇样品中多种蘑菇毒素的同时测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定野生蘑菇中的3种鹅膏毒肽

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法测定野生蘑菇中3种鹅膏毒肽的方法。方法 样品经甲醇超声提取,氮吹干后,加水复溶,HLB 固相萃取柱净化,Hypersil Gold - C18色谱柱（150 mm×2.1 mm,1.9 μm）分离,电喷雾（ESI+）多反应监测(MRM)方式检测。结果 3种鹅膏毒肽在5.0～100 ng/ml范围具有良好线性关系,相关系数值均大于0.999,平均回收率和相对标准偏差分别在81.8%～91.8%和4.5%～9.3%,定量限低于30 μg/kg。结论 该方法能准确、灵敏测定野生蘑菇中的3种鹅膏毒肽,适用于野生蘑菇中鹅膏毒肽的检测。     

德阳市81例蘑菇中毒事件调查及其分析

目的 :调查 2 0 0 3年 5月 2 3日～ 6月 15日在四川省德阳市发生的 81例毒蘑菇中毒事件并进行标本鉴定和毒素分析 ;方法 :现场采集标本进行形态学鉴定 ,利用高效液相色谱技术对蘑菇子实体、病人血液、病人透析液进行鹅膏肽类毒素检测 ;结果 :调查表明导致中毒的是鹅膏属中的异味鹅膏 (AmanitakotohiraensisNagasawa&Mitani) ,异味鹅膏子实体含有鹅膏肽类毒素的两种主要致死毒素 ,即α -鹅膏毒肽 (a -amanitin) ,β -鹅膏毒肽 (β -amanitin) ,其含量分别为196 4 2、 6 2 76 μg/g干重子实体 ,被检的 3个病人中有 1个病人的血液检测出含有 β -鹅膏毒肽 ,被检病人的透析液中未检测到毒素 ;结论 :异味鹅膏为有毒蘑菇 ,采食时要注意区分 ,不要误食。     

裂皮鹅膏毒素成分分析及致小鼠脏器改变

目的 研究裂皮鹅膏中的毒素含量分布并观察小鼠毒作用靶器官的病理改变.方法 采集引起食物中毒的蘑菇,经鉴定为裂皮鹅膏;超高效液相色谱-串联质谱法测定其鹅膏毒肽和鬼笔毒肽的毒素含量;给KM小鼠一次性腹腔注射裂皮鹅膏2g/kg(干粉),注射体积10 mL/kg,观察3h后处死小鼠,取心、肝、脾、肺、肾、肠进行病理检查.结果 ...     

鹅膏毒肽和鬼笔毒肽的提取鉴定研究进展

鹅膏毒肽和鬼笔毒肽是鹅膏菌属类蘑菇中的2种有毒环肽,是引起致死性食物中毒的主要毒素。鹅膏毒肽引起的食物中毒易误诊且缺乏针对性治疗,早期诊断对于鹅膏毒肽中毒的救治尤为重要。鬼笔毒肽虽不会引起食物中毒,但对鬼笔毒肽的分析有利于蘑菇种类的鉴定。本文对鹅膏毒肽和鬼笔毒肽的提取纯化和分析鉴定方法进行综述,为研发更加简便快捷的提取鉴定方法提供依据。     

鹅膏菌多肽毒素在生命科学研究中的应用

鹅膏菌多肽毒素是野生毒磨菇产生的主要毒素,常引起人和动物的中毒与死亡。由于鹅膏毒肽对真核细胞的ＲＮＡ聚合酶Ⅱ具有专一性抑制作用以及鬼笔毒肽对肌动蛋白具有束缚作用,它们在生命科学研究中具有重要的应用价值,并对生命科学的发展产生了很大的促进作用。本文拟综述鹅膏毒肽和鬼笔毒肽在生命科学中应用的研究进展     

超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法鉴定α-鹅膏毒肽在大鼠体内的代谢产物

目的 检测和鉴定大鼠尿中α-鹅膏毒肽的主要代谢产物,探讨α-鹅膏毒肽在大鼠体内的主要代谢途径。方法 大鼠以0.5mg/kg的剂量口饲α-鹅膏毒肽,分别采集实验组与对照组的尿液样品,尿液样品经简单处理后采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱仪检测,利用碰撞能量梯度(MSE) 、质量亏损过滤(MDF) 和离子色谱峰提取等技术处理数据。结果 在大鼠尿中共检测到8种代谢产物,其中,Ⅰ相代谢产物5种,Ⅱ相代谢产物3种,同时鉴定了代谢产物的结构,推测α-鹅膏毒肽在大鼠体内可能的主要代谢途径有氧化、脱氢、脱羧、甲基化反应。尿中主要代谢产物为原形、氧化代谢产物、脱氢代谢产物、脱羧代谢产物、甲基化结合物,α-鹅膏毒肽原形是尿液中的主要代谢产物,明显高于所有代谢产物的含量。结论 本研究将为确定α-鹅膏毒肽在动物体内的残留标志物及应用于α-鹅膏毒肽中毒应急检测与鉴定提供科学依据。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定玉米油中的伏马毒素

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法测定玉米油中伏马毒素(FBs)。方法取2 g玉米油样品使用乙腈水溶液(50∶50,V/V)提取,离心后取下层液体用Multi Sep 211 Fum净化柱净化,净化后的样品经氮气吹干后定容至1 ml,采用电喷雾离子源,以多反应监测(MRM)方式正离子化模式,使用超高效液相色谱-串联质谱仪进行检测。结果 FB1、FB2、FB3在5 ng/ml~200 ng/ml时线性良好,相关系数为0.988~0.999,检出限分别为0.27 ng/ml、0.09 ng/ml、0.13 ng/ml,定量限分别为0.89 ng/ml、0.29 ng/ml、0.43 ng/ml。该方法低、中、高3个浓度水平的平均加标回收率分别为87.3%~102.7%、89.1%~95.2%、88.7%~101.3%;相对标准偏差分别为2.7%~8.6%、4.7%~13.5%、7.5%~15.9%。结论该方法灵敏度高、精密度、准确度好;将该方法应用于市售玉米油样品的检测,填补了本省玉米油中伏马毒素含量测定的空白。     

鹅膏毒肽对大鼠心肌细胞影响

因误食含有鹅膏毒素蘑菇而中毒死亡事件在世界各国普遍发生，中毒致死的主要原因为鹅膏菌中的鹅膏肽类毒素。鹅膏毒肽中毒可导致心电图异常和心肌酶的升高。我们以大鼠为动物实验模型，研究其心肌酶的变化规律及其与心肌细胞病理改变的关系，为临床早期准确诊断鹅膏毒肽中毒提供参考。     

免疫亲和柱净化-液相色谱柱后衍生荧光法测定人尿液和血浆中河豚毒素

目的建立液相色谱柱后衍生荧光检测法测定尿液和血浆中河豚毒素(TTX)的分析方法。方法样品经免疫亲和柱净化浓缩10倍后进样分析,色谱柱为Zorbax Bonus RP柱(4.6 mm×150 mm,3.5μm),流动相为含10 mmol/L庚烷磺酸钠的60 mmol/L乙酸铵水溶液(pH5.0),4 mol/L NaOH 120℃柱后衍生,荧光检测器于激发波长385 nm,发射波长505 nm处进行检测。结果尿液和血浆中TTX的线性范围均为1.0~400 ng/ml,相关系数优于0.999,样品的检出限(S/N=3)均为0.3ng/ml,定量限(S/N=10)为1.0 ng/ml,4个浓度水平加标的平均回收率分别在94%~98%和92%~95%之间,相对标准偏差为1.2%~5.5%和2.0%~6.8%(n=5)。结论方法准确、灵敏、选择性强,适用于尿液和血浆样品中河豚毒素的中毒检测,已应用于实际样品的测定,取得满意结果。     

超高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法测定尿液中9种β_2-受体激动剂

目的研究尿液中9种β2-受体激动剂残留测定方法。方法样品在醋酸钠缓冲条件下(pH5.2)进行酶解,以高氯酸溶液沉淀蛋白,超声提取,调整提取溶液pH4.0,用HLB、MCX固相萃取柱浓缩和净化,通过Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18色谱柱分离,以甲醇和含0.1%甲酸的水溶液为流动相梯度洗脱,采用超高效液相色谱-电喷雾串连四极杆质谱,正离子多反应监测(MRM)模式进行测定。结果检出限0.002~0.025ng/ml,最低定量限为0.007~0.08ng/ml。添加水平为0.1、0.5和2ng/ml时,9种β2-受体激动剂的加标回收率为77.4%~101.7%,相对标准偏差为3.4%~18%。结论该法测定尿液中9种β2-受体激动剂残留物方法准确可靠,灵敏度高。     

稳定同位素稀释-液相色谱-串联质谱法测定啤酒中的3种伏马毒素

目的建立一种检测啤酒中伏马毒素B_1、B_2和B_3的稳定同位素稀释-液相色谱-串联质谱法。方法添加稳定同位素(~(13)C)标记内标的啤酒样品先经免疫亲和层析净化,再注入液相色谱-串联质谱仪分析。以乙腈-0.2%甲酸等度洗脱,3种伏马毒素于4.5 min内在C_(18)色谱柱上实现完全分离,以多反应监测模式检测,内标校正曲线法定量。结果3种伏马毒素的浓度为2.0 ng/ml~100 ng/ml时,分析物峰面积和内标峰面积的比值与浓度呈良好的线性关系,相关系数(r)≥0.998 4。伏马毒素B1、B2和B3的回收率分别为90%~104%、92%~105%和88%~106%,日内精密度分别为2.8%~4.3%、2.5%~4.0%和2.9%~3.5%,日间精密度分别为5.2%~6.9%、5.3%~8.1%和4.8%~6.5%,检出限分别为0.22μg/kg、0.21μg/kg和0.19μg/kg,定量限分别为0.72μg/kg、0.68μg/kg和0.62μg/kg。结论所建立的方法准确、特异、灵敏,可用于啤酒中3种伏马毒素的测定。     

超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法快速测定人血清中双酚A和4-叔丁基苯酚

目的建立人血清中双酚A(BPA)和4-叔丁基苯酚(4-t-BP)的超高效液相色谱串联三重四极杆质谱测定方法。方法取200μl血清用β-葡萄糖醛酸酶水解,甲基叔丁基醚萃取,丹酰氯衍生化后,采用C18超高效液相色谱柱和含0.1%甲酸的甲醇和水流动相梯度洗脱分离,三重四极杆质谱仪测定,内标标准曲线法定量。结果 BPA和4-t-BP浓度为0.1 ng/ml~50 ng/ml时,线性关系良好,相关系数(r)均0.995;3倍基线噪声所对应的BPA、4-t-BP的方法检出限分别为0.05 ng/ml和0.07 ng/ml。在1.0 ng/ml、2.0 ng/ml和10 ng/ml 3种加标水平下,BPA和4-tBP的加标回收率平均值分别为88%~104%、83%~96%,相对标准偏差(RSD)分别为5.9%~8.2%、6.1%~13.0%。该方法成功应用于20份实际人血清中BPA和4-t-BP的分析,并且在血清中均检出BPA,但是未检出4-t-BP。结论该方法样品前处理简单快速,而且灵敏高,准确性好,适合于大规模人群血清中BPA和4-t-BP的分析。     

微量血清中25-羟维生素D的柱前衍生-高效液相色谱-串联质谱法的建立及其临床应用

目的 建立微量血清中25-羟维生素D2（25-(OH)D2）和25-羟维生素D3（25-(OH)D3）的高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）,并用于临床常规检验。方法 10微升血清样本中加入同位素内标,用无水乙醇沉淀蛋白再用正己烷萃取,氮气吹干后衍生,复溶后经液相色谱分离、质谱定性定量。结果 25-(OH)D2和25-(OH)D3的线性相关系数（r）分别为0.9958和0.9937;批内精密度小于13.2%,批间精密度小于11.9%,平均加样回收率均在93.6%~109.7%之间;25-(OH)D2和25-(OH)D3的LOD分别为0.1ng/ml和0.025ng/ml,LOQ分别为1.5ng/ml和5ng/ml。在所检测的213份血样中约有6%的儿童的25-羟维生素D低于15ng/ml。结论 本法满足方法学要求,可用于微量血清中25-羟维生素D2和25-羟维生素D3的测定,对儿科临床诊断治疗有重要提示意义。     

一起拟灰花纹鹅膏菌毒蘑菇食物中毒事件的流行病学调查

目的 调查云南省澜沧县一起毒蘑菇中毒事件的流行病学特征,为毒蘑菇中毒事件处置提供参考。方法 用现场流行病学方法对病例开展回顾性调查,用描述性流行病学方法分析流行特征,结合毒蘑菇标本物种鉴定和毒素检测判定中毒原因。结果 该起毒蘑菇中毒事件进食者4人全部中毒、死亡1例;中毒潜伏期为15～20 h;临床症状以恶心、呕吐、腹痛、腹泻和头晕为主(均为3例)。死者临床特征以急性肝脏损害为主;毒蘑菇的形态学和分子生物学鉴定结果为拟灰花纹鹅膏菌(Amanita fuliginea)。蘑菇子实体中检出α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽。综合流行病学调查及实验室检测结果判定该事件为一起误食拟灰花纹鹅膏菌引起的中毒。结论 该起毒蘑菇中毒事件为误食拟灰花纹鹅膏菌引起。规范流行病学调查和报告,以及对毒蘑菇标本进行种类鉴定和毒素检测,是明确毒蘑菇中毒原因和事件有效处置的关键环节。     

高效液相色谱-三重四级杆质谱法同时测定大米中的伏马毒素B_1、B_2、B_3

目的建立高效液相色谱-三重四级杆质谱法同时测定大米中的伏马毒素B_1、B_2、B_3。方法大米样品经乙腈:水=50:50提取,以Multistep@211 Fum柱进行净化,将洗脱液氮吹至干,加1.0 ml 0.2%甲酸/乙腈=65:35溶解并定容,用LC-MS/MS检测。结果待测组分在5~800 ng/ml范围内呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.9996,检测限介于0.045~0.10 ng/ml。以空白大米粉样品进行加标水平分别为20、100、400 ng/g的回收率实验,回收率在94.5%~110.5%之间。结论该方法快速、准确,适用于大米中伏马毒素的测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定醋和黄酒中的邻苯二甲酸酯类塑化剂

目的建立醋和黄酒中13种邻苯二甲酸酯类塑化剂的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。方法样品加入适量盐后,经乙酸乙酯-正己烷(1∶1,V/V)提取,涡旋离心后,吸取上清液浓缩吹干,用甲醇定容后进液相色谱-串联质谱系统分析,内标法定量。色谱柱采用Agilent EC-C18柱(2.1 mm×75 mm,2.7μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸,进行梯度洗脱;质谱采用电喷雾离子源,在正离子多反应监测模式下进行检测。结果 13种邻苯二甲酸酯类塑化剂在10 ng/ml~500 ng/ml线性关系良好(r≥0.995 0);检出限和定量限分别为0.1 ng/ml~0.8 ng/ml和0.3 ng/ml~2.5 ng/ml;低、中、高3种浓度(20 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml)的回收率分别为90.2%~114.2%、97.1%~114.3%、94.7%~107.0%,精密度(RSD)分别为3.1%~13.0%、4.5%~12.1%、3.8%~9.4%。结论该方法简便、灵敏、准确、稳定,适用于醋和黄酒中邻苯二甲酸类塑化剂的测定。     

一起野生欧氏鹅膏菇食物中毒事件调查

目的调查宁波市镇海区一起食物中毒事件的原因,以警示公众,避免类似事件发生。方法对事件涉及的病例开展流行病学调查,收集病例的人口学信息、可疑进食史、临床症状和实验室检测等资料。采集2例病例的呕吐物、1例病例的全血标本进行毒素检测,现场采摘部分野生蘑菇进行鉴定和毒素检测。结果本次事件共5例病例,均有共同的野生蘑菇进食史,罹患率为100.00%;其中3例重症,1例轻症,1例死亡(3岁儿童)。病例潜伏期最短8 h,最长23 h,中位数为14 h;临床表现有呕吐、腹泻等胃肠道症状,部分出现尿、粪便隐血阳性,肌酐和丙氨酸氨基转移酶升高等肝肾功能损害症状。蘑菇样品中检出α-鹅膏毒肽和β-鹅膏毒肽;病例血液标本中检出α-鹅膏毒肽,为0.16 ng/mL。野生蘑菇经鉴定为欧氏鹅膏。结论本次事件为一起因食用野生欧氏鹅膏菇导致的肝肾损害型食源性中毒事件。