低功率毫米波辐射对K562细胞增殖的影响

目的 探讨低功率毫米波对K562细胞活力的影响。方法 应用细胞培养、活细胞计数、光镜、电镜及PCNA免疫组化染色及图像分析等方法,检测频率41.32GHz的毫米波辐射K562白血病细胞和未辐射毫米波K562白血病细胞活力的影响。 结果 与对照组比较,毫米波辐射45和60min组,K562细胞活力下降和PCNA阳性细胞减少,光镜观察各组未见明显差别,超微结构显示细胞形态呈增殖抑制改变。 结论 低功率毫米波辐射对K562细胞具有抑制增殖的作用。     

毫米波电磁场辐照可诱导人黑素瘤细胞凋亡

目的研究毫米波电磁场辐照对人黑素瘤A375 细胞凋亡的影响。方法研究共分为两部分：电磁场计算实验和细胞实 验。电磁场计算实验通过模拟毫米波辐照细胞这一生物物理过程,计算并对比分析比吸收率（SAR）的均匀性及强度,得出最佳 辐照参数。细胞实验中,A375细胞以35.2 GHz 毫米波分别辐照15、30、60、90 min,非辐照组除不接受辐照外其他环境与辐照组 保持一致,caspase-3抑制剂（AC-DEVD-fmk）组在毫米波辐照90 min前以10 μmoL的AC-DEVD-fmk预处理1 h。用CCK-8法 检测辐照组,非辐照组及AC-DEVD-fmk预处理组的细胞活性。用Annexin-V/ PI双染法检测细胞凋亡情况,蛋白印迹法检测细 胞内凋亡蛋白caspase-3的表达水平。结果电磁计算得出的最佳辐照方式为沿天线线极化方向,入射场垂直于塑料培养皿底 部,自下而上辐照。CCK-8细胞活性检测法的结果表明,毫米波对A375细胞活性具有抑制作用（P<0.05）,且呈时间依赖性。与 非辐照组相比,15、30、60、90 min 毫米波辐照组A375细胞的凋亡率显著升高（P<0.05）。辐照组A375细胞中caspase-3表达水 平明显增加,应用caspase-3抑制剂后可以逆转毫米波辐照对细胞活性的抑制作用,细胞活性率由（36.7±0.09）%增加到（59.8± 0.06）%,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。结论35.2 GHz毫米波辐照可以通过激活caspase-3诱导A375细胞凋亡。     

抗CXCR4单克隆抗体对与正常骨髓基质细胞共培养的HL-60细胞Bcl-2、PCNA、Fas蛋白表达的影响

目的　目前研究发现 ,骨髓基质细胞分泌的基质衍生因子 1(stromalcellderivedfactor 1,SDF 1)及其受体CXCR4可能参与髓内残留病变的形成。因此 ,本研究着重探讨了阻抑SDF 1活性对与正常骨髓基质细胞共培养的HL 60细胞增殖、生存的影响。方法　培养并共培养HL 60细胞。实验分为两组 ,实验组采用抗CXCR4单克隆抗体 12G5( 2 0ug/ml)阻断SDF 1生物作用 ,孵育 2 4小时后采用免疫组化染色检测HL 60细胞Bcl 2、PCNA、Fas蛋白表达。 结果　免疫组化染色显示 ,实验组中Bcl 2、PCNA及Fas阳性率分别为 ( 15 .7± 4.9) %、( 4 2 .1± 3 .9) %及 ( 3 9.7± 7 5 ) % ,而对照组分别为 ( 3 1.6± 5 .2 ) %、( 67.4± 8.5 ) %和 ( 2 4.1± 6.7) % ,t检验显示 12G5下调HL 60细胞Bcl 2及PCNA蛋白表达 ,上调Fas蛋白表达。结论　 12G5可在一定程度抑制HL 60细胞增殖 ,促进凋亡 ,影响其生存。     

二烯丙基二硫对人白血病细胞株增殖的影响

目的　研究二烯丙基二硫 (DADS)对人白血病细胞HL - 60的作用并探讨其作用机理。方法　采用MTT法、生长曲线绘制、流式细胞仪、免疫组化等方法 ,观察DADS对体外培养的HL - 60细胞的生长抑制、细胞周期分布以及PCNA表达的影响。结果　DADS对HL - 60细胞具有明显的生长抑制效应且呈剂量 -效应依赖关系 ,当 2 0mg·L- 1 DADS作用HL - 60细胞 72h ,增殖抑制率达 70 .5 %。流式细胞仪检测结果提示 :DADS处理后的HL - 60细胞主要停滞于S +G2 /M期 ,同时出现亚G1 峰 ;免疫组化结果显示 :DADS处理后的HL - 60细胞PCNA表达下降。结论　DADS对体外培养的HL - 60细胞具有明显的增殖抑制作用 ,DADS抑制HL - 60细胞增殖与细胞周期S +G2 /M期阻滞和促进凋亡有关     

毫米波照射对大鼠实验性肝癌病变的影响

目的 观察低能量高功率密度毫米波照射对实验性肝癌大鼠演变过程的影响。方法 30只Wistar雄性大鼠分为6组,第1至5组均为诱导肝癌组,用二乙基亚硝胺（DEN,diethylnitrosamine）喂养14周诱导实验性肝癌,同时用毫米波通过直接或循经（肝俞）照射5或10周;第6组为正常大鼠毫米波照射对照组。检测肝癌演变过程中血清学、组织学的变化。结果 诱导的肝癌大鼠,血清中r-谷氨酰转肽酶（r-GT）、碱性磷酸酶（AKP）、胆汁酸（BA）较正常大鼠组明显升高,毫米波照射肝癌大鼠r-GT、AKP、BA与肿瘤对照组相比略下降,统计学上各组间无明显差异。肿瘤对照组光镜下有肝癌结节,而毫米波照射组仅见嗜酸性和嗜碱性增生结节。毫米波照射后肝癌大鼠细胞核殖数（PCNA）明显低于肿瘤对照组,第5周开始的直接毫米波照射组PCNA低于其余毫米波照射组;毫米波照射后肝癌大鼠p53,bcl-2蛋白表达较肿瘤对照组明显减少。结论 毫米波照射能减缓DEN对大鼠的毒性作用,肝脏病理改变减轻,能使DEN诱导肝肿瘤大鼠肝细胞增殖数降低及可能诱导部分变异的肝细胞凋亡。     

齐墩果酸对HL60细胞bcl-2和bax表达的影响

目的探讨齐墩果酸（OA）对人急性早幼粒细胞白血病HL60细胞bcl-2和bax基因表达的影响。方法采用光学显微镜观察OA对体外培养HL60细胞的增殖抑制情况；并用RT-PCR法检测bcl-2和bax mRNA的表达。结果与空白组和二甲基亚砜（DMSO）对照组比较，80μmol／L OA处理细胞后，细胞增殖受抑制；OA用药组bax基因mRNA含量增加，bcl-2基因mRNA含量减少。结论OA可以诱导HL-60细胞凋亡，其机制可能与bax基因表达增加及bcl-2基因表达降低有关。     

低强度脉冲超声对体外培养的骨髓间充质干细胞增殖效应的研究

 目的探讨低强度脉冲超声（LIPU）对体外分离培养的骨髓间充质干细胞增殖效应（BMSC）的影响。方法将体外分离培养的第3 代BMSC 随机分为2 组：LIPU辐照组和对照组。每天镜下观察细胞生长情况;四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测各组细胞周期及增殖指数。结果LIPU 能够明显促进BMSC 增殖,LIPU 组辐照后细胞分裂增殖活性与对照组比较明显活跃,细胞集落更为密集;MTT 法检测LIPU 组于辐照前、辐照后1,3,5,7 d的细胞增殖活性均明显高于对照组（P< 0.05）;流式细胞仪检测提示LIPU 组辐照后细胞增殖指数明显高于对照组（P < 0.05）。结论低强度脉冲超声波对骨髓间充质干细胞的增殖具有明显的促进作用。     

蟾蜍灵诱导白血病HL-60细胞分化及相关基因表达

目的：研究中药蟾酥中蟾毒成分蟾蜍灵(bufalin)的抗癌机制。方法：以早幼粒白血病HL－60细胞为靶细胞，应用电镜技术观察bufalin诱导的细胞分化，免疫组化方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子p21^WAF1的表达。结果：0．001μmol/L bufalin作用HL－60细胞，细胞向粒细胞方向分化，p21^WAF1表达显著升高，而PCNA表达显著下降，二者显著负相关（P＜0．01）。结论：bufalin诱导HL－60细胞分化，与其上调p21^WAF1的表达、下调PCNA表达有关。     

α-干扰素联合脂多糖在体外抑制急性髓系白血病细胞株U937和HL60增殖的效应

目的 探讨α-干扰素联合脂多糖在体外对髓系白血病(AML)细胞系U937、HL60细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 用四甲基偶氮唑蓝法检测α-干扰素和(或)脂多糖对U937、HL60细胞增殖作用的影响;流式细胞仪检测α-干扰素和(或)脂多糖对U937、HL60细胞的凋亡率和细胞周期的影响.结果 (1)单用α-干扰素或脂多糖组较对照组能显著地抑制U937、HL60细胞的增殖、增加细胞的凋亡率和增加G1期细胞(P＜0.05).(2)α-干扰素联合脂多糖组较单用α-干扰素或脂多糖组及对照组均能显著地抑制U937、HL60细胞的增殖、增加细胞的凋亡率和增加G1期细胞(P＜0.05).结论 α-干扰素联合脂多糖对白血病细胞增殖抑制及凋亡促进有协同增强作用.     

苦参碱对白血病细胞诱导分化作用和机理研究

为了解苦参碱对人粒系白血病细胞系HL－60细胞的诱导分化作用并探讨其机制,采用MTT法,光镜观察、S－AP免疫组织化学法、硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验,流式细胞仪检测,逆转录酶／多聚酶链反应（RT－PCR）检测,观察苦参碱对HL－60细胞的增殖抑制作用,分化诱导作用及其对细胞周期移行和癌基因表达的影响,结果表明：苦参碱明显地抑制HL－60细胞的增殖,并诱导其向成熟粒系分化;苦参对HL－60细胞的诱导分化作用与其下调c-myc基因表达,阻滞细胞在G1期有关。     

阿糖胞苷对HL60细胞增殖和凋亡及bcl-2基因表达的影响

目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)对急性早幼粒白血病细胞HL60增殖、凋亡及bcl-2基因表达的影响。方法 Ara-c与HL60细胞共同孵育后,应用光学显微镜和透射电子显微镜观察细胞的形态学变化,通过四唑盐(MTT)法分析不同剂量Ara-C对细胞增殖的抑制作用,应用流式细胞术分析Ara-C对细胞凋亡和Bcl-2蛋白的影响,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究bcl-2基因表达的影响。结果 250μg／ml Ara-C对HL60细胞作用48 h后,光学显微镜下可见细胞呈核固缩、深染及染色质边集等多种形态改变,透射电子显微镜下可见典型的凋亡细胞,MTT检测显示Ara-C能明显抑制细胞的生长。流式细胞仪分析结果显示,细胞凋亡百分率随作用时间的延长而增加,而Bcl-2蛋白则随之下降。RT-PCR结果显示,bcl-2 mRNA的表达亦随着药物作用时间的延长而下降。结论 Ara-C能诱导HL60细胞凋亡,下调Bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA水平。     

131I-GMCSF诱导HL60/ADM细胞凋亡过程中对细胞周期的影响

目的观察131I-GMCSF在诱导HL60/ADM细胞凋亡过程中细胞周期的改变,进一步探讨凋亡与细胞周期改变的关系.方法采用体外放射免疫治疗模型,通过流式细胞术观察131I-GMCSF诱导HL60/ADM细胞凋亡情况及其对HL60/ADM细胞周期的改变.结果 Annexin V/PI双染色法证实一定放射性浓度的131I-GMCSF能明显诱导HL60/ADM细胞凋亡,且随着作用时间的延长,细胞凋亡率增加,流式细胞术显示作用24h后的细胞周期改变主要表现为S期阻滞和G2/M期阻滞,而作用48h后则主要引起细胞发生G2/M期阻滞.结论在放射免疫导向治疗中,辐射诱导的细胞凋亡与细胞周期发生阻滞,特别是与G2/M期阻滞有着密切的关系,细胞周期阻滞与放射敏感性可能存在正相关.     

~(131)I-GMCSF诱导HL60/ADM细胞凋亡过程中对细胞周期的影响

目的观察131I-GMCSF在诱导HL60/ADM细胞凋亡过程中细胞周期的改变,进一步探讨凋亡与细胞周期改变的关系。方法采用体外放射免疫治疗模型,通过流式细胞术观察131I-GMCSF诱导HL60/ADM细胞凋亡情况及其对HL60/ADM细胞周期的改变。结果Annexin V/PI双染色法证实一定放射性浓度的131I-GMCSF能明显诱导HL60/ADM细胞凋亡,且随着作用时间的延长,细胞凋亡率增加,流式细胞术显示作用24h后的细胞周期改变主要表现为S期阻滞和G2/M期阻滞,而作用48h后则主要引起细胞发生G2/M期阻滞。结论在放射免疫导向治疗中,辐射诱导的细胞凋亡与细胞周期发生阻滞,特别是与G2/M期阻滞有着密切的关系,细胞周期阻滞与放射敏感性可能存在正相关。     

抑制SDF-1活性对HL60细胞增殖影响的实验研究

目的：通过应用SDF-1受体CXCR4单克隆抗体(12G5)观察抑制SDF-1活性对HL60细胞增殖活性的影响，探讨趋化因子SDF-1在维持HL60细胞生存能力中的作用。方法：培养骨髓基质细胞，并与HL60细胞共培养，采用SDF-1受体CXCR4单克隆抗体阻断SDF-1生物活性后，用MTT法检测HL60细胞活力，流式细胞术观察HL60细胞增殖周期变化、检测细胞膜表面CXCR4表达，同时检测CXCR4单克隆抗体应用前后HL60细胞内游离钙离子浓度等。结果：应用抗CXCR4单克隆抗体后，HL60细胞出现下列变化：(1)细胞膜表面CXCR4表达下调；(2)增殖周期中G0／G1期的细胞增多，增殖期细胞减少；(3)细胞活性下降；(4)细胞内游离钙离子浓度降低，并与单抗浓度呈正相关。结论：抑制SDF-1活性可在一定程度上抑制白血病细胞增殖，但对于抑制髓内残留病变的形成尚需进一步研究。     

耐三尖杉酯碱白血病细胞株HL-60/H的建立及其耐药性和抗凋亡作用的检测

为了建立性能稳定的白血病耐药细胞株用于肿瘤细胞耐药性和促凋亡作用的研究, 通过逐渐增高三尖杉酯碱（Ｈ） 的剂量, 用极限稀释法克隆筛选出耐三尖杉酯碱（Ｈ） 的白血病细胞株ＨＬ－６０／Ｈ, 并用ＦＣＭ、透射电镜、ＤＮＡＬａｄｄｅｒ法、ＳＡＢＣ法对其进行耐药性和抗凋亡作用的检测。结果显示, ＨＬ－６０／Ｈ是亲代细胞ＨＬ－６０ 耐受Ｈ 的８９．２ 倍,ＨＬ－６０／Ｈ 在无药培养基中传代１６代, ＩＣ５０ 没有明显的降低。ＨＬ－６０／Ｈ细胞同时对多种药物产生耐受。Ｐ－１７０ 和ＢＣＬ－２在ＨＬ－６０／Ｈ 细胞的表达明显增多。药物不易在细胞内聚集,Ｈ不易诱导其发生凋亡。分析结果认为ＨＬ－６０／Ｈ是性能稳定的耐药细胞株,对耐药机制的研究和寻找逆转耐药的方法提供有利条件;多药耐药蛋白Ｐ－１７０ 介导的药物不易在细胞内聚集可能是ＨＬ－６０／Ｈ细胞产生耐药的重要机制; ＢＣＬ－２ 的高表达使ＨＬ－６０／Ｈ 细胞不易发生凋亡     

全反式维甲酸诱导HL60细胞分化前后蛋白表达差异分析

目的:建立全反式维甲酸(All trans-retinoic acid,ATRA)诱导HL60细胞向粒系分化的模型,研究采用改良双向电泳条件对分化前后的细胞全蛋白进行分离分析,寻找差异表达蛋白.方法:采用全反式维甲酸对HL60细胞进行诱导分化.通过MTT、流式细胞技术分析细胞增殖情况和CD11b细胞表面分化抗原的表达,选择最适的药物浓度和诱导时间;再通过细胞化学染色对分化结果进行验证,构建分化模型.采用改良双向电泳分离技术对细胞全蛋白进行分离,运用PDQuest软件分析HL60细胞分化前后蛋白表达差异,并用基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(MALDI-TOF)对差异蛋白点进行分析.结果:ATRA明显抑制HL60细胞增殖,并随药物浓度的增加,抑制效果也越显著;2 μmol/L的ATRA连续作用HL60细胞5 d即有90%以上的细胞有粒系分化标志抗原CD11b的表达.细胞化学染色结果亦表明诱导后的HL60细胞向粒系分化.将分化前后的HL60细胞全蛋白经过改良双向电泳技术分离,PDQuest软件比对,MAIDI-TOF分析,发现有25个蛋白点仅在未分化凝胶谱中找到,有15个蛋白点仅在分化细胞蛋白表达谱中找到.其中有的是癌基因表达蛋白,有的是抑癌基因表达蛋白,还有的则参与凋亡过程等.结论:在选定的药物浓度和作用时间下,ATRA可以诱导HL60细胞向粒系分化.改良双向电泳技术对药物作用前后细胞蛋白的分离,可发现不同于传统双向电泳分离所得的蛋白结果.     

环孢菌素A对HL-60和K562细胞增殖的影响

目的 探讨环孢菌素A对HL-60、K562细胞增殖的影响。方法 应用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）观察环孢菌素A对HL-60、K562细胞增殖的抑制率，应用电镜进行凋亡的检测。结果 癌细胞在环孢菌素A作用下，细胞增殖被阻遏，并呈现时间剂量效应关系。同时发现环孢菌素A能诱导HL-60、K562细胞凋亡。结论 环孢菌素A可以通过诱导细胞凋亡而抑制HL-60和K562细胞增殖。     

反义hTERT体外抑制白血病细胞增殖的研究

目的研究反义hTERT基因对白血病细胞体外增殖的抑制作用。方法体外通过SuperFect将已构建好的正、反义hTERT真核表达载体转染HL60白血病细胞,再经过G418及PCR筛选鉴定分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞HL60-s和HL60-as。随后运用实时荧光定量RT-PCR技术及TRAP-银染法对各组细胞内源性hTERT mRNA的表达情况及端粒酶的活性进行检测。同时还采用MTT法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析反义hTERT对白血病细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡。结果与空白对照、正义hTERT组相比,反义hTERT能显著地降低HL60细胞内源性hTERT mRNA的表达(P<0.01)和下调端粒酶活性。当各组细胞传至第25代后,与HL60、HL60-s比较,HL60-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低,同时伴有凋亡率的显著增加。结论反义hTERT在体外能抑制白血病细胞的生长增殖能力,其潜在、广谱的抗肿瘤作用的分子生物学机制可能是首先通过抑制和下调hTERT表达(端粒酶活性)而最终引发瘤细胞衰亡的途径来实现的。     

蝌蚪提取液诱导人早幼粒白血病细胞分化的实验研究

目的 :探讨蝌蝌提取液 (T871)对白血病细胞的诱导分化作用。方法 :利用细胞生长曲线、形态学观察、细胞免疫化学及原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术 ,观察了T871诱导HL 60细胞分化的作用和分化过程中癌基因c myc、c myb表达的变化。结果 :T871能抑制HL 60细胞的增殖 ,形态学表现为类似单核 /巨噬细胞 ,同时T871还能使HL 60细胞的NBT还原能力、ANAE活性显著增强 ,同时伴有癌基因c myc、c mybmRNA表达的下调。结论 :T871能诱导HL 60细胞向单核 /巨噬细胞方向分化 ,c myc、c myb癌基因可能参与了此过程     

HL-60细胞内游离钙对环核苷酸水平的影响

目的 藉离子霉素提高细胞内游离钙浓度（[C^2 ]i），观察其对急性白血病HL－60细胞内环核苷酸水平的影响。方法 在IBMX抑制磷酸二酯酶作用后加入离子氯素提高[C^2 ]i，比较[C^2 ]i升高对静息水平和肾上腺素刺激水平的HL－60细胞内cAMP,cGMP水平的影响，cAMP,cGMP水平以环核苷酸的累积量表示。结果 [C^2 ]i升高可使静息和肾上腺素刺激水平的cAMP累积量明显降低，cGMP累只量无明显改变，[C^2 ]i升高对硒诱导分化后的HL－60细胞环核苷酸的影响同分化前一致。结论 [C^2 ]i升高能够降低HL－60细胞内cAMP水平，对cGMP水平无影响，这种作用不因细胞分化而改变。