2011年广州市脑膜炎奈瑟菌分离株的分子特征分析

目的对2011年广州市分离的6株脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,N.meningitidis)进行分子特征分析。方法提取菌株基因组DNA,通过DNA序列测定分析外膜蛋白(outer membranes proteins,OMPs)编码基因porA、fetA可变区型别;通过多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST),采用Splits Tree在线软件分析进化关系,研究其分子特征。结果 6株菌株的OMPs编码基因porA、fetA可变区型别均不相同;MLST分型显示其分属5个不同的序列型(Sequence Type,ST),其中2株B群菌株序列型为ST-5615,1株C群菌株序列型为ST-5542,1株血清不能分群菌株序列型为ST-2146,分离自健康带菌者和密切接触者的2株W135群菌株的序列型不同,其中密切接触者为高致病性的ST-11型,而健康带菌者为新发现的ST-9133型。结论广州市N.meningitidis的基因型具有多样性特点,本研究为完善我市N.meningitidis分型数据、研发新疫苗及免疫规划措施的制订提供参考。     

MLMT与MLST在新生隐球菌基因分型中的应用研究

目的 探讨多位点微卫星灶分型(MLMT)和多位点序列分型(MLST)在新生隐球菌(C.neoformans)基因分型中的应用。方法 提取22株来源于国内及日本已明确为新生隐球菌的菌株DNA,经MLMT及MLST相应位点的引物进行扩增、测序;计算各微卫星灶(CNG1、CNG2及CNG3)序列中简单重复序列的重复数,确定菌株MLMT的基因型;将本研究菌株的MLST中各位点序列和网上数据库相应序列进行对比,获取该菌株的MLST基因型;比较两种方法在分型中分辨能力。结果 在22株菌中,有16株的基因型为MLMT17/MLST5(16/22,72.73%),MLMT将所有菌株分为7型,而MLST分为4型;根据MLST分型,MLMT17、16、34及39的菌株为MLST5;MLMT2、14、29相对应MLST66、32及31;两种方法的分型分辨能力比较,差异无统计学意义(P=0.488)。结论 MLMT-17/MLST 5是我国和日本的新生隐球菌常见基因型,包含CNG1、CNG2及CNG3位点的MLMT可作为MLST的替代或补充。     

广州地区鲍曼不动杆菌的多位点序列分型及流行克隆

目的 本研究对广州地区5家教学医院的鲍曼不动杆菌进行分子流行病学分析.方法 5家教学医院共采集138株鲍曼不动杆菌,利用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)及eBURST算法评价菌株之间的遗传关系.结果 MLST将138株鲍曼不动杆菌分为8个已有序列类型(STs),分别为ST...     

广东省茂名市副溶血弧菌涉水产品分离株病原学特征

目的 了解茂名市涉水产品中副溶血弧菌分离株的病原学特征。方法 对茂名市食品安全风险监测中分离到的副溶血弧菌进行血清分型、抗生素敏感性实验、毒力基因检测、脉冲场凝胶电泳( PFGE) 分子分型和多位点序列分型（MLST）。结果 2017—2018年共分离到涉水产品中副溶血弧菌分离株44株,O型共分7个血清型,无明显优势血清型。44株分离株除对氨苄西林和头孢唑林表现出高度的耐药性外,对其它抗生素均敏感,未发现有分离株携带tdh和trh基因。44株分离株分成44种不同的PFGE带型,MLST分型发现有30个新的ST型,呈现一定的遗传多样性。结论 广东省茂名市涉水产品中副溶血弧菌分离株血清型别多样,对大部分的抗生素敏感,均未发现携带tdh和trh 基因,且呈现一定的遗传多态性,需要继续加大监测的力度和范围。     

携带blaoXA-58的鲍曼不动杆菌的克隆相关性分析

目的 了解三甲医院携带碳青霉烯酶基因blaoXA-58的鲍曼不动杆菌的检出率和菌株克隆相关性,为临床合理使用抗菌药物和制定恰当的感染控制措施提供理论依据.方法 收集四川大学华西医院非重复鲍曼不动杆菌临床分离株.菌种的鉴定通过recA基因测序鉴定.PCR检测菌株的固有碳青霉烯酶基因blaOXA-51/66和获得性碳青霉烯酶基因blaOXA-58.用肠杆菌科基因间重复序列-聚合酶链反应分型技术(ERIC-PCR)、多位点序列分型技术(MLST)和脉冲场凝胶电泳分型技术(PFGE)对blaOXA-58阳性的菌株进行克隆相关性分析.结果 经recA和blaOXA51/66检测证实有115株鲍曼不动杆菌临床分离株.其中,9株对亚胺培南敏感性下降[最小抑菌浓度(MIC)≥2 mg/L]的菌株携带有blaOXA-58,占7.8％.其ERIC-PCR指纹图谱相似.MLST分型结果显示有8株菌属于ST-95型,1株菌属于ST-75型.8株ST-95型鲍曼不动杆菌的PFGE图谱显示为同一个克隆,分属于两个差异很小的亚型.结论 我院部分对碳青霉烯敏感性下降的鲍曼不动杆菌临床分离株携带有获得性碳青霉烯酶基因blaoXA-58.blaoXA-58阳性的鲍曼不动杆菌在我院主要以克隆性播散为主.     

一起食物中毒中金黄色葡萄球菌的分子特征分析

目的利用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术对一起食物中毒中检出的金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)进行分子分型,了解毒株的肠毒素类型,为金葡菌的分子溯源研究提供实验室数据。方法 mini VIDAS全自动荧光酶标免疫测试仪检测样品中葡萄球菌肠毒素。按照GB 4789.10-2010对样品进行菌株分离和生化鉴定,应用MLST方法对分离出的金葡菌进行基因分型,酶联免疫吸附法对分离株进行葡萄球菌肠毒素分型。结果分别从病人的呕吐物、食堂师傅手涂抹物、厨房刀涂抹物中检出金葡菌,呕吐物中检出葡萄球菌肠毒素;可疑食物中未检出金葡菌,葡萄球菌肠毒素为阴性。中毒毒株MLST分析得到4个ST序列型,ST5、ST15、ST59和ST338,其中ST5型金葡菌产肠毒素C、肠毒素D和肠毒素E; ST15型菌产肠毒素E; ST59型和ST338型菌产肠毒素B和肠毒素C。结论此食物中毒由不同MLST型别的金葡菌引起,毒株产葡萄球菌肠毒素的类别也不同。     

北京地区实验动物绿脓杆菌分离株MLVA分型

目的 通过多位点可变数目串联重复序列分析(multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis,MLVA)分型方法,研究北京地区实验动物绿脓杆菌分离株基因型和分布情况.方法 选择13个可变数目重复序列(variable-number tandem-repeat,VNTR)位点,对实验动物及设施中检测出的141株绿脓杆菌的基因组DNA进行重复序列扩增,所得指纹图谱使用BioNumerics软件进行聚类分析,绘制系统发育树和最小生成树(minimum spanning tree,MST).结果 所采用的13个VNTR位点能够对全部分离株进行有效分型.141株绿脓杆菌主要被分为了3个基因群,56个基因型.各群所占比例分别为A群82.3％,B群占12.8％,C群占5.0％,辛普森多样性指数为0.763.同一区域内相邻实验动物单位的绿脓杆菌分离株同源关系较远.结论 MLVA方法对绿脓杆菌具有很好的分型能力,能够有效的追踪绿脓杆菌的来源.北京地区实验动物中绿脓杆菌分离株基因型多态性丰富,但无地域性同源关系.     

漳州市沙门菌和副溶血性弧菌的分子分型研究

目的研究漳州市常见食物中毒菌株的分子分型特征,分析菌株之间的同源性。方法采用PCR法、脉冲场凝胶电泳技术、多位点序列分型技术对漳州地区2016-2019年分离的沙门菌和副溶血性弧菌进行分型和进化关系分析。结果 21株沙门菌的5种毒力岛基因SPI-1、SPI-2、SPI-3、SPI-4、SPI-5均为阳性,脉冲场凝胶电泳分为9种带型,相似度为48.0%～100.0%,一起食物中毒的10个菌株聚为一种带型,而另一起食物中毒的5个菌株分为两种带型,多位点序列分型分为8种型别,ST11型10株均分离自同一起食物中毒,3株ST19型与2株ST34型分离自同一起食物中毒,ST155型2株,其余菌株为ST29、ST31、ST365、ST469各1株,引起食物中毒的ST11、ST19、ST34在国内外均有发生。51株副溶血性弧菌TDH毒力基因阳性18株,TRH毒力基因阳性1株,TLH基因阳性51株,脉冲场凝胶电泳分为39种带型,相似度为51.8%～100.0%,2017年一起食物中毒的7个菌株分为两种带型,两种菌型进化关系相距甚远,2018年一起食物中毒的5个菌株条带相同,多位点序列分型分为34种型别,ST3型11株,10株来源于3起食物中毒,1株来源于食品,ST345型6株来源于同一起食物中毒,ST345菌株引起的这起食物中毒中还分离出1株ST199型,二者的亲缘关系很远,引起食物中毒的ST3、ST345、ST199在国内外均有发生,其中优势型ST3是国内外普遍流行菌株。结论引起漳州市食物中毒的沙门菌和副溶血性弧菌菌型在国内外均有发生,应加强对这些菌型的研究和控制。脉冲场凝胶电泳和多位点序列分型均适用于食源性致病菌的遗传进化分析和分子溯源。     

ST571型产NDM-1肺炎克雷伯菌检出及分子流行病学研究

目的探讨产新德里金属-β-内酰胺酶1(NDM-1)肺炎克雷伯菌检出的分子流行病学意义。方法实验菌株为从临床标本中分离到的1株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌。采用VITEK-2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及药敏试验,PCR及测序方法检测NDM-1等碳青霉烯酶基因的表达,并对菌株进行质粒转移接合试验及多位点序列分型(MLST)。经检索Pub Med收集其他地区产NDM-1肺炎克雷伯菌的MLST数据,采用e BURST V3软件及Tree drawing软件进行分析。结果该菌株对包括碳青霉烯类在内的多种抗生素均高度耐药,携带NDM-1基因,MLST为ST571含有该基因的质粒通过接合方式成功转移到受体菌。共收集源自28个国家的238株产NDM-1肺炎克雷伯菌的MLST信息,包含41个ST型,CC258(clone complex)为主要流行株。结论我国首次检出ST571型产NDM-1肺炎克雷伯菌,耐药基因可能通过质粒进行传播。产NDM-1肺炎克雷伯菌的分子分型呈多样化,以CC258流行最广,本实验菌株与该克隆复合体菌株的亲缘关系甚远。     

成人GHD患者的血清瘦素、脂联素、内脂素水平及相关性研究

【摘要】 目的了解三甲医院携带碳青霉烯酶基因blaOXA-58的鲍曼不动杆菌的检出率和菌株克隆相关性,为临床合理使用抗菌药物和制定恰当的感染控制措施提供理论依据。方法收集四川大学华西医院非重复鲍曼不动杆菌临床分离株。菌种的鉴定通过recA基因测序鉴定。PCR检测菌株的固有碳青霉烯酶基因blaOXA-51/66和获得性碳青霉烯酶基因blaOXA-58。用肠杆菌科基因间重复序列-聚合酶链反应分型技术(ERIC-PCR)、多位点序列分型技术(MLST)和脉冲场凝胶电泳分型技术(PFGE)对blaOXA-58阳性的菌株进行克隆相关性分析。结果经recA和blaOXA-51/66检测证实有115株鲍曼不动杆菌临床分离株。其中,9株对亚胺培南敏感性下降〔最小抑菌浓度(MIC)≥2mg/L〕的菌株携带有blaOXA-58,占7.8%。其ERIC-PCR指纹图谱相似。MLST分型结果显示有8株菌属于ST-95型,1株菌属于ST-75型。8株ST-95型鲍曼不动杆菌的PFGE图谱显示为同一个克隆,分属于两个差异很小的亚型。结论我院部分对碳青霉烯敏感性下降的鲍曼不动杆菌临床分离株携带有获得性碳青霉烯酶基因blaOXA-58。blaOXA-58阳性的鲍曼不动杆菌在我院主要以克隆性播散为主。     

北京市2009—2011年痢疾病原菌菌型分布和流行病学特征分析

目的分析2009—2011年北京地区志贺菌的菌型分布及流行病学特征。方法收集2009—2011年痢疾监测中分离到的志贺菌788株进行血清分型。结果 788株志贺菌中宋内志贺菌597株(占75.76%),福氏志贺菌188株(占23.86%)。检出高峰在8、9月份,年龄段以21～30岁为主。结论近三年北京市志贺菌流行菌型为福氏志贺菌和宋内志贺菌,其中优势菌型为宋内志贺菌。今后痢疾防控应以夏秋季为主。     

沙门菌携带者分离株血清学及PFGE分型研究

目的建立在健康携带者分离的沙门菌的血清型及PFGE分子型别图谱库,探讨其多态相关性关系。方法将预防性健康体检分离获得的21株沙门菌鉴定培养,进行血清分型;将确定后的菌株用限制性内切酶Xba I消化酶切其基因组DNA,在脉冲场凝胶电泳仪进行DNA电泳,所得的分子型别图谱用Bionumerics5.1软件建立图谱数据库,并进行聚类分析。结果21株沙门菌分属于O：4（B）、O：9（D1）和O：3,10（E1）3个菌群,8种血清型;以德尔卑沙门菌为主,共7株占所有分离株的占33.3%,其次为阿贡纳沙门菌19.1%（4/21）,鼠伤寒沙门菌14.3%（3/21）。经比对分析,18株沙门菌分为15个PFGE型别,菌株间的相似值在53.9%～100%之间,同一血清型别的沙门菌可对应多个PFGE型别。结论沙门菌的PFGE型别呈现多样性,脉冲场凝胶电泳对从业人员体检沙门菌有较高的分型能力,可为沙门菌的日常监测和相关疫情的处理提供重要的技术支撑。     

兰州市志贺菌相关毒力基因

目的调查兰州市分离志贺菌株的毒力基因型。方法常规分离志贺菌,应用聚合酶链反应检测志贺菌肠毒素1基因（set1A和set1B）、志贺菌肠毒素2基因（sen）、侵袭性质粒抗原H基因（ipaH）、侵袭相关位点基因（ial）和多重调控基因（virA）。结果兰州市志贺菌毒力基因virA、set1A阳性率为100％;ipaH阳性率为93．7％;ial、sen、set1B阳性率分别为56．2％、62．5％、25．0％,set1B仅在福氏志贺菌Ⅳ型中检出。结论兰州市志贺菌中携带的毒力基因存在差异,virA、set1A和ipaH较稳定,可作为靶基因用于兰州市志贺菌的检验,set1B可用于筛选福氏志贺菌Ⅳ型菌株。     

云南某医院多耐药E. coli 和 K. pneumoni1e分子流行病学分析

目的分析云南某医院Eeoli和五pneumonia菌耐药基因分子流行病学特征。方法全自动微生物分析仪分类鉴定菌株及抗生素敏感试验。扩增并序列分析耐药基因。MIST及PFGE分析菌株遗传变异关系。结果共收集23株Ecoli菌和9株Kpneumonia菌,除了1株XDR彪pneumoniae,其余均为MDR菌。全部菌株对一代、二代头孢霉素,甚至三代头孢霉素CRO耐药。绝大多数菌株对氟化奎林酮类、氨基苷类及磺胺类抗生素耐药。39．1％和69．6％Eeo／i携带厶如嘶和厶‰基因,而44．4％和100．O％尼pneumoniae检测到讹。和Mam基因。胁。均为TEM-1基因型。CTX-M-55及CTX-M-15为该地区优势基因型。所有Kpneumonia菌株携带觚Hv基因,SHV-11为优势型。87．5％Ecoli和77．8％Kpneumoniae菌株携带ISEcpl。91．3％Eeoli和77．8％Kpneumoniae携带intl。44．4％尼pneumoniae携带ISCR1基因。PFGE及MIST研究显示菌株存在明显的遗传多态性。结论云南该医院多重耐药Eeoli和Kpneumonia菌呈高度流行,耐药基因在不同菌株及菌种间快速传播。     

一起副溶血性弧菌食物中毒的溯源及毒力基因研究

目的对一起副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行分型溯源和毒力基因分析。方法采用荧光定量PCR对分离副溶血性弧菌株检测致热性溶血素TDH基因,并利用脉冲场凝胶电泳进行分子分型,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果从抽检食物中毒样品中分离的5株副溶血性弧菌TDH基因检测结果显示均为阳性;PFGE分型4株副溶血性弧菌带型一致,1株带型与其他分离株有1条带的差异。结论利用脉冲场凝胶电泳对食物中毒病原菌进行分子分型并进行毒力基因检测,为食源性疾病溯源及分子流行病学研究提供科学依据。     

北京市宋内氏志贺菌脉冲场凝胶电泳图谱研究

目的研究北京市2005～2006年分离的30株宋内氏志贺氏菌进行脉冲常凝胶电泳图谱特征。方法参照美国疾病预防控制中心PulseNet USA的统一方法进行脉冲常凝胶电泳,并对带型进行命名。采用BioNumerics图像分析软件做聚类分析。结果30株宋内氏志贺氏菌被分成17个带型,主要带型J16N11BJ0001到J16N11BJ0009的聚类相似性为92%,含概菌株占实验菌株总数的67%。结论建立北京市宋内氏志贺氏菌脉冲常凝胶电泳分析方法和初步带型数据库,获得了宋内氏志贺氏菌的主要克隆系。     

广州市首例利齐菲尔德沙门菌食物中毒的病原学分析

目的对2011年7月广州市发生的一起细菌性食物中毒进行病原学特征分析。方法对送检病人粪便、厨工肛拭及食物等样品进行荧光PCR检测和分离培养,对分离株进行生化鉴定,血清分型、脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型和药敏分析。结果从病人粪便、肛拭和厨房抹布共分离到18株利齐菲尔德沙门菌,为相同的PFGE型别,药敏结果显示菌株对实检和定阿米卡星,庆大霉素及妥布霉素耐药,对头孢噻肟、亚胺培南、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑等15种抗生素均敏感。结论实验判定这是一起由同一克隆型的利齐菲尔德沙门菌污染厨房环境所引起的食物中毒事件,PFGE分型法为暴发溯源提供分子流行病学证据和支持。     

228株结核分枝杆菌MLVA分型研究

目的：通过多位点可变数目串联重复序列（MLVA）分型,了解甘肃省临床分离结核分枝杆菌菌株基因型情况。方法：选择标化的15个VNTR位点,对临床分离菌株DNA进行检测,DNA指纹图谱使用BioNumerics4.5软件进行统计分析,得出聚类分析结果。结果：228株结核分枝杆菌被分为4大基因群,7个主要基因型,分别包含13（5.7%）、3（1.3%）、7（3.1%）、1（0.4%）、171（75.0%）、31（13.6%）、2（0.9%）个菌株;在株水平基因分型上,93（40.8%）株为独立基因型;其余菌株基因型分别包含2～10株结核分枝杆菌,共构成132个基因簇。结论：甘肃省临床分离结核分枝杆菌菌株存在丰富的基因多态性,MLVA方法具有较高的基因分型能力,可以满足结核分枝杆菌株水平DNA分型的需要。甘肃省临床分离结核分枝杆菌菌株主要为北京家族基因型菌株。     

金黄色葡萄球菌多位点熔解曲线分型可行性研究

目的建立多位点熔解曲线体系(Mutiple locus melting curve system,MLMC)对金黄色葡萄球菌(金葡菌)进行分子分型,并评价其可行性。方法建立并应用多位点熔解曲线体系检测59株金葡菌,以脉冲场凝胶电泳技术(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)作为金标准,评价MLMC方法应用与金葡菌食物中毒快速溯源的可行性。结果MLMC将59株金葡菌分为19个型别,包括11个流行克隆和8个散发克隆。PFGE将其分为15个型别,包括8组流行克隆和7个散发克隆。两者有13株金葡菌呈现不一致的分型结果,两种方法分型一致性为77.97%(46/59)。MLMC和PFGE的Simposn相关系数依次是0.92和0.87。结论结合流行病资料分析,认为MLMC方法具有良好的分型能力、分辨力和合理性,同时操作简单快速,分辨率高于PFGE分型技术,可应用于金葡菌食物中毒的快速溯源和筛查。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌同源性分析及耐药性研究

目的对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行耐药情况和分子流行病学监测,探讨院内MRSA的流行趋势。方法收集我院2009年1月~2011年6月临床标本分离的MRSA菌株60株;采用Microscan WalkAway 40进行菌株鉴定,同时对所有金黄色葡萄球菌进行药物敏感性分析;采用脉冲场凝胶电泳技术对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌进行分子分型。结果共收集60株MRSA菌株,其中17株被认为是可疑社区获得(CAMRSA),43株被认为是医院获得(HA-MRSA)。所有菌株均对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、呋喃妥因和奎奴普丁/达福普汀敏感,未出现耐药菌株。CA-MRSA与HA-MRSA对左旋氧氟沙星和利福平的敏感性有明显差异。临床分离的MRSA菌株PFGE分型较为分散,共分为13种型别,每种型别的菌株数分别为2~6株不等,未出现大范围的院内流行克隆。结论本院收集的临床分离的MRSA菌株多重耐药性严重,其中CA-MRSA相对HAMRSA敏感性稍高。所有金黄色葡萄球菌未出现糖肽类抗菌药物耐药。MRSA菌株未出现大范围的院内流行株,但仍应加强院内感染流行控制。