P70S6K在Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌中的表达及临床意义

目的检测P70S6K在Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌(renal cell carcinoma associated with Xp11.2 translocation/TFE3 gene fusion,TFE3 RCC)中的表达,探讨其在TFE3 RCC发生、发展中的作用及临床意义。方法采用免疫组化法检测23例确诊的TFE3 RCC、14例肾透明细胞癌(clear cell RCC,CCRCC)和6例乳头状肾细胞癌(papillary RCC,PRCC)组织中P70S6K的表达,观察其表达与三种RCC的关系,同时观察P70S6K表达与TFE3 RCC发生、发展和相关临床病理参数的关系。结果 P70S6K在TFE3 RCC组织中的表达(91.3%)明显高于其在CCRCC组织(64.2%)和PRCC组织中的表达(66.6%),差异有显著性(P0.05)。P70S6K在TFE3 RCC组织中阳性表达水平的H-score评分值(88.2±9.8)亦显著高于其在CCRCC组织(54.4±7.6)和PRCC组织(43.7±6.2)中阳性表达水平的H-score评分值,差异具有显著性(P0.05)。P70S6K表达与TFE3 RCC患者年龄、有无淋巴结转移和脉管瘤栓有关,与患者性别、肿瘤直径等临床病理参数无关。结论与CCRCC和PRCC组织相比,TFE3 RCC组织中P70S6K表达显著增高,有助于TFE3 RCC的鉴别诊断。P70S6K在TFE3 RCC组织中高表达,同时提示mTOR信号通道在TFE3 RCC的发生、发展中可能起重要作用。为TFE3 RCC的靶向治疗寻找潜在药物靶点提供一定的理论基础。     

mTOR_P70S6K信号通路在小儿脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨mTOR_P70S6K信号通路在小儿脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法:随机选取脑胶质瘤患儿88例,采用SP免疫组化方法,检测脑胶质瘤组织和正常脑组织中mTOR蛋白及P70S6K蛋白的表达。并分析其与脑胶质瘤组织临床分级之间的关系。结果:mTOR蛋白及P70S6K蛋白在脑胶质瘤组织中的阳性表达率分别为81.58%(31/38)和78.95%(30/38),明显高于其在正常脑组织中的阳性表达率[分别为15%(3/20)和10%(2/20)](P<0.01)。mTOR蛋白和P70S6K蛋白在脑胶质瘤组织中的表达呈正相关(r=0.68,P<0.05),且两者在正常脑组织中的表达亦正相关性(r=0.89,P<0.01)mTOR蛋白及P70S6K蛋白阳性表达率在脑胶质瘤高级别组(Ⅲ~Ⅳ级)中的表达均明显高于低级别组(Ⅰ~Ⅱ级),说明随着肿瘤级别的升高二者的表达也增强。结论:mTOR_P70S6K信号通路在小儿脑胶质瘤中发生了特异性的激活。该通路可能与小儿脑胶质瘤的发生、发展密切相关。     

mTOR/P70S6K/HIF-1α信号通路在脂多糖诱导Caco-2细胞屏障损伤中的作用及机制

目的:探讨缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的Caco-2细胞屏障损伤中的作用,并探究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian rapamycin target protein,mTOR)/P70核糖体蛋...     

超氧化物歧化酶及游离脂肪酸检测在胰岛素抵抗疾病中的应用

目的 探讨超氧化物歧化酶(SOD)及游离脂肪酸(FFA)检测在胰岛素抵抗疾病中的应用价值.方法 选择300例2型糖尿病(DM2)患者,其中150例合并非酒精性脂肪肝(NAFLD),空腹采血检测超氧化物歧化酶(SOD)、游离脂肪酸(FFA)、胰岛素(INS)、葡萄糖(FPG)、脂类等实验室指标,同时做肝脏瞬时弹性检查(FibroScan)和受控衰减参数(CAP);选择150例体检健康者为对照组,做相同检测.结果 糖尿病组和合并NAFLD组检测结果进行对比,各项指标的差异均具有统计学意义(P＜0.05),糖尿病组、合并NAFLD组与对照组的检测结果进行对比,各项指标的差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 超氧化物歧化酶及游离脂肪酸检测在胰岛素抵抗疾病中有重要的应用价值.     

Pim-3在大鼠脂肪组织中的表达及其与脂肪胰岛素抵抗的关系

目的: 检测Pim-3在脂肪中的表达,并探讨其在脂肪的胰岛素抵抗发生过程中的作用。方法: RT-PCR法检测脂肪组织中Pim-3 mRNA的表达,免疫荧光化学法检测Pim-3蛋白表达及亚细胞定位;检测胰岛素抵抗大鼠的附睾及肾周脂肪组织中Pim-3 mRNA表达变化;体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞,油红O染色判断分化程度,并观察分化前后Pim-3表达变化。RT-PCR法检测高胰岛素(100 nmol/L)对骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞中Pim-3表达变化的影响。结果: (1) 脂肪组织中具有较高水平的Pim-3 mRNA表达,免疫荧光结果显示其蛋白主要分布于胞浆;(2)胰岛素抵抗大鼠附睾及肾周脂肪组织中Pim-3 mRNA表达显著低于对照组 (P<0.05) ;(3)大鼠骨髓间充质干细胞成功分化为脂肪细胞,分化后Pim-3 mRNA表达水平明显增高;(4)高胰岛素处理后,脂肪细胞中Pim-3 mRNA表达显著降低。结论: Pim-3表达于脂肪组织中,并可能参与骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞分化过程及脂肪组织胰岛素抵抗的发病过程。     

乙醇抑制大鼠原代肝细胞中P70S6K和ERK1/2活性

 目的 研究乙醇对原代肝细胞中P70S6K和ERK1/2活性的影响。方法 分离成年雄性SD大鼠的肝细胞,分别以0、50、100 和200mmol/L的乙醇处理4h,或以200 mmol/L乙醇处理0、1、2和4h,用Western blot法检测P70S6K和ERK1/2的活性。在细胞中加入100 nmol/L的mTOR特异抑制剂雷帕霉素或10μmol/L 的MEK1/2特异抑制剂U0126,培养 24 h后收集细胞,用Western blot法检测P70S6K、ERK1/2及PPARγ的表达;用EMSA检测PPARγ的活性。结果 随着乙醇浓度的增加或处理时间的延长,P70S6K的表达逐渐降低;乙醇也可抑制ERK1/2的活性;U0126同时抑制ERK1/2和P70S6K的活性,而雷帕霉素虽抑制P70S6K的活性,但增强ERK1/2的活性;乙醇不影响PPARγ的表达和活性。 结论 在大鼠原代肝细胞,乙醇对P70S6K的活性有抑制作用,且存在量效关系和时效关系。P70S6K的活性受ERK1/2的控制,但P70S6K也可反向调节ERK1/2。     

胰岛素生长因子1(IGF-1)通过S1P/S1PR1信号激活PI3K通路促进小鼠肺泡上皮细胞迁移

目的 探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对肺泡上皮细胞(AEC)迁移的影响及其相关机制.方法 在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin)存在与否的情况下,采用IGF-1、鞘氨醇1磷酸(S1P)刺激AEC后,划痕愈合实验检测MLE-12小鼠AEC的迁移,Western blot法检测磷酸化的...     

mTOR/S6K1在2型糖尿病Wistar大鼠肝脏和肌肉的表达

目的应用Wistar大鼠制备2型糖尿病的动物模型,观察肝脏和肌肉组织mTOR/Rps6kb1(S6K1)表达的变化。方法雄性Wistar成年大鼠高脂饲料喂养8周,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)25mg/kg,注射后第4周检测空腹血糖、胰岛素水平,对结果进行统计分析;解剖大鼠,取肝脏和肌肉组织,应用RT-PCR和Western blot检测肝脏和肌肉组织mTOR及S6K1表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠血糖值升高(0.05),胰岛素水平下降(0.05),肝脏和肌肉中的mTOR/S6K1蛋白和mRNA表达均升高(0.05)。结论 mTOR及S6K1在2型糖尿病大鼠肝脏和肌肉过表达,提示其可能参与2型糖尿病发病过程。     

乳腺癌组织中p-Tyr、p-Akt和p-p70S6K的表达及其临床意义

目的 探讨p-Tyr、P-Akt和p-p70S6K在乳腺癌中的表达以及与临床病理参数的关系.方法 用免疫组化SP法检测120例乳腺浸润性导管癌,20例癌旁正常组织,20例导管内癌组织中p-Tyr、P-Akt和p-p70S6K的表达.结果 p-Akt表达与p-Tyr和p-p70S6表达呈正相关(r=0.211,P=0.021;r=0.199,P=0.030),在癌旁正常组织中无表达,在癌组织中呈高表达.P-Tyr、P-Akt和p-p70S6K表达与术后无瘤生存有关,差异具有统计学意义(分别P=0.019,P=0.002和P=0.044),与绝经状态、年龄、肿瘤大小和TNM分期无关(P>0.05).p-Tyr、P-Akt表达与ER表达呈正相关(r=0.252,P=0.006;r=0.229,P=0.012),p-Akt和p-p70S6表达与淋巴结转移有关,差异有统计学意义(分别P=0.004,P=0.022),p-Akt表达还与组织学分级有关,差异有统计学意义(P=0.040),与PR表达呈负相关(r=-0.201,P=0.028).结论 p-Tyr、P-Akt和p-p70S6K在乳腺癌的发生发展中起重要作用.p-Akt可作为判断乳腺癌预后的参考指标.     

增食欲素系统在胰岛素抵抗大鼠胰腺组织中的表达及意义

目的：研究高脂肪膳食诱导的胰岛素抵抗（IR）大鼠胰腺组织中增食欲素（orexin）及其受体的变化规律。方法:IR大鼠模型采用高脂肪膳食诱导并经钳夹技术证实。采用微型血糖仪和化学发光免疫分析法测定全血葡萄糖和血清胰岛素的变化。应用实时定量PCR和Western 印迹杂交分析检测胰腺组织中orexin及orexin受体（OXR）mRNA和蛋白质在IR状态下的表达改变。结果:高脂肪膳食喂养4周后，实验组大鼠葡萄糖输注率由对照组(12.5±0.6) mg·kg-1·min-1下降至(7.6±0.4) mg·kg-1·min-1。实验组大鼠的体重、全血葡萄糖、血清胰岛素水平高于对照组，分别为26％、25％和30％（P<0.05）；高脂肪膳食诱导的IR大鼠胰腺组织中orexin mRNA和蛋白质的表达比对照组减少约71%和63％，而OX1R mRNA和蛋白质的表达比对照组降低约49％和67％（P<0.05），OX2R mRNA和蛋白质的表达改变不明显。结论:高脂肪膳食可诱导大鼠体内产生IR，并抑制胰腺中orexin及其OX1R基因的转录和翻译。Orexin系统可能是参与调节脂肪－胰岛轴的主要因素。     

非小细胞肺癌中S100A2、S100A4及S100P表达及意义

目的研究钙结合蛋白S100家族中S100A2、S100A4及S100P基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,阐明其与肺癌发生及转移的关系。方法以12例正常肺组织为对照,采用半定量RT-PCR技术检测17例腺癌和12例鳞癌及其癌旁组织中S100A2、S100A4及S100P mRNA的表达水平。结果(1)S100A2、S100A4及S100P mRNA在NSCLC中的表达量均高于癌旁和正常组织。(2)肺腺癌中三者mRNA表达量均高于癌旁和正常组织;肺鳞癌中S100A4和S100P mRNA的表达量高于正常组织。(3)根据不同的临床分期,S100A2、S100A4 mRNA在Ⅱ期与Ⅲ期中的表达量均高于Ⅰ期;S100P mRNA在Ⅲ期中的表达量高于Ⅰ期。(4)根据有无淋巴结转移,三者mRNA在有淋巴结转移癌组织中的表达量均高于无淋巴结转移的癌组织。(5)根据有无静脉癌栓,S100A4 mRNA在有静脉癌栓的癌组织中的表达量高于无静脉癌栓的癌组织。结论S100A4、S100A6、S100P在NSCLC中表达增加,尤其是在有淋巴结转移及TMN分期越高的癌组织中表...     

The effect of MK-801 on mTOR/p70S6K and translation-related proteins in rat frontal cortex

In experimental animals, including rats, MK-801 produces characteristic behavioural changes that model schizophrenia. It has been hypothesized that these changes accompany long-term synaptic changes, which require protein neosynthesis. We observed the effect of MK-801 on the “mammalian target of rapamycin” (mTOR)/70-kDa ribosomal protein S6 kinase (p70S6K) pathway that regulates protein synthesis in the rat frontal cortex. A single injection of MK-801 (0.5, 1, or 2 mg/kg) induced an acute increase in the phosphorylation of Akt (Ser-473) eIF4E-binding protein (4E-BP1) (Thr-37/46) and p70S6K (Thr-389). In contrast, after repeated treatment with MK-801 (1 mg/kg for 5 or 10 days), the phosphorylation of Akt (Ser-473), mTOR (Ser-2481), 4E-BP1 (Thr-37/46), p70S6K (Thr-389), and S6 (Ser-240/244) increased. Thus, proteins in the mTOR/p70S6K pathway are modulated in chronic MK-801 animal models. These findings may suggest that repeated MK-801 treatment activates the signal transduction pathways involved in the initiation of protein synthesis in the rat frontal cortex.     

Upregulation of cystathione β‐synthase and p70S6K/S6 in neonatal hypoxic ischemic brain injury

Encephalopathy of prematurity (EOP) is a complex form of cerebral injury that occurs in the setting of hypoxia‐ischemia (HI) in premature infants. Using a rat model of EOP, we investigated whether neonatal HI of the brain may alter the expression of cystathionine β‐synthase (CBS) and the components of the mammalian target of rapamycin (mTOR) signaling. We performed unilateral carotid ligation and induced HI (UCL/HI) in Long‐Evans rats at P6 and found increased CBS expression in white matter (i.e. corpus callosum, cingulum bundle and external capsule) as early as 24 h (P7) postprocedure. CBS remained elevated through P21, and, to a lesser extent, at P40. The mTOR downstream target 70 kDa ribosomal protein S6 kinase (p70S6K and phospho‐p70S6K) and 40S ribosomal protein S6 (S6 and phospho‐S6) were also overexpressed at the same time points in the UCL/HI rats compared to healthy controls. Overexpression of mTOR components was not observed in rats treated with the mTOR inhibitor everolimus. Behavioral assays performed on young rats (postnatal day 35–37) following UCL/HI at P6 indicated impaired preference for social novelty, a behavior relevant to autism spectrum disorder, and hyperactivity. Everolimus restored behavioral patterns to those observed in healthy controls. A gait analysis has shown that motor deficits in the hind paws of UCL/HI rats were also significantly reduced by everolimus. Our results suggest that neonatal HI brain injury may inflict long‐term damage by upregulation of CBS and mTOR signaling. We propose this cascade as a possible new molecular target for EOP—a still untreatable cause of autism, hyperactivity and cerebral palsy.     

p-p70S6K (Thr 389) Expression in nodular sclerosing hodgkin's disease as evidence for receptor tyrosine kinase signaling

Platelet-derived growth factor receptor-alpha (PDGFR-alpha) expression in the Hodgkin/Reed-Sternberg cells of nodular sclerosing Hodgkin's disease has been demonstrated in 2 studies. Additional receptor tyrosine kinases have also now been documented. This communication reports the correlative expression in nodular sclerosing Hodgkin's disease of activated (phosphorylated) p70S6K, one of the putative downstream effectors common to receptor tyrosine kinase signaling.