血清白介素8固相放射免疫法的建立及应用

本方法将兔抗人白介素8(IL-8)特异性抗体IgG包被塑料试管内壁,建立了一种快速、简便、高灵敏、特异的固相竞争放射免疫分析法(RIA)测定人血清中的IL-8.标准曲线范围为0.2～9.6ng/mL,最小检出值和正常值分别为0.16 ng/mL和0.30±0.05ng/mL.批内CV%为6.8%,批间CV%为9.6%.本文所建的固相RIA法与液相RIA法平行测定58份样品的IL-8浓度(0.26～3.56 ng/mL),经统计学处理,两者之间具有良好的直线相关(r=0.954,P<0.001,Y=0.994X).表明本文建立的固相RIA法可以代替液相RIA法测定血清IL-8浓度,并适用于大批样品和自动化检测.     

表皮生长因子（EGF）放射免疫分析方法建立及临床应用

目的：研究表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）放射免疫分析方法的建立和临床应用。方法：采用人EGF对豚鼠免疫,获得高比度的抗血清,建立了体外放射免疫分析,并用来检测正常人、肝癌、糖尿病、结肠癌、肺癌、胃癌、子宫肌瘤及卵巢癌患者血清EGF浓度。结果：标准曲线范围（0.2～27）ng/ml;批内和批间（CV）分别为4.6%及8.7%;灵敏度为0.18ng/ml;回收率在95%～104%之间。分别测定正常人、肝癌、糖尿病、结肠癌、肺癌、胃癌、子宫肌瘤及卵巢癌血清EGF浓度,依次为（0.52±0.25）ng/ml,n=74;（1.29±0.58）ng/ml,n=99;（1.91±0.58）ng/ml,n=90;（1.43±0.56）ng/ml,n=90;（1.30±0.47）ng/ml,n=95;（1.25±0.58）ng/ml,n=87;（1.49±0.46）ng/ml,n=44;（1.79±0.60）ng/ml,n=54。病人血清EGF浓度与正常人经统计学处理均P〈0.01,有显著性差异。结论：所建立的EGFRIA能用于临床及科研需要。     

转铁蛋白放射免疫分析方法的建立

目的 :在样品血清不作稀释的前提下建立转铁蛋白的放射免疫分析方法。方法 :通过降低标记抗原的比放射性 ,提高抗血清的浓度 ,改进曲线拟合方式等方法 ,扩大测定范围。结果 :抗血清亲和率为 3 82×10 -10 mol/L ,标记抗原的比放射性为 15 3mg/mCi,批间误差CV =5 38%批内误差CV =3 5 % ,曲线形态良好。 30例正常人的血清Tf含量为 2 81± 0 972mg/ml。结论 :在样品血清不作稀释的前提下建立转铁蛋白的放射免疫分析法 ,具有较好的临床实用价值。     

塑料试管固相放射免疫法测定甲胎蛋白

本文将甲胎蛋白(AFP)特异的抗体IgG包被在塑料管内壁,建立了一种快速、简便、高灵敏、特异的固相竞争放射免疫分析(RIA)法测定AFP。标准曲线范围为10～800ng/ml,最小检出值和正常值均<10ng/ml。批内CV％为7.1％,批间CV％为10.3％。本文与液相RIA法平行测定61扮样品的AFP浓度(10.1～3030ng/ml)。经统计学处理,两者之间具有良好的直线相关,表明本文建立的方法可以替代液相RIA法测定AFP,并适用于大批样品和自动化检测。     

E2RIA系统误差的分析

目的通过分析放射免疫测定(RIA)血清雌二醇(E2)的系统误差,提高测定的准确度.方法用回收实验、溶血和类似物干扰实验及方法比较实验进行系统误差分析.结果回收实验加入浓度100pg/ml回收率101.6%,加入浓度360pg/ml回收率104.3ng/ml.溶血干扰实验平均百分干扰值为-23.36%;类似物干扰实验干扰值雌二醇0.19%,雌酮13.1%,孕酮0.11%,睾酮0.45%.125I-RIA和3H-RIA方法比较实验结果Y(125I-RIA)=16.84+1.11X(3H-RIA),t=11.75,p＜0.05.结论125I-RIA测定血清雌二醇准确度高,标本溶血和雌酮影响测定结果,两种测定方法存在系统误差.     

新型固相竞争性时间分辨荧光免疫检测血清孕酮方法的建立

本研究以血清孕酮为对象,在国内首次建立了小分子类固醇激素的时间分辨荧光免疫分析法。将半抗原——载体蛋白分子即孕酮——BSA 包被微量滴定条后,再行无水乙醇处理,制成固相抗原;纯化的抗孕酮抗体 IgG 与生物素偶联;E_u~3 则与链亲和素标记,作为通用标记物。该法曲线范围是0.1～100ng/ml,灵敏度为0.05ng/ml,平均批内及批间 C、V 分别为6.45%及8.93%,平均回收为89.95%,血清线性稀释实验测得值与期望值接近.40例样本同时用 TRFIA 及 RIA 测量,相关性良好,r=0.9619。     

IMMULITE Ⅰ型全自动分析系统使用初评

本文通过测定血清中T3,T4含量为例,介绍IMMULITE Ⅰ型酶放大化学发光免疫分析仪及化学发光法与放射免疫分析法(RIA)的比较.IMMULITE Ⅰ型分析仪测得血清中T3,T4重复性良好,批内变异和批间变异均小于5%.在对T3值是432ng/dL和377ng/dL的血清样品作回收实验,回收率为103.2%-116.9%.两种方法测得T3结果呈相关,相关系数 0.91,回归方程为Y=1.06X+0.159.IMMULITE Ⅰ型分析仪测量,在25min后出第一个样品结果,以后每35sec出另一个结果,而RIA通常需要几小时或更长时间,才能出结果.因此IMMULITE Ⅰ型分析仪操作简便,其采用的化学发光法可与RIA媲美,是一种功能全,运行平稳的化学发光分析仪,值得进一步推广使用.     

白细胞介素-10放免方法的建立及其初步临床应用

本文建立了白细胞介素-10(IL-10)放射免疫分析法(RIA)并初步应用于临床.将重组IL-10作免疫原,获多克隆抗体.采用Iodogen法制备高比活度125I-IL-10,建成IL-10 RIA.应用本法测定抑郁症患者组及对照组血清IL-10含量,结果表明:IL-10测定范围为5-1215ng/mL;对照组血清IL-10含量为28.0±8.9ng/mL,而抑郁症患者组IL-10含量为25.3±11.1ng/mL,较对照组低(P《0.05);患者治疗后(28.4±13.2ng/mL)较治疗前有明显升高(P《0.05).IL-10 RIA的建立为进一步开展IL-10在相关学科的研究,提供了一种有价值的指标.     

血清孕酮放射免疫测定试剂盒的研制

制备人孕酮放射免疫试剂盒的特异性抗血清,首先要合成孕酮-11α-半琥珀酰-BSA结合物,形成完全抗原,依据动物体的免疫反应规律,制备高质量的抗孕酮抗血清。采用氯胺T法标记孕酮;TCL分离。制备去人激素血清,建立了竞争结合分析法。通过方法学和可靠性的测定,说明该方法具有较高的灵敏度、特异性、准确性,相关系数r=0.996。检测了50名正常中、青年男子,测定值为0～1.85ng/ml,正常女性范围:滤泡期为0.14～1.65ng/ml,黄体期2.07～32ng/ml,绝经期0.2～1.7ng/ml,妊娠期:随着妊娠月份的增加,孕酮浓度也增加,最高可达280ng/ml。经临床验证,该试剂盒符合稳定、可靠、灵敏、适用的要求。     

血清CEA升高396例回顾性分析

本文对本院自1994年10月～1996年10月应用CEA RIA检测结果升高的396例患者进行回顾性分析,旨在对CEA水平升高的临床意义有更详细的了解。 资科和方法 一、资料:选择1994年10月～1996年10月在本院住院,经病史、临床表现、B超、X线、CT、内窥镜、病理、实验室检查等确诊的病人,并经血清CEA检测,结果>15ng/ml者,以16～30ng/ml为轻度增高,31～50ng/ml为中度增高,51～80ng/ml为高度增高,>80ng/ml为极度增高。 二、方法: （一）空腹采血2ml分离血清待测。 （二）采用上海放射免疫分析技术研究所提供的CEA RIA kit,按说明书操作。 （三）采用上海原子核研究所生产的SN-682型     

不同肿瘤患者leptin与NPY关系的研究

目的：探讨胃癌等肿瘤患者瘦素（leptin）与神经肽Y（neuropeptide,NPY）的相互关系。方法：应用放射免疫分析测定180例不同肿瘤患者血清leptin和血浆NPY水平,并与30例正常人作比较。结果：①leptin水平与对照组（4．18±0．51ng／m1）比较,胃癌、肝癌、食管癌、直、结肠癌和肺癌组均明显增高,并具显著性差异（P〈0．01;P〈0．05;P〈0．01;P〈0．01;P〈0．05）。正常对照组血浆NPY水平为（150．25±20．33）pg／ml,除肝癌组外,其它各恶性肿瘤组血浆NPY水平均较对照组增高显著。②相关分析显示,胃癌、食管癌、直肠癌患者lepdn浓度增高与NPY增高呈明显正相关,其r值分别为0．354、0．30、0．285,P值均〈0．01。胃癌、肝癌、食管癌、直肠癌leptin与TG之间呈明显正相关,其r值分别为0．301、0．268、0．335,P值均〈0．01;leptin与TC、LDL—C、HDL—C之间无相关性。结论：①胃癌等肿瘤患者存在着高leptin和NPY血症;③leptin、NPY在恶性肿瘤食欲及能量调节过程中合成、分泌、与受体结合力的异常在肿瘤恶病质的形成中发挥重要作用。     

双标记AFP及Free-β-HCG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的：研制能同时检测人血清AFP和Free-β-HCG的双标记时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）试剂盒。方法：铕（Eu3＋）标记抗AFP单克隆抗体,用钐（Sm3＋）标记抗Free-β-HCG单克隆抗体,采用双抗体夹心法建立AFP/Free-β-HCG双标记TrFIA试剂,对试剂的各项性能指标进行评价。结果：AFP分析灵敏度为0.1U/ml,分析内和分析间的精密度分别为1.2%～5.9%和2.8%～6.3%,检测试剂的测量范围为（0.1～500）U/ml;Free-β-HCG分析灵敏度为0.25ng/ml,分析内和分析间的精密度分别为1.5%～6.2%和3.5%～5.6%,检测试剂的测量范围为（0.25～200）ng/ml。孕妇血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,AFP和Free-β-HCG的相关系数分别为0.987、0.968,具有较好的一致性。结论：自制AFP/Free-β-HCG双标记TrFIA试剂盒的各项性能指标均能达到临床检测要求,可替代国外同类产品。     

血清CA125和CA19-9水平对子宫内膜异位症诊断价值的探讨

目的：探讨血清CA125和血清CA19-9水平对子宫内膜异位症的诊断价值。方法：应用放射免疫分析测定45例子宫内膜异位症患者血清CA125和CA19-9水平,并和40例正常健康人作比较。结果：子宫内膜异位症组及对照组血清CA125检测值及阳性率分别为（89.63±30.16）U/ml、77.78%和（16.26±6.37）U/ml、7.50%;子宫内膜异位症及对照组血清CA19-9检测值及阳性率分别为（95.62±43.67）U/ml、62.22%和（20.26±8.25）U/ml、10.00%;子宫内膜异位症患者血清CA125和CA19-9检测值显著高于对照组（P〈0.001）;子宫内膜异位症患者血清CA125和CA19-9阳性率显著高于对照组（P〈0.001）;子宫内膜异位症血清CA125敏感性及特异性分别为77.78%及92.50%;血清CA19-9敏感性及特异性分别为62.22%及90.00%;血清CA125及CA19-9联检的敏感性及特异性分别为57.78%及100%;子宫内膜异位症（Ⅰ、Ⅱ）期与（Ⅲ、Ⅳ期）血清CA125和CA19-9检测值差异显著（P〈0.001）;血清CA125阳性率无显著差异（P〉0.05）;血清CA19-9阳性率差异显著（P〈0.05）。结论：测定子宫内膜异位症患者血清CA125和CA19-9水平对子宫内膜异位症有一定的诊断价值,联检CA125和CA19-9水平更有实用价值。     

A quantitative enzyme-linked immunosorbent assay for rat insulin

A simple, quantitative micro-ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) has been developed for rat insulin. The micro-ELISA is a solid phase, indirect, competitive immunoassay. The useful range of the micro-ELISA was superior to that of a commercial RIA for rat insulin (e.g. 0.4 to 46.0 ng/ml for the ELISA; 0.2-8.6 ng/ml for the RIA). The ELISA's sensitivity (the lower limit of detection) was 1.0 ng/ml +/- 0.13 ng/ml, (mean, +/- SEm; 9 assays) or 20 +/- 2.6 pg/determination, and compared favorably with the sensitivity of a radioimmunoassay (RIA) for rat insulin (0.38 +/- 0.10 ng/ml; 4 assays). The ELISA measured pure rat insulin standards accurately. Correlation experiments showed that the results of the ELISA agreed with those of the RIA (r = 0.91), when rat insulin was assayed in crude extracts of isolated pancreatic Islets of Langerhans. When the standard curve was plotted as a log of the dose response curve, a sigmoidally shaped curve was obtained which could be transformed into a straight line relationship with a logit-log program. The goodness of fit of the transformed standard curve to a straight line relationship was excellent (r = 0.97 to 0.99: n = 4 ELISAs). The transform facilitated dose interpolation, tests of parallelism, and quality control. Tests of parallelism showed that the ELISA was specific for rat insulin. The precision of the ELISA was superior to the precision of the rat insulin RIA tested. The intraassay precision of the ELISA was always less than 10% (CV%), and its interassay precision was always less than or equal to 15% (CV%). The micro-ELISA is versatile, since it can be used to measure human, porcine, rat, and probably mouse insulin.     

小鼠表皮细胞生长因子放射免疫分析的建立及初步应用

目的:建立高特异性和高灵敏度的小鼠表皮细胞生长因子(EGF)放射免疫分析,用于测定小鼠和大鼠血清中EGF水平.方法:用人工重组的小鼠EGF多次免疫兔子获取高效价、高特异的小鼠EGF抗体.用氯氨T法制备<'125>I标记的EGF,经Sephadex G-25纯化.抗原抗体反应采用平衡一步法,4℃温浴24h后经PR试剂分离...     

RP-HPLC法同时测定红景天苷原料药中红景天苷及其有关物质的含量

目的:建立RP-HPLC方法同时测定红景天苷原料药中红景天苷及其有关物质的含量。方法:Shi m-pack C18色谱柱,甲醇/水(15/85,v/v)为流动相,检测波长为275nm,流速1.0 mL.min-1,外标法计算含量。结果:红景天苷试验线性范围为:0.0300~1.0000 mg.mL-1,r=0.9999,回收率为99.92%。有关物质淫羊藿次苷D2试验线性范围为:0.0010~0.0300 mg.mL-1,r=0.9997,回收率为99.82%;4-乙酰基苯酚-β-D-葡萄糖苷试验线性范围为:0.0003~0.0050 mg.mL-1,r=0.9995,回收率为98.17%;云杉素试验线性范围为:0.0001~0.0030 mg.mL-1,r=0.9996,回收率为98.83%。结论:所建立的分析方法简便、快速、准确,适用于红景天苷原料药中红景天苷及其有关物质的同时测定。     

2型糖尿病患者C反应蛋白、脂联素和瘦素水平与胰岛素抵抗的相关性

目的探讨C反应蛋白(CRP)、脂联素(APN)、瘦素(Leptin)水平、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)与2型糖尿病(T2DM)病变易患因素的关系。方法用RIA法测定2型糖尿病患者血浆leptin和胰岛素(FINS),用ELSIA法测定血清ANP,用全自动生化分析仪常规测定血清CRP、空腹血糖(FPG),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR,FPG×FINS/22.5),以正常健康体检者为对照组,进行对比分析。结果 CRP、leptin、HOMA-IR在2型糖尿病组显著高于对照组(P<0.01),ANP显著低于对照组(P<0.01);线性相关显示2型糖尿病HOMA-IR与CRP(r=0.36,P<0.05)、leptin(r=0.39,P<0.05)呈正相关,2型糖尿病HOMA-IR与APN(r=-0.32,P<0.05)呈负相关。结论低APN和高CRP、leptin血症可能是糖尿病的发病因子,它们的代谢紊乱与胰岛素抵抗有密切关系。     

CEA电化学发光免疫分析法的建立

目的建立人癌胚抗原（CEA）的电化学发光免疫分析法（ECLIA）。方法生物素标记的CEA McAb、钌复合物标记配对的CEA McAb、链霉亲和素包被的磁性微粒组成CEA ECLIA试剂,用ECLIA仪检测CEA并做方法学评价。用本法与进口的同类ECLIA试剂对119例结直肠癌、150例肺癌、45例胃癌、32例胰腺癌和34例肝细胞癌患者的血清CEA检测结果进行分析。调查218名志愿者血清CEA正常参考值。结果本法检测CEA的批内CV为1.6%～7.1%,批间CV为2.3%～11.7%,灵敏度为0.2 ng/mL。与CA19-9和AFP无交叉反应。自建ECLIA检测CEA浓度范围为0.2～1000.0ng/mL,正常参考值低于5.6ng/mL。结论自建CEA ECLIA与进口试剂比较（r=0.9641,P〈0.05）,正常参考范围接近进口同类方法。具备产业化的潜能。     

异嗜性抗体对甲状腺功能测定干扰作用的研究

目的 研究异嗜性抗体(HAb)对甲状腺功能测定的干扰,分析其临床特点并探讨减少和排除干扰作用的方法.方法 2008年5月-2009年6月,在我院选择296例甲状腺功能测定表现为血浆TSH水平不适当增高的患者(FT3、FT4测定采用固相放射免疫分析方法,TSH测定采用免疫放射分析方法-IRMA),其中9例疑诊HAb增多症...