不同反应靶细胞中IL-6对STAT1激活的比较

目的 :探讨不同反应靶细胞中白细胞介素 6 (IL 6 )对信号转导子与转录激活子 1(STAT1)的激活。方法 :利用抗STAT1和抗酪氨酸磷酸化STAT1的抗体 ,进行免疫印迹分析。结果 :IL 6可促进 7TD1和TF1细胞生长 ,但在这两种细胞中对STAT1的酪氨酸磷酸化水平没有明显影响。M 1、R2和U937细胞在IL 6诱导下生长停止并向巨噬细胞方向分化 ,而IL 6在这 3种细胞中均可激活STAT1,且激活效应有剂量与时间依赖性。结论 :STAT1的活化可能与抑制效应有关。我们的数据有助于解释为什么IL 6在不同效应靶细胞中有不同的生物学效应     

酪氨酸蛋白激酶JAK1 在IL-6诱导JAK/STAT 途径活化中的作用

目的 酪氨酸蛋白激酶JAK1和转录因子STAT3为参与IL－6诱导的JAK／STAT信号转导途径的两种主要的信号蛋白分子。本研究试图揭示JAK1在JAK／STAT途径诱导活化中的作用。方法 分别采用凝胶阻滞电泳（EMSA）和免疫沉淀（IP）法观察IL－6刺激作用下STAT3和JAK1在3种骨髓瘤细胞系（XG－7，KM－3和Sko-007)中的诱导活化状态。采用RTPCR和Western-blot法检测这两种信号蛋白分子在以上3株靶细胞中的表达情况。结果 尽管SAT3在3株靶细胞中都能够正常表达，但只有Sko-007细胞中出现IL－6刺激作用下STAT3的诱导活化。在XG－7细胞中，既没有检测到JAK1的表达，也没有观察到JAK1的活化。尽管JAK1在KM－3细胞中能够正常表达，但不能被IL－6诱导激活。Sko-007细胞中则同时出现JAK1的表达及IL－6刺激后的诱导活化。结论 JAK1的正常表达和激活是IL－6刺激作用下JAK／STAT信号转导途径在骨髓瘤细胞中诱导活化的前提条件。     

IL—6在人骨髓瘤细胞U266中的信号转导途径与细胞增殖促进效应之间的关系

目的：研究人骨髓瘤细胞U266中IL－6信号转导途径激活与细胞增殖促进效应之间的关系。方法：首先分别采用MTT、凝胶阻滞电泳（electrwophoretic mobility shift assay, EMSA）和免疫沉淀（immunoprecipitation,IP）方法观察IL－6对U266细胞生长的影响及两条IL－6信号转导途径在U266细胞中的诱导激活状态;然后采用化学试剂处理或转基因方法观察信号途径活化状态变化与IL－6效应变化之间的关系。结果：IL－6可明显促进U266细胞增殖,并在不同剂量下诱导JAK／STAT和Ras/NF-IL-6途径活化;Ras途径活化被特异性上调和下调时,IL－6对U266细胞的生长促进效应分别得以增强和减弱;而JAK／STAT途径活化受抑时,IL－6的促细胞生长效应反而加强。结论：Ras途径的诱导激活介导了IL－6对U266细胞的增殖促进效应;而JAK／STAT途径活化介导了与IL－6促细胞增殖相反的生物学效应。     

IL-1β诱导类风湿性关节炎滑膜细胞MAPKs通路的活化(英文)

目的研究类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast likesynoviocyte,FLS)信号转导中 ,IL 1β 介导的丝裂原活化的蛋白激酶(mitogen activated proteinkinaseMAPKs)的激活情况。方法原代培养RFFLS ;应用Westernblot检测IL 1β对于RAFLS蛋白质酪氨酸磷酸化状态的影响 ,及其对MAPKs家族成员活化的浓度效应和时相特点。结果IL 1β可以瞬时增加RAFLS蛋白质酪氨酸磷酸化的程度 ,并在短时间内激活MAPKs通路(以ERK2 ,JNK2和P38为主)。不同浓度的IL 1β对MAPKs的活化无明显差异 ,但ERK2,JNK2和P38的活化分别在IL 1β作用后5min ,15min和1min最明显。结论IL 1β在RAFLS信号转导中 ,可以瞬时导致蛋白质酪氨酸化的程度增加 ,并同时激活MAPKs3条通路 ;但MAPKs3个亚家族成员的活化具有异质性。     

人基因工程白介素6对人胚脾脏NK细胞的促进效应

本文采用4小时~(51)Cr释放法,研究了人重组白介素6(rIL—6)对人胚胎期脾脏细胞NK活性的调节作用。首次证实rIL—6与胎脾细胞共育24小时后,明显增强NK细胞对K562靶细胞的杀伤活性,且此效应有剂量依赖关系,与新鲜胎脾细胞NK活性和无rIL—6培养的对照组相比,差异显著(P<0.001)。我们还发现rIL—6对不同胎龄脾NK活性均有增强效应(提高2.24～2.78倍).rIL—6作用后的不同胎龄脾NK活性无明显差别(32.3～45.4%,P>0.05)。而且增强后的胎脾NK活性接近成人组水平,二者间无显著差异(P>0.05):结果表明,IL—6对胚胎期NK活性有正向调控作用,提示在机体抗肿瘤和抗病毒性有正向调控作用,提示在机体抗肿瘤和抗病毒性疾病的防御机制中,IL—6可能有重要的调节作用。     

Ras/MAPK/NF-IL-6信号途径在IL-6促7TD1细胞增殖中的作用

为探讨IL 6促进 7TD1细胞增殖的机制 ,本研究采用凝胶阻滞电泳方法比较IL 6对核因子STAT3(代表JAK STATs通路 )、NF IL 6 (代表Ras/MAPK/NF IL 6通路 )的激活方式 ,以反义寡核苷酸 (ASODNs)阻断IL 6对核因子的激活 ,检测ASODNs对IL 6效应的影响 ,并采用MEK特异性抑制剂PD0 980 5 9阻断Ras/MAPK通路的激活 ,观测Ras/MAPK通路的功能意义。结果发现STAT3与NF IL 6都可被低剂量IL 6激活 ,但NF IL 6激活后持续的时间比STAT3长。STAT3ASODN对IL 6效应的影响很弱 ,而NF IL 6ASODN可显著拮抗IL 6的促增殖作用。PD0 980 5 9的作用同NF IL 6ASODN相似。这些结果说明在 7TD1细胞中 ,Ras/MAPK/NF IL 6途径介导IL 6的促增殖信号。     

抗激活小鼠T细胞抗原单克隆抗体（2H3）识别的靶抗原分析

2H3为一株抗激活小鼠T细胞表面抗原的IgG_1型单克隆抗体。间接ELISA实验表明:它能与ConA 激活的小鼠脾细胞及IL—2依赖的CTLL—2细胞发生特异性结合。靶细胞免疫荧光染色法表明:上述两种靶细胞可与荧光标记的抗IL—2R单抗结合并可被事先与2H3作用所阻断,但该两种靶细胞与荧光标记抗Ia抗体的结合不能被2H3所阻断。对2H3所结合的靶细胞膜蛋白提取物进行的Western-Blotting实验表明:2H3识别的靶抗原分子量约为50～60KD。结果提示:2H3识别的靶抗原与小鼠细胞膜表面的IL—2R(P_(55)蛋白)是一致的,其免疫生物学活性正在进行分析中。     

结核杆菌抗原活化的γδT细胞中ZAP-70的酪氨酸磷酸化特点

目的　观察结核杆菌抗原 (Mtb Ag)活化的γδT细胞信号转导分子ZAP 70酪氨酸磷酸化的特点。方法　用Mtb Ag和抗CD3单克隆抗体 (CD3McAb)体外刺激人外周血单个核细胞(PBMC) ,诱导活化 ,在含IL 2的培养液中扩增培养 ,分别获得Mtb Ag激活的T细胞 (MtbAT)和CD3McAb激活的T细胞 (CD3AT)。再分别用Mtb Ag和CD3McAb刺激 ,在不同时间内提取细胞裂解液 ,用抗 酪氨酸磷酸化蛋白抗体作免疫沉淀 ,用抗ZAP 70单克隆抗体进行免疫印迹。结果　MtbAT中γδT细胞可达 6 0 %～ 80 % ,CD3AT中CD3 细胞可达 90 %以上 ,而γδT细胞 <10 % ;MtbAT细胞用Mtb Ag再刺激后 15min时出现ZAP 70的酪氨酸磷酸化 ,30min达高峰 ,可持续到 6 0～ 12 0min ,而CD3AT用CD3McAb再刺激后仅在 5min时检测到ZAP 70的磷酸化。结论　与CD3McAb对普通T细胞的作用比较 ,Mtb Ag刺激可优先活化γδT细胞 ,其对γδT细胞ZAP 70活化的特点是 :较慢、较强、较持久     

Ras/NF-IL-6信号转导途径介导人骨髓瘤细胞KM-3中的IL-6生物学效应

目的　研究人骨髓瘤细胞KM 3中的IL 6信号转导途径与生物学效应之间的关系。方法　分别采用MTT、凝胶阻滞电泳 (electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)、免疫沉淀方法检测IL 6对KM 3细胞生长状态的影响、参与IL 6信号传递功能的转录因子以及蛋白激酶在KM 3细胞中的诱导激活状态。结果　IL 6可明显促进KM 3细胞增殖 ,并可引发Ras/NF IL 6信号转导途径活化 ,但Jak/STAT信号途径没有激活。结论　Ras/NF IL 6信号转导途径介导了IL 6对KM 3细胞的生长促进作用     

CD_2功能与ζ-NK细胞受体复合物相关联

NK 细胞表达两种不同的触发细胞裂解效应的受体。一种是CD_(16)(IgFc 段受体)启动细胞ADCC 效应,与信号传递亚单位ζ有关。通过CD_(16)激活NK 细胞导致ζ亚单位中酪氨酸磷酸化;另一种NK 细胞受体是CD_2(也表现于T 细胞)。有证据表明ζ在CD_2介导的NK 细胞激活过程中发挥重要作用。文章旨在探讨CD_2与ζ亚单位的关联。     

AITD患者IL-6、TNF-α水平的变化

目的：了解自身免疫性甲状腺疾病(AITD)患者自细胞介素—6(IL—6)、肿瘤坏死因子—α(TNF—α)与其发病、复发的关系。方法：观察一组AITD患者治疗前后及复发患者游离T3(FT3)、游离T4(FT4)、促甲状腺素(TSH)、抗甲状腺球蛋白抗体(TGA)、抗甲状腺微粒体抗体(TMA)、IL—6、TNF—α水平。结果：AITD中甲状腺功能亢进时TGA，TMA、IL—6、TNF—α水平升高，抗甲状腺药物(ATD)治疗后FT3、FT4水平恢复正常，TGA、TMA下降，IL—6、TNF—α水平下降。ATD停药后7例复发甲亢FT3、FT4水平升高，IL—6、TNF—α水平也升高，再次给予ATD治疗3月后FT3、FT4。水平恢复正常，IL—6、TNF—α水平下降。结论：细胞因子参与AITD的发生和发展过程，与AITD的免疫紊乱和功能状态异常间存在十分重要的内在联系。     

生长因子受体酪氨酸蛋白激酶

生长因子受体具有酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性,为受体激酶。该酶的激活是生长因子信息传递的关键步骤,受体通过自身磷酸化(autophosphorylation)和其他激酶催化的磷酸化对受体激酶活性进行正负调节,活化的受体激酶催化多种底物蛋白质酪氨酸残基磷酸化而发挥其刺激细胞生长,增殖的生物学效应。     

M1与7TD1细胞中IL-6激活核因子的比较

目的：探讨ＩＬ－６在不同靶细胞中引起不同生物学效应的分子基础。方法：检测ＩＬ－６对Ｍ１与７ＴＤ１细胞生长及分化的影响。通过凝胶阻滞电脉（ＥＭＳＡ）比较ＩＬ－６在Ｍ１与７ＴＤ１细胞中激活ＳＴＡＴ３代表ＪＡＫ－ＳＴＡＴｓ通路）和ＮＦ－ＩＬ０６（代表Ｐ２１ｒａｓ／ＭＡＰＫ／ＮＦＩＬ－６通路）的情况。结果：ＩＬ－６诱导Ｍ１细胞生长停止并向巨噬细胞方向分化,却促进７ＴＤ１细胞生长。在这两种细胞中,低剂量ＩＬ     

IL-2分泌必然引起酪氨酸磷酸化

T淋巴细胞激活导致IL-2的产生,该激活与磷酯酶C(PLC)活性的增加及导致磷酸肌醇和甘油二酯产生增加有关。最终导致(Ca~(2+)]的升高和激活PKC,但在佛波酯存在时,则无此现象。另外,细胞内几种特异蛋白质的Ser、Thr和Tyr残基的磷酸化也增加。本文阐述酪氨酸磷酸化在IL-2分泌中的作用。作者用抗磷酸化酪氨酸抗体作Western印迹,证明用丝裂原或抗CD_3抗体激活小鼠T细胞使分子     

流式细胞术检测磷酸化STAT3

为建立流式细胞术检测细胞内的信号转导及转录活化因子 3 (STAT3 )的方法 ,用IL 5刺激HL 60细胞株 ,活化细胞内的STAT3 ,然后用抗酪氨酸磷酸化STAT3抗体及相应的二抗标记 ,进行流式分析。结果表明 :( 1)IL 5能活化HL 60细胞内的STAT3 ,且STAT3的酪氨酸磷酸化水平与IL 5的浓度之间存在剂量依赖关系 ;( 2 )可用流式细胞术测得的平均荧光强度反映细胞内酪氨酸磷酸化STAT3的相对浓度。应用流式细胞术能快速、定量地测定细胞内的磷酸化STAT3水平。本法可用于STAT3相关疾病的筛选和临床监测及对其他胞内信号转导分子的研究。     

Bcl-2家族不同分子分别介导地塞米松在不同类型人骨髓瘤细胞系上的凋亡效应

目的：研究3种Bcl-2家族抗凋亡蛋白（Bcl-2,Bcl-xl,Bcl-1)在地塞米松（dexamethasone,DEX)诱导的不同类型人骨髓瘤细胞系凋亡过程中的作用。方法：采用MTT方法观察DEX对骨髓瘤细胞生长的影响。采用碘化丙胺（propidium iodide,PI)染色和流式细胞术分析骨髓瘤细胞经DEX处理后的凋亡情况，采用免疫印迹方法检测Bcl-2家族3种抗凋亡蛋白在骨髓瘤细胞凋亡过程中的表达改变情况。结果：DEX能够诱导IL－6依赖型骨髓瘤细胞系XG－7和IL－6非依赖型骨髓瘤细胞系Sko-007发生典型的细胞亡反应。同时XG－7细胞中Bcl-XL和Mcl-1的表达在DEX处理后明显下调，而同样条件下Sko-007细胞中则出现了Bcl-2的降解。结论：Bcl-2家族不同抗凋亡蛋白可分别介导DEX在不同骨髓瘤细胞系上的凋亡效应。     

蛋白激酶C在调节血管内皮细胞通透性中的作用

蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)是一种钙或/和磷脂依赖性蛋白磷酸化酶,广泛存在于人体的各种组织细胞中.它能被细胞外生物活性因素(生长因素、神经递质、细胞因子等)激活,完成靶细胞蛋白的磷酸化,通过蛋白磷酸化后生物活性的改变而完成细胞外源性信号的应答,构成细胞内重要的信号转导系统.许多实验证明蛋白激酶C的激活在血管内皮细胞屏障功能和血管通透性的变化调节中起着重要的作用.本文将就PKC在血管通透性变化中的效应、激活方式、信号的通路以及作用底物等方面做一综述.