微囊化牛嗜铬细胞移植对致痛大鼠行为学及脊髓C-fos表达的影响

目的:探讨微囊化牛嗜铬细胞(BCC)蛛网膜下腔移植对疼痛大鼠脊髓后角神经元活动的影响。方法:SD大鼠24只,随机分为空囊组、微囊化BCC组和BCC组,每组8只。分别在3组大鼠的脊髓蛛网膜下腔植入含空囊的DMEM、微囊化BCC和单纯BCC。移植8周后,对3组大鼠行福尔马林疼痛实验;福尔马林处理后2h,免疫组织化学法检测大鼠脊髓后角Cfos蛋白的表达。结果:空囊组、BCC组和微囊化BCC组大鼠痛觉行为反应和脊髓后角Cfos阳性神经元数目均依次减少(P均<0.05)。结论:BCC移植对福尔马林致痛大鼠有镇痛作用,可以抑制福尔马林致痛大鼠脊髓后角Cfos的表达,微囊化BCC效果优于BCC。     

牛嗜铬细胞植入大鼠蛛网膜下腔的镇痛作用

目的 :观察牛嗜铬细胞 (BCC)植入大鼠脊髓蛛网膜下腔后的镇痛效应。方法 :5 0只成年Sprague Dawley大鼠 ,随机分为A、B、C、D和E组 ,每组 10只。A、B、C和D组大鼠蛛网膜下腔植入 2 0 μlBCC悬液 ;E组大鼠植入等量的DMEM液。D组和E组于移植手术后 ,每周进行急性热刺激实验 ,持续 8周 ;A、B和C组于移植手术后 3周分别进行纳洛酮、酚妥拉明和生理盐水阻断的福尔马林实验 ,D组和E组进行福尔马林实验。结果 :急性热刺激实验中D组抗热伤害效应明显高于E组 (P <0 .0 5 ) ,并持续 8周 ;福尔马林实验中D组急性期反应评分和慢性期反应评分均低于E组 (P <0 .0 1)。阻断剂实验中 ,急性期疼痛评分A组、B组均高于C组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,但慢性期2组间差异无统计学意义 (P均 >0 .0 5 )。结论 :BCC移植对大鼠急慢性痛均有明显镇痛作用 ,植入的BCC分泌的脑啡肽类和儿茶酚胺类活性成分参与镇痛过程的调节 ,但 2种物质的作用机制不同。     

微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞脑内移植治疗偏侧帕金森病样猴 …

目的：观察微囊化牛肾上腺嗜铬细胞（ＢＣＣ）脑内移植对偏侧帕金森病（ＰＤ）样猴的行为和脑组织液中单胺类物质含量的影响；评价微胶囊的免疫隔离效果。方法：以海藻酸钠－多聚赖氨酸－海藻酸钠（ＡＰＡ）为材料包裹ＢＣＣ。右侧颈内动脉注射甲基－苯基－甲氢吡啶（ＭＰＴＰ）诱发ＰＤ样猴模型。将微囊化、非囊化ＢＣＣ或空微囊分别植入ＰＤ样猴右侧尾状核和壳核，观察ＰＤ样猴行为、尾状核和壳核微透析液中单胺类物质的变化。结果     

羊蛛网膜下植入APA微囊化牛嗜铬细胞脑脊液亮氨酸脑啡肽和儿茶酚胺含量的变化

目的 :了解APA微囊化牛嗜铬细胞 (APA BCCs)蛛网膜下植入引起正常羊脑脊液中儿茶酚胺 (cate cholamine ,CA)和亮氨酸脑啡肽 (leucine enkephalin ,L EK)含量的变化 ,分析APA BCCs移植镇痛的可能机制及APA微囊的免疫保护效应。方法 :以手术方法分别将APA BCCs、BCCs或空微囊植入正常羊脊髓蛛网膜下 ,测定移植前后不同时间羊脑脊液中去甲肾上腺素 (norepinephrine,NE)、肾上腺素 (epinephrine ,E)和L EK的含量。结果 :与移植前羊脑脊液中NE、E和L EK的水平相比 ,空微囊植入未能升高 ;BCCs植入可在 7d内升高 ;APA BCCs植入可明显升高超过 2 8d(P <0 0 5 )。结论 :蛛网膜下植入BCCs能显著升高宿主羊脑脊液中CA和L EK的水平 ,这可能与BCCs蛛网膜下移植的镇痛效应有关 ;APA微囊包裹有利于BCCs在异种动物体内较长期地分泌镇痛物质。     

壳聚糖/海藻酸钠微胶囊包埋大鼠胰岛异种腹腔移植的实验研究

目的 探讨用壳聚糖代替聚赖氨酸,制备包埋大鼠胰岛的壳聚糖/海藻酸钠(ACA)微胶囊进行异种胰岛移植的可行性.方法 SD大鼠胰腺原位消化法分离纯化胰岛,气流吹喷制作海藻酸钠/壳聚糖/海藻酸钠(ACA)微囊化大鼠胰岛,比较微囊化与未微囊化胰岛的胰岛素释放情况、在异种受体腹腔内存活情况及糖尿病小鼠模型血糖逆转情况.结果 实验组与对照组的胰岛素释放试验差异无显著性(P＞0.05);实验组糖尿病小鼠模型血糖正常持续时间为23～65 d(平均48 d),对照组为3～6 d(平均5 d),两组差异有显著性(P＜0.05);小鼠腹腔灌洗分离ACA微囊化大鼠胰岛,发现微囊膜完整,囊壁无纤维化,胰岛存活良好.结论 ACA微胶囊具有良好的免疫隔离作用,胰岛素释放正常并可使异种胰岛移植物存活时间明显延长.     

APA微囊化BCCs蛛网膜下腔移植对大鼠慢性神经性疼痛的镇痛效应

目的:观察APA微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(BCCs)移植对大鼠慢性神经性疼痛的作用。方法:SD大鼠4组,即对照组(C组),正常大鼠;单纯CCI组,右侧坐骨神经松结扎;CCI注入APA组和APA-BCCs组,CCI模型后7 d,蛛网膜下腔分别移植500～600个APA空囊和5×106个APA微囊化BCCs。测定各组移植后7 d至42 d的触诱发痛阈值(g)和CO2激光刺激痛阈值(ms)。并取脊髓行TH、ENK、DβH免疫组化检测。结果:APA-BCCs组结扎侧触诱发痛阈值和CO2痛阈值在移植后7-42 d均高于CCI组和APA组(P<0.01),与C组无显著差异(P>0.05)。移植后的BCCs TH染色阳性,脊髓软膜可见到DβH和ENK免疫组化染色阳性。结论:APA微囊化BCCs蛛网膜下腔移植可缓解CCI模型大鼠的痛觉过敏和触诱发痛,ENK和NE参与其镇痛作用机制。     

热板法镇痛实验存在的问题和对策

热板法镇痛实验是一个经典的筛选镇痛药的实验,其原理是将小白鼠放入55℃±0.1℃恒温水浴锅内,小白鼠受热刺激后可出现舔后足的反应,测定热痛反应时间(痛阈);镇痛药可提高痛阈,延长热痛反应时间。1实验步骤1.1筛选并测正常痛阈值即用药前痛阈值Q。若雄性、或30秒内不舔后足、逃     

微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞脑内移植治疗偏侧帕金森病样猴的行为及神经生化效应

目的:观察微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(BCC)脑内移植对偏侧帕金森病(PD)样猴的行为和脑组织液中单胺类物质含量的影响;评价微胶囊的免疫隔离效果.方法:以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)为材料包裹BCC.右侧颈内动脉注射甲基-苯基-四氢吡啶(MPTP)诱发PD样猴模型.将微囊化、非囊化BCC或空微囊分别植入PD样猴右侧尾状核和壳核,观察PD样猴行为、尾状核及壳核微透析液中单胺类物质的变化.结果:囊化组(n=6)和非囊化组(n=2)移植后1周开始PD样猴左侧上肢活动明显增加,阿朴吗啡(Apo)诱发的异常旋转次数减少.非囊化组猴在移植1～2个月后主动行为及Apo诱发的异常旋转圈数逐渐退回到移植前水平;而移植囊化BCC 6只PD样猴的异常行为纠正效果,在观察的7个月内仍存在.空囊组(n=1)PD样猴异常行为无变化.移植前PD样猴右侧壳核、尾状核细胞外液中DA、DOPAC和HVA水平较左侧明显降低(P＜0.05).移植后2、7个月时,囊化组右侧壳核、尾状核细胞外液中DA、DOPAC和HVA水平较移植前明显提高(P＜0.05),但仍低于左侧的水平.结论:PD样猴脑内移植BCC后异常行为明显改善,微囊组的纠正效果明显优于非囊化组,其移植区DA及其代谢产生明显增加.APA微囊具有良好的免疫隔离作用,能明显延长BCC在异种脑内存活和发挥作用的时间.     

ACA、APA微囊的强度、通透性及生物相容性研究

CA、APA微囊是细胞移植过程中包裹、保护细胞的合适载体.     

微囊化鼠肝细胞腹腔移植的实验研究

目的：建立急性肝功能衰竭大鼠腹腔内微囊化肝细胞移植的动物模型，观察微囊及肝细胞形态和超微结构改变，并探讨移植物转归。方法：实验组60只Wister大鼠（受体）建立急性肝功能衰竭模型，分离纯化SD（供体）大鼠肝细胞，进行微囊化包裹，以每只鼠2．5×10^7个微囊化肝细胞进行腹腔移植，在移植后1周、2周分别处死30只受体大鼠．回收微囊．进行细胞形态及超微结构的观察。对照组15只Wister鼠只接受同等量空微囊．对比观察两组生存率、肝功能。结果：实验组大鼠存活率和肝功能指标改善情况明显好于对照组，移植后1周，微囊膜较完整。微囊间可见小血管增生，其内细胞活性好（81％±3％），腹腔中未见到炎症和免疫反应的迹象．且电镜观察细胞内结构正常、胞浆内细胞器丰富、核内容物存在。移植2周后微囊膜开始纤维化，部分肝细胞有变性。结论：微囊化肝细胞移植，可以治疗急性肝功能衰竭。微囊及肝细胞随着移植时间出现退行性改变。微囊的纤维化可能是导致移植后肝细胞存活下降的主要原因。     

祛风息痛丸对小鼠实验性疼痛的镇痛作用

目的 观察祛风息痛丸的镇痛作用,为其临床应用提供一定的实验依据. 方法 制备小鼠实验性疼痛模型,观察祛风息痛丸的镇痛作用.①扭体法:取昆明种小鼠100只,随机分为5组,每组20只,雌雄各半.对照组灌胃给予生理盐水10 ml/kg;祛风息痛丸低、中、高剂量组分别灌胃祛风息痛丸0.36,1.08,3.24 g/kg.阳性对照组灌胃阿司匹林0.4 g/kg.每Et用药1次,10 d后观察各组动物腹腔注射醋酸后5-20 min内的扭体反应次数.②热板法将小鼠放在(55±1)℃的热板上,以小鼠舔后足为疼痛反应指标,观察小鼠的热痛阈值.选用痛觉阈值在5-30 s的雌性小鼠50只,随机分为5组,每组10只,分组与给药方法与①同.给药10 d后记录各组小鼠热板法痛阈值,比较各组间的差异. 结果 ①扭体法实验结果显示,祛风息痛丸0.36,1.08,3.24 g/kg灌胃10 d使腹腔注射醋酸所致的小鼠扭体反应次数较对照组明显减少,对扭体反应次数的抑制率分别为25.4%,30.0%和43.4%(P<0.05).②热板法实验结果显示,给药前各组小鼠热痛阈值无统计学差异(P>0.05);给药10 d后祛风息痛丸各剂量组小鼠热痛阈值均较给药前显著提高(P<0.05),与对照组比较,祛风息痛丸组给药后热痛阈值显著延长(P<0.05). 结论 祛风息痛丸对小鼠实验性疼痛具有良好的镇痛作用.     

Foxp3体外诱导产生的调节性T细胞对小鼠心脏移植物存活的影响

目的研究Foxp3基因转染的受体na ve CD4 CD25-T淋巴细胞对小鼠同种异体心脏移植物存活的影响。方法将Foxp3重组逆转录病毒载体转染的CD4 CD25-T细胞于术前1d经尾静脉输入受体体内。实验分为3组:A组:Foxp3组,术前输入转染PLXSN-mFOXP3-IRES2-EGFP的受体CD4 CD25-T细胞;B组:调节性T细胞组,术前输入受体CD4 CD25 调节性T细胞;C组:空白对照组术前没有加任何干扰措施。术后第3天、第7天各组随机取2只小鼠,进行病理学检查。其余小鼠每日观察心脏移植物存活情况。结果4组移植物的存活时间分别为:A组(56.7±13.5)d(n=15),B组(59.1±11.5)d(n=15),C组(14.0±4.4)d(n=15)。A、B组移植物的存活时间较对照组显著延长,差异有统计学意义(P<0.01),但A、B两组之间差异无统计学意义(P>0.05),病理检查显示A、B组移植物排斥反应轻于C组。结论转染Foxp3基因的小鼠na ve CD4 CD25-T细胞,可以明显延长小鼠异位心脏移植物存活时间,其能力与自然发生的CD4 CD25 调节性T细胞相当。     

骨髓单核细胞移植对脑梗死小鼠白质损伤及血管再生的影响

目的 探讨评价骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNCs)移植对大脑中动脉栓塞小鼠脑白质损伤的疗效及梗死周围血管再生的影响.方法 线栓法将成年雄性小鼠制成大脑中动脉栓塞模型,模型成功后按随机表法随机分成假手术组,MCAO组,PBS组及BMMNCs移植组(BMMNCs组).梯度密度离心法提取分离BMMNCs,模型成功后24 h经尾静脉移植入0.5 ml含1×106个BMMNCs细胞悬液,PBS组给予等体积的PBS溶液,神经功能学评分(mNSS)评价小鼠神经功能,luxol fast blue(LFB)染色观察梗死周围脑白质损伤情况,免疫荧光染色观察梗死周围血管再生情况.结果 除假手术组外,其他各组均有不同程度的神经功能缺损.梗死后56 d,BMMNCs组LFB着色减少百分比[(24.06±5.48)％]明显低于MCAO组[(62.22±5.38)％]及PBS组[(61.22±5.48)％],BMMNCs组血管密度[(249.8±11.8)个/mm2]明显高于MCAO组[(119.1 ±11.2)个/mm2]及PBS组[(114.3±12.1)个/mm2],差异有统计学意义(P＜0.05),MCAO组与PBS组相比,LFB着色减少百分比和血管密度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BMMNCs移植可促进血管新生,增加梗死周围区血管密度,减轻脑白质损伤程度,显著改善脑梗死小鼠神经功能.