丹参酮对阿尔茨海默病样大鼠海马内乙酰胆碱酯酶和一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨丹参酮治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)样大鼠的神经化学机制.方法应用凝聚态β-淀粉样肽1～40片段(Aβ1～ 40)在大鼠海马齿状回背侧进行微量注射以建立AD样记忆障碍的动物模型;利用改良的乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学方法观察大鼠海马内各亚区胆碱能纤维的变化;用免疫组织化学方法检测大鼠海马内神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达.结果大鼠双侧海马内注射Aβ1～40(20μg)14 d后,海马内各亚区AChE阳性纤维面积百分比显著低于对照组;海马内iNOS的表达上调,而nNOS的表达则明显降低.此外,大鼠海马各亚区内AChE阳性纤维面积百分比与iNOS细胞数存在显著负相关.丹参酮50 mg/kg连续灌胃14 d后,分别对上述变化有不同程度的改善作用.结论丹参酮治疗AD样大鼠的作用机制可能与保护脑内胆碱能系统和调节NOS的表达有关.     

丹参酮对阿尔茨海默病样大鼠海马内诱导型一氧化氮合酶mRNA和乙酰胆碱酯酶表达的影响

目的探讨丹参酮（Tan）对阿尔茨海默病（AD）样大鼠海马内诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mR—NA及乙酰胆碱酯酶（AChE）表达水平的影响。方法60只SD大鼠随机分为3组，每组20只：对照组、模型组、治疗组。模型组与治疗组，在大鼠双侧海马齿状回背侧细胞带微量注射10μg凝聚态Aβ1—42以建立AD样记忆障碍的动物模型；建模24h后，用丹参酮（50mg／kg）对治疗组大鼠连续灌胃14d。采用以下方法观察丹参酮的干预效果：采用明暗箱被动回避法、穿梭法检测丹参酮对大鼠学习记忆功能障碍的改善作用；用半定量逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）方法测定海马内iNOS mRNA的表达；利用AChE组织化学方法观察大鼠海马内各亚区胆碱能纤维的变化。结果与对照组相比，模型组大鼠的学习记忆功能明显障碍，而给予丹参酮治疗后，可以有效延长大鼠进洞潜伏期（P〈O．05），显著增加大鼠主动回避次数（P〈O．05），减少逃避失败次数（P〈O.05）。模型组大鼠海马内iNOS的表达上调，各亚区AChE阳性纤维面积百分比则显著低于对照组（P〈O．01）；治疗组中上述指标变化有不同程度的改善。结论丹参酮对Aβl—42诱导大鼠的学习记忆功能障碍具有显著改善作用。其机制可能是保护AD样大鼠脑内胆碱能系统，并调节iNOS的表达。     

丹参酮对D-半乳糖-Aβ1-40复合痴呆模型大鼠的作用机制

目的探讨丹参酮对D-半乳将β-淀粉样肽蛋白片段1-40（Aβ1—40）复合模型大鼠学习记忆障碍（痴呆）的作用机制。方法应用D-半乳糖腹腔注射致衰老加大鼠双侧海马齿状回背侧10μg注射凝聚态Aβ1-40复合造模方法,建立拟人类老年痴呆症的动物模型;给治疗组大鼠灌饲丹参酮50mg／（kg·d）,14d;采用免疫组织化学法和酶组织化学法,分别观察大鼠海马内Aβ、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和乙酰胆碱酯酶表达的变化。结果老年痴呆症模型大鼠海马内Aβ和iNOS免疫反应性细胞数明显增多,平均光密度增强;乙酰胆碱酯酶阳性神经纤维受损,光密度下降（含阳性面积百分比和光密度）,与对照组比较有显著性差异（P〈0．01）;丹参酮治疗后,Aβ和iNOS免疫反应性细胞数明显减少,光密度也下降,乙酰胆碱酯酶阳性神经纤维受损减轻,光密度增强;与模型组比较有显著性差异（P〈0．01）。结论丹参酮改善D－半乳糖－Aβ1－40复合痴呆大鼠学习记忆障碍的作用机制,可能与降低海马内Aβ和iNOS的表达而保护脑内胆碱能神经有关。     

丹参酮对阿尔茨海默病样大鼠海马内IL-1β、IL-6 mRNA以及一氧化氮合酶表达的影响

[目的]探讨丹参酮(tanshinone,Tan)抑制β-淀粉样肽对神经元毒性的分子机制.[方法]在大鼠双侧海马齿状回背侧细胞带微量注射凝聚态β-淀粉样肽1-40片段(amyloid β-peptide1-40 Aβ1-40)20μg以建立阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)样记忆障碍的动物模型;用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定海马内白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)mRNA含量;Western blot检测海马内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达;采用丹参酮(Tan,50 mg/kg)对Aβ1-40处理的大鼠连续灌胃14 d,观察其干预效果.[结果]海马内注射Aβ1-40 14 d后,经行为学检测大鼠出现记忆障碍时,海马内IL-1β和IL-6 mRNA以及iNOS蛋白的表达均显著高于对照组(P＜0.01),相关性分析发现iNOS表达与IL-1β和IL-6存在明显正相关(P＜0.01,P＜0.05).以Tan 50mg/kg连续灌胃14 d后,对上述变化有不同程度的改善作用,和模型组比较,P＜0.01.[结论]Tan能有效地抑制AD样大鼠海马内IL-1β、IL-6与iNOS表达,这可能为其抑制Aβ神经毒的分子机制.     

锂-匹罗卡品致痫大鼠海马结构nNOS、iNOS及活化Caspase-3蛋白表达的动态变化

目的 探讨大鼠癫痫持续状态（SE）后海马结构神经型一氧化氮合酶（nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及活化Caspase-3蛋白表达的动态变化及其相互关系。 方法 采用锂-匹罗卡品腹腔注射建立大鼠SE模型,用免疫组织化学及免疫印迹法在2h、6h、3d及7d不同时相点检测大鼠海马nNOS、iNOS 及活化Caspase-3蛋白的表达。 结果 大鼠海马nNOS的蛋白表达在SE后2h开始迅速增高,在6h时达到高峰,之后逐渐降低,但在3、7d时仍显著高于对照组（P均<0.01）。iNOS蛋白的表达在SE后6h时开始持续增高（P<0.01）,并在7d时达到高峰（P<0.01）。活化Caspase-3蛋白的表达在3d开始增高（P<0.01）,7d时达到高峰（P<0.01）。 结论 大鼠在SE后海马的nNOS、iNOS及活化Caspase-3的表达均有不同程度的增高,提示一氧化氮合酶的反应产物一氧化氮可能与癫痫发作后海马结构内的神经元受损有关,而神经元受损与凋亡之间的关系亦密不可分。     

拟AD模型大鼠学习记忆障碍和海马CA1区Aβ1-40和nNOS的表达

目的:建立拟AD大鼠模型,观察海马CA1区Aβ1-40和nNOS的表达.方法:采用冈田酸进行海马CA1区微量注射建立拟AD大鼠模型,冈田酸末次注射2星期后水迷宫行为学试验检测其学习记忆能力,免疫组化方法观察海马CA1区Aβ1-40和nNOS的表达.结果:拟AD模型组大鼠定向航行试验的第二天开始,同对照组比较,平均逃避潜伏期明显延长(P＜0.05或P＜0.01),空间探索试验中原站台象限活动时间明显缩短(P＜0.01);对照组大鼠海马CA1区未见或偶见Aβ1-40表达,拟AD模型组大鼠海马CA1区Aβ1-40表达多见;拟AD模型组大鼠海马CA1区nNOS表达比对照组显著减少(P＜0.01).结论:冈田酸海马CA1区微量注射,大鼠海马CA1区Aβ1-40表达增加及nNOS表达减少,是导致拟AD模型大鼠学习记忆障碍的可能机制.     

丹参酮Ⅱ A对阿尔茨海默病模型大鼠海马MMP 2、iNOS表达及自由基释放的影响

目的探讨中药丹参酮ⅡA(TanⅡA)对AD模型大鼠学习记忆、海马内基质金属蛋白酶(MMP-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及自由基释放的影响及作用机制。方法采用β-淀粉样蛋白(Aβ)定向注射法建立AD大鼠模型,并使用TanⅡA干预,通过观察大鼠学习记忆能力、定量分析大鼠海马MMP-2和iNOS基因及蛋白表达差异及表达相关性、自由基释放量的影响以阐明其作用机制。结果与正常对照组相比,Aβ注射法所建立AD模型大鼠海马内iNOS及MMP-2的表达显著增高(P0.05),两者的表达在mRNA及蛋白水平均正相关(P0.05)。AD大鼠海马内诱导释放的一氧化氮(NO)、ONOO-及活性氧(ROS)自由基含量显著增高(P0.05),同时AD模型组大鼠的学习记忆能力明显下降。而TanⅡA(50mg/kg)干预可显著降低AD大鼠海马内的NO、ONOO-及ROS含量,并降低iNOS(P0.05)及MMP-2蛋白的表达(P0.01),明显改善AD模型大鼠的学习记忆能力。结论TanⅡA可有效缓解AD症状,作用机制可能与抑制AD诱导的iNOS及MMP-2蛋白的表达,减少氧化性毒害自由基的产生,抑制氧化应激损伤有关。     

一氧化氮合酶抑制剂L-NNA对福尔马林大鼠脑nNOS、iNOS表达的影响

目的 探讨一氧化氮合酶抑制剂L-NNA对福尔马林实验大鼠脑一氧化氮合酶表达的影响。方法 应用免疫组织化学ABC法研究了nNOS、iNOS在福尔马林大鼠脑内的表达。结果 在福尔马林实验大鼠不同脑区,nNOs和iNOS表达较强。一氧化氮合酶抑制剂L-NNA可抑制福尔马林实验大鼠脑nNOS、iNOS的表达,NO生成减少。结论 一氧化氮合酶抑制剂L-NNA可通过抑制一氧化氮合酶作用,参与伤害性痛觉调制。一氧化氮在脑的痛觉调制过程中起重要作用。     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马COX-2、iNOS表达的影响

目的观察电针对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力及大脑海马CA1区神经元炎性反应的影响,探讨针灸防治AD的具体作用机制。方法雄性Wistar大鼠50只,随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组,每组10只,采用双侧海马注射凝聚态Aβ25-35制备AD大鼠模型。电针组选取双侧肾俞穴、双侧足三里穴和大椎穴,接韩氏电针仪治疗。采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测脑组织中海马神经元环氧合酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果大鼠海马注射Aβ25-35导致海马CA1区锥体神经元的损伤,同时伴有COX-2、iNOS表达增加。与模型组相比,电针能有效抑制COX-2、iNOS表达(均P0.05),显著提高AD大鼠的学习记忆能力(P0.05)。结论电针能有效抑制AD大鼠脑内神经元炎性反应,改善AD大鼠空间探索的能力,其作用机制可能与减轻COX-2过表达,抑制iNOS活性有关。     

β2肾上腺素受体对Aβ1-40诱导阿尔茨海默病大鼠脑内胆碱能水平的影响

目的:研究β2肾上腺素受体激动剂和抑制剂对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力和脑内乙酰胆碱含量的影响?方法:40只健康雄性SD大鼠随机平均分为4组:对照组?AD组?克伦特罗组和ICI118,551组?AD组给予海马内注射Aβ1-40 1 μl(10 μg),克伦特罗组和ICI118,551组同样注射Aβ1-40 后分别腹腔注射克伦特罗0.5 mg/kg和ICI118,551 1 mg/kg?对照组注射生理盐水?Y迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力后检测海马内胆碱酯酶(AChE)和乙酰转移酶(ChAT)的含量,Nissle染色观察海马CA1区神经元的形态学改变?结果:与AD组相比,克伦特罗组的学习记忆能力明显下降(P < 0.01),海马ChAT?AChE活力下降,CA1区神经元凋亡明显(P < 0.01);而ICI118,551组学习记忆能力?海马ChAT?AChE活力均较AD组提高,海马神经元的损伤情况较AD组有所改善(P < 0.05)?结论:β2肾上腺素受体激动剂?抑制剂分别能加重和减轻AD病变,其机制可能与改变脑内胆碱能水平有关?     

华中五味子酮对阿尔茨海默病样大鼠学习记忆功能及海马区核因子κB、诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:观察华中五味子酮(Schisandrone)对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)样大鼠学习记忆及海马区核因子κB(nuclear factor-κB)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响,探讨华中五味子酮对AD可能的防治作用.方法:30只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、AD模型组和华中五味子酮干预组3组,每组各10只.采用侧脑室立体定向注射β淀粉样蛋白(amyloid-beta protein, Aβ)25-35的方法,建立AD的动物模型;华中五味子酮干预组采用华中五味子酮灌胃进行药物干预,空白对照组注射生理盐水.通过Morris水迷宫检测大鼠学习、记忆能力,通过免疫组化法观察大鼠海马区NF-κB及iNOS 蛋白的表达.结果:华中五味子酮干预组大鼠短期学习记忆能力较AD样大鼠有明显改善(P＜0.05),海马区NF-κB及iNOS 的表达较AD样大鼠明显减少(P＜0.05),海马区NF-κB及iNOS 的表达呈正相关关系(空白对照组、AD模型组、华中五味子酮干预组的相关系数分别为0.639、0.656、0.682,P均＜0.05).结论:华中五味子酮可能通过影响NF-κB信号转导通路而抑制Aβ诱导的氧化应激和炎性反应,在AD发病中具有保护作用.     

银杏内酯对拟AD模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响

目的：研究银杏内酯对拟阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响。方法：采用冈田酸（OA）海马CA1区微量注射建立拟AD大鼠模型，3周后银杏内酯腹腔注射，水迷宫行为学试验检测学习记忆能力，免疫组织化学方法观察海马CA1区Aβ1-40的表达。结果：与拟AD模型组比较，银杏内酯组平均逃避潜伏期明显缩短（P〈0．01），银杏内酯组海马CA1区Aβ1-40表达明显减少或消失（P〈0．01）。结论：银杏内酯显著改善拟AD模型大鼠学习记忆能力，其机理可能是抑制海马Aβ1-40的表达及tau蛋白磷酸化，减轻OA对大鼠海马神经元的病理损害。     

布洛芬对Aβ25-35所致大鼠海马损伤及iNOS表达的影响

目的研究非甾体类抗炎药布洛芬(Ibuprofen,Ibu)对大鼠脑室内注射Aβ25-35所致海马损伤及iNOS mRNA表达的影响.方法大鼠灌胃给予Ibu(7.5,15mg·kg-1)连续应用3w,脑室内注射Aβ25-35 (5μL, 2M),注射后1w,取脑组织,进行尼氏(Nissl)染色和胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)免疫组织化学染色,观察海马CA1区锥体神经元形态学改变和星形胶质细胞的活化浸润情况.RT-PCR 分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达水平.结果大鼠脑室内注射Aβ25-35可引起海马CA1区星形胶质细胞的激活和浸润及锥体神经元的损伤,同时伴有iNOS mRNA表达增加.Ibu(7.5,15mg·kg-1,连续应用4w)能减轻海马CA1区锥体神经元的损伤及星形胶质细胞的激活和浸润,抑制Aβ25-35引起的iNOS mRNA表达增加.结论 Ibu能够通过抑制Aβ25-35引起的iNOS mRNA表达,减轻大鼠海马锥体神经元的损伤.     

依那普利对肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后NOS的影响

目的通过观察依那普利（ACEI）对肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后神经功能和一氧化氮合酶（NOS）的影响，探讨ACEI的脑保护机制。方法Wistar雄性大鼠56只，随机分为依那普利治疗组（Y，n=16）、高血压，缺血再灌注组（HIR，n=16）、正常血压，缺血再灌注组（IR，n=16）、假手术组（n=8）；前三组再按时间点分为缺血2小时、再灌注24小时两个亚组，每组8只。采用狭窄肾动脉方法建立肾性高血压大鼠模型；采用线栓法造成大脑中动脉缺血再灌注模型。采用免疫组织化学方法检测脑组织内皮源性一氧化氮合酶（eNOS）、诱导性一氧化氮合酶（iNOS）、神经源性一氧化氮合酶（nNOS）的表达。结果Y组大鼠神经功能评分较HIR组和IR组降低（P〈0．05）；IR组神经功能评分低于HIR组（P〈0．05）；Y组与HIR组和IR组比较eNOS表达显著增高（P〈0．05），nNOS和iNOS表达显著降低（P〈0．05）；HIR组与IR组比较，eNOS表达明显降低（P〈0．05），而nNOS、iNOS表达明显增加（P〈0．05）。结论肾性高血压可能通过增加nNOS和iNOS表达、抑制eNOS表达加重缺血再灌注后脑损伤；ACEI能够改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能，上调脑组织eNOS表达，抑制nNOS、iNOS表达，提示这种抗高血压药可能对脑缺血再灌注损伤有脑保护作用。     

一氧化氮合酶与脑缺血亚急性期神经损伤的关系

目的 探讨大鼠脑缺血亚急性期脑力内三型一氧化氮合酶（NOS）的表达及其与经济损伤的关系。方法 采用大鼠大脑中动脉缺血模型，用免疫组织化学方法检测局灶性脑缺血24h三型NOS在脑内的表达。结果 局灶性脑缺血24h，缺血中心区及部分边缘区内可见大量诱导型一氧化氮合酶（iNOS）阳性的胶质细胞浸润。表达神经元型一氧化氮合酶（nNOS）及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的神经细胞数减少。结论 脑缺血亚急性期胶质细胞iNOS表达上调与迟发性神经元损伤有密切关系。在此期给予选择性iNOS抑制剂可以减少缺血性损害。     

捕食应激致大鼠海马NO释放增多及nNOS表达增强

目的：探讨一氧化氮（NO）在创伤后应激障碍（PTSD）样行为异常大鼠的变化规律，以进一步揭示PTSD的神经生物学机制。方法：在大鼠捕食应激PTSD动物模型基础上，动态检测了大鼠海马、额叶皮层组织匀浆NO、一氧化氮合酶（NOS）含量及神经元型NOS（nNOS)表达。结果：PTSD样行为异常大鼠海马NO含量于捕食应激后即刻明显升高，12h达高峰，24h时仍明显增多；海马nNOS表达亦同步增高，而额叶皮层则无明显改变。结论：严重心理生理应激所致海马nNOS持续性高表达与NO释放明显增多，在实验大鼠持续性PTSD样行为异常中可能有重要作用。     

电针对老年性痴呆大鼠前额叶皮质nNOS阳性神经元表达的影响

目的：研究电针对老年性痴呆（AD）模型大鼠前额叶皮质（Prefrontal Cortex ,PFC）神经元型一氧化氮合酶（nNOS）阳性神经元表达的影响。方法：以D-半乳糖腹腔注射和Aβ1-40海马注射诱导形成的老年性痴呆模型大鼠为研究对象。电针“大椎”、“太溪”、“肾俞”三穴,以免疫组织化学法检测大鼠PFC中nNOS阳性神经元的表达。结果：与模型组相比,电针组nNOS阳性神经元数量明显增多,具有显著性差异。结论：电针可能通过上调大鼠PFC中nNOS阳性神经元的表达,进而发挥抗老年性痴呆的作用。     

华中五味子酮对阿尔茨海默病样大鼠海马内IL-1β及iNOS表达的影响

目的:观察华中五味子酮(schisandrone)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)样大鼠海马内白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA水平的影响,探讨华中五味子酮对AD可能的防治作用.方法:30只雄性SD大鼠, 8～12周龄,体质量250～300 g,随机分为3组:空白对照组、AD模型组和华中五味子酮干预组(n=10).采用侧脑室立体定向注射β-淀粉样蛋白(amyloid-beta protein)Aβ25-35(溶于无菌生理盐水,浓度10 mmol/L)的方法,建立AD的动物模型,并用华中五味子酮(溶于玉米油,浓度1 mmol/L)灌胃进行药物干预,通过半定量RT-PCR的方法观察华中五味子酮对AD样大鼠海马区IL-1β及iNOS mRNA水平的影响.结果:用华中五味子酮干预,AD样大鼠海马内IL-1β及iNOS mRNA水平(0.333 7±0.122 3和0.266 6±0.088 5)较AD样大鼠(0.969 3±0.153 9和0.666 0±0.121 1)有显著降低(P<0.001).结论:华中五味子酮能够抑制Aβ诱导的氧化应激和炎性反应,在AD发病中可能具有保护作用.     

铅暴露对大鼠大脑皮质和海马NOS的影响

目的 观察铅暴露对大鼠海马和大脑皮质一氧化氮合酶(NOS)的影响,探讨铅暴露对中枢神经系统损害的机制.方法 4周龄Wistar雄性大鼠,按体重用45 mg/kg醋酸铅灌胃30天;第30天时测定大鼠海马和大脑皮质总NOS和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性,对大鼠脑组织冰冻切片进行β-NADPH染色,并对海马各区nNOS阳性神经元进行数量统计分析.结果 与空白对照组大鼠比较,染铅组大鼠海马和大脑皮质总NOS活性明显降低,而iNOS活性均升高,海马CA1和齿状回nNOS阳性神经元数量减少,差异有显著性(P＜0.01).结论 铅暴露可以使大鼠海马和大脑皮质总NOS活性降低,iNOS活性升高,海马nNOS阳性神经元数量减少.     

银杏内酯对拟AD模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响

目的: 研究银杏内酯对拟阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响.方法:采用冈田酸(OA)海马CA1区微量注射建立拟AD大鼠模型,3周后银杏内酯腹腔注射,水迷宫行为学试验检测学习记忆能力,免疫组织化学方法观察海马CA1区Aβ1-40的表达.结果:与拟AD模型组比较,银杏内酯组平均逃避潜伏期明显缩短(P＜0.01),银杏内酯组海马CA1区Aβ1-40表达明显减少或消失(P＜0.01).结论:银杏内酯显著改善拟AD模型大鼠学习记忆能力,其机理可能是抑制海马Aβ1-40的表达及tau蛋白磷酸化,减轻OA对大鼠海马神经元的病理损害.