三氧化二砷抑制人肝癌细胞株增殖和诱导凋亡作用

目的体外培养人肝癌细胞株HepG-2,BEL-7402,观察测定应用不同浓度三氧化二砷后多种指标的变化,从多个角度探讨三氧化二砷的抗肿瘤作用及其机制.方法应用倒置相差显微镜、电子显微镜、透射电镜、扫描电镜、流式细胞仪、细胞免疫组化法,分别对不同浓度加药组及对照组HepG-2,BEL-7402细胞的存活,形态学改变,细胞DNA含量的分布以及Bc1-2,Bax蛋白的表达进行了观察和测定.结果0.5,1,2μmol/L As2O3均能抑制人肝癌细胞株细胞的生长增殖.流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,电镜下,对照组细胞核质比大、核大、核膜有明显切迹,0.5μmol/L As2O3组细胞核质比减小、核变圆、胞质内出现分化良好的细胞器,0.5,1,2μmol/L As2O3组均可见细胞膜完整、核固缩、凋亡小体形成.细胞免疫组化法测定Bcl-2,Bax蛋白的表达以及两者之间的比率均有变化.结论三氧化二砷不仅抑制人肝癌细胞增殖,而且诱导细胞凋亡.诱导肝癌细胞凋亡与Bd-2,Bax蛋白的表达改变有关.     

中药960诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的：观察９６０抗癌合剂对人肝癌细胞的凋亡作用,揭示其原发性肝癌作用机理。方法：丫啶橙（ＡＯ）染色,琼脂糖凝胶电经丙锭染色细胞周期分析（ＰＩ－ＦＣＭ）和末端转移酶ＤＮＡ断裂点原位标记（ＴＵＮＥＬＦＣＭ）。结果：经９６０药和血清处理后。细胞皱缩,深染,ＡＯ染色,细胞呈致密浓染的黄绿药荧光;ＤＮＡ电位见典型“梯形”带;ＤＮＡ直方图上见典型凋亡峰（０．９５％～２７．７％）,ＴＵＮＥＬ标记率６４．１２％～     

三氧化二砷诱导大肠癌细胞株SW620凋亡

大肠癌的发病率与死亡率逐年上升,严重威胁人们的身心健康,平均5年生存率低于40％。积极探讨大肠癌综合治疗的新手段有重要的临床和社会经济意义。研究表明,多种肿瘤的发生与细胞凋亡障碍有关,诱导肿瘤细胞凋亡可能成为肿瘤治疗中有前景的手段之一。三氧化二砷(As_2O_3)是近年来新认识的对多种肿瘤有良好效果的药物,能诱导多种肿瘤细胞凋亡,但对大肠癌的作用未见报道,我们对此进行初步探讨。     

维甲酸诱导肺腺癌细胞凋亡的实验研究

目的　探讨诱导分化剂全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）对人肺腺癌细胞株Ａ５４９ 和ＳＰＣＡ１ 的影响。　方法　实验分为不同浓度的维甲酸用药组及对照组，进行氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷（３ＨＴｄＲ）掺入细胞生长测定，电子显微镜下观察细胞核形态及用流式细胞仪测定细胞ＤＮＡ 含量，分别做凋亡细胞的定性和定量分析。　结果　ＡＴＲＡ 在１０ μｍ ｏｌ／Ｌ浓度时即对肺癌细胞Ａ５４９ 和ＳＰＣＡ１的生长有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性。此种抑制是通过诱导细胞凋亡达到的。Ａ５４９ 和ＳＰＣＡ１凋亡细胞率在５０ μｍ ｏｌ／Ｌ药物浓度分别为３５１８％ 和１９２０％ 。　结论　ＡＴＲＡ 在体外可以诱导肺腺癌细胞的凋亡，为临床上通过诱导细胞分化促进和触发肿瘤细胞凋亡，从而为预防和治疗肿瘤提供了理论依据。     

健脾理气药诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的研究

目的观察健脾理气药的诱导凋亡效应,为其临床应用进一步提供依据.方法采用血清药理学方法研究中药的体外效应.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测含中药兔血清对肝癌细胞的抑制效应,以Annexin V标记法、DNA含量测定、电子显微镜方法检测含中药血清诱导凋亡及细胞周期阻滞效应.免疫组化法观察含中药血清对P53,P21WAF1/CIP1蛋白的影响,RT-PCR法观察含中药血清对P21WAF1/CIP1 mRNA表达水平的影响.结果含中药血清有一定的抑制肝癌细胞作用,其作用3 d的抑制率为6.6%,作用6 d的抑制率为36.2%.含中药血清作用2 d诱导9.8%±4.0%的肝癌细胞凋亡,使细胞周期阻滞于S期,并上调P53蛋白、P21WAF1/CIP1 mRNA及蛋白的表达.结论健脾理气药具一定的诱导凋亡及抑制肝癌细胞效应,上调p53,p21WAF1/CIP1基因的表达为分子机制.     

亚砷酸诱导人骨髓间充质干细胞凋亡的研究

目的研究亚砷酸（ATO）体外对人骨髓间充质干细胞（MSC）凋亡的影响。方法在正常人髂后上棘穿刺获得MSC,体外培养传代,取第3代细胞鉴定后进行实验。纯化的MSC与1、5、10μmol／L的ATO共孵育,分别在6、12、24h用HE染色观察细胞形态学变化,透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡情况。结果ATO可致MSC形态明显改变;不同浓度ATO对MSC作用24h可见不同阶段的凋亡细胞;FCM检测表明,ATO可诱导MSC凋亡,该作用随ATO浓度和作用时间增加而增强。结论ATO可在体外诱导MSC凋亡,并呈时间和浓度依赖性。     

棘霉素诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡的研究

目的研究棘霉素诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡的作用,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法通过细胞计数获得不同浓度棘霉素作用SMMC7721细胞的生长抑制率,观察棘酶素对肝癌细胞生长的影响;通过流式细胞仪分析棘霉素对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果棘霉素浓度〉10 ng/ml时可抑制SMMC7721细胞的生长。结论棘霉素在体外可诱导肝癌细胞凋亡,具有很强的抗肿瘤作用。     

复方肝癌宁含药血清诱导肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的:观察复方肝癌宁含药血清对肝癌HepG2 细胞凋亡的诱导作用．方法:运用中药血清药理学方法,选择不同浓度的含药血清与人肝癌HepG2细胞共同孵育观察,并与阳性血清组、无药血清组作对照．结果:复方肝癌宁含药血清可显著抑制HepG2 细胞的增长;TUNEL法检测HepG2细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变,可见“凋亡小体”,高、中、低剂量含药血清组凋亡率分别为:14．50％,13．61％和10．19％,与无药血清组比较P<0．01;流式细胞仪检测可见亚G1峰, 凋亡呈含药血清浓度依赖性特点,高、中、低剂量含药血清组凋亡率分别为15．1％,12．0％, 5．5％．与无药血清组比较P<0．01或P<0．05 结论:复方肝癌宁可通过诱导肿瘤细胞凋亡, 发挥临床抗肝肿瘤、抗转移的作用．     

射频联合亚砷酸治疗兔肝VX2肿瘤的疗效观察

射频（RFA）是肝癌治疗的一种新手段，疗效确切。临床研究发现，对于直径大于5cm的恶性肿瘤治疗不彻底是RFA所面临的一大难题。我们采用射频联合亚砷酸局部治疗兔肝VX2肿瘤，通过观察肿瘤体积、转移和荷瘤兔存活时间的影响探讨联合治疗的安全性及高效性。     

去甲斑蝥素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响。方法用MTT方法检测人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率。应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果 NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721有生长抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量和时间效应关系。流式细胞仪示SMMC-7721细胞的S期细胞明显增多,G0/G1期细胞减少,凋亡率上升（P〈0.05或〈0.01）。结论 NCTD能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,其可能与抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡有关。     

LivinmRNA反义寡核苷酸对人肝癌细胞株HepG-2体外增殖及凋亡的影响

目的 探讨LivinmRNA反义寡核苷酸（ASODN）进行肿瘤基因治疗的可行性。方法设计合成嵌合骨架型ASODN及其对照错义寡核苷酸（MSODN）,脂质体转染到HepG-2细胞（观察1组和观察2组）,同时设未转染者为对照组。采用MTr法检测HepG-2细胞增殖抑制率（IR）,电镜、流式细胞仪与吖啶橙／溴化乙锭（AO／EB）细胞染色法检测细胞凋亡水平和形态学变化。结果ASODN在终浓度200nmol／L作用72h时,观察1组HepG-2细胞IR及细胞凋亡数明显高于其他两组.结论以Livin为靶点的ASODN能够促使肿瘤细胞凋亡,具有靶特异性和低毒性,有可能成为抗肿瘤药物开发的新工具。     

黄芩苷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡作用观察

目的研究黄芩苷对人肝癌HepG-2细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以不同浓度的黄芩苷与人肝癌HepG-2细胞共同培养,采用MTT法测定细胞增殖抑制率;采用Hoechst33258/PI染色法在荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学变化;采用TUNEL法检测细胞凋亡率;采用Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果在25~100μg/ml的药物浓度作用下,细胞增殖被抑制。药物浓度在50μg/ml下作用48h,细胞抑制率达50.63%,药物浓度在75μg/ml下作用48h细胞,抑制率达77.62%。抑制率呈浓度和时间依赖性;药物浓度在50μg/ml时作用48h,可见HepG-2细胞皱缩、细胞核碎裂成碎片,呈现典型的凋亡改变;随着黄芩苷作用浓度的增加,细胞凋亡率增高(P<0.05);随药物浓度的增加,Caspase-9和Caspase-3蛋白表达量呈增加趋势,而Bcl-2表达减少。结论黄芩苷能通过诱导细胞凋亡进而抑制人肝癌细胞增殖,其诱导凋亡机制可能与线粒体通路有关。     

腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的实验研究

背景：X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）相关因子1（XAF1）是新近鉴定的肿瘤抑制基因,在许多人类恶性肿瘤中低表达甚至不表达。目的：研究Ad5/F35腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的作用及其可能机制。方法：构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、对照病毒Ad5/F35-Null和报告病毒Ad5/F35-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）,分别按不同感染复数（MOI）在同一作用时间点感染人肝癌细胞株SMMC7721。以荧光显微镜和流式细胞仪检测Ad5/F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测XAF1mRNA和蛋白表达;以甲基噻唑基四唑（MTT）法检测细胞增殖率;以Annexin V-FITC/PI双染法和原位末端标记TUNEL法检测细胞凋亡率;以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达。结果：Ad5/F35-EGFP感染48h,MOI为2.0时,92%以上的SMMC7721细胞表达绿色荧光蛋白。Ad5/F35-XAF1感染48h后,SMMC7721细胞中XAF1 mRNA和蛋白表达增高,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡剂量依赖性地增多,并伴随凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的裂解。结论：重组腺病毒Ad5/F35-XAF1在人肝癌细胞株SMMC7721中具有很强的感染效率,可促进XAF1基因表达,且能明显抑制人肝癌细胞增殖和诱导凋亡,此作用可能与XAF1激活了内、外源性凋亡通路有关。     

安体维康诱导肝癌细胞凋亡模型的建立

华蟾素具有明显的抗乙肝病毒作用，以华蟾素为主要成分的安体维康（ＡＴＶＫ）对ＨＢＶ复制有明显抑制作用。为探讨其对肝癌的作用机理，我们以人肝癌细胞株ＢＥＬ－７４０２为研究对象，进行了如下实验。１资料与方法１．１四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）微量酶反应实验用进口...     

丹参素诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

丹参素是传统中药丹参的一种水溶性提取物,具有抗氧化和潜在的抗肿瘤作用。目的：探讨丹参素体外对人肝癌细胞株SMMC7721的诱导凋亡作用及其机制。方法：分别以0mg／L、10mg／L、20mg／L、30mg／L、40mg／L丹参素作用SMMC7721细胞24、48和72h后．采用MTT法检测细胞抑制率。透射电子显微镜观察细胞凋亡形态。AnnexinV-FITC／PI双染法检测不同浓度（O-40mg／L）丹参素和40mg／L丹参素作用不同时间（0-48h）对SMMC7721细胞的凋亡：RT-PCR法检测不同浓度（0-40mg／L）丹参素作用SMMC7721细胞24h后p53mRNA表达。结果：丹参素可呈时间和剂量依赖性地抑制SMMC7721细胞增殖和诱导凋亡：透射电子显微镜下可见典型的细胞凋亡特征。随着丹参素浓度的升高．D53mRNA表达亦明显上调。结论：丹参素在一定浓度范围内可呈时间和剂量依赖性地抑制SMMC7721细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与p53表达上调有关。     

腺病毒介导多基因对肝癌细胞凋亡的诱导作用

目的 研究腺病毒介导的多基因（ｐ５３、Ｂ７－１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２）对肝癌细胞系调亡的诱导,及对肝癌细胞系裸鼠体内成瘤性改变的影响。方法 应用光镜、电镜和ＴＵＮＥＬ法,检测肝癌细胞系感染腺病毒介导的多基因后凋亡的发生,检测ＨｅｐＧ２细胞导入腺病毒多基因后裸鼠体内的成瘤性改变。结果 肝癌细胞系导入多基因后发生凋亡,并对化疗药物顺铂的敏感性增加,册时给予１０ｍｇ／Ｌ的顺铂,可使近３０％的肝癌细胞发     

乙醇诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究低浓度乙醇对肝癌细胞增殖的影响及作用机理。方法 采用MTT比色法观察乙醇对细胞增殖的影响；采用流式细胞仪法观察乙醇对肝癌细胞内活性氧的影响；采用琼脂凝胶电泳法观察DNA片段的梯形条带。结果 低浓度乙醇抑制了细胞的增殖；乙醇作用于细胞后，在2h内引起活性氧的产生；24h后细胞出现典型的凋亡表现。结论 乙醇能通过诱导细胞内活性氧的产生而引起细胞凋亡，呈明显的剂量依赖性。     

苯乙酸钠对人肝癌细胞凋亡的研究

为了观察苯乙酸钠对人肝癌细胞的分化诱导作用，应用流式细胞仪（ＦＣＭ）、台盼蓝染色计数法和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察茉乙酸钠对人肝癌细胞株的细胞周期动力学变化，另用喉癌细胞株（Ｈｅｐ－２）做对照细胞，结果显示苯乙内对人肝癌细胞呈剂量依赖性抑制，细胞周期的Ｇ１期下降，Ｓ期相对升高，但对喉癌抑制作用不明显。表明苯乙酸钠可抑制人肝癌细胞株增殖，主要是抑制细胞周期的Ｇ１期。     

健脾中药诱导人胃癌细胞裸小鼠移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究健脾类中药复方四君子汤及以四君子汤等健脾药物为基础结合清热解毒、软坚散结中药组成的复方SRRS对人胃癌细胞裸小鼠移植瘤的抑瘤作用与诱导肿瘤细胞凋亡的关系.方法采用人胃癌细胞SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤模型.实验动物共30只,造模后随机分为3组,每组10只:SRRS方剂组,予240 g/L SRRS煎剂0.5mL/d灌胃;四君子汤组,予160 g/L四君子汤煎剂0.5 mL/d灌胃;对照组,予生理盐水0.5 mL/d灌胃,共40 d.应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)、电镜,结合流式细胞仪分析技术,观察SRRS方剂及四君子汤的抑瘤作用与肿瘤细胞凋亡率及形态学改变.结果四君子汤、SRRS方剂对人胃癌细胞裸小鼠移植瘤抑瘤率分别为34%,47%,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数(AI)分别为:16%±3%,13%±3%,与对照组AI:3%±1%比较,显著提高(四君子组P＜0.01;SRRS方剂组P＜0.05,均为t检验);流式细胞分析示四君子汤组凋亡率:11%±6%,SRRS方剂组:12%±6%,均较对照组:7%±1%提高(t检验,P＜0.05);但四君子汤和SRRS方剂组之间的凋亡率TUNEL法和流式细胞分析均无差异.电镜下二中药治疗组见较多凋亡细胞和凋亡小体;对照组凋亡细胞和凋亡小体极少.结论中药四君子汤、SRRS方剂在体内的抑瘤作用与诱导胃癌细胞凋亡有关,其诱导细胞凋亡作用可能主要与健脾药物有泄?诱导肿瘤细胞凋亡可能是健脾药物抗癌作用的机制之一.     

肝癌细胞系放射诱导的细胞凋亡和细胞周期的变化

目的：探讨肝癌细胞系放射诱导的细胞周期和细胞凋亡的变化特点．方法：研究细胞系为肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721．对照细胞系为正常肝细胞系HL-7702、肺小细胞癌HCI-H460和肺腺癌A549．常规培养48h后接受4Gy射线照射,收获受照前(0h)和受照后6,12,24,36和48h的细胞,采用流式细胞术(FCM)检测各细胞系细胞周期和细胞凋亡．结果：4GyX线照射后,HepG2在照射后12h出现细胞凋亡高峰,射线诱导的细胞凋亡比率为45．16%(t=8．864,P＜0．0025),而SMMC-7721在24h达高峰,诱导的细胞凋亡比率为24．94％,HepG2较SMMC-7721射线诱导的细胞凋亡高峰出现早、比率高：HepG2和SMMC-7721与HCI-H460和A549变化较一致,凋亡变化的走势和峰值均与S期的相反,两株肝癌细胞可能均发生了射线诱导的有丝分裂前S期细胞凋亡．HepG2在照射后12h有明显的G_2/M期阻滞,可能有射线诱导的G_2/M期细胞损伤,发生了延迟的间期死亡．结论：两株肝癌细胞可能均发生了射线诱导的有丝分裂前S期细胞凋亡,HepG2可能伴有射线诱导的G_2/M期细胞损伤,发生了延迟的间期死亡．