脑脉通联合骨髓干细胞动员对脑缺血大鼠神经细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

目的 观察脑脉通联合骨髓干细胞(BMSCs)动员对脑缺血大鼠神经细胞凋亡的作用,并从对凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达及Bax/Bcl-2变化的影响探讨其可能的作用机制.方法 大鼠随机分组.线栓法制备局灶性脑缺血(MCAO)动物模型.动员组和联合组大鼠分别于术前3 d和术后2 d皮下注射人重组粒细胞集落刺激因子(rG-CSF);脑脉通灌胃用药.术后2、3、7、14 d取材,测定外周血和脑组织CD34+细胞;观察脑组织病理改变;检测神经细胞凋亡;测定脑组织Bax、Bcl-2表达,计算Bax/Bcl-2比值.结果 模型组大鼠外周血和脑组织CD34+细胞增加,分别于3 d和7 d达到峰值;各治疗组尤其联合组脑组织CD34+增强明显.缺血后7 d大鼠脑组织损伤明显,动员组14 d和各联合组的损伤减轻.各模型组神经细胞凋亡增多、Bax表达增加、2 d和3 d的Bax/Bcl-2增高.各联合组神经细胞凋亡减轻、Bax表达减弱,7 d及14 d的Bcl-2表达增强,各时间点的Bax/Bcl-2降低.联合组较动员组2 d和3 d的凋亡细胞、各时间点的Bax表达减轻和Bax/Bcl-2降低,7 d及14 d的Bcl-2表达增强.结论 脑缺血可引起BMSCs进入外周血及向脑组织归巢,达到峰值的时间存在差异,脑脉通可使动员后的骨髓干细胞增多;脑缺血引起的神经细胞凋亡与Bax表达上调相关,脑脉通可使BMSCs动员抑凋亡的作用增强并延长,其作用可能与早期(2 d、3 d)下调促凋亡基因Bax和后期(7 d、14 d)上调Bcl-2表达有关.     

调节“脑中血海”法联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠缺血脑组织血管再生的影响

目的：研究调节“脑中血海”中药脑脉1号联合骨髓间充质干细胞（bone marrow stromalstem cell,BMSC）移植对脑缺血再灌注大鼠血管再生和神经功能的影响。 方法：制作大鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,分为模型组、脑脉1号组、BMSC移植组、脑脉1号加BMSC移植治疗组,另选8只大鼠行假手术作为假手术组。分别于造模3、7、14d后进行神经行为学评分（behavior rating scale,BRS）,观察脑组织病理损伤,免疫组织化学法检测血管内皮细胞标志物CD31的表达量。 结果：与模型组相比,BMSC移植、脑脉1号以及二者联合治疗对大鼠BRS有显著改善（P=0．000）,但在该指标上两者无交互效应。与模型组相比,BMSC移植、脑脉1号以及二者联合可显著增加CD31表达（P=0．000）,且两者联合使用存在交互效应,与观察时点存在交互效应（P〈0．01）。 结论：调节“脑中血海”的中药脑脉1号可促进接受BMSC移植治疗的局灶性脑缺血大鼠的血管再生,改善BRS,随着疗程的延长,效果更加显著。     

Fas/FasL与氧自由基在肺纤维化大鼠细胞凋亡中的作用研究

目的 探讨肺纤维化大鼠肺组织中Fas/FasL介导的细胞凋亡与氧自由基的关系。方法 将32只大鼠分为3组：对照组（16只）、模型7d组（8只）及模型28d组（8只）,测定博莱霉素致肺间质纤维化大鼠肺组织的细胞凋亡率、Fas/FasL表达和丙二醛（MDA）的含量。结果 模型7d组肺组织细胞凋亡增加,Fas/FasL表达增高（P〈0.01）,28d组细胞凋亡、Fas/FasL表达升高更为明显;模型7d组肺组织中MDA含量明显增加（P〈0.01）,28d组MDA含量下降但仍高于对照组（P〈0.05）。结论 肺纤维化大鼠细胞凋亡和氧自由基增加;Fas/FasL系统与氧自由基在大鼠肺纤维化中起着重要作用。     

丹龙醒脑片对大鼠脑缺血再灌注后海马区AI及Fas／FasL、TNF-α表达的影响

目的探讨丹龙醒脑片对大鼠脑缺血再灌注海马区细胞凋亡指数（AI）、MasL、TNF-α表达的影响。方法运用大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型。将动物随机分为假手术组、模型组、丹龙醒脑片组、尼莫地平组,采用原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡神经细胞。采用免疫组织化学法,观察海马区Fas／FasL、TNF-α的表达。结果丹龙醒脑片能显著减轻神经细胞的损伤;假手术组有一定量的Fas,FasL、TNF—α表达,缺血后Fas／FasL、TNF—α迅速增加．丹龙醒脑片组显著抑制Fas／FasL、TNF—α的表达,模型组和丹龙醒脑片组、尼莫地平组比较,差异均具有统计学意义（p〈0．05）。结论抑制由缺血再灌注损伤诱导的Fas,FasL、TNF-α表达可能是丹龙醒脑片具有脑保护作用的机制之一。     

参芎注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠Fas、FasL蛋白表达的影响

目的观察参芎注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠Fas、FasL蛋白表达的影响,探讨其脑保护作用及机制。方法用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）局灶脑缺血再灌注模型,将实验大鼠随机分为假手术组、模型组、参芎注射液组,于缺血后2h再灌注1、3、7d后处死,HE染色观察组织病理学变化,免疫组化观察Fas、FasL蛋白的表达。结果与模型组比较,参芎注射液组Fas、FasL蛋白表达显著降低。结论参芎注射液可通过抑制Fas、FasL蛋白的表达,减轻局灶性脑缺血再灌注损伤,对脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用。     

大鼠急性脑缺血后CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3表达及其意义

摘要：目的动态观察大鼠急性脑缺血后不同时期外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞和脑组织中Foxp3的表达,探讨其在急性
缺血性卒中病理生理演变过程中的作用。方法48 只Wistar 大鼠按随机数字表法分为缺血组和假手术组。参考改良的
Zea-Longer插线方法将缺血组大鼠制作成右侧大脑中动脉线栓脑缺血动物模型。采用流式细胞术和免疫组化染色检测造模后
1、3、7、14 d时大鼠外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞表达和脑组织中Foxp3表达,同时采用改良NSS神经功能评分观察大鼠
行为学变化。结果缺血组和假手术组大鼠神经功能缺损评分在模型制备后逐渐下降（P<0.01）。流式细胞术显示脑缺血后1、
3 d时缺血组大鼠外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞的表达与假手术组比较差异无统计学意义（P>0.05）,7、14 d时表达明显高
于假手术组（P<0.05）,且与大鼠的神经功能评分呈负相关（r=-0.68,P=0.01）。免疫组化显示脑缺血后1 d时缺血组大鼠脑组织
中即可观察到Foxp3表达,且主要集中在缺血灶区域,在未缺血侧也可观察到Foxp3表达,但表达量较少,而假手术组脑组织中
未见Foxp3表达。结论CD4+ CD25+调节性T细胞参与了大鼠急性脑缺血后炎症免疫反应的发生发展过程,且在脑缺血后1 d
时便开始参与脑缺血性损伤的免疫调节,这种免疫调节对脑细胞有着保护作用。
     

清热化瘀方提取物预处理对大鼠脑缺血耐受作用及Fas/FasL表达的影响

目的：探讨脑缺血耐受机制及清热化瘀方作为预处理药物对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：采用线栓法制备大鼠大脑中动脉脑缺血预处理模型和再灌注模型。取健康雄性SD大鼠40只，随机分为假手术组、单纯脑缺血再灌注组、脑缺血预处理组、药物预处理组。再灌注后以免疫组化法测定Fas／FasL蛋白表达。TUNEL法检测细胞凋亡。结果：药物预处理能够抑制梗死后Fas／FasL表达（P〈0．05），其作用程度与缺血预处理接近；药物预处理能抑制缺血半暗区神经元凋亡（P〈0．05）。其作用程度与缺血预处理相当。结论：脑缺血预处理可能通过抑制促凋亡蛋白Fas／FasL的合成发挥其神经保护作用，Fas／FasL是脑缺血耐受机制之一；清热化瘀方通过下调脑缺血后Fas／FasL的表达而减轻再缺血后神经元凋亡。     

针刺任督脉对脑缺血再灌注大鼠血管内皮生长因子和CD34表达的影响

目的 探讨任督脉经穴针刺对脑缺血再灌注大鼠脑内血管内皮生长因子（VEGF）和CD34蛋白表达的影响.方法 将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和针刺任督脉组,每组又随机分为7、14 d和28 d各三个亚组.线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型.假手术组切开后不插线直接缝合.利用免疫组化法检测7、14 d和28 d大鼠脑内VEGF和CD34蛋白的表达情况.结果 大鼠MCAO后模型组和针刺任督脉组VEGF和CD34蛋白表达均增加,其中,模型组VEGF表达在7d为最低（169.97±2.42,P＜0.01）,后逐渐增多,CD34表达在14 d为高峰期（164.17±2.86,P＜ 0.01）,后逐渐减少.针刺任督脉组跟模型组的7、14 d和28 d相比,VEGF表达均增加（14.47±0.32） （P＜ 0.01）、（10.16±0.25）（P＜0.01）、（9.17±0.21）（P＜0.01）,且CD34表达均增加（16.00±0.20） （P＜ 0.01）、（19.34±0.38） （P＜ 0.01）、（16.50±0.27） （P＜ 0.01）.结论 针刺任督脉经穴可能通过上调脑内VEGF和CD34蛋白表达,促进微血管新生,这可能为其抗脑缺血再灌注损伤的作用机制之一.     

脑健胶囊对MCAO大鼠脑组织Fas凋亡途径的影响

目的研究脑健胶囊对大鼠脑组织Fas凋亡途径的影响,探讨脑健胶囊抗脑缺血后神经保护的作用机制。方法将SD大鼠随机分为补阳还五汤组、脑健胶囊组、模型组和假手术组共4组,每组25只。除假手术组和模型组给予等体积无菌蒸馏水以外,其余两组在大脑中动脉线检法复制局灶性脑缺血大鼠模型(MCAO)造模后给药,将各组大鼠分别存活1、3、7、14、28 d时取脑组织及腹主动脉采血。运用免疫组化法和Elisa法检测脑组织及血清中Fas相关死亡域蛋白(FADD)、Caspase-8、Caspase-3因子表达。结果脑缺血后大鼠均有神经功能障碍,经过治疗后,脑健胶囊能显著改善其神经功能缺失症状,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论脑健胶囊通过抑制缺血后脑组织FADD、Caspase-3、Caspase-8的表达,从而起到保护缺血后脑组织作用,减轻脑组织损伤。     

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及survivin、caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)移植对缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞凋亡及存活蛋白(survivin)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达的影响.方法 健康SD大鼠42只,随机分为假手术组(n=6)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(n=18)和MSC组(n=18).PBS组和MSC组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,假手术组除不插入尼龙线外,其余步骤相同.PBS组和MSC组分别于建模成功后3 h分别经尾静脉注射等体积的PBS液和已制备好的同种异体MSC悬液.每组于脑缺血90 min再灌注1 d、3 d、6 d时分别采用Western blot及免疫组化方法检测缺血侧脑组织survivin和caspase-3蛋白的表达,运用TUNEL方法检测细胞凋亡.结果 假手术组无神经功能缺损,未见细胞凋亡及未见survivin和caspase-3蛋白表达.与PBS组比较,MSC组于脑缺血90 min再灌注1 d开始,caspase-3蛋白表达减少,再灌注3 d开始,神经细胞凋亡数较少,神经功能缺损评分较低,survivin蛋白表达较高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 骨髓间充质干细胞移植能改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能,上调survivin蛋白表达,下调caspase-3蛋白表达,减少神经细胞凋亡,推测可能是其作用机制之一.     

p38／Fas／FasL对心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的调控作用

目的探讨p38／Fas／FasL对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的调控作用。方法SD大鼠20只随机分成2组（假手术组、模型组）,每组10只。结扎冠状动脉左前降支,30min后剪断结扎线制作心肌缺血再灌注模型。对心肌组织进行苏木精一伊红（H—E）染色,观察心肌组织病理变化;免疫印迹（WesternBlotting）检测Fas、Fas配体（FasL）、p38促分裂素原活化蛋白激酶（p38MAPK）以及磷酸化p38MAPK（P—p38MAPK）在缺血再灌注心肌组织中的表达;TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡模型。结果H—E染色结果显示,模型组心肌纤维变性;Western Blotting结果显示模型组大鼠心肌组织中Fas、FasL、p38MAPK及P—p38MAPK蛋白的表达明显增高;TUNEL结果显示模型组的心肌组织中细胞凋亡明显增多。结论心肌缺血再灌注时Fas、FasL、p38MAPK和P—p3SMAPK表达明显增多,且与细胞凋亡率呈正相关,提示心肌缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡可能是通过激活Fas／FasL／p38MAPK途径实现的。     

二期梅毒患者外周血淋巴细胞凋亡及其Fas、FasL表达的研究

目的:检测二期梅毒患者外周血淋巴细胞(PBLC)凋亡及其Fas、FasL的表达,探讨二期梅毒患者细胞免疫功能异常与淋巴细胞凋亡的关系。方法:采用流式细胞仪检测33例二期梅毒患者和30例正常人PBLC细胞凋亡及其Fas、FasL的表达。结果:梅毒患者CD3+、CD4+及CD16,56+细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01),CD8+细胞凋亡率两组比较差异无显著性(P>0.05)。梅毒患者CD3+、CD4+及CD16,56+细胞Fas与FasL表达均明显高于对照组(P<0.01),CD8+细胞Fas与FasL表达两组比较差异无显著性(P>0.05)。梅毒患者CD3+、CD4+及CD16,56+细胞凋亡率分别与其Fas、FasL表达呈显著正相关(r=0.685,P<0.01;r=0.712,P<0.01;r=0.705,P<0.01;r=0.694,P<0.01;r=0.716,P<0.01;r=0.727,P<0.01)。结论:二期梅毒患者细胞免疫功能异常可能与淋巴细胞凋亡过度有关,而淋巴细胞凋亡过度与Fas、FasL表达异常有关。     

脑脉通联合溶栓对脑缺血大鼠肺胃损伤的保护作用

目的:观察脑脉通联合溶栓治疗对大鼠脑缺血损伤肺胃组织的保护作用。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、尿激酶溶栓组(简称溶栓组)、脑脉通组、脑脉通加尿激酶溶栓组(简称联合组)。自体血栓结合线栓阻塞大鼠大脑中动脉制备血栓栓塞性脑缺血动物模型。大鼠分别于缺血后3、6和9h经导管进行区域动脉溶栓。动脉给药后24h,观察大鼠死亡率、颅内和胃出血率、脑组织和肺及胃病理损伤,测定脑梗死面积和肺含水量变化。结果:脑缺血损伤后大鼠死亡率、颅内和胃出血率增高,脑梗死面积增大,脑组织和肺及胃病理损伤明显,肺含水量增加;脑脉通和联合组大鼠死亡率、颅内和胃出血率降低,溶栓和联合组可减轻大鼠脑组织和肺及胃病理损伤,减小脑梗死面积,降低肺含水量;缺血9h脑、肺和胃病理损伤较3h明显,脑梗死面积增大,肺含水量增加;联合组9h病理损伤较溶栓组轻,脑梗死面积减小,肺含水量减少。结论:脑缺血损伤可引起大鼠胃和肺组织病理损伤,且随缺血时间延长呈加重趋势;溶栓治疗可引起颅内和胃出血,早期溶栓对脑和肺及胃组织损伤有明显保护作用;脑脉通联合溶栓可降低大鼠死亡率和胃出血率,对不同时间脑缺血大鼠肺和胃组织损伤均可发挥保护作用。     

胶原诱导关节炎大鼠CD44和Fas／FasL的表达

目的了解胶原诱导关节炎（CIA）大鼠血清及滑膜CD44、Fas／FasL的变化及其在类风湿关节炎（RA）发病机制中的作用。方法选取雌性Wistar大鼠40只,随机分为对照组8只,CIA组32只。对照组不做任何处理,CIA组建立CIA模型,30d后测定关节炎指数（AI）,用ELISA法检测血清CD44、Fas和FasL水平,RT—PCR检测滑膜CD44水平,免疫组化法检测滑膜Fas、FasL水平。结果CIA组大鼠血清CD44和Fas、FasL水平均高于对照组,差异有显著性（t=11．917～195．960,P〈0．01）;滑膜CD44、Fas的表达亦明显高于对照组,而滑膜FasL的表达低于对照组,差异有显著性（t=6．916～20．264,P〈0．01）。CIA组大鼠血清CD44、Fas／FasL水平与AI呈正相关（r=0．603、0．485,P〈0．05）,血清CD44水平与Fas／FasL水平呈正相关（r=0．533,P〈0．05）。结论CD44可能通过上调Fas的表达、下调FasL的表达,使得Fas和FasL结合减少,从而引起细胞凋亡减少,导致滑膜增生,参与RA的发病过程。     

脑脉通对脑缺血再灌注老龄大鼠脑组织一氧化氮合酶和核因子-κB的影响

目的:从脑组织核转录因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)、热休克蛋白70(heat-shockprotein70,HSP70)和一氧化氮合酶(nitric-oxidesynthases,NOSs)的表达变化来揭示脑脉通对老年大鼠脑缺血再灌注损伤的防护机制及其量效关系。方法:采用大脑中动脉闭塞方法建立脑缺血再灌注(缺血3h再灌注12d)动物模型,观察高、中、低剂量脑脉通对脑缺血再灌注大鼠神经症状积分,脑组织含水量、病理变化及大脑皮质NF-κB、HSP70和NOS表达的影响。结果:模型组大鼠脑组织含水量,神经症状积分及NF-κB、HSP70、神经型一氧化氮合酶(neuronalnitric-oxidesynthase,nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(endothelialnitric-oxidesynthase,eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(induciblenitric-oxidesynthase,iNOS)表达均高于假手术组;高、中、低剂量脑脉通组和尼莫地平组大鼠脑组织含水量,神经症状积分及NF-κB、iNOS和nNOS表达均低于模型组;高、中、低剂量脉通组和尼莫地平组大鼠HSP70和eNOS表达高于模型组;中剂量脑脉通组神经症状积分和nNOS表达低于尼莫地平组,eNOS表达高于尼莫地平组;中剂量脑脉通组HSP70和eNOS表达高于低剂量脑脉通组,其他各项指标均低于低剂量脑脉通组。结论:脑脉通拮抗大鼠脑缺血再灌注损伤的机制与抑制脑组织NF-κB、nNOS、iNOS和上调HSP70、eNOS表达有关,且以中剂量效果较好。     

椒目油对哮喘大鼠血清总IgE、IL-13水平及肺组织Fas／FasL表达的影响

目的观察椒目油（zanthoxylum seed oil,ZSO）对支气管哮喘大鼠模型血清中总IgE、IL-13水平及肺组织Fas／FasL表达的影响,为临床应用椒目油治疗哮喘提供实验证据和理论支持。方法将雄性SD大鼠60只随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组和椒目油治疗组,每组各15只。以卵白蛋白（ovalbumin,OVA）腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立哮喘大鼠模型。收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,行细胞计数;采用ELISA法检测血清中总IgE和IL-13的含量;以免疫组化ABC法检测肺组织中Fas／FasL蛋白的表达。结果椒目油和地塞米松均能降低哮喘肺组织BALF中白细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞的数量,与哮喘模型组相比较,有统计学意义（P〈0．01）。与哮喘组相比,椒目油和地塞米松均能显著下调哮喘大鼠血清中总IgE和IL-13的含量（P〈0．05）,并增强肺组织淋巴细胞表面Fas／FasL的蛋白表达（P〈0．05）。结论椒目油可抑制哮喘大鼠的免疫细胞产生IgE和IL-13,减轻Eos浸润,并可能通过增强Fas／FasL蛋白表达而促进炎症局部淋巴细胞凋亡,具有明显的抗炎、抗过敏作用。