NASBA技术在蚊媒传染病检测中的研究进展

核酸序列依赖性扩增技术(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)是以PCR为基础发展的恒温扩增技术,操作简单、高保守性、高灵敏度、高特异性、引物设计简单、检测周期短和兼容性强,适用于RNA的扩增,能在2 h将单链RNA扩增约109倍,无需特殊设备。NASBA技术已广泛应用于呼吸道病毒、肠道病毒、食物传播病毒、免疫缺陷病毒和动物源性病毒等病原体的检测。本文就NASBA技术的检测原理、技术特点、扩增产物检测方法以及在蚊媒传染病检测中的应用做一总结。     

结构DNA纳米技术在疫苗设计合成及应用领域的研究进展

结构DNA纳米技术因具有良好的序列可编程性、可寻址性和生物相容性等特点，成为多个领域的研究热点，尤其是近年来在疫苗和免疫治疗策略的应用上发展迅速。通过设计DNA折纸或者DNA纳米颗粒的结构，搭载抗原和/或佐剂，可诱导产生炎症反应及特异性抗体等。本文就基于结构DNA纳米技术在疫苗设计合成中的应用及相关的免疫考量，和目前该技术在疫苗领域的应用做一综述，并对其未来发展进行展望。     

人神经生长因子cDNA的体外扩增

目的：提取人胎盘组织中RNA,以其中的mRNA为模板,扩增人βNGFcDNA,并测定核苷酸序列,为进一步克隆及表达βNGFcDNA奠定基础。方法：采用异硫氢酸胍法提取RNA,采用RT－PCR技术扩增人βNGFcDNA;Sanger双脱氧链终止法测定核苷酸序列。结果：从人胎盘组织中提取RNA,以其中的mRNA为模板,扩增出人βNGFcDNA,经琼脂糖凝胶电鉴定为目的片段,序列测定证实与实际序列相符。结论：以人胎盘组织中的mRNA为模板,运用RT－PCR技术扩增βNGFcDNA,扩增时在5′端以限制性内切酶酶切位点加以修饰,以便于βNGF基因的克隆及表达。     

未来十年我国传染病预防发展趋势的战略对策

5 传染病预防科学研究的发展前沿、活跃领域、带头领域、滞后领域,我国的差距及存在问题5.1 发展前沿分子生物学、分子遗传学和传染病流行病学研究的进展为带动传染病预防科研的前沿学科。分子生物学和分子遗传学是传染病预防的科学研究基础。这两门微观研究学科结合在一起促进了病原学、诊断学、治疗技术和疫苗科研的发展。传染病流行病学为宏观研究领域,其研究进展可宏观地指引微观研究的方向,并可在群体防治中应用及检验微观研究的成果。这样,微观和宏观研究相结合,共同成为了传染病预防科研的前沿阵地。5.2 活跃领域医学微生物的DNA、RNA 序列研究、基因工程技术的应用、脂多糖和外膜蛋白的研究、疫苗更新换代的研究和新疫苗的研制,是微观研究的活跃领域。不断     

肿瘤坏死因子α真核表达载体的构建

目的：克隆人肿瘤坏死因子α（TNF-α），构建真核表达载体pEGFP—C1／hTNF-α。方法：以总RNA为模板，应用RT—PCR方法扩增TNF-α上游序列长约702bp的片段，克隆入绿色荧光蛋白GFP的基因下游，测序鉴定。结果：DNA测序结果与GeneBank中TNF-αmRNA序列（NM-000594）完全一致，片段长度为702bp。结论：人肿瘤坏死因子的真核表达载体pEGFP—C1／hTNF-α构建成功，为TNF-α功能的进一步研究奠定了基础。     

一种新的分子治疗方式——RNAa

RNA激活是最近发现在转录水平激活目的基因表达的新的RNA调控方式,能够激活基因转录的小分子RNA被称为小激活RNA(saRNA)。和siRNA的沉默效果相比,RNAa的激活作用更为持久,具有更为广泛的肿瘤治疗范围,有可能成为基因功能研究及疾病治疗的一种新的有效工具。     

聚合酶链反应在寄生虫学研究中的进展

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction简称PCR),是一种在体外将特异性DNA序列进行高效扩增的方法。自1985年由美国Cetus公司人类遗传部的Saski等研究成功以来,PCR技术在短短的几年内得到迅速发展。由于PCR具有简单、快速、敏感、特异和高效等优点,目前已广泛用于遗传性疾病诊断、产前诊断、病毒学、细菌学、肿瘤研究和法医学等领域,本文仅就其在寄生虫学研究中的应用进展作一综述。     

甲肝病毒的核苷酸变异研究

[目的]揭示甲肝病毒在甲肝疫苗使用多年后的变异情况。[方法]用逆转录(RT)、PCR、套式PCR(nPCR)扩增来自病人血清中的甲肝病毒和甲肝疫苗H2减毒株的5’端非编码区中的核苷酸片段。扩增的片段进行核酸序列测定，并与甲肝疫苗H2减毒株的相应序列进行比较。[结果]从22份RT-PCR-nPCR甲肝病人血清中扩增到3个目的片段，经测序比较，其中两个扩增片段的序列与甲肝疫苗株的相应序列一致，另一扩增片段的序列与甲肝疫苗株的相应序列比较有一个核苷酸的变异。[结论]甲肝病毒在甲肝疫苗使用多年后没有变异。     

基因疫苗临床研究进展

自1993年,Ulmer等开始对流感病毒基因疫苗进行研究以来,在短短的几年中基因疫苗的研究不仅从病毒性疾病扩展到各种微生物感染引起的传染病,而且在肿瘤和自身免疫性疾病的治疗中也取得了重要的进展。基因疫苗Ⅰ/Ⅱ期临床试验研究结果表明,人体对基因疫苗的接种具有良好的耐受性和安全性;基因疫苗能诱导机体产生特异性的体液和细胞免疫应答,特别是能有效地诱导CTL的细胞免疫应答,因此在难治性传染病(如艾滋病和慢性病毒性肝炎)、肿瘤以及自身免疫性疾病的预防和治疗中具有广阔的应用前景,值得进一步深入研究和推广。     

肿瘤核酸疫苗研究进展

基因疫苗是当前疫苗研究领域中的热点之一。肿瘤核酸疫苗主要包括与肿瘤相关抗原有关的全长、表位、独特型和融合脱氧核糖核酸疫苗,能够自主复制的核糖核酸疫苗,与树突细胞相关的肿瘤基因疫苗等。现对肿瘤核酸疫苗的研究进展进行综述。     

SARS-CoV人工合成基因CAGZ的克隆和表达

严重急性呼吸道综合征（severe acute respiratory syndrome。SARS）是一种传播快、病死率高、严重威胁人类健康和生命的急性传染病。WHO宣布一种新的冠状病毒（coronavirus）是引起SARS的病原体，即SARS—CoV，属于单链正义RNA病毒，其中纤突蛋白（Spike，S）是致病过程中的主要毒力因子，S蛋白含有若干B细胞表位。能够诱导中和抗体产生，这些特征使它成为研究基因工程疫苗的最佳候选结构蛋白。本研究应用生物信息学技术，对S蛋白结构进行分析，人工合成编码S蛋白抗原表位的嵌合基因，并将其克隆、表达，为SARS重组疫苗的研制奠定基础。现将结果报告如下。     

乙肝核心抗原在疫苗研究中的应用

寻找有效的疫苗治疗感染性疾病和肿瘤一直是医学研究的热点,乙肝核心抗原(Hepatitis B core antigen,HBcAg)因其独特的理化性质和免疫学特性,在疫苗研究中得到广泛的重视.本文就乙肝核心抗原在疫苗研究中的应用进展作一综述.     

B群脑膜炎球菌疫苗免疫原性评价技术研究进展

流行性脑脊髓膜炎(流脑)是一种病死率高且后遗症严重的急性呼吸道传染病, 脑膜炎球菌疫苗是预防控制流脑的有效措施。目前, 包括中国在内, B群流脑已成为全球主要流行的血清群。脑膜炎球菌ACYW等疫苗主要成分为荚膜多糖, 而B群脑膜炎球菌疫苗主要成分为蛋白, 有外膜囊泡(OMV)疫苗和重组蛋白疫苗两种。B群脑膜炎球菌疫苗免疫原性的评价方法包括人补体血清杀菌试验(hSBA)及脑膜炎球菌抗原分型系统(MATS)、脑膜炎球菌表面抗原表达试验(MEASURE)、脑膜炎球菌抗原分型系统(gMATS)和Bexsero 疫苗抗原序列分型(BAST)等替代方法。疫苗免疫原性评价技术是疫苗研发和临床试验研究的基础, 而我国目前尚无B群脑膜炎球菌疫苗。因此, 本文就B群脑膜炎球菌疫苗免疫原性评价技术研究进展进行综述, 以期为我国B群脑膜炎球菌疫苗研发和后期免疫原性评价及临床试验研究提供技术指导。     

多肽疫苗研究进展

多肽疫苗以特异性抗原表位作为疫苗抗原成分，能够有效地减少接种不良反应，增强疫苗的免疫原性，具有良好的应用价值和前景。本文综述了多肽疫苗的制备、诱导免疫反应的原理、疫苗递送载体、优势和不足，以及细菌、病毒和肿瘤多肽疫苗的研究现状，为多肽疫苗的研发提供参考。     

基因疫苗临床研究进展

自1993年Ulmer等开始对流感病毒基因疫苗进行研究以来,在短短的几年中基因疫苗的研究不仅从病毒性疾病扩展到各种微生物感染引起的传染病,而且在肿瘤和自身免疫性疾病的治疗中也取得了重要的进展。基因疫苗I/Ⅱ期临床试验研究结果表明,人体对基因疫苗的接种具有良好的耐受性和安全性;基因疫苗能诱导机体产生特异性的体液和细胞免疫应答,特别是能有效地诱导CTL的细胞免疫应答,因此在难治性传染病（如艾滋病和慢性病毒性肝炎）、肿瘤以及自身免疫性疾病的预防和治疗中具有广阔的应用前景,值得进一步深入研究和推广。     

lncRNA作为ceRNA在卵巢癌中的研究进展

人类基因组中大部分为非编码区，转录产生非编码RNA（non-coding RNA，ncRNA）。ncRNA 虽然不能翻译成蛋白，但可通过对mRNA直接或间接地调控影响人体生理、病理过程。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是ncRNA的重要分类，越来越多的研究表明lncRNA参与癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和耐药等，影响肿瘤的发生和发展，lncRNA可作为肿瘤早期诊断、治疗和判断预后的潜在靶向标记物。竞争性内源RNA（competitive endogenous RNA，ceRNA）假说的提出使人们对肿瘤发生机制有了进一步的了解。在ceRNA的形成中，lncRNA有着重要作用。近年lncRNA作为ceRNA在卵巢癌中的研究日益增多。本文就lncRNA形成的ceRNA网络在卵巢癌的发生发展过程中的研究进展进行综述。     

现代分子生物学与生物恐怖主义

分子生物学技术的快速发展,使制造新的药剂强有力的生物武器将成为可能,新研制的突变型保护抗原起保护作用,提供了新的疫苗研制,可代替新型更有效的防护方法,而引起机体保护性抗体反应。DNA基本技术,通过选择量化mRNA表达,PCR技术和纳米技术的应用,用来鉴别生物恐怖毒剂DNA序列,以防范生物恐怖主义袭击。     

RNAi-基因敲除技术在妇科领域中的应用

RNAi是存在于真核生物体内的一种阻断外源基因表达的自我防御体系。它是由双链RNA介导的使与其互补的具有同源序列的单链RNA进行特异性的降解。随着这几年RNAi研究的不断深入，RNAi的干涉机制逐渐被阐明。该文介绍了RNAi的干涉机制和在妇科肿瘤领域中的应用进展。RNAi技术必将成为妇科肿瘤领域基因功能研究、细胞信号传导以及基因治疗的一种强大的新型工具。