基于分子对接的方法探讨桑根酮C对MC3T3-E1细胞的作用

目的:观察桑根酮C(SanC)对地塞米松(DEX)作用下小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响,并探讨其作用机制。方法:将SanC与同源建模所得的Runt-相关转录因子2(Runx2)蛋白结构进行分子对接。不同浓度SanC(8,16,32μmol·L^-1)和1μmol·L^-1DEX共同作用MC3T3-E1细胞,而后采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测SanC对MC3T3-E1成骨细胞增殖影响。试剂盒测定MC3T3-E1成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性和茜素红染色检测骨矿化结节的形成。采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Runt-相关转录因子2(Runx2),ALP,和锌指结构转录因子(Osterix)mRNA的表达水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Runx2蛋白表达。结果:SanC与Runx2对接打分为-9.78。与正常组比较,DEX组显著降低细胞存活率(P<0.01),其中7 d存活率差异达到最大;与DEX组比较,SanC能显著促进MC3T3-E1的细胞增值(P<0.01),其中32μmol·L^-1SanC作用细胞7 d增殖率差异达到最大。与正常组比较,DEX组Runx2,ALP和Osterix mRNA的表达均有一定程度升高(P<0.05);与DEX组比较,不同浓度SanC组依赖性上调Runx2,ALP和Osterix mRNA的表达(P<0.01)。与正常组比较,DEX组Runx2蛋白表达明显下降(P<0.05);与DEX组比较,SanC干预下细胞Runx2蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:桑根酮C能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和矿化,其机制可能与上调Runx2表达有关。     

二仙汤含药血清通过BK通道对H2O2诱导的MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响

探讨二仙汤(Erxian Decoction, EXD)含药血清通过BK通道(BK channel)对氧化应激的MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化的影响。构建H₂O₂诱导MC3T3-E1细胞氧化应激模型，使用3 mmol·L^-1的氯化四乙基铵(tetraethylamine chloride, TEA)阻断MC3T3-E1细胞BK通道。将MC3T3-E1细胞分为对照(control)组、模型(model)组、EXD组、TEA组和TEA+EXD组。MC3T3-E1细胞按照分组分别处理2 d后，加入700μmol·L^-1 H₂O₂继续培养2 h, CCK-8法检测细胞增殖活性，碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)试剂盒法检测细胞ALP活力，蛋白免疫印迹法检测细胞蛋白表达，实时荧光定量PCR检测细胞mRNA表达，茜素红染色法检测成骨细胞矿化区域。结果显示，与control组相比，model组细胞增殖活性和ALP活力显著降低，BK通道α...     

淫羊藿苷促前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的实验研究

目的探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)促进前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的机制。方法采用不同浓度(10~(-10)~10~(-5)mol/L)的ICA干预前成骨细胞MC3T3-E1 3、6、9天后采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测试剂盒测定ALP活性,确定ICA最适促分化浓度。最适ICA浓度干预前成骨细胞MC3T3-E1 7天后应用实时定量PCR法(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测骨形态发生蛋白(BMP)和Wnt/β-catenin信号通路相关分子(BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclin D1)基因表达。ICA分别与BMP、Wnt/β-catenin信号通路抑制剂(Noggin、DKK-1)联合干预前成骨细胞MC3T3-E1后,茜素红钙结节染色观察钙化程度以及Western blot检测BMP-2蛋白表达变化。结果 ICA促进前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化,且10~(-9)mol/L ICA促进分化的能力最强。与对照组比较,ICA能明显上调BMP和Wnt/β-catenin信号通路相关分子(BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclin D1)mRNA表达(P0.01)。Noggin或DKK-1能抑制前成骨细胞MC3T3-E1钙化,且两者联合作用时抑制更加明显。与ICA单独作用比较,ICA与DKK1联合干预后BMP-2蛋白表达水平下降(P0.01)。结论 ICA可能通过Wnt/β-catenin/BMP-2信号通路调控前成骨细胞MC3T3-E1的成骨分化。     

白芍总苷对小鼠成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的研究白芍总苷(TGP)对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、分化和矿化的影响。方法采用MTT法和流式细胞术检测TGP对MC3T3-E1细胞增殖和细胞周期的影响;诱导MC3T3-E1成骨分化,通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性和RT-PCR法检测人类相关转录因子2(Runx2)基因表达,分析TGP对成骨分化的影响,采用茜素红染色分析TGP对矿化的影响。结果 3、10μg/L TGP均能促进MC3T3-E1细胞增殖(P0.05,P0.01);10μg/L TGP可使G1期细胞的比例减少,S+G2期细胞的比例增加(P0.05);与对照组比较,TGP处理组细胞的ALP活性和Runx2表达水平显著升高(P0.05,P0.01),且矿化结节量明显增加。结论 TGP具有促进MC3T3-E1细胞增殖和分化成熟的能力,为炎性骨质疏松的治疗策略提供了实验依据和治疗思路。     

牛膝甾酮对小鼠MC3T3-E1细胞成骨分化和增殖的影响

目的研究牛膝甾酮(IS)对小鼠成骨细胞系(MC3T3-E1细胞)增殖、分化的影响及其可能的分子机制。方法将MC3T3-E1细胞分为对照组及IS不同浓度组(10~(-4)～10~(-1)ng/μL),24、48 h后采用细胞计数(CCK8)试剂盒检测细胞增殖,7、14天后采用碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒检测ALP活性,茜素红染色检测矿化结节,原位末端标记(TUNEL)试剂盒检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测成骨分化相关标志物Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、骨保护素(OPG)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、ALP以及雌激素受体alpha(ERα)、雌激素受体beta(ERβ) mRNA的表达水平。结果与对照组比较,在干预48 h后,10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)ng/μL IS能抑制细胞的增殖(P0.05),但对细胞凋亡无明显影响。10~(-4)、10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)ng/μL IS均能够促进ALP活性及矿化结节的形成(P0.05),亦能促进ERα、OPG、CollagenⅠ、ALP mRNA表达(P0.05);10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)ng/μL IS均能促进OPN、OCN mRNA表达(P0.05),10~(-1)ng/μL IS能够促进ERβmRNA表达(P0.05)。结论 IS能促进MC3T3-E1细胞的成骨分化,其可能机制与上调成骨分化标志物及提高ERαmRNA表达有关。     

淫羊藿总黄酮胶囊活性成分宝藿苷Ⅱ对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

目的:从淫羊藿总黄酮胶囊中制备分离宝藿苷Ⅱ,检测不同浓度宝藿苷II对体外培养的MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。方法:分别用10、20、40nmol/ml的宝藿苷II作用MC3T3-E1细胞,CCK-8法检测细胞存活率;比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活力;ELISA法检测骨钙素(OT)含量;茜素红染色分析并用氯化十六烷基吡啶测定钙沉积量;Western Blot法检测宝藿苷Ⅱ对BMP2信号通路蛋白表达的影响。结果:10、20、40nmol/ml的宝藿苷Ⅱ均可明显促进MC3T3-E1的增殖;提高MC3T3-E1分泌ALP和OT的能力;矿化结节数量明显增多且钙沉积量吸光度值显著增大;明显提高BMP2、Runx2和Osterix蛋白表达量,且呈剂量依赖性。结论:淫羊藿总黄酮胶囊活性成分宝藿苷II可以明显促进MC3T3-E1细胞的增殖分化。     

新疆塔里木马鹿茸多肽对小鼠前成骨细胞的影响

目的探讨新疆塔里木马鹿茸多肽对小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1)的作用机制。方法以BCA蛋白质定量试剂盒测定马鹿茸多肽样品的浓度;体外培养MC3T3-E1细胞,采用BCIP/NBT碱性磷酸酶(ALP)显色试剂盒染色;诱导分化形成矿化结节,进行茜素红染色;将MC3T3-E1细胞置于马鹿茸多肽高、中、低(10、1.0、0.1μg/m L)3个浓度的培养基中培养,采用MTT法和微量酶标法检测马鹿茸多肽不同浓度对MC3T3-E1细胞增殖和ALP合成的影响。结果 BCA蛋白质定量检测结果显示,马鹿茸多肽蛋白浓度为0.07 mg/m L。体外培养MC3T3-E1细胞ALP染色呈淡蓝色,阳性率为90%;矿化结染色呈红色。与对照组比较,第3、7日马鹿茸多肽高、中、低剂量组可促进MC3T3-E1细胞增殖,且呈现剂量依赖效应;第3日马鹿茸多肽高、中、低剂量组均可促进MC3T3-E1细胞分泌ALP(P0.01),且呈现一定的剂量效应。结论塔里木马鹿茸多肽通过促进MC3T3-E1细胞增殖和ALP合成的分泌,达到治疗骨质疏松症的作用。     

莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1细胞炎症的保护作用及机制研究

目的研究莫诺苷对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导成骨细胞MC3T3-E1炎症的保护作用,探讨Caspase、MAPK和NF-κB通路调控机制。方法 TNF-α(50 ng/m L)诱导MC3T3-E1细胞,制备细胞炎症模型;MTT法检测莫诺苷对MC3T3-E1细胞增殖的影响,并检测不同浓度的莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1细胞活力的影响;ELISA法检测细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6的水平;Western blotting法检测Caspase-3、Caspase-9、p-ERK、p-JNK、p-p38、p-IκBα、IκBα和NF-κB等相关蛋白的表达。结果莫诺苷能够促进正常MC3T3-E1细胞增殖,TNF-α诱导MC3T3-E1细胞增殖受到抑制,而莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1细胞具有保护作用;莫诺苷可以抑制TNF-α诱导MC3T3-E1细胞IL-1β和IL-6的释放;降低Caspase-3、Caspase-9、p-ERK、p-JNK、p-p38、p-IκBα蛋白的表达,升高IκBα蛋白表达,对NF-κB p65无明显影响。结论莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1炎症细胞有保护作用,其机制为抑制炎性因子的释放、抑制MAPK和NF-κB通路的激活、抑制凋亡蛋白Caspase的表达,从而抑制MC3T3-E1细胞的凋亡。     

新疆马鹿角提取物对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

目的 研究新疆马鹿角提取物对体外培养成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响.方法 以MC3T3-E1细胞作为药物筛选模型,用MTT法测定不同浓度的新疆马鹿角提取物促细胞增殖作用,采用碱性磷酸酶活性测定和骨钙素含有量检测,观察不同浓度的新疆马鹿角提取物促细胞分化作用,以Von kossa钙化染色法观察新疆马鹿角提取物溶液对MC3T3-E1细胞钙化能力的影响.结果 MTT检测结果表明5×102、5×101、5 μg/mL新疆马鹿角提取物溶液在24、48、72 h均可促进MC3T3-E1细胞增殖,且呈时间依赖性.ALP检测结果表明5×102、5×101 μg/mL新疆马鹿角提取物溶液在24、48、72 h可提高MC3T3-E1细胞内ALP的活性.BGP检测结果表明5×102、5×101 μg/mL新疆马鹿角提取物溶液在8、12 d可促进MC3T3-E1细胞内BGP的合成和分泌.Von kossa染色钙化面积百分比结果表明3组新疆马鹿角提取物溶液与对照组比较无明显区别.结论 新疆马鹿角提取物可促进成骨细胞株MC3T3-E1的增殖和分化能力.     

六味地黄丸含药血清对MC3T3-E1细胞增殖以及对Runx2、FOXO1 mRNA表达的影响

目的探讨六味地黄丸含药血清对MC3T3-E1细胞增殖以及对Runx2、FOXO1 mRNA表达的影响。方法制作六味地黄丸混悬液,对成年Wistar大鼠进行灌胃,获取六味地黄丸含药血清。常规培养MC3T3-E1细胞24 h后更换含10%不同浓度含药血清的培养基,分别培养48 h和72 h后用CCK-8法检测MC3T3-E1细胞的增殖;对MC3T3-E1细胞进行诱导培养22天后进行饥饿培养24h,随后更换含10%不同浓度的含药血清,培养72 h后检测Runx2、FOXO1 mRNA表达。结果六味地黄丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖,并且呈现一定的剂量依赖性;同时六味地黄丸含药血清各剂量组均能明显促进Runx2 mRNA的表达(P0.01),高剂量组的表达明显高于低剂量组(P0.01)。高剂量组的FOX01 mRNA表达明显高于其他3组(P0.01)。结论六味地黄丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖,同时能促进Runx2、FOXO1 mRNA表达。     

左归丸通过线粒体途径抗叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡

目的:观察左归丸对叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的保护效应,探讨其作用机制是否与其干预线粒体途径有关。方法:以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,建立叔丁基过氧化氢(t-BHP)成骨细胞MC3T3-E1氧化应激模型,实验分为空白组,t-BHP组,左归丸+t-BHP组,补佳乐+t-BHP组。孵育24,48,72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测左归丸含药血清对t-BHP诱导MC3T3-E1细胞存活的影响;孵育48 h后,采用吖啶橙溴乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡,采用Hoechst 33342染色法观察凋亡细胞核变化,采用罗丹明123荧光染色法观察线粒体膜电位的改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法分析线粒体蛋白家族B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,t-BHP组显著抑制细胞增殖(P0.05,P0.01),细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2蛋白表达明显下调(P0.01);与t-BHP组比较,左归丸加t-BHP组促进暴露于t-BHP诱导的MC3T3-E1氧化损伤细胞的存活(P0.01),48 h者尤佳,逆转细胞凋亡情况,提高细胞线粒体膜电位,上调Bcl-2蛋白表达(P0.05),抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:左归丸含药血清能够抗t-BHP诱导的MC3T3-E1细胞凋亡,其作用机制可能与其干预线粒体途径有关。     

柚皮苷对小鼠成骨细胞MC3T3 E1增殖、分化和矿化的影响

目的:检测骨碎补有效成分柚皮苷对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响.方法:以成骨细胞株MC3T3-E1细胞为体外药效的试验模型(药物组和对照组),通过CCK-8法观察10,1,0.1,0.01,0.001,0.000 1μmol·L~(-1)的柚皮苷溶液对MC3T3-E1细胞增殖能力的影响;通过乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验观察以上浓度的柚皮苷溶液对细胞毒性能力的影响.通过骨形成蛋白-2(BMP-2),碱性磷酸酶(ALP)活性测定和骨钙素(OC)含量测定观察柚皮苷对MC3T3-E1细胞分化能力的影响;通过Von kossa钙化染色法观察柚皮苷对MC3T3-E1细胞钙化能力的影响.结果:高浓度的柚皮苷溶液在12 h和24 h时能促进MC3T3-E1细胞的增殖作用.而低浓度的柚皮苷溶液则无此作用.所测的各个组别细胞毒性百分比都较小,且随着时间的推移(12,24,48 h)变化较小.光镜下观察各个时间点细胞的密度和形态也未发生明显的变化.BMP-2细胞免疫化学结果表明,24,48 h时柚皮苷浓度10,1,0.1μmol·L~(-1)包浆内棕色着色比对照组明显.ALP检测结果表明48 h时,1,0.1μmol·L~(-1)的柚皮苷溶液可提高MC3T3细胞的ALP活性(P<0.05).72 h时,0.1 μmol·L~(-1)的柚皮苷溶液可提高MC3T3细胞的ALP活性(P<0.05).OC检测结果表明12 d时,10,1μmol·L~(-1)柚皮苷溶液作用组与对照组相比OC活性明显提高(P<0.05).Vonkossa染色钙化面积百分比结果表明3组柚皮苷溶液作用组与对照组相比无明显区别.结论:柚皮苷溶液可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖能力和分化能力.     

JNK通路对左归丸含药血清调控MC3T3 成骨细胞Runx2 mRNA表达的影响

目的:探讨c-Jun氨端激酶(JNK)信号通路在左归丸含药血清调控成骨前体细胞(MC3T3-E1)增殖和成骨特异转录因子核心结合因子(Runx2) mRNA表达中的作用.方法:以MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,选用JNK特异抑制剂SP 600125,实验分为空白对照组、SP 600125组、左归丸组、左归丸加SP 600125组、倍美力组、倍美力加SP 600125组.孵育48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测SP600125对左归丸含药血清干预MC3T3-E1成骨前体细胞增殖作用的影响,采用Western blot法分析JNK蛋白磷酸化水平,采用Real Time RT-PCR法检测成骨细胞特异转录因子Runx2 mRNA表达情况.结果:与空白对照组比较,左归丸含药血清组显著促进细胞增殖,明显上调p-JNK蛋白和Runx2 mRNA表达(P＜0.01);SP600125显著抑制左归丸含药血清诱导的增殖和p-JNK蛋白表达(P＜0.01),对Runx2 mRNA表达的影响不显著.结论:JNK信号通路的激活可能参与了左归丸含药血清诱导的MC3T3-E1成骨前体细胞增殖,但左归丸含药血清诱导的Runx2mRNA高表达对JNK信号通路依赖不显著.     

补肾健脾活血方对高糖环境下MC3T3-E1细胞的成骨分化及凋亡的影响

目的探讨补肾健脾活血方对高糖环境下MC3T3-E1细胞的成骨分化和凋亡的影响。方法以MC3T3-E1细胞为研究对象,制备补肾健脾活血方含药血清,实验分为空白对照组、高糖组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、二甲双胍组。采用流式细胞术检测MC3T3-E1成骨细胞凋亡,蛋白质免疫印记技术(Western-blot)检测来观察成骨分化相关蛋白的表达。结果与高糖组相比,中药组对高糖(25mmol/L)条件下MC3T3-E1细胞能够一定程度上抑制成骨细胞凋亡,以中药中剂量组效果更为显著(P0.01);高糖条件下的中药组能够促进成骨分化相关蛋白BMP2和Runx2的表达,以中药高剂量组效果较为显著(P0.01)。结论补肾健脾活血方能够促进高糖环境下MC3T3-E1成骨细胞分化和抑制凋亡的作用。     

黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞活性的影响及其机制探讨

目的:探讨黄芪甲苷对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1细胞活性的影响及其作用机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞,用不同浓度的黄芪甲苷进行预处理后,MTT法测定细胞增殖情况,碱性磷酸酶法(ALP)测定细胞分化情况,Western blotting分析转化生长因子TGF-β1、成骨细胞信号转导蛋白Smad2/3表达水平;应用小干扰RNA(siRNA)转染法观察TGF-β1 siRNA对MC3T3-E1细胞增殖及活性的影响,加入抗Smad2/3抗体,探讨Smad2/3在黄芪甲苷介导的细胞增殖分化中的作用。结果:黄芪甲苷在一定浓度范围内剂量依赖性促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力。进一步机制分析表明,黄芪甲苷处理可诱导TGF-β1蛋白表达,TGF-β1siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降;此外,黄芪甲苷可显著性诱导Smad2/3表达,经TGF-β1 siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的Smad2/3表达显著下降;加入Smad2/3抗体后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降。结论:黄芪甲苷可通过刺激TGF-β1-Smad2/3通路的活化促进成骨细胞的增殖和分化,从而有利于骨形成。因此,本研究将为骨折愈合的治疗提供新的研究方向。     

土家传统药刺老苞总皂苷对H_2O_2诱导的MC3T3-E1成骨细胞损伤改善

目的:在H2O2胁迫下,研究刺老苞总皂苷增强MC3T3-E1成骨细胞抗自由基损伤的作用。方法:用H2O2作用MC3T3-E1成骨细胞,建立自由基损伤细胞模型。培养的成骨细胞分为对照组、模型组、刺老苞总皂苷低剂量组(1×10-8mol/L)、刺老苞总皂苷中剂量组(1×10-7mol/L)和刺老苞总皂苷高剂量组(1×10-6mol/L)。测定不同处理组细胞活力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性自由氧(reactive oxygen species,ROS)含量、脂质过氧化物(lipid oxygen,LPO)含量,同时利用荧光偏振法测定细胞膜流动性。结果:模型组细胞活力、SOD活性、细胞膜流动性均比不同刺老苞总皂苷组有显著降低(P﹤0.01),而ROS含量、LPO含量均比不同刺老苞总皂苷组有显著升高(P﹤0.01)。结论:H2O2摄入会导致MC3T3-E1成骨细胞的氧化损伤,而刺老苞总皂苷可以预防或降低此类损伤对细胞的影响。     

刘氏正骨方对BMSCs成骨分化中Wnt信号通路及Sclerostin基因的影响

目的探究刘氏正骨方对骨髓间充质干细胞成骨分化中Wnt信号通路的影响。方法使用刘氏正骨方含药血清或BMP-2对骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行28 d成骨诱导后,检测BMSCs的细胞活性、ALP活性及细胞矿化情况;采用RT-PCR和Western blotting法检测细胞中Col 1A2、OCN、OPN和Sclerostin基因表达情况。使用含2.5%、5%、10%中药血清对BMSCs进行14 d体外干预,检测Wnt信号通路关键因子LRP5、Sclerostin及成骨关键转录因子Runx2的表达情况。结果1)中药组和BMP-2组中BMSCs中ALP活性及细胞矿化现象明显强于对照组,且中药组明显高于BMP-2组(P<0.05);Col1A2、OCN、OPN的表达也呈现相同趋势改变(P<0.05),但Sclerostin基因呈现明显表达下调(P<0.05)。2)高浓度中药血清可上调LRP5和Runx2表达(P<0.05),下调Sclerostin基因表达(P<0.05)。结论刘氏正骨方可以促进BMSCs体外成骨分化,其作用机制可能与下调Sclerostin基因表达、激活Wnt信号通路有关。     

去甲二氢愈创木酸对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响

目的探讨不同浓度去甲二氢愈创木酸(NGDA)对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响及其机制。方法应用MTT法测定0,5,10,20,30μmol/L NGDA培养后成骨细胞MC3T3-E1增殖情况,利用流式细胞技术检测0,5,10,20μmol/L NGDA培养后MC3T3-E1细胞周期,用Western blotting法检测0,10,20,30,60μmol/L NGDA培养后MC3T3-E1成骨细胞m TOR通路蛋白表达情况。结果 NGDA浓度从5μmol/L开始有促进成骨细胞MC3T3-E1增殖的作用,20μmol/L时MC3T3-E1增殖活性最强,而30μmol/L时MC3T3-E1增殖活性明显低于20μmol/L时(P<0.05)。0,5,10,20μmol/L浓度的NGDA刺激下,成骨细胞MC3T3-E1进入S期的比例分别为28.9%,38.3%,44.2%,58.2%。NDGA浓度在20μmol/L时m TOR信号通路下游底物p-4E-BP1、p-S6水平明显高于0μmol/L时(P<0.05),但30μmol/L时m TOR信号通路下游底物p-4E-BP1、p-S6水平开始明显下降。结论低浓度NDGA可明显促进成骨细胞MC3T3-E1增殖,诱导细胞周期进入S期,且呈剂量依赖关系,这一作用可能是通过对m TOR信号通路的激活来完成的。     

老鹳草素通过Wnt/β-catenin信号通路影响小鼠骨髓基质干细胞的增殖和成骨分化

目的:观察Wnt/β-catenin信号通路在老鹳草素诱导小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化中的作用机制。方法:分离、培养小鼠BMSCs,分为对照组(DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素低剂量组(10-9mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素中剂量组(10-8mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量组(10-7mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量+DKK1(Wnt/β-catenin信号通路特异性阻断剂)组和DKK1组。成骨诱导第7天时,采用CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量。成骨诱导48 h时,采用Real time-PCR和Western-blot检测各组Wnt/β-catenin信号通路的关键信号分子Wnt3a、β-catenin、GSK-3β、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达。结果:成骨诱导第7天时,老鹳草素各剂量组明显促进BMSCs的增殖,呈剂量依赖性(均P<0.05);同时ALP活性及OCN含量较对照组显著升高,呈剂量依赖性(均P<0.05)。成骨诱导48 h时,老鹳草素各剂量组Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达较对照组显著上调,GSK-3βmRNA和蛋白表达较对照组显著下调,呈剂量依赖性(均P<0.05)。加入DKK1后,细胞增殖受到显著抑制,ALP活性及OCN含量显著降低(均P<0.05);同时Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达显著下调,GSK-3βmRNA和蛋白表达显著上调(均P<0.05)。结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs的增殖及向成骨方向分化,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。