化痰通络方对IL-1β刺激的RA滑膜成纤维细胞增殖及TNF-α和aFGF的影响

目的探讨化痰通络方对IL-1β刺激的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibroblast,RASFB)增殖及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,a FGF)分泌的影响。方法体外培养RASFB细胞株,加入终浓度为1、5、10、20μg/L的IL-1β24、48 h以WST-1法检测RASFB增殖率;然后选择20μg/L的IL-1β为诱导剂量为IL-1β组。在此基础上加入终浓度(V/V)为5%、2%、1%的高、中、低浓度化痰通络方水煎液为高、中、低浓度化痰通络方组,培养24、48 h,并设空白对照组。比较RASFB的增长率。ELISA法检测各组TNF-α和a FGF含量,RT-PCR检测TNF-α和a FGF mRNA表达。结果24、48 h时,与IL-1β1μg/L比较,IL-1β5、10、20μg/L RASFB增殖率升高(P0.01);与IL-1β5μg/L比较,IL-1β10、20μg/L RASFB增值率升高(P0.01),且IL-1β20μg/L RASFB增值率高于IL-1β10μg/L(P0.01)。48 h时各浓度的RASFB增值率高于24 h(P0.01)。与高浓度化痰通络方组比较,中、低浓度化痰通络方组RASFB增殖率降低,且中浓度化痰通络方组对IL-1β刺激的RASFB增殖率明显降低(P0.01)。与空白对照组比较,IL-1β组24、48 h时TNF-α、a FGF mRNA表达及含量均升高(P0.05);与IL-1β组比较,除24 h低浓度化痰通络方组TNF-αmRNA表达外,24、48 h高、中、低浓度化痰通络方TNF-α、a FGF mRNA表达及含量均降低(P0.05);与高浓度化痰通络方组比较,24、48 h时中、低浓度化痰通络方TNF-α、a FGF mRNA表达升高,24 h低浓度化痰通络方TNF-α含量以及24、48 h中、低浓度化痰通络方TNF-α、a FGF含量升高(P0.05)。结论化痰通络方治疗RA的机理可能涉及抑制RASFB的增殖,降低TNF-α和a FGF mRNA的表达及其蛋白的分泌。     

补气通络法对大鼠腰神经根慢性炎症性损害干预作用的研究

目的：观察补气通络法（补气通络胶囊）干预腰神经根慢性炎症性损害的疗效及探讨其作用机制。方法：36只大鼠随机分成补气通络组、布洛芬组、生理盐水组及非手术组各9只,建立大鼠椎间盘突出症坐骨神经损害模型,分别在手术造模3、5、7周后,观察各组神经根组织病理变化,检测大鼠腰神经根肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA、白细胞介素-1（IL-1）mRNA表达水平。结果：生理盐水组IL-1 mRNA、TNF-αmRNA表达较非手术组增高,差异均有显著性意义（P〈0.05）;补气通络组IL-1 mRNA、TNF-αmRNA表达较生理盐水组、布洛芬组下调,差异均有显著性意义（P〈0.05）。结论：补气通络胶囊对大鼠腰神经根慢性炎症性损害具有良好的抗炎镇痛作用,并可改善大鼠腰神经根中TNF-αmRNA、IL-1 mRNA表达水平。     

魔芋葡甘露聚糖(KGM)对LPS诱导的THP-1源巨噬细胞产生细胞因子的影响

目的:探讨魔芋葡甘露聚糖(Konjac glucomannan,KGM)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的THP-1源巨噬细胞产生细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α和IFN-γ的影响。方法:以佛波酯(Phorbol myristate acetate,PMA)诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞,利用LPS刺激THP-1源巨噬细胞建立炎症模型,设置THP-1组(空白对照组)、THP-1+LPS组(模型组)、THP-1+LPS+KGM低浓度组、THP-1+LPS+KGM高浓度组,进行不同浓度KGM作用THP-1源巨噬细胞24、46 h体外实验,分别采用RT-PCR及ELISA法检测THP-1源巨噬细胞的IL-6、IL-1β、TNFα和IFN-γmRNA转录水平及细胞上清中各细胞因子的含量。结果:模型组细胞IL-6、IL-1β、TNF-α和IFN-γmRNA及蛋白表达水平均明显增加,较空白对照组细胞比较均具有显著意义(P<0.01)。低、高浓度KGM组则能显著下调由LPS刺激引起的IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA及蛋白表达水平的增加,上调IFN-γ的表达,与空白对照组及模型组比较均有显著意义(P<0.01)。结论:魔芋葡甘露聚糖(KGM)可能通过影响THP-1源巨噬细胞IL-6、IL-1β、TNF-α和IFN-γmRNA及蛋白的表达来达到免疫调节的作用,并具有一定的浓度与时间依赖性,其机理值得进一步研究。     

大黄素对脂多糖诱导后巨噬细胞释放炎症因子的影响

目的:研究大黄素对脂多糖(Lipopolysacchride,LPS)诱导后巨噬细胞RAW264.7释放炎症因子的影响及其分子机制。方法:将细胞分为6组,空白组,LPS组和不同浓度(1μM,5μM,10μM,25μM)大黄素+LPS组,不同浓度的大黄素预处理细胞2 h后,再加入1μg/m L LPS刺激细胞,用ELISA法检测细胞上清液中的TNF-α,IL-1β,IL-6蛋白水平,用RT-PCR法检测炎症因子mRNA表达,用Western-Blot检测核转录因子(NF-κB p65)的磷酸化。结果:LPS刺激后RAW264.7巨噬细胞炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的表达和分泌明显高于空白组,而给予大黄素的LPS组表达和分泌上述细胞因子明显降低,且呈剂量依赖性。LPS刺激后的细胞NF-κB p65磷酸化明显增强,而大黄素则能抑制NF-κB p65的磷酸化,且呈剂量依赖性。结论:大黄素能明显抑制巨噬细胞释放炎症因子,降低mRNA的表达,其作用机制主要通过抑制NF-κB p65磷酸化的信号通路。     

温脾通络开窍方对Aβ_(1-42)诱导小胶质细胞炎性因子的影响

目的:研究温脾通络开窍方对Aβ1-42诱导小胶质细胞生成和释放炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α的抑制作用。方法:实验分为5组:空白对照组,模型组,温脾通络开窍方高、中、低浓度组。除空白对照组外,余组均予Aβ1-42诱导BV-2细胞释放IL-1β、IL-6及TNF-α等炎性细胞因子,温脾通络开窍方予不同浓度进行干预,用ELISA法检测各组IL-1β、IL-6及TNF-α含量的变化。结果:与模型组比较,温脾通络开窍方细胞上清液中IL-1β、IL-6及TNF-α含量均显著降低,尤以高浓度作用最明显(P<0.01)。结论:温脾通络开窍方对活化后BV-2细胞IL-1β、IL-6及TNF-α的分泌有显著的抑制作用,提示良好的抗炎作用可能是温脾通络开窍方治疗老年性痴呆的药理机制之一。     

祛瘀化痰通络方加减治疗慢性喉炎大鼠的效果研究

目的研究祛瘀化痰通络方加减治疗慢性喉炎大鼠的效果。方法建模的30只大鼠随机分为模型组、阿司匹林组、祛瘀化痰通络方组各10只,正常组大鼠10只。祛瘀化痰通络方组给予祛瘀化痰通络加减方干预,阿司匹林组给予阿司匹林灌胃干预,模型组和正常组两组大鼠均给予等体积无菌生理盐水干预。观察大鼠喉部组织病理学,统计体质量、肉芽增生、足肿胀、咳嗽次数,检测白介素-1β(IL-1β)、白介素-6β(IL-6β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平。结果与模型组相比,祛瘀化痰通络方组体重、肉芽增生、足肿胀、咳嗽次数降低,差异具有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,祛瘀化痰通络方组IL-1β、IL-6β、ICAM-1水平降低,差异具有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,祛瘀化痰通络方组TNF-α、CRP、MMP-9蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论祛瘀化痰通络方加减治疗慢性喉炎大鼠的效果显著,能够有效的改善其临床症状,降低炎症相关指标水平,起到抗炎效果。     

独活寄生汤延缓人椎间盘髓核细胞退变机制的研究

探讨独活寄生汤(Duhuo Jisheng decotion,DHJSD)延缓人椎间盘退变的作用及其可能的分子机制。术中摘取人椎间盘标本,根据磁共振Pfirrmann退变程度分为正常组和退变组。Western blot和Real-time PCR法检测椎间盘组织中炎症因子TNF-α,IL-1β和胞外基质分解酶MMP-3,MMP-13的表达。体外培养人髓核细胞,用CCK-8法测定在基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1,10μg·L-1)和各种不同浓度的DHJSD共同处理下,髓核细胞的活力情况,并筛选出DHJSD合适的作用浓度。随后分为3组:对照组、SDF-1组、DHJSD+SDF-1组,检测各组细胞TNF-α,IL-1β,Agg,co IⅡ,MMP-3,MMP-13的表达情况。为进一步探讨其分子机制,采用NF-κB抑制剂(BAY11-7082)或CXCR4-siRNA转染髓核细胞,检测CXCR4,NF-κB主要基团P65磷酸化水平(p-P65)以及P65核转移情况,细胞炎症因子和细胞外基质的表达情况。通过检测2组椎间盘组织发现退变髓核组织中TNF-α,IL-1β,MMP-3,MMP-13的表达明显升高(P0.05)。而体外细胞实验发现,CCK-8法检测显示当DHJSD质量浓度为300 mg·L-1时髓核细胞的活力明显增加。将实验分为3组后,检测发现与单独SDF-1组相比,用DHJSD处理后TNF-α,IL-1β,MMP-3,MMP-13含量明显降低,而Agg和co IⅡ表达明显上升。采用CXCR4-siRNA转染髓核细胞后发现,SDF-1可以明显提高CXCR4和p-P65的表达,促进P65向核内转移,而给予DHJSD或CXCR4-siRNA处理后其作用明显被抑制。进一步采用BAY11-7082处理髓核细胞后发现,能明显降低髓核细胞炎症因子TNF-α和IL-1β,以及胞外基质分解酶MMP-3和MMP-13的表达。独活寄生汤可抑制炎症因子表达,促进胞外基质合成,其潜在机制与SDF-1/CXCR4/NF-κB信号通路有关。     

益气活血通络方对db/db小鼠胰腺组织JNK信号通路及IL-1β、TNF-α表达的影响

目的:观察益气活血通络方对db/db小鼠胰腺组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及炎症因子表达的影响,探讨益气活血通络方对胰岛细胞炎性损伤的保护作用及其机制。方法:用自发性2型糖尿病C57BL/Ks J-db/db小鼠为动物模型,将db/db小鼠随机分成模型组、硫辛酸组(0.078g/kg)、益气活血通络方6.4、3.2、1.6g/kg剂量组,另取10只db/m小鼠为正常对照组,连续灌胃给药8周,模型组给予生理盐水。药前、药后4周和8周测定小鼠血糖。实验结束后,摘取胰腺组织,HE染色法观察病理变化,ELISA法检测小鼠胰腺组织胰岛素含量,Western bloting与免疫组织化学法检测IL-1β、TNF-α、JNK、p-JNK蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组胰岛细胞出现严重的病理性损伤,药后4周和8周血糖、胰腺组织中IL-1β、TNF-α、P-JNK蛋白的表达水平明显高于正常组;与模型组比较,益气活血通络方组胰岛细胞病理损伤程度减轻,血糖降低,胰腺组织胰岛素含量升高,胰腺组织IL-1β、TNF-α、P-JNK蛋白表达水平显著下降。结论:益气活血通络方能够减轻db/db小鼠胰岛细胞损伤,可能与降低炎症因子表达,抑制JNK信号通路过度激活有关。     

蠲痹历节清方对痛风细胞模型中TLR4/NF-κB信号通路主要元件的影响

目的:研究蠲痹历节清方对痛风作用及对TLR4/NF-κB信号通路主要元件的影响。方法:实验分为两部分,①不添加TLR4受体抑制剂部分;②添加TLR4受体抑制剂部分。每部分利用单钠尿酸盐(MSU)结晶诱导巨噬细胞产生痛风模型,随机分正常对照组、模型组、蠲痹历节清方组,并分别干预。用Westen-blot法测定干预后巨噬细胞中髓样分化分子88(MyD88)、IκB激酶-β(IKK-β)、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达,RT-PCR测定干预后各组巨噬细胞中Toll样受体4(TLR4)基因表达;免疫荧光法检测巨噬细胞核转录因子kappa B(NF-κB)核移位情况;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:不添加TLR4受体抑制剂部分:与正常对照组相比,模型组MyD88蛋白、IKK-β、TLR4 mRNA表达含量明显升高;TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高;IκB-α蛋白明显降低。与模型组比较,蠲痹历节清方组中MyD88蛋白、IKK-β、TLR4 mRNA表达含量明显降低;TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显降低;IκB-α蛋白含量明显升高。正常对照组血清组中NF-κB p65主要集中在细胞浆,细胞核中表达较少,模型组中NF-κB蛋白表达呈猩红色明显增强,主要集中在细胞核中,细胞浆中较少,表明NF-κB核移位明显;蠲痹历节清方组NF-κB主要在细胞浆中,细胞核中相对较少,未出现明显NF-κB核移位情况。同步使用通路阻断剂TAK-242(TLR4受体抑制剂)进行试验对照,上述通路及其上下游各分子(因子)水平均受到明显抑制。各组巨噬细胞NF-κB表达明显受到抑制。结论:蠲痹历节清方可改善痛风细胞模型炎症因子情况,抑制TLR4 mRNA及MyD88、IKK-β蛋白表达和上调IκB-α蛋白表达、抑制NF-κB活化作用,因此推测蠲痹历节清方治疗急性痛风性关节炎局部组织炎症的部分作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路表达有关,可能是以通路中MyD88依赖性信号转导经典途径。     

胃痞消治疗慢性萎缩性胃炎的临床研究

目的观察气血并治方有效组分(CWQB)对C57BL/6J小鼠骨髓源性巨噬细胞(M0型)及脂多糖(LPS)联合干扰素-α(IFN-α)诱导M1型巨噬细胞白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素10(IL-10)、转化因子-β(TGF-β)表达水平的影响。方法从C57BL/6J小鼠股骨中分离、提取、培养骨髓细胞(BMC),以粒细胞集落刺激生物因子(GM-CSF)诱导分化为M0型巨噬细胞,LPS+IFN-α诱导M0型巨噬细胞分化为M1型,采用流式细胞法检测M0型和M1型巨噬细胞表面标志性细胞因子表达情况。根据MTT检测结果,CWQB和辛伐他汀分别作用于M0和M1型巨噬细胞10 h,常规倒置相差显微镜下观察细胞形态,ELISA法检测细胞上清液IL-8、IL-10、TGF-β的含量,RT-PCR法检测细胞裂解液IL-8、IL-10、TGF-βm RNA的表达水平。结果经上述方法培养和诱导的M0型巨噬细胞84%呈F4/80和CD11b双阳性,M1型巨噬细胞83.4%呈CD86和i NOS双阳性;常规倒置相差显微镜下观察,M0型巨噬细胞呈圆形或椭圆形,伴有伪足,M1型巨噬细胞呈梭形,伴伪足伸展,药物干预后巨噬细胞均呈圆形伴短伪足,整体形态较为收拢;在加入CWQB作用10 h后,M0型巨噬细胞组IL-8分泌量由(2.07±0.14)pg·m L~(-1)降低至(1.69±0.17)pg·m L~(-1)(P0.05),TGF-β分泌量由(1.24±0.14)pg·m L~(-1)升高至(1.41±0.15)pg·m L~(-1)(P0.05)。M1型巨噬细胞组IL-10分泌量由(0.73±0.12)pg·m L~(-1)升高至(1.03±0.10)pg·m L~(-1)(P0.05),TGF-β分泌量由(1.13±0.32)pg·m L~(-1)升高至(1.33±0.26)pg·m L~(-1)(P0.05)。基因相对表达量方面,与M0组比较,M0+CWQB组IL-8 m RNA下降,IL-10、TGF-βm RNA升高(P0.05);与M1组比较,M1+CWQB组IL-8 m RNA下降,IL-10、TGF-βmRNA升高(P0.05)。结论 CWQB可以抑制骨髓源性巨噬细胞及LPS+IFN-ɑ诱导M1型巨噬细胞IL-8的表达,促进IL-10、TGF-β的表达,从而发挥其调节炎症反应的作用。     

黄芪多糖对THP-1巨噬细胞HSP60诱导下IL-6、TNF-α表达的影响

目的探讨黄芪多糖(Astragalus Polysaccharide,APS)对炎症模型细胞所释放的炎症因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法以人急性单核白血病细胞株(THP-1)为实验对象,以热休克蛋白60(HSP60)诱导,使分化为巨噬细胞(MΦ),并以APS干预。随机分为4组,分别是THP-1组、MΦ组、HSP60组、APS组。收集上清培养液,用ELISA法检测细胞上清中IL-6、TNF-α的浓度。结果 APS组较HSP60组IL-6、TNF-α表达明显下调。结论APS对THP-1巨噬细胞HSP60诱导下的炎症反应具有一定干预作用。     

黄芪多糖对LPS诱导的THP-1源巨噬细胞产生细胞因子TNF-α、IL-12和IL-10的影响

目的:探讨黄芪多糖(APS)对脂多糖(LPS)诱导的THP-1源巨噬细胞产生细胞因子TNF-α、IL-12和IL-10的影响及其抗肿瘤的机制。方法:实验设置THP-1组(空白对照组)、THP-1+LPS组(模型组)、THP-1+LPS+APS低浓度组、THP-1+LPS+APS高浓度组,通过佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞,并通过LPS刺激建立炎症模型,将APS作用于THP-1源巨噬细胞进行24h、48h体外实验,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫法(ELISA)检测THP-1源巨噬细胞的IL-10、IL-12和TNF-α mRNA转录水平及蛋白的表达水平。结果:模型组细胞IL-10、IL-12和TNF-α mRNA及蛋白表达水平均明显增加,与空白对照组细胞比较,均有显著意义(P<0.05)。不同浓度APS组能够上调由LPS刺激引起的IL-12、TNF-α mRNA及其蛋白表达水平的增加,下调IL-10的表达。结论:黄芪多糖(APS)可能通过影响THP-1源巨噬细胞的IL-12、IL-10、TNF-α mRNA及蛋白的表达水平,从而起到调节细胞免疫功能,抑制肿瘤生长的作用,并呈一定的浓度与时间依赖性,其具体作用机制仍值得进一步探讨及研究。     

益气活血方介导促炎因子促进破裂型腰椎间盘突出后重吸收的机制研究

目的:通过比较益气活血方介导对趋化因子5(CCL5)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)在破裂及非破裂型髓核细胞中表达的影响,探索益气活血方促进破裂型腰椎间盘突出后重吸收的机制。方法:收集破裂型与非破裂型腰椎间盘突出症患者的髓核组织各6例,采用酶消法分离细胞,放入含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养,定期用倒置相差显微镜观察细胞贴壁及生长情况。用10只3个月龄SD大鼠制备含药(益气活血方)血清及无药(生理盐水)血清,用两种血清分别培养破裂型及非破裂髓核细胞。提取两种血清体外给药后的破裂及非破裂原代髓核细胞RNA。利用实时荧光定量PCR(实时qPCR)技术分别检测体外含药血清给药培养后及非含药血清培养后的破裂及非破裂型髓核细胞中CCL5,TNF-α,IL-1βmRNA的表达,记录统计分析数据。提取含药血清及非含药血清体外给药培养后的破裂及非破裂型原代髓核细胞蛋白,利用免疫蛋白印迹(Western Blotting)技术分别检测两种血清体外给药培养后的破裂及非破裂型原代髓核细胞中CCL5,TNF-α及IL-1β蛋白的表达,记录统计分析数据。结果:CCL5,TNF-α及IL-1β在破裂型髓核中的表达明显高于非破裂型(P0.05),在破裂型含药组髓核细胞中的表达显著高于无药组(P0.05)。结论:益气活血方可提高促炎因子在破裂型髓核细胞中高表达,有利于髓核细胞的炎性反应,加速细胞外基质(ECM)的降解,从而有利于重吸收现象的发生,且破裂型髓核比非破裂型髓核更容易发生重吸收现象。     

加味芎蝎散含药血清对哮喘小鼠巨噬细胞表型及气道重塑蛋白表达的影响

目的 观察加味芎蝎散含药血清对哮喘小鼠巨噬细胞活力、M1/M2表型、炎症介质[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-8(IL-8)] m RNA水平及基质金属蛋白酶（MMP9）和Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）蛋白的影响，探讨加味芎蝎散调控巨噬细胞极化，进而探讨其对Th1/Th2免疫平衡、组织重塑的相关机制。方法 建立哮喘小鼠模型并分离提取肺巨噬细胞，同时制备加味芎蝎散含药血清。设立空白组、模型组及加味芎蝎散含药血清高剂量组、低剂量组，根据分组给予相应处理措施。干预24 h后，细胞增殖和毒性法检测细胞活力，免疫荧光法（IF）检测细胞M1标志物iNOS、M2标志物CD206的表达，荧光定量PCR法检测炎症因子TNF-α、IL-2、IL-4、IL-8的mRNA水平，免疫印迹法检测基质金属蛋白酶（MMP9）和Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）的蛋白变化。结果 与正常组比较，模型组巨噬细胞活力增加，iNOS/CD206比例下调，TNF-α、IL-8水平增高，IL-4减低，MMP9和CollagenⅠ蛋白表达增多，差异有统计学意义（P <0.05）；与模型组比较...     

隔药灸对克罗恩病大鼠结肠黏膜巨噬细胞M1/M2型极化的影响

目的:观察隔药灸对克罗恩病(CD)大鼠结肠黏膜巨噬细胞M1/M2型极化及炎性因子表达的影响，探讨其作用机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、隔药灸组，每组10只。采用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠法制备CD模型。造模成功后隔药灸组大鼠给予隔药饼灸“天枢”“气海”,每次每穴灸2壮，每日1次，共10 d。西药组大鼠给予美沙拉嗪灌胃，每日2次，共10 d。治疗结束后取各组大鼠结肠上皮组织，分离、纯化和培养结肠黏膜固有层巨噬细胞。HE染色法观察结肠组织病理变化；透射电镜观察结肠组织超微结构；Western blot法检测结肠黏膜巨噬细胞α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)、核因子κB(NF-κB) p65、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平；流式细胞术检测结肠黏膜组织M1、M2型巨噬细胞的数量；免疫荧光法检测结肠黏膜组织M1、M2型巨噬细胞的表达情况。结果:与正常组比较，模型组大鼠结肠组织呈现巨大溃疡及炎性表现，结肠上皮细胞连接疏松，细胞器结构破坏；结肠黏膜巨噬细胞α7nAChR表达水平降低(P<0.01),NF-κB p65和TNF-α表达水平升高(P&l...     

补肝健腰方对腰椎间盘突出大鼠NF-κB信号通路的影响

目的:观察补肝健腰方对腰椎间盘突出大鼠NF-κB信号通路的影响。方法:取SD大鼠100只,随机分为正常对照组、假手术组、模型对照组、补肝健腰方组、塞来昔布组各20只。补肝健腰方组、塞来昔布组制备大鼠腰椎间盘突出模型成功后分别予补肝健腰方、塞来昔布灌胃。干预前、干预后第1、2、3周,各组随机选取5只大鼠处死,检测核因子κB(NF-κB)mRNA、IκB激酶β(IKK-β)mRNA以及下游产物肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果:在干预前,补肝健腰方组、塞来昔布组大鼠腰椎间盘突出局部组织NF-κB mRNA、IKK-βmRNA及TNF-α表达与模型对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);干预第1、2、3周,补肝健腰方组大鼠NF-κB mRNA、IKK-βmR NA及TNF-α表达均低于模型对照组(P0.05)。补肝健腰方组大鼠干预第1、2、3周的NF-κB mRNA、IKK-βmRNA及TNF-α表达均低于干预前(P0.05)。结论:补肝健腰方具有调控腰椎间盘突出大鼠NF-κB信号通路的作用,可减少NF-κB mRNA、IKK-βmRNA及TNF-α表达,这可能为其治疗腰椎间盘突出症的作用机制。     

四逆散对脂多糖诱导的RAW264.7细胞极化的影响

目的:探讨四逆散(Sinisan,SNS)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264. 7巨噬细胞极化的调控作用。方法:RAW264. 7分为5组,分别为空白组,模型组,SNS低、中、高质量浓度组(10,20,40 mg·L~(-1));以LPS(100μg·L~(-1))刺激的RAW264. 7细胞为体外模型,使用不同质量浓度的SNS提前干预细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同质量浓度SNS对RAW264. 7细胞增殖的影响;光学显微镜下观察各组细胞分化程度;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养基上清中M1极化因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β)以及M2极化因子白细胞介素-10(IL-10)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测RAW264. 7细胞M1极化因子TNF-α,IL-6以及M2极化因子IL-10,精氨酸酶-1(Arg~(-1))的mRNA水平。结果:与空白组比较,模型组促进细胞增殖(P 0. 05),刺激M1极化因子TNF-α,IL-6,IL-1β的释放和上调TNF-α,IL-6的mRNA含量(P 0. 01),减少M2极化因子IL-10释放和IL-10,Arg~(-1)的mRNA水平(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,SNS对RAW264. 7细胞的活性没有影响。与模型组比较,SNS可抑制LPS诱导的细胞增殖(P 0. 05),减少LPS刺激的细胞分化,减少M1极化因子TNF-α,IL-6,IL-1β的释放和TNF-α,IL-6的mRNA含量(P 0. 05,P 0. 01),并增加M2极化因子IL-10释放和IL-10,Arg~(-1)的mRNA水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:SNS可抑制LPS诱导的RAW264. 7细胞炎症,其机制可能与调控巨噬细胞M1/M2表型极化平衡相关。     

制首乌中大黄素对泡沫细胞NF-κB、TNF-α及IL-1β表达的影响

目的探讨大黄素对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞NF-κB、TNF-α及IL-1β表达的影响。方法选用RAW264.7细胞株作为实验对象,ox-LDL诱导其泡沫化并分为空白组,阳性对照组,激动剂组,阻断剂组,大黄素高、中、低剂量组。采用Real-time PCR法检测NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA的表达。结果与空白组相比,大黄素各剂量组均能影响NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA的表达(P0.01)。结论大黄素可能通过NF-κB信号转导途径调节RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA的表达。     

补肾通络方通过抑制chemerin及炎性因子干预骨质疏松症的机制研究

目的评价补肾通络方对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨、成脂分化以及小鼠单核巨噬细胞RAW264.7破骨分化模型的干预作用,并探究其调节骨形成及骨吸收的相关机制。方法分别给予补肾方、通络方和补肾通络方进行干预,采用茜素红染色法鉴定BMSCs成骨分化后各组钙结节形成情况;采用油红O染色鉴定BMSCs成脂分化后各组脂滴形成情况;采用q RT-PCR法检测BMSCs成骨、成脂分化后各组成骨、成脂分化标志基因m RNA表达,成骨、成脂分化过程和炎症模型中chemerinm RNA表达;采用ELISA法检测BMSCs成骨、成脂分化过程和炎症模型中各组chemerin分泌量。采用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant alkaline phosphatase,TRAP)染色鉴定各组RAW264.7细胞破骨分化程度,并测定各组TRAP活性;采用Westernblotting法检测RAW264.7细胞破骨分化中各组TRAP蛋白表达情况;采用q RT-PCR法及ELISA法检测RAW264.7细胞破骨分化后各组chemerin、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)mRNA表达及分泌。结果与对照组比较,补肾通络方组钙结节显著增多(P0.01),脂滴显著减少(P0.01),成骨分化标志基因表达显著升高(P0.01),成脂分化标志基因表达显著下降(P0.05),chemerin分泌及基因表达在成骨分化第3天及成脂分化第3、7天显著下降(P0.05、0.01)。与对照组比较,BMSCs炎症模型chemerin分泌及基因表达显著升高(P0.01);与BMSCs炎症模型比较,补肾通络方组chemerin分泌及基因表达显著下降(P0.01)。与对照组比较,RAW264.7细胞破骨分化中TRAP阳性细胞、活力、蛋白表达以及IL-6、TNF-α分泌与基因表达均显著升高(P0.05、0.01);与模型组比较,补肾通络方组TRAP阳性细胞、活力、蛋白表达以及IL-6、TNF-α分泌与基因表达显著降低(P0.01)。结论补肾通络方可通过抑制chemerin及炎症因子来调节成骨、成脂分化及破骨细胞分化,从而促进骨形成、抑制骨吸收、改善骨质疏松症。     

益肾壮骨颗粒剂对人工关节生物因素松动的影响

目的:探讨益肾壮骨颗粒剂对人工关节生物因素松动的影响。方法:随机选择准备行人工髋关节置换术患者20例。采集外周血,分离单个核细胞,每例标本分成5份。A组:仅单个核细胞,为正常对照组;B组:单个核细胞+骨水泥微粒,为模型组;C组:单个核细胞+骨水泥微粒+益肾壮骨低剂量组(3mg·mL-1);D组:单个核细胞+骨水泥微粒+益肾壮骨中剂量组(6mg·mL-1);E组:单个核细胞+骨水泥微粒+益肾壮骨高剂量组(12mg·mL-1)。培养48 h后,用ELISA测定细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量。结果:模型组的TNF-α和IL-6含量均明显高于正常对照组(P<0.01);单个核细胞+骨水泥微粒+益肾壮骨各剂量组的TNF-α和IL-6含量明显低于模型组(P<0.05)。结论:骨水泥微粒可刺激单个核细胞分泌TNF-α和IL-6,而益肾壮骨颗粒剂能有效地抑制单个核细胞分泌TNF-α和IL-6。益肾壮骨颗粒剂对人工关节生物因素松动方面有一定的防治作用。