环磷酰胺下调大鼠睾丸OCT-4和GDNF表达

目的探讨抗肿瘤药物环磷酰胺对大鼠睾丸和精原干细胞相关因子OCT-4和GDNF表达的影响。方法 12只8周龄大鼠随机分为对照组和实验组,每组6只;实验组每天腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg,连续3 d,用药4周后PAS染色法观察大鼠睾丸组织学变化,精原细胞,生精小管直径和附睾尾部精子数量。免疫组织化学法检测精原干细胞相关分子OCT-4和GDNF表达水平。结果与对照组比较,实验组大鼠体重、睾丸和附睾重量均显著减轻,睾丸组织学无明显改变,附睾精子活动度降低,附睾精子和精原细胞数量减少。实验组GDNF表达明显减少,而OCT-4表达水平无明显变化。结论环磷酰胺短期用药可造成精子发生的损害,其中精原细胞的减少可能与损害后GDNF表达下调有关。     

环磷酰胺对大鼠睾丸和附睾的影响

目的探讨抗肿瘤药物所致大鼠睾丸和附睾损害,为寻找男性不育症中药治疗的研究提供理论依据。方法选用16只15周龄SD大鼠随机分为对照组和实验组,每组8只;实验组腹腔注射环磷酰胺20mg·kg-1·d-1,连续5d,用药2个月后,应用HE染色法研究大鼠睾丸、附睾远期组织学变化,用原位缺口末端标记法(TUNEL方法)检测生精细胞凋亡。结果实验组大鼠体重、睾丸和附睾重量均显著减轻(P<0.01),睾丸生精小管直径缩小、间距增宽、生精上皮变薄、生精细胞层次和数量减少、生精小管腔多未见精子形成,实验组睾丸生精小管直径、面积、生精上皮细胞数、均显著低于对照组(P<0.01);实验组生精细胞凋亡增多,与对照组比较,生精细胞显著凋亡(P<0.01);附睾管管腔内腔内精子稀少,含有大量脱落细胞,管壁变薄。结论环磷酰胺对大鼠睾丸、附睾远期损害明显,促进生精细胞凋亡。     

锌缺乏导致小鼠睾丸游离锌离子和附睾精子数量减少

目的研究锌缺乏对小鼠睾丸游离锌离子和附睾精子数量的影响。方法锌缺乏饲养小鼠5周后,应用ZnSe金属自显影技术对小鼠睾丸和附睾进行染色,观察睾丸和附睾锌离子的分布,同时计数附睾精子数量,并与对照组小鼠的精子数量做对比。结果缺锌喂养后的小鼠睾丸游离锌离子明显减少,并且睾丸生精小管管腔狭小,生殖细胞层厚度增加,此外,附睾精子数量也明显低于对照组。结论睾丸和附睾内游离锌离子减少是锌缺乏小鼠精子数量下降的原因,本结果有助于改善男性生殖健康的状况。     

衰老对小鼠精子成熟和受精能力的影响

目的：探讨衰老对附睾精子成熟、体外受精和胚胎发育的影响。方法： 取老龄小鼠（18月龄，n=15）和青年小鼠（6月龄，n=15）附睾头精子和附睾尾精子，分别检测精子密度、存活率、活动率、正常形态率和胞浆小滴率，并通过体外受精比较附睾尾精子受精率和各阶段胚胎发育率。结果：老龄小鼠附睾头精子和附睾尾精子活动率、精子密度显著低于青年组（P<0.01），胞浆小滴率和畸形精子率显著高于青年组（P<0.05），附睾尾精子的受精率下降（P<0.01），胚胎各阶段发育率降低（P<0.01）。结论：衰老影响小鼠精子功能及附睾精子成熟过程。小鼠可作为雄性生殖衰老研究的动物模型。     

巴戟天对环磷酰胺诱导的大鼠睾丸生精功能的影响

目的:探讨巴戟天在环磷酰胺诱导的大鼠生精障碍动物模型中的作用,研究巴戟天对大鼠生精功能的影响。方法:检测大鼠的精子活力、精子密度、睾丸指数、附睾指数及组织结构变化;酶联免疫吸附法检测血清睾酮、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)含量。结果:与空白对照组相比,模型组睾丸指数、附睾指数、精子活力以及精子密度降低;治疗组相对模型组睾丸指数、附睾指数、精子活力、精子活动率均显著增高;H-E染色显示模型组生精小管直径缩小,间距增宽,生精上皮变薄,生殖细胞数量显著减少;治疗组与模型组比较生精小管壁增厚,含有精子的生精小管显著增多;模型组与空白对照组比较血清睾酮显著降低;治疗组与模型组比较其血清睾酮显著增加。结论:巴戟天对环磷酰胺诱导的生精障碍睾丸具有改善睾丸生精小管结构,促进精子发生和间质细胞分泌睾酮的功能。     

不同光照制对雄性小鼠生殖影响的研究

目的 探讨不同光照制对雄性小鼠生殖的影响。方法 取昆明种雄性小鼠作短期持续光照、持续黑暗、反相光照3种光照制处理。观察小鼠睾丸、附睾重量及光镜下睾丸、附睾组织学变化、精子数量、精子活动度、精子畸形率。结果 各组小鼠睾丸、附睾重量无显著性差异,而且各实验组光镜下睾丸、附睾组织学均未见异常。与对照组相比,黑暗小鼠和反相光照组小鼠精子数量明显降低,此外,反相光照组小鼠精子畸形率显著增加。结论 异常光照周期可能影响雄性小鼠生殖能力。     

己烯雌酚对幼年香猪睾丸与附睾雌激素受体和一氧化氮合酶表达和分布的影响

目的 探讨己烯雌酚（DES）对幼年香猪睾丸和附睾中雌激素受体（ERs）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达的影响,及DES对诱导雄性动物生精异常的作用机制。 方法 将20只20～25日龄幼年雄性香猪分成４组,对照组只注射生理盐水,实验组经腹腔每天注射DES(实验1组：0.03mg/kg;实验2组：0.3mg/kg;实验3组：3mg/kg),连续注射9d。最后１次注射24h后手术取出左侧睾丸和附睾组织经中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,常规制备5μm石蜡切片,采用免疫组织化学SP法检测睾丸和附睾组织中ERα、ERβ和eNOS的表达。 结果 ERα只在输出小管上皮细胞胞核中表达;ERβ在输出小管上皮细胞、间质细胞及附睾管上皮细胞胞核中均有表达,在睾丸生精小管细胞胞质中也有少量表达。DES能够使ERα在输出小管中的表达率显著下降（P<0.05）。随着DES用量的增多,ERβ在输出小管和附睾管中的表达率显著升高（P<0.05）,当DES用量为3mg/kg时ERβ在输出小管和附睾管中的表达率明显高于用量0.03mg/kg和0.3mg/kg（P<0.05）。但0.03mg/kg用量的DES却使睾丸生精小管中ERβ的表达率显著性下降（P<0.05）,并在0.3mg/kg和3mg/kg用量时在睾丸生精小管中未能检测到ERβ受体的表达。eNOS在睾丸生精小管细胞和输出小管上皮细胞中都有表达,DES能促进eNOS在睾丸生精小管细胞中表达（P<0.05）而降低其在输出小管细胞中表达（P<0.05）。结论 DES明显影响ERs和eNOS在睾丸和附睾中的表达。     

左卡尼汀经β-catenin信号通路保护环磷酰胺所致大鼠睾丸损伤

目的　探讨左卡尼汀（L-carnitine，LC）对环磷酰胺（cyclophosphamide，CP）所致大鼠睾丸损伤的保护作用及其机制。 方法　将18只雄性大鼠随机分为3组：生理盐水（NS）组，CP组，CP+LC组，腹腔注射给药。观测大鼠体重、精神等一般情况及睾丸重量，采用HE染色检测睾丸损伤情况，免疫组化和Western blot法检测睾丸内β-catenin的表达。 结果　CP组大鼠睾丸重量低于NS组（P<0.05），CP+LC组大鼠睾丸重量比CP组有所恢复（P<0.05）；HE染色显示CP组和CP+LC组比NS组生精细胞层数减少（P<0.05），但CP+LC组较CP组生精细胞层数增多（P<0.05）；免疫组化和Western blot均显示CP组β-catenin的表达量高于NS组（P<0.05），CP+LC组β-catenin表达量低于CP组（P<0.05）。 结论　左卡尼汀可下调β-catenin信号进而对环磷酰胺所致大鼠睾丸损伤起到保护作用，可能对抗瘤药引起的男性生育障碍具有潜在的治疗意义。     

小鼠精子发生过程中dysbindin-1的表达

目的 探讨精子发生过程中dysbindin-1的表达及dysbindin-1对精子顶体形态的影响。 方法 取生后7d、14d、21d、28d、35d和3月龄的雄性小鼠各3只,用免疫印迹法检测睾丸组织dysbindin-1的表达;以dysbindin-1缺失突变的sdy小鼠为研究对象,收集附睾尾部精子,一部分制备精子涂片,HE染色显示精子形态,用异硫氰酸荧光素-豌豆凝集素（FITC-PSA）和抗精子蛋白56（sp56）单克隆抗体进行荧光染色显示顶体的结构;另一部分采用免疫印迹法检测精子中dysbindin-1的表达。 结果 不同发育阶段小鼠睾丸组织及精子中均只有dysbindin-1A,无dysbindin-1C的表达;sdy小鼠的精子及顶体的形态未见明显异常。 结论 Dysbindin-1A表达于小鼠精子发生的不同时期,dysbindin-1A对精子形态维持不起关键作用。     

观察链脲佐菌素诱导的BALB/c糖尿病小鼠睾丸微循环损害

目的:观察链脲佐菌素(STZ)诱导的BALB/c糖尿病小鼠睾丸微循环变化。方法:20只BALB/c小鼠,采用完全随机法分为糖尿病组和对照组,每组10只。糖尿病组小鼠连续5天腹腔注射40mg/kg STZ诱导糖尿病模型,对照组注射柠檬酸缓冲液。一周后,应用激光多普勒成像系统(Moor LDLS)检测两组小鼠下腹-外阴部皮肤微循环血流灌注水平;分离腹膜,暴露睾丸,应用激光多普勒血流灌注检测系统(Moor VMS-LDF)检测两组小鼠睾丸微循环血流量及睾丸微血管自律运动。心脏灌流后取两组小鼠睾丸制作组织切片,HE染色观察睾丸微血管形态,免疫组织化学染色两步法观察睾丸微血管内皮细胞抗血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)表达水平。结果:糖尿病组小鼠下腹-外阴部皮肤总血流灌注量低于对照组(P0.01);睾丸平均血流灌注水平和微血管自律运动频率和振幅均显著低于对照组(P0.01);糖尿病组小鼠生精上皮受损,成熟生精细胞减少;睾丸间质微血管增多。睾丸间质微血管内皮细胞PECAM-1表达水平低于对照组(P0.01)。结论:STZ诱导的BALB/c糖尿病小鼠睾丸微循环存在较多损害。     

海马sortilin在链脲佐菌素诱导的糖尿病认知损伤小鼠中的作用

目的 探讨海马sortilin在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病认知损伤小鼠中的作用。方法 24只成年雄性ICR小鼠,随机分为溶媒对照组（NS）和实验组（STZ）。STZ腹腔注射诱导糖尿病认知损伤动物模型,注射后用血糖仪检测血糖改变,注射后第8周采用新旧事物识别实验检测各组小鼠认知功能;免疫组织化学方法检测sortilin免疫阳性产物表达变化;Western blotting和Real-time PCR方法检测各组小鼠海马sortilin和脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白及mRNA表达变化。结果 与NS组相比,STZ组小鼠空腹血糖显著增高（P<0.01）;在新旧事物识别实验中新事物辨别指数明显降低（P<0.05）;海马区sortilin的免疫阳性产物（P<0.05）、蛋白（P<0.01）以及mRNA（P<0.05）表达均显著下调;海马区BDNF mRNA（P<0.01）及蛋白（P<0.05）表达均明显降低。结论 STZ诱导的糖尿病小鼠认知损伤可能与海马sortilin的表达下调有关。     

水通道蛋白-4在大鼠睾丸和附睾中的表达

目的 观察水通道蛋白-4（AQP4）在雄性大鼠睾丸和附睾的表达及分布特点,为探讨水通道蛋白在睾丸和附睾中的作用提供形态学基础。方法 采用免疫组织化学的方法,检测AQP4在睾丸和附睾的表达分布。结果 AQP4在睾丸中表达于各级生精细胞、支持细胞以及间质细胞中;在附睾管内表达于柱状上皮细胞,且腔面表达更明显。结论 AQP4可能参与了精子的生成及成熟过程,在激素的分泌调节中发挥作用。     

Bcl-2-caspase-9凋亡通路在哮喘小鼠睾丸组织中的相关表达

目的：通过建立小鼠哮喘模型,探讨哮喘对小鼠睾丸组织中细胞凋亡表达的影响。方法：将10只BALB/c小鼠分为两组：急性哮喘组和正常对照组。急性哮喘组采用连续7 d雾化吸入卵白蛋白(OVA)的方法致敏,而对照组则雾化吸入生理盐水,之后收集附睾和睾丸来确定精子计数和精子能动性。通过DNA Ladder、免疫组化和一系列相关的凋亡基因PCR扩增来判断睾丸细胞的凋亡。caspase-3和聚腺苷二磷酸 核糖聚合酶(PARP)的裂解是通过Western blot来测定,而caspase-9、caspase 3/7酶活性则是通过Caspase-Glo试剂盒来测定的。结果：与对照组相比,实验组小鼠的体重、睾丸重量、精子计数和精子活性显著降低(P<0.05)。在急性哮喘组中,DNA-Ladder和免疫组化结果均显示睾丸组织的凋亡指数显著增加（P<0.05）,而PCR结果显示Bcl-2的表达显著降低（P<0.01）,而Bax、BNIP3、caspase-9、AIF的表达显著增加。此外,在蛋白表达水平,AIF的表达显著增加,而Bcl-2的表达明显下调。而且在哮喘小鼠的睾丸组织中,caspase-9的表达明显高于正常对照组。结论：在哮喘小鼠的睾丸组织中Bcl-2-caspase-9凋亡通路的相关基因及蛋白表达显著增高。     

层黏连蛋白受体在小鼠睾丸和附睾中的表达

目的 探讨层黏连蛋白受体(LAMR1)在小鼠睾丸和附睾中的表达.方法收集3只正常成年昆明小鼠睾丸和附睾.采用原位杂交和免疫组织化学方法,检测LAMR1 mRNA及蛋白在成年小鼠睾丸和附睾中的分布.结果 LAMR1 mRNA在附睾头和附睾尾表达最强;在睾丸生精细胞中也有表达.免疫组织化学结果显示,LAMR1蛋白从附睾头到...     

敲除基因Pabpc6对雄性小鼠精子发生的影响

目的 探究小鼠细胞质多聚腺苷酸结合蛋白-6(PABPC6)在雄性小鼠精子发生中的作用。方法 利用CRISPR/Cas9靶向敲除C57BL/6J小鼠基因Pabpc6,通过PCR鉴定Pabpc6的敲除情况。通过交配繁殖得到Pabpc6^+/+、Pabpc6^+/-、Pabpc6^-/- 3种不同基因型的小鼠，进行睾丸称重、形态学观察和精子计数。RT-qPCR和Western blot检测不同组织中Pabpc6在mRNA和蛋白的表达水平；通过免疫荧光和苏木精-伊红染色观察该基因的定位以及睾丸曲细精管内部形态学变化。结果 成功鉴定出敲除Pabpc6的小鼠；Pabpc6在睾丸组织中高表达(P<0.001)。免疫荧光显示该基因主要表达于精母细胞和早期精子阶段，基因敲除小鼠与野生型小鼠相比在睾丸外形、精子形态、精子数量和曲细精管内部形态上没有明显差异。结论 Pabpc6在小鼠睾丸组织中高表达，敲除该基因后对雄性小鼠的精子发生无明显影响，说明该基因所编码的蛋白对于小鼠精子发生过程可能是非必需的。     

大鼠精子细胞变态期核蛋白转换的研究

用细胞分离、免疫组织化学及同位素标记方法研究了大鼠精子细胞变态期核蛋白转换（ＨＰＲＲ）所取得的结果。用速度沉降法及超声波得到高纯度的睾丸圆形、长形业郛细胞核及附睾精子核，提取其总碱性核蛋白（ＴＮＢＰ），电泳分析，发现睾丸圆形精子细胞核内为组蛋白；长形精了细胞核内主要为精核蛋白、少量过渡形蛋白（ＴＰｓ）及组蛋白；附睾精子核中主要为精核蛋白，免疫组织化学研究表明，吸人长形精子细胞核内检测到精核蛋白，而     

精原干细胞冷冻保存后再移植的生精功能

背景:精原干细胞的冷冻保存在男性不育治疗方面具有潜在的临床应用价值,但冷冻保存过的精原干细胞移植后,其精子发生过程及生精能力目前尚不完全清楚。目的:观测精原干细胞冷冻保存后移植的生精功能。方法:采用复合酶消化、差速贴壁结合非连续性Percoll密度梯度离心的方法获取雄性SD大鼠及雄性C57BL/6小鼠精原干细胞;以雄性BALB/c裸小鼠为受体,出生后6周予腹腔注射白消安破坏其内源性生精功能。将供体精原干细胞分为冷冻保存组与非冷冻保存组,分别以曲细精管微注射的方法异种移植精原干细胞,采用形态学方法观察生精过程;采集附睾精液,观察精子形态并进行体外受精实验。移植后1,2,3个月取受体睾丸组织,采用免疫组化SABC法检测α6-Integrin蛋白表达情况;移植后1周、1个月、3个月取受体睾丸组织,应用扫描电镜观察生精过程。结果与结论:冷冻保存前的精原干细胞活性率高于冷冻保存后的细胞活性率(P0.01)。冷冻保存组与未冷冻保存组受体睾丸组织精原细胞膜和细胞质中均有α6-Integrin的阳性表达,随时间增加而增加,两组间α6-Integrin蛋白的表达无统计学差异;SD大鼠精原干细胞移植后能在BALB/c裸小鼠生精上皮中克隆增殖,并能分化形成大鼠形态特征的精子,在小鼠精子发生巢内既有大鼠来源的精子发生,又有小鼠内源性精子发生,其供体来源的精子数量较小鼠自身来源的精子数量多。通过体外受精实验提示移植后的精原干细胞在受体内增殖分化形成的精子功能正常,具有受精的能力。结果说明采用常规方法冷冻保存的精原干细胞,移植后能在受体生精上皮中克隆增殖,并能分化形成成熟的精子。     

PIAS2蛋白和生精细胞凋亡在无精子症中相关性的研究

目的 研究PIAS2蛋白和生精细胞凋亡在无精子症中的作用。方法 选取2020年3月至2021年11月体检的健康男性中的30例,记为A组,同期选取就诊的无精子症患者30例,记为B组,检测两组睾丸组织中PIAS2蛋白和生精细胞凋亡情况,评估并分析其在无精子症中的作用。结果 与A组相比,B组睾丸体积及睾丸取精阳性率显著降低;与A组相比,B组睾丸组织中的PIAS2蛋白表达显著降低;与A组相比,B组生精细胞凋亡显著升高;PIAS2蛋白表达与睾丸体积及取精阳性率呈正相关关系;生精细胞凋亡与睾丸体积及取精阳性率呈负相关关系;PIAS2蛋白表达与生精细胞凋亡呈负相关关系;PIAS2蛋白检测对无精子症诊断的灵敏度为82.31%、特异度为77.26%、AUC值为0.826、约登指数为0.59,生精细胞凋亡检测对无精子症诊断的灵敏度为81.54%、特异度为79.25%、AUC值为0.844、约登指数为0.61。结论 PIAS2蛋白表达和生精细胞凋亡与睾丸体积及取精阳性率存在相关性,对无精子症疾病具有一定的诊断价值。     

青春期糖尿病雄鼠血清和性腺血管紧张素转换酶活性变化

４０日龄雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠２１只，分为对照（Ｃ）组，腹腔内注射赋形剂和糖尿病（Ｄ）组，腹腔内注射链脲菌素（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ，ＳＴＺ），５５ｍｇ／ｋｇ体重，观察６０天。结果表明，Ｄ组大鼠的睾丸、附睾、附睾尾重量显著低于Ｃ组（Ｐ＜０．０１）；Ｄ组附睾尾精子计数显著少于Ｃ组（Ｐ＜０．００１）。ＡＣＥ活性测定结果表明，Ｄ组睾丸和附睾尾组织ＡＣＥ活性显著低于Ｃ组（Ｐ＜０．０５），而血清ＡＣＥ显著高于Ｃ组（Ｐ＜０．０１），相关检验显示，附睾重量，附睾尾精子计数与附睾尾ＡＣＥ水平呈显著正相关（Ｐ＜０．０１），与血清ＡＣＥ呈显著负相关（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。     

慢性束缚应激对小鼠海马N6-甲基腺苷及相关酶表达的影响

目的 探讨慢性束缚应激对小鼠海马N6-甲基腺苷(m6A)及相关酶表达影响。方法 将20只C57BL/6J雄鼠随机分成对照(control)组、慢性束缚应激模型(CRS)组；给予CRS组小鼠3周慢性束缚应激建立小鼠焦虑模型，采用旷场实验和高架十字迷宫实验检测各组小鼠焦虑样行为变化；采用免疫组织化学法和m6A RNA甲基化检测试剂盒检测小鼠海马m6A的表达变化；采用Western blotting和Real-time PCR方法分析海马m6A相关酶表达变化。结果 1.小鼠焦虑相关行为学检测结果显示，与control组相比，CRS组小鼠在旷场内框停留时间明显下降(P<0.01);高架十字迷宫开放臂探索时间减少(P<0.0001);2. m6A RNA甲基化检测试剂盒检测结果显示，与control组相比，CRS组小鼠海马m6A含量明显减少(P<0.05);免疫组化结果显示，与control组相比，CRS组小鼠海马m6A阳性产物明显减少(P<0.001);3. PCR结果显示，与control组相比，CRS组小鼠海马去甲基化酶间变性淋巴瘤激酯B(AlkB)同源蛋白5(AL...