补益强心片对慢性心力衰竭大鼠的保护作用

目的研究补益强心片对慢性心力衰竭大鼠的保护作用。方法 60只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组及补益强心片低、中、高剂量组(0.18、0.36、0.72 g/kg),结扎心脏左冠状动脉前降支的方法建立慢性心力衰竭模型。灌胃给药4周后,超声仪检测血流动力学参数(LVEDd、LVESd、LVEF),ELISA检测BNP、ANP水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、caspase-3 mRNA表达,Western blot检测Bcl-2、Bax、caspase-3、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果与模型组比较,补益强心片组血流动力学参数显著改善(P<0.05,P<0.01),BNP、ANP水平,细胞凋亡率,Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论补益强心片对慢性心力衰竭大鼠具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路、抑制凋亡有关。     

丁香活性组分抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的研究

筛选丁香活性组分(active fraction from clove, AFC)对人结肠癌细胞敏感的细胞株,研究AFC对其增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR(phosphoinositide 3-kinase/Akt/mechanistic target of rapamycin pathway)信号通路的影响,揭示AFC诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机制。实验采用CCK-8法检测不同浓度的AFC的细胞毒作用;采用Hoechst 33258荧光染色、Annexin V-FITC/PI双染法检测AFC诱导细胞凋亡的发生;Western blot法检测AFC单独或AFC联合IGF-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ)作用于细胞后,凋亡相关蛋白caspase-3,caspase-9,PARP(poly ADP-ribose polymerase)以及PI3K/Akt/mTOR信号通路PI3K,p-PI3K,Akt, p-Akt, mTOR和p-mTOR蛋白表达情况。结果显示,AFC抑制作用最明显的是人结肠癌HCT116细胞,最佳作用时间为48 h; AFC处理HCT116细胞后,剂量依赖性地出现典型的细胞凋亡特征,如核染色质浓缩、核碎裂、凋亡小体的出现等;Annexin V-FITC/PI双染法结果显示,与对照组比较,50,100μg·mL~(-1) AFC组诱导HCT116细胞凋亡率显著上升(P0.001);凋亡相关蛋白caspase-9,cleaved caspase-3,cleaved PARP均被AFC以浓度依赖方式激活,cleaved caspase-3/procaspase-3,cleaved PARP/PARP,caspase-9/β-actin在100μg·mL~(-1) AFC组与对照组间比较,差异均有统计学意义(P0.001);p-PI3K,p-Akt, p-mTOR蛋白相对表达量呈浓度依赖性的递减,而Akt, mTOR在各组间无明显变化,p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt, p-mTOR/mTOR在50,100μg·mL~(-1) AFC组与对照组间比较,差异均有统计学意义(P0.01)。联合IGF-Ⅰ,削弱了AFC抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的作用,p-Akt/Akt, p-mTOR/mTOR在AFC组和AFC+IGF-Ⅰ组间比较,差异有统计学意义(P0.05);联合IGF-Ⅰ,AFC诱导的cleaved caspase-3,cleaved PARP蛋白表达减弱,cleaved caspase-3/procaspase-3,cleaved PARP/PARP在AFC组和AFC+IGF-Ⅰ组间比较,差异有统计学意义(P0.01)。综上,AFC浓度相关性地激活caspase级联反应诱导人结肠癌HCT116细胞发生凋亡,凋亡发生与PI3K/Akt/mTOR信号通路的抑制有关。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨温下方乙酸乙酯部位对A549细胞移植瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用

目的 探讨温下方乙酸乙酯部位经调控PI3K/Akt信号通路抑制A549细胞移植瘤生长的作用及机制。方法 建立人肺腺癌A549细胞移植瘤裸鼠模型，随机分为模型组、阳性对照组(顺铂注射液，2.0 mg/kg)和温下方高、中、低剂量组(400、200、100 mg/kg),每组5只，药物干预5周后，取裸鼠肿瘤，称定质量并计算抑瘤率，HE染色观察裸鼠肿瘤病理形态学变化，TUNEL染色检测裸鼠肿瘤凋亡情况，Western blot法检测裸鼠肿瘤组织Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K、MMP-3、caspase-3、Bcl-2蛋白表达。结果 与模型组比较，顺铂组和温下方各剂量组肿瘤质量和瘤组织p-Akt、p-PI3K、MMP-3、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡阳性细胞面积比例和瘤组织caspase-3蛋白表达升高(P<0.05),肿瘤细胞出现不同程度的坏死。结论 温下方乙酸乙酯部位可抑制裸鼠A549细胞移植瘤的生长，其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路有关。     

三百棒醇提物通过抗炎和凋亡作用减轻CIA大鼠的关节炎北大核心CSCD

探讨三百棒醇提物(Toddalia asiatica alcohol extract,TAAE)通过磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及其机制研究。首先建立CIA大鼠模型,然后每天口服TAAE和雷公藤多苷片(TGT),每周对后肢关节的肿胀程度进行评分。给药35 d后,苏木素-伊红(HE)染色观察组织病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞因子(TNF-α、IL-6)的水平;TUNEL法检测TAAE对大鼠滑膜组织细胞凋亡的影响;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3及通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的表达水平;RT-qPCR检测Bax、Bcl-2、caspase-3、TNF-α、IL-6、IL-1β及通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的mRNA水平。TAAE可减轻CIA大鼠关节肿胀程度,降低血清炎症因子水平,改善滑膜组织病理改变,促进滑膜组织细胞凋亡,抑制滑膜炎症。此外,RT-qPCR和Western blot实验结果显示TAAE上调促凋亡相关蛋白Bax水平,下调抑凋亡蛋白Bcl-2水平,激活caspase-3促进了滑膜组织细胞凋亡,TAAE还有效地下调了p-PI3K、p-Akt蛋白水平。该研究表明,TAAE对CIA大鼠的关节炎具有很好的治疗作用,并且对降低炎症反应具有很强的药理活性,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,促进滑膜细胞凋亡有关。总体而言,该研究为三百棒的抗炎机制的研究提供了新的线索,并为临床更好应用三百棒治疗炎症性及自身免疫性疾病提供理论依据。     

血根碱通过调控PI3K/Akt信号通路诱导胰腺癌细胞凋亡的机制

目的:探讨血根碱对胰腺癌细胞凋亡的影响及其信号通路调控机制。方法:不同浓度血根碱(2,4,6μmol·L~(-1))处理小鼠胰腺癌Panc02细胞不同时间(24,48,72 h)后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测血根碱对细胞生长抑制作用的影响;采用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染色试剂盒通过流式细胞仪检测血根碱对Panc02细胞凋亡影响;采用花青染料(JC-1)探针试剂盒荧光染料分析检测线粒体膜电位的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),总磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)的表达情况。结果:与空白组比较,不同浓度的血根碱作用同一时间后,随着药物浓度的增加细胞生长抑制率逐渐升高(P0.05),与空白组比较,同一浓度作用不同时间后,随着时间的增加细胞生长抑制率逐渐升高(P0.05);与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组的细胞凋亡率无明显升高,与空白组比较,血根碱4,6μmol·L~(-1)组的细胞凋亡率均明显升高(P0.05);与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组时红绿荧光无变化,血根碱4,6μmol·L~(-1)组红色荧光减弱,绿色荧光增强,Panc02细胞线粒体膜电位降低;与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组处理的Bax,Bcl-2,p-PI3K,p-Akt,Akt和PI3K蛋白表达均无变化,血根碱6μmol·L~(-1)组Bax蛋白表达增高,Bcl-2及PI3K/Akt信号通路中关键蛋白p-PI3K,p-Akt表达降低(P0.05)。结论:血根碱通过抑制PI3K/Akt信号通路有效地诱导小鼠胰腺癌Panc02细胞经线粒体凋亡途径发生凋亡。     

PI3K/Akt通路在芍药苷抗Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的:研究PI3K/Akt通路在芍药苷对PC12细胞神经保护中的作用。方法:芍药苷组(5,10,20μmol·L-1)预处理30 min,然后加入Aβ25-35(20μmol·L-1)共同作用24 h;抑制剂LY294002(10μmol·L-1)于芍药苷(10μmol·L-1)作用前预处理30 min。用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染检测细胞凋亡率,以及Western blot法检测p-Akt,Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3蛋白表达。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,其保护作用可能是通过上调Akt磷酸化水平,增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制caspase-3等的激活而实现的;抑制剂LY294002可减弱上述芍药苷的保护作用。结论:芍药苷可通过激活PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

绿原酸基于PI3K/Akt信号通路对结肠癌细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:探讨绿原酸对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:采用CCK8实验方法检测绿原酸对HCT116细胞增殖的影响,流式细胞术检测绿原酸对HCT116细胞凋亡的影响,免疫印迹技术检测绿原酸对HCT116细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-Akt、B淋巴细胞瘤(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)及Bax蛋白表达的影响。结果:与空白对照组相比,绿原酸能明显抑制HCT116细胞增殖,差异具有统计学意义(P0.05);绿原酸能显著诱导HCT116细胞凋亡,差异具有统计学意义(P0.05);绿原酸能明显抑制p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达,诱导Bax蛋白表达,且呈浓度依赖性。结论:绿原酸能明显抑制HCT116细胞的增殖、诱导其凋亡,其作用可能与抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。     

黄芪注射液对重症肺炎大鼠胸腺细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:探讨黄芪注射液对重症肺炎大鼠胸腺细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法:将40只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、模型组、黄芪高剂量组、黄芪中剂量组和黄芪低剂量组,每组8只。采用气管穿刺注入感染法制作大鼠重症肺炎模型。分别采用原位末端转移酶标记法(Terminal deoxynucleotidyl transfer-ase dUTP nick end labeling,TUNEL)检测各组大鼠胸腺细胞凋亡及Western blot检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。结果:与对照组比较,模型组和黄芪治疗各组胸腺细胞凋亡增加,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和Bax表达增强,除黄芪高剂量组外Bcl-2表达均减弱,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05);与模型组比较,黄芪高剂量组胸腺细胞凋亡减轻,Bcl-2表达增强,cleaved caspase-3和Bax表达减弱(P<0.05),Bcl-2/Bax比值增加。结论:黄芪注射液能减轻重症肺炎时胸腺细胞凋亡,其机制与促进Bcl-2表达,减轻Bax表达,增加Bcl-2/Bax比值有关。     

乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法将人结肠癌HT29细胞分为空白组、乙酰紫草素组(10μmol/L)、奥沙利铂组(1μmol/L)和联合给药组(10μmol/L乙酰紫草素+1μmol/L奥沙利铂),MTT法检测HT29细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HT29细胞凋亡率、qRT-PCR法检测HT29细胞Ki-67、Bcl-2及Bax mRNA表达,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白表达。结果人结肠癌HT29细胞经乙酰紫草素、奥沙利铂和联合给药处理24、48、72 h后,细胞增殖抑制率均增加,其中联合给药组细胞增殖抑制率最高(P<0. 05)。药物处理HT29细胞48 h后,与空白组比较,乙酰紫草素组、奥沙利铂组和联合给药组凋亡率、Bax mRNA表达增加(P<0. 05),而Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0. 05);联合给药组的细胞凋亡率、Bax mRNA表达均高于乙酰紫草素组和奥沙利铂组,Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达低于乙酰紫草素组和奥沙利铂组。结论乙酰紫草素和奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞均具有抑制增殖及诱导凋亡作用,可能与调控PI3K/Akt信号通路有关,且两者联用时效果更好。     

PI3K/Akt信号通路在瓜蒌皮保护心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的研究PI3K/Akt信号通路在瓜蒌皮保护心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法以2.5 mmol/L Na_2S_2O_4诱导心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分为正常组、模型组、瓜蒌皮提取物组及抑制剂组。应用MTT法检测细胞活力;流式细胞术观察细胞凋亡情况;Western Blot测定Akt、p-Akt(Ser 473)、Bax、Bcl-2的蛋白表达水平。结果与模型组相比,瓜蒌皮提取物预处理24 h后能改善心肌细胞形态,明显提高心肌细胞活力。瓜蒌皮提取物能促进Akt、p-Akt(Ser 473)及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制促凋亡蛋白Bax的表达,减少心肌细胞凋亡。PI3K抑制剂LY294002与瓜蒌皮提取物联合处理后,逆转了瓜蒌皮提取物对心肌细胞的上述作用,导致细胞凋亡率上升。结论瓜蒌皮提取物可能通过激活PI3K/Akt信号通路改善缺氧/复氧损伤诱导的心肌细胞凋亡。     

基于PI3K/Akt通路探讨首乌丸对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 探讨首乌丸通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元凋亡的影响。方法 将SPF级SD雄性大50只随机分为正常组、模型组、维生素E组、首乌丸中剂量组及首乌丸高剂量组,除正常组外,其余4组均用D-半乳糖（120 mg·kg^-1）制造衰老模型,同时首乌丸中、高剂量组用首乌丸（1.08、2.16 g·kg^-1）进行灌胃,维生素E组予以维生素E（0.018 g·kg^-1）灌胃。造模6周后取全脑、海马组织,尼氏染色观察海马神经元形态学变化,原位末端标记法（TUNEL）检测海马细胞凋亡,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马组织中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）,磷酸化（p）-PI3K,蛋白激酶B（Akt）,p-Akt、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、叉头框蛋白O3a（FoxO3a）、p-FoxO3a、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马FoxO3a mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠海马神经元凋亡阳性细胞明显增多,凋亡指数显著升高（P<0.01）,海马CA1区尼氏染色显示海马神经元丢失、排列稀疏,尼氏体数量减少,存在尼氏体固缩和深染,p-PI3K、p-Akt、Caspase-3蛋白相对表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著升高（P<0.01）,FoxO3a、p-FoxO3a蛋白相对表达、p-FoxO3a/FoxO3a显著降低（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.01）,Bax蛋白表达显著升高（P<0.01）,FoxO3a mRNA表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,经首乌丸治疗后,凋亡阳性细胞明显减少,细胞凋亡指数显著降低（P<0.01）,海马CA1区尼氏染色显示各治疗组神经元丢失好转,尼氏体增多,排列较密集,大鼠PI3K、Akt蛋白表达差异无统计学意义,首乌丸中、高剂量组的p-PI3K、p-Akt、Caspase-3蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著降低,FoxO3a、p-FoxO3a蛋白表达、p-FoxO3a/FoxO3a显著升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bax蛋白表达显著降低（P<0.01）,Foxo3a mRNA表达显著升高（P<0.01）。结论 首乌丸能够改善海马神经元组织结构,抑制PI3K/Akt信号通路,下调Caspase-3蛋白表达,激活FoxO3a,上调Bcl-2,下调Bax,上调Bcl-2/Bax,从而减少神经元细胞凋亡。     

盐酸石蒜碱对脂肪酸诱导H9c2细胞炎性损伤的保护作用及其机制

目的：研究盐酸石蒜碱(lycorine hydrochloride)对脂肪酸诱导H9c2细胞炎性损伤的保护作用及机制。方法：脂肪酸(100μmol/L)诱导H9c2细胞炎性损伤,采用CCK-8法筛选盐酸石蒜碱最佳给药浓度;蛋白免疫印迹法检测TLR4、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达;荧光显微镜及流式细胞术检测H9c2细胞内活性氧(ROS)产生水平。结果：CCK-8筛选出盐酸石蒜碱的最佳给药浓度为5、10μmol/L。与正常对照组比较,模型组TLR4蛋白表达及p-PI3K/PI3K、ROS水平显著升高,p-Akt/Akt显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,盐酸石蒜碱组TLR4蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR、ROS水平显著降低,p-Akt/Akt水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论：盐酸石蒜碱对脂肪酸诱导H9c2细胞炎性损伤具有保护作用,其机制可能与抑制TLR4、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达,促进Akt蛋白磷酸化,抑制炎性损伤H9c2细胞内ROS的产生有关。     

蝙蝠葛碱通过调控PTEN/PI3K/Akt通路抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖与诱导凋亡

目的:探讨蝙蝠葛碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响及潜在机制。方法:培养MCF-7细胞至对数生长期,经终浓度为0、2.5、5、10μg/mL的蝙蝠葛碱处理,其中0μg/mL蝙蝠葛碱为对照组;分别采用MTT法、流式细胞术、Hoechst染色、实时定量PCR法、Western blot检测蝙蝠葛碱对MCF-7细胞增殖抑制率、凋亡率、凋亡指数、凋亡相关基因及PTEN/PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响。结果:与对照组比较,蝙蝠葛碱各浓度组细胞增殖抑制率、凋亡率及凋亡指数均显著升高(P0.01);与对照组比较,蝙蝠葛碱各浓度组Bcl-2 mRNA表达显著降低,Bax、Caspase-3 mRNA表达显著升高(P0.05或P0.01);与对照组比较,蝙蝠葛碱各剂量组PTEN蛋白表达显著升高,p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著降低(P0.05或P0.01)。结论:蝙蝠葛碱具有抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖与诱导凋亡作用,其机制与调控PTEN/PI3K/Akt通路有关。     

阳和汤对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的:探讨阳和汤对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:CCK-8检测阳和汤提取物不同浓度(0、10、20、40、80、120μg/ml)分别在24小时、48小时、72小时对MDA-MB-231细胞增殖的影响。设空白对照组(给等量培养基),阳和汤低、中、高剂量组(分别按10、20、40μg/ml浓度给药),药物干预24小时后,流式细胞术检测各组细胞凋亡的情况;免疫蛋白印迹法检测各组细胞Bcl-2、Bax、p-Akt、total Akt、pPI3K、total PI3K表达情况。结果:相对于空白对照组,阳和汤各剂量组细胞增殖的抑制率均增高,且对细胞增殖的抑制作用呈时间与剂量依赖,差异有统计学意义(P0. 05)。药物干预24小时后,相对于空白对照组,阳和汤各剂量组MDA-MB-231细胞凋亡率均增加,差异具有统计学意义(P0. 05); Bax表达增加、Bcl-2表达降低,p-PI3K相对PI3K、p-Akt相对Akt表达均降低,差异有统计学意义(P0. 05)。结论:阳和汤可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能与其抑制PI3K/Akt信号通路的活化有关。     

康心饮对缺血性心肌病大鼠心肌凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路的影响

目的观察康心饮对缺血性心肌病(ICM)大鼠心肌凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路的影响,探讨其对ICM的作用及可能机制。方法 66只大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、卡托普利组及康心饮低、中、高剂量组,每组11只。采用左前降支结扎法制备缺血性心肌病模型。模型组予生理盐水10 m L/(kg·d)早晚灌胃,卡托普利组予卡托普利2.86 mg/(kg·d)早晚灌胃,康心饮低、中、高组分别予康心饮9.2、18.4、36.8 g/(kg·d)早晚灌胃,给药2周。TUNEL法检测心肌凋亡情况,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、PI3K、Akt、FoxO1蛋白表达,RT-PCR检测PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组心肌凋亡增多(P0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达量升高(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达量下降(P0.01),PI3K、p-Akt、p-FoxO1蛋白和PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达均下降(P0.05);与模型组比较,康心饮组低、中、高剂量和卡托普利组心肌凋亡均明显减少(P0.01),Bax和Caspase-3蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达增加(均P0.05),PI3K、p-Akt、p-FoxO1蛋白及PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达均升高(P0.01),且康心饮高剂量组和卡托普利组优于康心饮低、中剂量组(P0.05)。结论康心饮可能通过激活PI3K/Akt/FoxO1信号通路,抑制ICM心肌细胞凋亡。     

紫背万年青提取物联合吉非替尼对A549肺癌细胞的协同作用研究

目的:探讨紫背万年青提取物与吉非替尼联用对A549肺癌细胞的协同作用,并阐明其可能的分子机制。方法:采用CCK-8法检测细胞活力和细胞增殖的影响,并通过Isobologram方法进行联用效应分析。采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。采用Western blot法检测相关蛋白,包括Bcl-2、Bax、p-PI3K和p-Akt的表达水平。结果:与单用吉非替尼相比,紫背万年青提取物与吉非替尼联用能显著降低吉非替尼抑制A549细胞IC₅₀(P<0.05);Isobologram分析表明联用具有协同效应。联用可以显著诱导细胞的凋亡(P<0.05),同时上调凋亡标记蛋白Bax/Bcl-2的表达比例(P<0.05)。同时,联用也可以显著提高G0/G1期的比例(P<0.05),促进细胞分裂G0/G1停滞。Western blot结果表明,联用可以显著下调p-PI3K和p-Akt的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:紫背万年青提取物与吉非替尼联用可协同抑制细胞增殖、阻滞细胞周期和促进细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

莪术醇诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡及对PI3K/Akt信号通路相关蛋白的影响

目的观察莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡作用及对PI3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt信号通路相关蛋白的影响。方法采用MTT法检测不同浓度莪术醇以及临床常用抗肿瘤药物顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率及对细胞周期的影响;Western blotting法检测莪术醇、顺铂及其两者联合诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡过程中PI3K/Akt信号通路蛋白(PI3K、p-PI3K、Akt、pAkt)的表达。结果莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞具有生殖抑制作用,其生殖抑制作用呈剂量-时间正效应关系;莪术醇可以促进人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡,细胞凋亡率随着莪术醇浓度增大而增强;不同质量浓度莪术醇处理SKOV3细胞48 h后,细胞周期分布发生明显改变,药物的作用将肿瘤细胞的生长阻止在G0/G1和S期;莪术醇、顺铂及其两者联合在诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡时,下调了PI3K/Akt信号通路中p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平,且莪术醇和顺铂联合应用时具有协同效应,联合组p-PI3K、p-Akt蛋白表达下调最为明显。结论莪术醇可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活来阻滞人卵巢癌SKOV3细胞周期,诱导细胞凋亡,进而阻止肿瘤细胞的生长或诱导其分化。     

PESV干预K562细胞PI3K/Akt 信号通路凋亡调控的研究

[目的]探讨PESV对K562细胞PI3K/Akt信号蛋白及凋亡调控因子Bcl-2和Bad表达的影响。[方法]将体外培养K562细胞,经PESV处理不同时间后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化,实时荧光定量RT-PCR检测Bcl-2、Bad mRNA水平变化。[结果]与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率显著增加,PI3K及p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达降低,促凋亡基因Bad mRNA表达增加。[结论]PESV可能通过降低PI3K、Akt信号蛋白表达,调节Bcl-2和Bad表达,抑制K562细胞增殖,促进其凋亡。     

新藤黄酸体外抗肺癌血管生成的作用机制研究

为了观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对肺癌血管生成的影响及初步的作用机制。该实验以新藤黄酸处理肺腺癌A549细胞的条件培养基培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立非直接接触型细胞共培养体系;应用Matrigel胶建立HUVEC的二维培养模型,观察新藤黄酸对血管生成的影响;DAPI染色倒置荧光显微镜下观察新藤黄酸对HUVEC细胞凋亡的影响;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术分析新藤黄酸对HUVEC凋亡率的影响;Western blot法检测新藤黄酸对HUVEC中PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt,VEGF蛋白表达的影响;采用PTEN-siRNA转染细胞后,RT-PCR法检测PI3K,Akt基因的表达水平。结果表明,新藤黄酸能明显抑制血管生成,其抑制效果与剂量相关;DAPI染色荧光显微镜下可见HUVEC可出现凋亡形态特征;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测结果显示新藤黄酸诱导HUVEC细胞凋亡;Western blot法检测结果表明新藤黄酸下调了p-PI3K,p-Akt蛋白的表达水平,而对PI3K,Akt蛋白表达影响不明显。RT-PCR法检测表明PTEN-siRNA转染入细胞后,能上调PI3K,Akt mRNA基因的表达。体外研究表明新藤黄酸能抑制肺癌血管生成,抑制血管生成的机制可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

常春藤皂苷元对前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨常春藤皂苷元对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,以及可能的机制。方法:培养人前列腺癌细胞株DU145,分别加入不同浓度常春藤皂苷元(25、50、100μg/ml)作用于DU145细胞,继续培养12、24、36、48h,采用MTT法检测不同浓度常春藤皂苷元对DU145细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;利用Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;利用实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax、PI3K、Akt基因表达,利用Western blot检测Bcl-2、Bax、PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达。结果:随着常春藤皂苷元浓度(25、50、100μg/ml)的增加,可显著抑制DU145细胞的增殖,这种抑制作用具有时间和剂量依赖性;随着常春藤皂苷元浓度(25、50、100μg/ml)的增加,DU145细胞细胞凋亡率升高;与对照组相比,常春藤皂苷元能显著抑制DU145细胞迁移和侵袭能力;常春藤皂苷元不同浓度组处理DU145细胞48h后,随着常春藤皂苷元浓度升高,Bcl-2、PI3K、Akt mRNA和蛋白相对表达量下降,而Bax mRNA和蛋白相对表达量升高。结论:常春藤皂苷元可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,促进细胞凋亡发生,且表现出一定的剂量-反应关系,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。