成年大鼠神经干细胞的冷冻复苏及生物学特性观察

目的 建立成年大鼠神经干细胞冷冻复苏方法，观察冻存复苏后神经干细胞的活力及生物学特性。方法 采用10％BSA 8％DMSO做冷冻保护剂，于液氮中冻存；采用细胞培养和免疫细胞化学方法观察冻存复苏后细胞的活力、形态、分化能力及特异性抗原表达。结果 不同的冻存时间、细胞代数对冻存后细胞的存活率没有明显影响；冻存复苏的神经干细胞不仅有较高的存活率，而且仍保持其原有的生物学特性。结论 成年大鼠神经干细胞的冻存并不影响其活力及原有的生物学特性。     

皮肤及皮肤相关组织细胞的深低温冻存研究进展

保持冷冻后皮肤较好的活力对皮肤移植十分重要,采用慢速或中速降温（-1℃／min）或（-60℃／min）可以获得较高的活性。冷冻保护剂被证实对保持低温冻存皮肤活力有益,目前发现的冷冻保护剂有丙二醇、丙三醇、二甲基亚枫、海藻糖。采用海藻糖联合二甲基亚砜最有利于复合皮肤组织在深低温储存和冻融后保留活性。D-阿洛糖作为冷冻保护剂的添加剂,对皮肤角化细胞和人真皮成纤维细胞生存能力有益。玻璃化冷冻技术则使冻存后皮肤及皮肤相关组织、细胞活性达到80％以上。     

-80℃冻存外周血干细胞21例分析

目的：探索一种操作简单、干细胞回收率和存活率高、成本低廉的外周血浆存方法。方法：采用终浓度为5％二甲基亚砜（DMSO），3％羟乙基淀粉（HES）和4％人血白蛋白（HSA）的干细胞保护剂直接－80℃冰箱冰存外周血干细胞，并检测不同时相点（1、3、6、9、12个月）外周血干细胞的细胞活性，单个核细胞（MNC）和CFU－GM、CD34^ 细胞的回收率。结果：随着保存时间的延长，观察到12个月时，冻存干细胞的细胞活性、MNC回收率和CD34^ 细胞回收率分别为86．46％、88．58％、87．65％，与冻存1个月相比无统计学差异（P＞0．05），足以保障干细胞移植后造血重建的成功。结论：5％DMSO，3％HES和4％HAS作为干细胞冷冻保护剂直接－80℃冰箱冻存外周血干细胞是一种简便、实用、安全、可靠、成本低的外周血干细胞冻存方法，具有广泛的临床推广价值。     

人胎胰岛冷冻保存的实验研究

报告了一种在无速率冷冻装置条件下获得保持较高成活率和功能的胰岛冻存方法。冻存胰岛复苏后活性测定结果表明，（１）胰岛成活率为８５％～９０％；（２）保持了胰岛素的分泌功能和对葡萄糖的反应力；（３）β细胞可进行旺盛的胰岛素生物合成；（４）仍保持完整的细胞结构和分泌结构。提示人胚胎胰岛在冻存后仍有与新鲜胰岛相似的功能和活性。     

自体造血干细胞冷冻保存方法的实验研究

目的 观察程序降温仪冷冻法和HES冷冻法在冷冻保护体系和技术实施上的差别，选择一种可以获得良好回收率，操作过程更为简便和安全的冷冻保存方法。方法 (1)通过血细胞分离机，获得去除了红细胞后的单个核白细胞。(2)使用程序降温仪冷冻法，将细胞冷冻后，放置液氮中保存。(3)使用HES冷冻法，直接置-80℃低温冰箱中保存。(4)采用常规计数法，台盼蓝拒染法，甲基纤维素法，流式细胞仪，检测两种方法冻存自体造血干细胞前后，单个核细胞的总数、细胞存活数，CFU—GM集落形成数、CD34阳性细胞的百分率。(5)在37℃恒温水浴槽中，快速解冻细胞。结果 用两种冻存方法保存的自体造血干细胞，解冻回输给患者后，均未出现过敏症状和特殊的不良反应。检测两种不同冻存方法，在冻存前后单个核细胞的总数、细胞存活率、以及CFU—GM集落形成数和CD34阳性细胞的百分率。经统计学处理，无显著性差异。在操作时间上，程序降温仪冷冻法为4h，HES冷冻法为1．5h。结果表明，采用HES冷冻体系，直接置-80℃低温冰箱短期冻存自体造血干细胞，回收率不受影响，方法简单，操作时间短，临床使用安全可靠。     

体外培养细胞的长期冷冻保存

在体外细胞培养过程中,如按常规法传代保种,不仅耗时费力,且能引起细胞性状发生改变,同时又易受微生物或细胞之间的感染。为了避免在细胞培养过程中常会遇到的这些问题,1959年Hauschka等曾应用低温(-78℃)保存法冻存82种肿瘤和正常细胞,初获成效。但细胞经长期冻存后存活率很低,仅2～3％。近年来,由于冷冻技术的发展,普遍采用深低温(-196℃)的液氮冻存法,大大提高了细胞的存活率。据报道,若干细胞系经液氮冻存1～2年后的存活率仍可达     

人参总皂苷对骨髓造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究

目的 探讨骨髓造血细胞的冷冻保存效果及人参总皂苷(TSPG)降低冷冻损伤的作用。方法 以5％二甲基亚砜(DMSO)为冷冻保护剂，采用逐步降温法将骨髓造血细胞在液氮中保存3～5个月，复苏后应用台盼蓝拒染法、集落形成试验、CD34^ 及细胞总数回收率等，测定骨髓造血细胞生物学活性的变化；将不同剂量的TSPG与复苏的骨髓造血细胞共培养，应用集落形成试验、MTT比色分析法及流式细胞术等方法检测TSPG对骨髓造血细胞冷冻损伤可恢复性的影响。结果 骨髓造血细胞在低温保存时一部分细胞会失去增殖能力，但这种损伤并不与保存时间成正比。细胞复苏后，加入合适剂量的TSPG(25μg／mL)，可明显提高冻存骨髓造血细胞的集落产率；TSPG在一定浓度范围内(25～50μg／mL)能促进冻存骨髓造血细胞的增殖；TSPG(25μg／mL)能促进冻存骨髓造血细胞进入细胞增殖周期。结论 TSPG能促进冷冻骨髓造血细胞的复苏、增殖，提高骨髓细胞冷冻损伤的可恢复性，对应用冻存骨髓造血细胞进行造血移植有一定意义。     

人外周血造血干细胞低温保存方法的实验研究

目的：观察－196℃程控降温冻存方法和－80℃直接冻存方法中单用二甲基亚砜（DMSO）与DMSO加羟乙基淀粉（HES)两种浆存保护剂对人外周血造血干细胞体外冻存的效果。方法：对5例经Cs-3000Plus血细胞分离机分离所得的外周血单个核细胞分别加入10％DMSO和5％DMSO加6％HES冻存保护剂。并分别以－196℃程控降温冻存方法和－80℃直接冻存方法保存15d，以快速复温法复苏细胞，检测冻存前后细胞活率及有核细胞、CD34^ 细胞、粒单系集落形成单位（CFU－GM）、红系集落形成单位（CFU－E）回收率。结果：在－196℃程控降温冻存方法时，单用DMSO和DMSO加HES两组在细胞活率、有核细胞回收率、CD34^ 细胞回收率、CFU－E回收率方面差别无显著性意义；在－80℃直接冻存方法时，MDSO加HES组有核细胞回收率、CFU－E回收率高于单用DMSO组。结论：－196℃程控降温冻存时10％DMSO和5％DMSO加6％HES两种冻存保护剂均可有效应用于外周血造血干细胞保存；一80℃直接冻存方法适合5％DMSO加6％HES冻存保护剂，也可有效用于外周血造血干细胞保存。     

深低温冻存对SLE患者外周血CD34+ 阳性细胞活性的影响

目的探讨深低温冻存对系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血CD34^＋细胞活性的影响。方法ClinMACS磁性分选系统分选CD34^＋细胞。采用5％二甲基亚砜,6％羟乙基淀粉和4％人血白蛋白作冷冻保护剂,-80℃直接冻存。观察不同时相复温后的细胞台盼兰拒染率、CFU—GM计数以及移植后造血恢复时间。结果SLE患者与正常人脐血CD34^＋细胞冻存后1～90d,细胞活性无明显差异。SLE患者与非自身免疫性疾病患者同样方法冻存造血干细胞,移植后造血恢复特征相似。结论-80℃深低温保存对SLE患者造血干细胞活性无影响。     

冻存增强人外周血单个核细胞产生IL－2的机理初探

作者用ＥＬＩＳＡ法研究了冻存对人外周血革个核细胞（ＰＢＭＣ）产生白介素２（ＩＬ－２）的影响。结果表明，冻存后ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２能力明显增强；去除ＣＤ８＋细胞或加入消炎痛后，ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２能力增强，且与ＰＢＭＣ冻存后产生ＩＬ－２水平相同。研究提示：冻存过程有可能通过抑制ＰＧＥ２分泌细胞及使ＣＤ８＋细胞失活，使ＰＢＭＣ增加ＩＬ－２的产生。     

冻贮大鼠甲状腺组织自体移植的计量形态学研究

应用计量形态学的方法,对大鼠自体移植的新鲜和冷冻的甲状腺组织进行了光镜和电镜观察.结果表明,26只大鼠行自体移植的新鲜和冷冻的甲状腺组织,4周末均存活且生长良好.冷冻保存移植物的面积及其滤泡的平均直径,均明显小于新鲜移植物(P<0.01).但在超微结构水平上,冷冻及新鲜移植物的滤泡上皮细胞,其线粒体和粗面内质网的体密度和面密度无显著差别(P>0.05).提示冷冻后移植物的存活细胞数少于新鲜移植物,但电镜下二者单个滤泡的主要细胞器的大小和含量并无差别,说明生长4周的冷冻移植物的滤泡上皮细胞结构已完全复原,从结构上已看不出冷冻损伤的影响.     

YAC-1细胞冻存方法的研究

目的研究YAC-1细胞保种的冻存方法。方法用3种不同的冻存方法对YAC-1细胞进行冷冻保存,在冻存1年内不同时间段对细胞存活率及复苏24小时后细胞的生长状况进行比较。结果用不同的冻存方法冻存YAC-1细胞,不同时间段复苏后细胞存活率不同,3种方法无显著性差异,生长状况均良好,为实验室选择适合的冻存方法提供了依据。     

冷冻大鼠肾上腺自体移植的超微结构观察

应用电子显微镜分别对经冷冻保存的和新鲜自体移植的大鼠肾上腺组织进行观察。结果表明,47只大鼠新鲜肾上腺组织自体移植成活40只(85.1%)冷冻保存的47只大鼠肾上腺自体移植成活27只(57.7%)。未行移植单纯冷冻保存的肾上腺组织,复温后多数细胞的形态无改变,部分细胞核内出现不规则腔隙,核质分布不均匀。未冷冻的肾上腺自体移植后,5d细胞开始再生,25～30d细胞成熟;冷冻的肾上腺移植后,与前者相比再生略缓慢,再生细胞数量少。47只未冷冻的肾上腺组织移植后,有5只髓质细胞成活。提示冷冻保存法对肾上腺组织有一定的保存作用。     

超低温冻存对大鼠骨髓细胞膜完整性及功能的影响

目的：研究超低温冻存后的大鼠骨髓细胞的细胞膜表面形态和功能的完整性。方法：采用超低温保存技术对大鼠骨髓细胞进行慢速、快速冻存比较。结果：以VS1作为快速冻存液，快速冻存骨髓细胞，不但快速简便，而且快速冻存较短时间的大鼠骨髓细胞的荧光强度以及膜表面形态与新鲜对照组及慢速冻存组相比差异无显性。结论：快速冻存法冻存骨髓细胞是可行的，本研究为快速冻存骨髓细胞的实际应用提供了一定的科学依据。     

胎儿垂体细胞离体培养的研究

本文采用机械法制备胎儿垂体细胞悬液后进行了冻存前、后的离体培养。经生长激素(GH)测定、细胞染色及计算机图像分析,证明胎儿垂体细胞冻存前、后经体外培养均有活性。本方法成本低廉、简便易行。为垂体的适时移植增加了供体来来。     

人类卵巢组织玻璃化冷冻及复苏后形态学及组织增殖活性观察

目的 探讨玻璃化冷冻对成人卵巢组织中原始卵泡与初级卵泡的形态学及细胞增殖状态的影响.方法 采用液氮直接覆盖玻璃化冷冻(direct cover vitrification,DCV)方法冻存成人卵巢组织块,液氮保存2周后复苏组织.观察和比较冻融前后人卵巢组织中原始卵泡与初级卵泡组织形态学改变;免疫组化染色测定经体外培养48 h后新鲜和冻融卵巢组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况.结果 冻融前后人卵巢组织内原始卵泡和初级卵泡分布差异无统计学意义(P>0.05);新鲜卵巢组织中,形态异常的原始卵泡比例与初级卵泡比例差异无统计学意义(P>0.05),冻融卵巢组织中,形态异常的原始卵泡比例低于形态异常的初级卵泡比例(P<0.05);新鲜组、新鲜及冻融后培养组均有PCNA的阳性表达,PCNA 阳性表达可见于中间型卵泡和初级卵泡的卵母细胞和颗粒细胞、卵巢组织间质细胞.结论 利用DCV方法对人卵巢组织进行冻存能够保存原始卵泡和初级卵泡,冻融过程对原始卵泡和初级卵泡形态结构都可能造成一定程度的损伤,冻融后组织内卵泡有体外生长发育的潜力.     

桥本甲状腺炎组织中细胞凋亡相关蛋白表达的意义

目的　探讨细胞凋亡相关蛋白在桥本甲状腺炎（HT）发病机制及病理变化中的作用及意义。方法　采用TUNEL法检测HT及非毒性甲状腺肿（NTG）患者各17例甲状腺标本中的细胞凋亡水平,并用免疫组织化学方法检测凋亡相关蛋白Fas,FasL,Bcl-2和Bax的表达及分布。结果　HT组细胞凋亡百分率(32.5%±12.3%)比NTG组(1.3%±0.7%)显著增高（P<0.01）,其甲状腺细胞Fas、FasL、Bcl-2和Bax染色阳性率(88%～94%),也显著高于对照组(35%～47%,P<0.01）。HT中凋亡细胞及Fas、FasL和Bax染色强阳性甲状腺细胞多分布于浸润淋巴滤泡附近,Bcl-2染色强阳性细胞则多分布于远离浸润淋巴滤泡的区域。浸润淋巴细胞中Fas,FasL,Bcl-2和Bax染色均较弱。结论　HT中有较高水平的细胞凋亡,凋亡相关蛋白Fas,FasL,Bcl-2和Bax在甲状腺细胞中呈特征性分布的高表达,而在浸润淋巴细胞中表达较少,这些改变与甲状腺滤泡萎缩、破坏及弥漫性淋巴细胞浸润有关。     

低温对人脐血内皮祖细胞的影响

目的将人脐血中分离培养出的内皮祖细胞进行低温保存和快速复苏,建立EPC细胞系,比较冻存前后细胞形态及生物学功能是否改变。方法采集人脐血,分离出单核细胞,对细胞进行冻存和复苏,测定内皮祖细胞增殖能力及黏附能力。结果内皮祖细胞经冻存和复苏后测得细胞的存活率为（84.17±4.02）%,细胞的形态学未见明显改变;与未冻存的细胞相比,刚复苏后即行增殖和黏附能力的检测,细胞的增殖和黏附能力有显著变化,P〈0.05;细胞复苏后继续培养48h行增殖和黏附能力检测,两者未见明显差异,P〉0.05。结论对低温保存后复苏的EPC,立即行增殖和黏附能力检测其能力均降低,复苏后继续培养48h再次检测未见明显差异。     

低温冻存对人绒毛膜来源的间充质干细胞多向分化潜能的影响

目的 探讨低温保存对人绒毛膜来源的间充质干细胞(hCDMSC)体外生长特性和多向分化潜能的影响,验证冻存后hCDMSC作为组织工程种子细胞的可行性.方法 用胶原酶和胰蛋白酶法消化胎盘组织基蜕膜,传代培养,取第4代细胞置于液氮深低温(-196 ℃)条件下冻存3个月后复苏,采用MTT法测定复苏hCDMSC的增殖活性,茜素红...