LYVE-1在肝细胞癌组织中的表达及其意义

目的：探讨淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(LYVE-l)在肝癌组织中的表达及其临床意义。
方法：采用蛋白质印迹法检测24例低分化肝细胞癌, 6例高分化肝细胞癌和30例正常肝组织中LYVE-1的蛋白表达。
结果：肝癌组织LYVE-l表达阳性。低分化肝癌组织中LYVE-l的表达高于高分化肝癌组织二者均显著高于正常肝组织（P＜0.05）。
结论：LYVE-1可作为肝癌组织的淋巴管特异性标志物,为肝癌的预后提供了一种更有效的研究手段。

     

肝细胞癌中Bcl-2|Fas|Fas-L的表达及相关性研究

目的：探讨肝细胞癌中Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白的表达及意义。
方法：采用免疫组化方法检测40例肝癌组织和10例良性肿瘤组织中Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白的表达,分析它们之间的关系及与肝癌临床病理参数的关系。
结果：40例肝细胞癌中Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白的表达率分别为45%,75%,70%,10例肝良性病变中Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白的表达率分别为0%,30%,30%。Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白在肝细胞癌中的表达率高于肝良性病变,差异有统计学意义（P＜0.05）。其中Bcl-2蛋白的表达与Fas蛋白的表达呈正相关（r=0.390,P＜0.05）。
结论：HCC的Bcl-2表达上调可能通过阻断Fas/Fas-L凋亡通路和其直接抗凋亡作用导致HCC细胞得以免疫逃逸。Fas,Fas-L表达的肿瘤细胞具有更强的浸润转移能力,其极有可能作为判断肿瘤转移能力的参考指标。

     

AIBP在肝癌细胞中的表达及意义与含AIBP基因及AFP启动子驱动的双自杀基因表达载体构建

目的：探讨载脂蛋白A-I结合蛋白（AIBP）在肝癌细胞中的表达及意义。方法：用RT-PCR与Western blot法分别检测正常肝细胞株L02,AFP阳性人肝癌细胞株HepG2和Hep3B,及AFP阴性人肝癌细胞株SMMC7721中AIBP基因与蛋白的表达;构建AFP启动子驱动的双自杀基因（CD,TK）+AIBP基因过表达载体pcDNA3.1-AFP-AIBP-yCD/TK,并转染Hep3B和SMMC7721细胞,用MTT法检测转染后细胞的增殖能力,用RT-PCR和Western blot法检测细胞AIBP,血管内皮生长因子（VEGF）,VEGF受体2（VEGFR-2）,基质金属蛋白酶9（MMP-9）基因和蛋白的表达。结果：AIBP mRNA和蛋白在正常肝细胞中高表达,而在各肝癌细胞系中均表达下调,且Hep3B和SMMC7721细胞中下调明显。成功构建pcDNA3.1-AFP-AIBP-yCD/TK真核表达质粒并转染入Hep3B和SMMC7721细胞。转染后AFP阳性Hep3B细胞生长到明显抑制,但AFP阴性SMMC7721细胞增殖不受影响;两种细胞的AIBP基因与蛋白表达均明显上调,而VEGFR-2,VEGF和MMP-9基因与蛋白表达明显表达下调。定量指标间的差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：AIBP在肝癌细胞中表达下调,AIBP与肝癌细胞的侵袭转移能力有关,而与细胞增殖能力无关;成功构建了联合基因载体pcDNA3.1-AFP-AIBP-yCD/TK。

     

PTCH和SMO在大鼠肝癌中的表达及意义

目的：探讨PTCH和SMO两种基因在大鼠肝癌中的表达及其意义。
方法：用二乙基亚硝胺诱导SD大鼠肝癌模型,实时荧光定量PCR法检测大鼠肝癌组织及相应癌旁良性组织中PTCH mRNA和SMO mRNA的表达。
结果：13例肝癌癌组织中与其旁良性组织PTCH mRNA表达量为6.33±0.62与7.18±0.99,而SMO mRNA表达量为7.93±1.00与8.76±0.83,两组间均有统计学差异（P＜0.05）。
结论：PTCH和SMO是Sonic Hedgehog（SHH）信号通路激活的重要因子;SHH通路可能参与肝癌的发生。

     

黄芪注射液对肝癌细胞HepG2生长及细胞内NF-κB蛋白表达的影响

目的：探讨黄芪注射液对肝癌细胞生长及细胞内NF-κB蛋白表达的影响。
方法：采用系列浓度的黄芪注射液作用HepG2细胞，以MTT法检测黄芪注射液对HepG2细胞生长的影响。根据MTT实验结果，分别采用浓度为0，6.25%，12.5%，25.0%的黄芪注射液作用HepG2细胞48 h，Western blot法检测各组肝癌细胞中NF-κB的表达。
结果：不同浓度黄芪注射液对HepG2细胞的生长均有抑制作用，并呈浓度依赖性（P＜0.05~0.01），其半数抑制浓度（IC50）为0.39192。Western blot检测显示，黄芪注射液能浓度依赖性抑制HepG2细胞中NF-κB蛋白表达。
结论：黄芪注射液对肝癌HepG2细胞的生长有抑制作用，并能下调细胞NF-κB蛋白的表达。

     

以发热为首发表现的肝癌误诊为肝脓肿3例报告

目的：探讨肝癌误诊为肝脓肿的原因,提高诊疗水平。
方法：回顾性分析以发热为首发表现的肝癌误诊为肝脓肿3例患者的临床资料。
结果：3例患者均因误诊,导致病程迁延。其中2例临床治疗效果良好,1例因误诊而错过最佳治疗时机。
结论：原发性肝癌和继发性肝癌均缺乏特异性临床表现,容易误诊。全方位综合分析临床表现、实验室检查及影像学资料,可减少误诊。

     

ADAM23|αvβ3在大肠癌中的表达与大肠癌肝转移的关系

目的：探讨ADAM23,αvβ3在大肠癌中的表达及其与肝转移等临床病理因素的关系。方法：应用免疫组化和RT-PCR方法检测53例大肠癌及其癌旁组织及20例良性病变组织中ADAM23,αvβ3的表达情况,并分析两者的蛋白表达与临床病理因素的关系。结果：大肠癌组织中ADAM23蛋白与mRNA阳性表达率明显低于癌旁组织与良性病变组织（均P<0.05）,而αvβ3蛋白与mRNA阳性表达率明显高于癌旁组织与良性病变组织（均P<0.05）。大肠癌组织中ADAM23和αvβ3蛋白的表达呈负相关（χ2=10.3390;r=-0.637,P<0.01）。ADAM23和αvβ3的蛋白表达与患者的性别,年龄及分化程度无关（均P>0.05）,而与临床分期,淋巴转移及肝转移有关,此外ADAM23蛋白的表达还与大肠癌浸润深度有关（均P<0.05）。结论：大肠癌中ADAM23呈低表达,αvβ3呈高表达,两者可能与大肠癌的肝转移等不良临床转归有关。

     

N-cadherin、 β-连环素在肝癌组织中的表达及与Wnt信号途径的关系

目的 观察肝癌(HCC)中N-cadherin分子是否调控β-连环素(β-catenin)的表达及Wnt信号途径的活化。方法 免疫组织化学分析64例肝癌组织中N-cadherin及β-catenin的表达及相互关系。调控肝癌细胞株HCCLM3、SMMC-7721中N-cadherin表达并检测β-catenin的表达及Wnt信号途径的活化。结果 64例肝癌中,N-cadherin表达缺失34例;β-catenin在细胞膜上表达,无细胞核内聚集,且13例细胞膜表达缺失;细胞膜上β-catenin表达缺失与N-cadherin表达缺失呈正相关(P＜0.05)。下调HCCLM3细胞或上调SMMC-7721细胞中的N-cadherin表达导致细胞膜上β-catenin表达减弱或增强,但均未导致Wnt信号途径的活化。结论 在肝癌中,N-cadherin表达与细胞膜上β-catenin的表达水平呈正相关,但N-cadherin分子并不参与Wnt信号途径的调控。     

肝癌细胞β-catenin表达及其亚细胞内分布

目的肝癌细胞在细胞膜、细胞浆和细胞核β-catenin蛋白分布及其与肝癌分化程度的关系。方法利用免疫组织化学和Western Blotting两种方法检测正常肝、肝硬化和肝癌组织细胞表达pcatenin，及其在细胞膜、细胞浆和细胞核内分布情况。结果正常肝、肝硬化细胞膜β-catenin分布均匀、清晰、完整，细胞浆仅有少许黄色颗粒，Western Blotting显示胞浆及胞核无明显β-catenin分布。免疫组化显示肝癌细胞膜β-catenin分布不均匀、不连续，甚至缺如，低分化肝癌细胞膜β-catenin分布较高分化癌少，肝癌细胞浆呈现β-catenin高表达。18例（90％）肝癌细胞膜β-catenin表达量明显减少，10例（50％）胞膜分布不连续或缺如，细胞间界限不清楚，癌细胞大小也不一致；17例（85％）细胞浆明显的pcatenin积聚，而且细胞浆分布不均匀；随肝癌分化程度不同，pcatenin表达也有明显差异，7例（77．8％）高分化肝癌细胞膜pcatenin分布较为清楚连续，细胞间有界限，细胞浆表达量较多，分布均匀。4例（80％）低分化肝癌pcatenin细胞膜表达较少细胞界限不清楚，细胞浆pcatenin分布不均匀，呈点状积聚。中度分化的肝癌细胞膜和细胞浆内pcatenin分布界与高低分化之间，5例（83．3％）细胞浆pcatenin表达阳性。Western Blotting检测肝癌细胞浆和细胞核均有分布，且核内积聚免疫组化法难以观察。结论肝癌细胞pcatenin表达在细胞膜、细胞浆和胞核异常分布与Wnt信号细胞内转导异常，这可能与肝癌快速增殖、高侵袭和转移有关，为肝癌的临床治疗和新药研究提供了理论基础。     

microRNA-200c在胰腺癌干细胞中的表达及作用

目的：探讨microRNA-200c（miRNA-200c）在胰腺癌干细胞中的表达及作用。方法：应用流式细胞术在人胰腺癌PANC-1细胞中以CD24+CD44+ESA+为标记物分选胰腺癌干细胞,并通过NOD/SCID小鼠移植瘤实验验证其肿瘤干细胞特性;分别用RFQ-PCR法Transwell试验检测PANC-1细胞、胰腺癌干细胞以及转染miRNA-200c前体片段或阴性对照序列的胰腺癌干细胞的miRNA-200c表达与侵袭能力。结果：PANC-1细胞中分选出CD24+CD44+ESA+细胞（占0.8%）具有肿瘤干细胞特性,其在小鼠皮下移植后的移植瘤体积明显大于同期移植的PANC-1细胞[（1 725.14±261.29）mm3 vs.（479.65± 99.67）mm3,P<0.05];胰腺癌干细胞中miRNA-200c的表达量明显低于PANC-1细胞（0.15±0.01 vs. 1.00±0.09,P<0.05）,平均穿膜细胞数明显多于PANC-1细胞[（321±7.62）个vs.（70±16.47）个,P<0.05],但转染miRNA-200c前体片段后,胰腺癌干细胞中miRNA-200c表达量明显升高,平均穿膜细胞数明显减少（P<0.05）。结论：胰腺癌干细胞中miRNA-200c的表达降低,miRNA-200c具有抑制胰腺癌干细胞生长及侵袭力的作用。

     

肿瘤干细胞与肿瘤转移的关系

肿瘤干细胞（CSCs）对细胞毒性药物具有先天性的抵抗能力,与肿瘤细胞的运动性,侵袭性和抗凋亡能力密切相关。上皮/间质转化（EMT）是指在各种因素作用下上皮细胞转变为具有高侵袭、转移能力间质表型的过程,与CSCs关系密切。笔者就CSCs的EMT现象与肿瘤转移,CSCs定植和趋化作用与转移瘤形成,CSCs与临床治疗的关系研究进展作一综述。

     

骨髓间充质干细胞移植途径对胰岛移植物免疫排斥反应的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSC)与胰岛共移植对诱导胰岛移植物免疫耐受的作用,并比较MSC不同途径移植的效果。方法:SD大鼠和Lewis大鼠分别作为供、受体。取SD大鼠股骨,贴壁培养法分离和扩增MSC,胶原酶V分离胰岛。应用链脲佐菌素制备Lewis大鼠糖尿病模型后,将其随机均分为A组(将BrdU标记的MSC与胰岛经门静脉混合输入),B组(将胰岛经门静脉输入,BrdU标记的MSC经尾静脉输入),C组(胰岛经门静脉输入,联合应用环孢素A)和D组(单纯胰岛门静脉移植)。观察各组术后血糖变化,比较各组胰岛移植物存活时间。术后第7天切取各组部分存活大鼠肝脏、胸腺、脾脏行免疫组化染色观察MSC归巢位置。结果:A,B两组大鼠术后正常血糖维持时间最长,C组次之,D组最短;各组胰岛存活时间A组为(12.1±2.3)d,B组为(8.6±1.4)d,C组为(13.2±1.9)d,D组为(2.2±0.6)d;MSC归巢部位观察显示,A组BrdU阳性的MSC主要分布于肝脏,并在植入胰岛周围形成"类微囊化效应",B组BrdU阳性的MSC主要分布于胸腺、脾脏。结论:MSC与胰岛共移植能诱导胰岛移植物免疫耐受,且MSC和胰岛混合经门静脉移植效果优于胰岛门静脉移植联合MSC外周静脉移植。     

基于树突状细胞的肝细胞癌免疫治疗研究进展

肝细胞癌（HCC）是最常见的原发性肝癌,目前,免疫疗法已成为继手术治疗、放射治疗、化学治疗之后的第4种治疗HCC的手段。许多研究证明,免疫治疗可以提高机体的免疫功能,以减少HCC的复发和转移、延长患者生存期。树突状细胞（DC）是体内功能最强大的抗原提呈细胞,在机体的抗肿瘤免疫应答中发挥着重要作用。DC抗肿瘤疫苗、DC-细胞因子诱导的杀伤细胞细胞疗法、DC免疫治疗联用肝动脉化疗栓塞术和光动力疗法等以DC为基础的方式已成为HCC免疫治疗研究中的热点,并展现出良好的前景。笔者将对近几年基于树突状细胞的HCC免疫治疗的研究进展进行综述。

     

肥大细胞参与主动脉血管重构的机制研究进展

血管重构是主动脉扩张病发生发展的主要过程，而由免疫细胞介导的多种免疫炎性反应在血管重构中发挥了重要作用。笔者就肥大细胞（MC）参与主动脉血管重构的机制作一综述，主要内容包括MC通过参与主动脉壁炎症反应、影响基质的合成与降解、参与肾素-血管紧张素系统（RAS）的激活以及参与新生血管形成导致血管重构等，并指出未来研究可能的发展方向。

     

《肝细胞癌合并门静脉癌栓多学科诊治中国专家共识（2016年版）》解读

肝癌细胞容易侵犯肝内的脉管系统尤其是门静脉系统,形成门静脉癌栓（PVTT）,一旦出现PVTT,病情发展迅速,提示预后不良。基于现有的循证医学证据,尤其是国内学者对肝细胞癌合并PVTT的研究结果,全国肝癌合并癌栓诊治研究协作组制定了《肝细胞癌合并门静脉癌栓多学科诊治中国专家共识（2016年版）》。笔者从PVTT分型及不同类型癌栓治疗方式选择等角度对共识进行了解读。

     

骨髓间质干细胞的分离培养鉴定与生物学特性

目的 观察贴壁法分离提取大鼠乳鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)并进行体外扩增培养的可行性并探讨其生物学特性,为进一步实验研究作基础.方法 实验2008-01/06于南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所完成.贴壁法分离培养SD大鼠乳鼠MSCs,经CD29、CD34、CD44、CD45鉴定MSCs,并绘制不同代数细胞生长曲线和贴壁率曲线分析其生物学特性.结果 ①原代细胞生长潜伏期略长,孵育24 h后小部分圆形单核细胞开始贴壁,48 h可见巢状克隆集落形成,贴壁细胞呈多形性,贴壁3d后增殖加快,9d后基本融合.②生长曲线及贴壁率曲线提示第2至第6代细胞接种存活率基本相同,生长曲线基本一致,而第7代以后细胞的生长速度渐缓,贴壁时间延长,细胞接种存活率也明显降低,并出现衰化现象.③免疫组化鉴定结果 显示CD29、CD44表达基本阳性,而CD34、CD45表达阴性.结论 贴壁法比较容易分离培养MSCs,为组织工程的应用提供了足够的种子来源,MSCs有一定的增殖能力但并不是无限的,而是随传代扩增逐渐衰化,因此了解和掌握MSCs的生物学特性为进一步研究应用打下基础.     

甲状腺癌靶向研究的热点与展望

甲状腺癌是常见的内分泌肿瘤。近年来,甲状腺癌分子生物学研究取得显著的进展,而靶向治疗方面的研究将为甲状腺癌治疗提供新思路。笔者将分别从甲状腺癌干细胞、mi RNA、甲状腺肿瘤微环境等方面对甲状腺癌的靶向研究进行阐述。     

转B、T 淋巴细胞衰减子基因树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的作用及机制

目的:探讨慢病毒介导B、T淋巴细胞衰减子(BTLA)基因转染的树突状细胞(DC)诱导大鼠肝脏移植免疫耐受的作用及机制。方法:以DA大鼠为供体,为Lewis大鼠为受体,建立原位肝移植模型;获取SD大鼠DC后,分别用携带或不携带BTLA基因的重组慢病毒载体感染DC。将36只肝移植术后大鼠随机均分为模型组(移植术后无任何无处理)、DC组(肝移植术后输入未携带BTLA基因的重组慢病毒转染的DC)、BTLA-DC组(肝移植术后输入携带BTLA基因的重组慢病毒转染的DC)。每组术后7 d完成血生化指标与肝脏病理学检测后,剩余大鼠行生存时间分析。结果:与模型组比较,BTLA-DC组术后的肝功能损伤指标、免疫刺激细胞因子IFN-γ水平以及移植肝组织排斥反应的病理学评分降低,免疫抑制性细胞因子IL-10水平升高,但DC组术后的以上指标均呈一定程度的反向变化,定量指标的差异均有统计学意义(均P0.05)。模型组的中位生存时间为15 d,DC组的中位生存时间为13 d,BTLA-DC组的中位生存时间为79 d,3组间的生存时间差异有统计学意义(χ~2=16.14,P=0.000 3)。结论:高表达BTLA的DC减缓了移植肝脏急性排斥反应,延长受体大鼠的生存时间,机制可能与其诱导T细胞免疫耐受有关。     

外科手术联合TACE治疗晚期肝癌合并门静脉癌栓的疗效分析

目的：探讨原发性肝癌（HCC）合并门静脉癌栓（PVTT）的外科治疗及疗效。方法：回顾性分析2010年1月—2013年1月收治的68例HCC合并PVTT患者临床资料,其中50例行手术（规则半肝+癌栓及受累门静脉切除术或不规则肝切除+门脉癌栓取出术）+经导管肝动脉化疗栓塞术（TACE）治疗（联合治疗组）;18例患者单纯口服索拉非尼治疗（索拉非尼治疗组）。联合治疗组患者中,11例PVTT侵犯门静脉二级及以上分支,39例侵犯门静脉一级分支;索拉非尼治疗组患者PVTT侵犯部位均为门静脉一级分支。分析患者0.5、1、2、3年生存率、总生存时间（OS）、疾病进展时间（TTP）。结果：联合治疗组PVTT侵犯门静脉二级及以上分支患者与侵犯门静脉一级分支患者0.5、1、2、3年生存率分别为100%、90.9%、18.2%、9.1%与87.2%、51.3%、15.4%、5.1%;索拉非尼治疗组0.5、1、2、3年生存率分别为83.3%、33.3%、0%、0%。联合治疗组PVTT侵犯门静脉二级及以上分支患者与侵犯门静脉一级分支患者中位OS为16个月与12个月,中位TTP为7个月与5个月;索拉非尼治疗组中位OS为9个月,中位TTP为4个月。统计学分析显示,联合治疗组无论是PVTT侵犯门静脉二级及以上分支或侵犯门静脉一级分支患者中位OS及中位TTP均明显长于索拉非尼治疗组（均P<0.05）。结论：对于合并门静脉一级及以上分支癌栓的晚期HCC患者,可行外科手术联合术后TACE治疗,且疗效优于单纯索拉非尼治疗。