硫酸阿尔新蓝染色方法介绍

<正>淀粉样蛋白的鉴别是淀粉样变病理诊断重要的参考。传统方法依赖于刚果红染色,但其存在过程复杂,影响因素较多的缺点,近年国外新兴的一种染色方法——硫酸阿尔新蓝染色(SAB法)用于淀粉样蛋白的鉴别具有显著优势,我院病理科近期采用该方法取得良好效果,特介绍如下。1材料与方法1. 1组织标本选自武汉大学中南医院病理科活检组织,10%中性福尔马林固定,石蜡包埋切片,切片厚度8～10μm。1. 2试剂准备及配置阿尔新蓝染色液,1%硫酸钠溶液,     

脱钙骨冷冻切片硫堇-苦味酸染色方法

传统制作骨切片的方法是采用骨组织经过脱钙后进行火棉胶包埋切片,硫堇-苦味酸染色.火棉胶切片存在程序繁琐、周期长、切片较厚等缺陷[1].笔者采用冷冻切片法对脱钙骨进行切片,然后硫堇-苦味酸染色.结果显示,冷冻骨切片制作染色方法操作程序简便,制作周期短,染色效果理想,适用于组织学实验教学中切片的大量制作.在与骨相关的科学研究领域也有一定的应用价值.     

铁苏木精整块染色显示线粒体的方法

线粒体的光镜教学切片标本通常是以幼年小动物,如小白鼠或蛙类的小肠、胰、肝和肾为材料。其制片染色方法也较多,但人们普遍采用的方法为Heidenhain铁苏木精染色法,其优点是:结构清晰、方法可靠,而且不易褪色,便于长期保存,但操作步骤烦琐,而且耗费大量的时间和试剂材料。近年来我们对使用多年的Heidenhain铁苏木精显示线粒体的染色方法进行了改进,将原方法中线粒体组织经过切片后再染色制片改之为整块组织染色后切片,经过脱蜡即可封固,取得了较为满意的效果,既大大简化了操作程序,更便于制作批量教学切片。现将方法介绍如下。     

一种解决切片干燥的方法

影响切片质量的因素较多,要制出高质量的切片,每一操作步骤都至关重要[1,2],组织切片的制作程序包括脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色、封固.其中切片是制片过程中手工操作较复杂而又重要的环节,切片质量的好坏直接影响诊断工作[1].在实际工作中,由于空气干燥,尤其是冬天切片易出现龟裂和空洞现象(图1).往往靠对每张切片组织块表面哈气来补救,或者蘸温水加湿组织表面,该方法不仅效果差,而且影响制片速度.笔者摸索出一种简单有效的方法,解决了切片易出现龟裂、空洞的问题,现介绍如下.     

脊髓块染改良法

脊髓是医学院校学生实验课必须观察的内容之一,脊髓前角神经细胞内尼氏体的形态结构可作为判断其机能状态的一种标志.在光镜下显示尼氏体的染色方法较多,但大多数为石蜡切片染色法.虽然有的方法能很清晰地显示尼氏体.但标本很快褪色,不易保存.为探索一种快速显示和能较久地保存尼氏体的方法.作者经反复试验,改用组织块固定和染色同时进行的方法.该方法非常简单,容易掌握.经染色后的组织块不但容易切片.而且能保存数年不褪色:同时,封固剂也由常规的加拿大树胶改用环氧树脂、DDSA混合剂,避免易褪色现象.     

超薄切片传统液滴漂浮染色法改进

利用传统的液滴漂浮法进行超薄切片染色,难以避免铅染液造成的污染.通过裸网捞片,我们对液滴漂浮法的操作进行改进,使超薄切片的两面同时进行染色,此方法不仅缩短了染色时间,提高了工作效率,还可以最大程度避免染液与切片及空气的接触,减少了染色污染的发生机率.     

过碘酸-Schiff染色法与苏丹黑B双重染色在肌病诊断中的应用

在肌病病理诊断过程中,对骨骼肌活检标本冰冻切片进行H-E染色后,观察时发现有空泡现象的组织切片,除排除冰晶以外,一般考虑是否有糖原累积或脂质沉积,需要分别进行糖原染色与脂肪染色,以做进一步的鉴别诊断.过碘酸-Schiff染色法(periodic acid schiff,PAS),是一种常用的糖原染色方法;苏丹黑B是常用脂肪染色方法之一.笔者尝试将这2种染色方法在同一张切片上先后进行染色,实验结果表明,方法可行、结果满意;并且给观察提供方便.     

HE染色原理和试剂配制及染色过程中的若干问题的探讨

目的 探讨HE染色原理和试剂配制及染色过程中的若干问题的临床基础性意义,推广优良、简捷、经济的试剂配制方法,研究染色过程中的若干问题,完美HE染色,明确病理诊断,利于临床治疗.方法 采用本科室自己配制试剂所染HE切片30张和30张(对照组)某试剂公司配制试剂所染HE切片进行显微镜下对比,分析两者的优缺点及染色过程中的若干问题.结果 本科室自家配制试剂所染HE切片明显优于对照组,尤其体现在细胞核着色上,注重染色过程中的若干问题的切片比未注重染色过程中的若干问题的切片质量高.结论 HE染色原理和试剂配制及染色过程中的若干问题的探讨,从基础理论出发,不断实践,为更完美、清晰地呈现显微镜下正常或异常的组织细胞结构,明确病理诊断,从而更好更快地指导临床治疗而努力.     

四种固定液对肾上腺组织冰冻切片固定效果的比较

目的　以肾上腺组织为例观察比较丙酮、4%多聚甲醛、AAF和95%乙醇四种固定液的固定效果,为临床做出更好的快速冰冻切片,及时、准确的做出病理诊断提供实验基础。 方法　取人正常肾上腺组织,冰冻切片后分别用四种固定液进行固定,然后行HE染色,观察各组的组织结构、细胞核染色、细胞质染色和核质对比度情况。 结果　经冷丙酮固定的肾上腺组织切片,镜下组织结构清晰,高倍镜下观察：细胞核形态清晰完整,核染色和胞质染色清晰对比度好;经4%多聚甲醛固定的切片,镜下组织结构不清,细胞核形态较清晰,核染色和胞质染色对比度差;经AAF液固定的组织切片,镜下组织结构尚清晰,细胞核部分溶解,核染色均一,胞质染色较清晰;经95%乙醇固定的组织,组织结构尚清晰,核溶解普遍,胞质染色不清晰。 结论　四种固定液都可用于固定肾上腺组织及其它细胞成分较多的病理肿瘤组织,但冷丙酮效果最好。     

提高病理冰冻切片质量的体会

目的通过自身的工作体会,探讨提高冰冻切片质量的技巧及方法.方法对乳腺、子宫、甲状腺、胃肠等几种不同组织进行冰冻切片比较、观察.结果切片完整,厚薄均匀,染色核浆对比鲜明,细胞形态及组织结构清晰,符合术中快速冰冻诊断要求.结论一张优质的冰冻切片需要技术员对不同的组织区别对待,从取材、冷冻、切片、固定、染色等环节认真做起.     

微波在肾穿刺活组织检查快速病理诊断中的应用

微波在肾穿刺活组织检查快速病理诊断中的应用师锁柱程庆砾陈香美朱宁陈振玉肾穿刺活组织检查（肾活检）是目前确诊肾小球疾病及肾间质病变的唯一方法。由于肾活检标本小、切片薄（厚２μｍ），在固定、浸蜡、包埋、切片及染色等方面要求较高，加上染色种类较多（每例病人...     

改良快蓝焦油固紫染色法

改良快蓝焦油固紫(Luxol Fast Blue—CresylViloet)染色是根据Diamond法改良而建立的联合染色方法.可以同时在一张切片上观察神经细胞、神经胶质细胞和髓等结构.该方法具有两个突出优点:(1)使用冰冻切片法,制作时间周期短.染色方法简便,切片不易破碎.可制直径>2厘米的连续切片,对脑切片尤为适宜,便于科研工作中的连续观察.(2)集神经细胞,神经胶质细胞和髓鞘于一体.结构清晰,容易分辨.可使用于中枢神经系统的研究和教学中.1 方法1.1固定10%福尔马林液灌注或直接固定.10%盐水福尔马林用碳酸镁饱和液再固定14～20天.中间更换新固定液一次.1.2 冲洗 组织流水冲洗1小时,入20%蔗糖内至组织块下沉.1.3 切片 冰冻切片20～40μm.收集切片于20%酒精溶液中,便于展平切片.     

细胞块切片免疫细胞化学染色在浆膜腔积液细胞学诊断中的应用

目的 探讨浆膜腔积液细胞块切片免疫细胞化学染色在细胞学诊断上的意义.方法 收集2006年至2008年有间皮增生、异形细胞、癌细胞的浆膜腔积液99例,进行离心涂片、细胞块切片HE染色及免疫细胞化学染色,并结合临床及随访结果进行综合分析.结果 本组病例涂片、细胞块切片HE染色、免疫细胞化学染色及综合诊断的阳性率、阴性率和不确定率依次为:涂片,68.7%(68/99)、16.2%(16/99)和15.1%(15/99);细胞块切片HE染色,71.7%(71/99)、16.2%(16/99)和12.1%(12/99);细胞块切片免疫细胞化学染色,76.8%(76/99)、20.2%(20/99)和3.0%(3/99);综合诊断,77.8%(77/99)、17.2%(17/99)、5.0%(5/99).涂片与细胞块切片HE染色检查结果的差异无统计学意义(P>0.05);涂片或细胞块切片HE染色检查与免疫细胞化学染色的不确定率差异均具统计学意义(P<0.05).涂片、细胞块切片HE染色检查的假阳性率、假阴性率均为0;免疫细胞化学染色的假阳性率、假阴性率均为1.0%(1/99).结论 细胞块免疫细胞化学染色是诊断浆膜腔积液良恶性及判别瘤细胞组织来源的有效方法;结合涂片、切片之HE和免疫细胞化学染色及临床情况综合分析能提高积液诊断的阳性率.     

术中印片快速病理检查常用染色方法的应用比较

手术中快速病理诊断对临床手术方案的制定起重要的指导作用.细胞印片技术具有简单、快速的优点,可辅助甚至部分代替冷冻切片诊断,起到提高准确率和加快诊断速度的作用,目前已经被许多医院视为常规的术中诊断技术与冰冻切片同时进行.细胞印片染色最常用的染色方法包括HE染色、瑞-姬姆萨染色、甲苯胺蓝染色法等.染色方法的不同直接影响细胞印片的质量,并影响其在诊断中的应用价值.本文结合实际工作经验,对以上3种术中印片染色方法进行比较,并评价各种染色方法的优缺点.     

胆固醇组织化学方法的改良

Schultz组化方法显示胆固醇对多种组织都是常用的。但按原方法要费时半月,且因要以冰冻切片作捞片,在染色过程中极易使切片破损,对本即松散的组织捞片,甚至可使得染色反应无法进行。我们对此方法做了重要改进,大大缩短了时程(后半月余减至4～5天),并把捞片改为恒冷切片后直接粘贴于载片或盖片上,大大改善了切片在染色过程中的完整性,使松散组织亦可进行染色。现将改良方法简介如下:1.取新鲜材料恒冷切片20μm,直接敷贴于载片上,空气干燥。2.CCF液     

陈旧褪色病理教学HE切片颜色恢复技术探讨

在病理学实习教学中,病理常规HE切片是重要的教学工具.对病理学教学切片要求所选病例典型,组织切片应完整、无皱褶、无摺叠、无破损,并且切片染色鲜艳,红蓝对比鲜明.由于时间的关系,一些教学切片发生褪色,其中主要是苏木精颜色的减退,有些切片甚至完全褪色,整张切片呈现一片红色,从而严重影响了教学效果.本文旨在在原有HE染色的基础上,探索一种促染方法,改善这些褪色教学切片的颜色,恢复其鲜艳的红蓝对比颜色,使其发挥正常的教学作用.     

提高电镜超薄切片染色效率的装置

随着电镜技术应用的普及,利用电镜观察肾小球超微结构进行临床诊断的样品日益增多.传统的超薄切片染色方法不能1次进行大批量染色操作(费时、费工,且易造成污染).为此,笔者对传统的电镜染色法作了探索和改进,最终做出了制作简便、染色量大、染色效果稳定的电镜超薄切片染色装置.     

不同厚度神经球冰冻切片免疫荧光细胞化学染色结果的比较

目的探索适合免疫荧光细胞化学染色的神经球最佳冰冻切片厚度。方法选取悬浮培养10～12 d的神经球,制作厚度分别为4、7、10μm的冰冻切片。采用免疫荧光细胞化学染色比较神经球神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达和定位。结果培养10～12 d的神经球直径为200～250μm,状态良好,折光性强,呈圆球状,周边有毛刺。4μm的神经球冰冻切片制作较难,容易卷片,但细胞层次清楚,染色均匀,密疏适宜,可较清楚计数细胞。成像清楚。胞核清晰,可见较多nestin染色阳性的完整胞质包绕4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色阳性的胞核,能观察更多的细胞间细节。7μm切片较4μm切片制作容易,切片较平整,细胞层次不如4μm切片清楚,染色较均匀。所含细胞数较4μm多,可粗略计算细胞数。荧光拍照不能完全对焦,可见部分完整细胞形态。10μm的冰冻切片制作相对容易,切片平整,但细胞层次不清楚,堆叠严重,成像不清楚,难以看到完整细胞形态。结论 4μm厚度的神经球冰冻切片较适合进行免疫荧光细胞化学染色和分析。     

针对组织工程多孔生物陶瓷的组织学技术优化探讨

目的 改进硬组织切片技术以适应生物陶瓷材料在骨组织工程中的研究.方法 探索硬组织切片的厚度、漂片温度、裱片方法、烤片温度和时间的最佳组合,针对阳离子防脱载玻片的使用条件进行反复比较,通过改进操作流程中的关键技术和需避免的问题,摸索出阳离子载玻片在硬组织切片裱片中的最佳应用条件,克服了硬组织切片制作技术中标本易破碎、切片易脱落及染色时染料容易吸附的缺点.结果 通过技术探索与改进,生物陶瓷支架材料体内植入后的类骨修复体标本的硬组织切片能保持其杂化后的组织结构与比较完整的材料结构,可进行Masson三色染色、苏木精-伊红(HE)及甲苯胺蓝染色.染色后镜下观察显示支架内杂化生长的组织结构完整、细胞形态清晰、切片质量好、生物陶瓷支架脱片少.荧光显微镜可观察到类骨修复体钙沉积现象完整.结论 改善了传统硬组织切片技术处理生物陶瓷材料时易于破坏组织-材料结构的缺点.改进的硬组织切片技术适应生物陶瓷材料在骨组织工程领域研究.     

Lillie-Mayer苏木精在冷冻切片快速进行性染色中应用

恒温冷冻切片是用于术中快速病理诊断的主要制片技术,除了要求技术人员有熟练的操作技能外,更重要的是要求在制作程序及苏木精染液的配制和使用方法上做出有效的选择,才能达到最佳的染色效果.Lillie-Mayer苏木精染液是一种从英国引进的改良配方,应用于冷冻切片的快速进行性染色,全程染色约90 s完成,该方法简化了盐酸乙醇分化的程序,节省了分化和返蓝中所消耗的时间,避免了盐酸乙醇酸化后引起的部分组织脱落掉片的现象.现将我科多年来在冷冻切片的快速染色方法及Lillie-Mayer苏木精染液的配制方法介绍如下.